鈉-葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)體2抑制劑通過調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化和旁分泌改善心肌纖維化

周昊,張穎倩,胡穎蕓,3,陳潤都,馬明睿,李越洋,陳韻岱*

(1解放軍醫(yī)學(xué)院,北京,100853;2中國人民解放軍總醫(yī)院第六醫(yī)學(xué)中心心血管病醫(yī)學(xué)部,北京 100142;3南開大學(xué)醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系,天津 300071)

心血管疾病是全世界死亡和發(fā)病的主要原因,造成了巨大的社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[1]。急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)后早期干預(yù),特別是及時(shí)再灌注治療,大大改善了生存率。即便如此,急性心肌梗死后的左心室重塑和隨后的心力衰竭(heart failure,HF)仍然是一個(gè)嚴(yán)峻的臨床挑戰(zhàn)[2]。在心肌梗死后的修復(fù)過程中,成纖維細(xì)胞表達(dá)ɑ-平滑肌肌動(dòng)蛋白(alpha-smooth muscle actin,ɑ-SMA)被激活成為肌成纖維細(xì)胞,這是心肌纖維化的一個(gè)關(guān)鍵步驟。肌成纖維細(xì)胞合成并分泌大量細(xì)胞外基質(zhì),在心肌纖維化的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用[3]。心肌梗死后,巨噬細(xì)胞被招募到心臟,作為關(guān)鍵的炎癥調(diào)節(jié)細(xì)胞發(fā)揮重要功能。既往研究表明,巨噬細(xì)胞和心臟成纖維細(xì)胞(cardiac fibroblasts,CFs)之間的相互作用促進(jìn)心臟重塑[4]。心肌梗死期間M1到M2巨噬細(xì)胞表型的延遲轉(zhuǎn)換被認(rèn)為是不良心室重塑(adverse ventricular remodeling, AVR)的主要因素之一。鈉-葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)體2抑制劑(sodium-glucose cotransporter 2 inhibitor,SGLT2i)是一種用于治療糖尿病的降糖藥物[5],在大鼠心肌梗死模型中SGLT2i可以通過調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化來緩解纖維化[3]。然而,SGLT2i如何在再灌注治療后抑制纖維化及巨噬細(xì)胞旁分泌在其中的作用仍有待研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

選用購自北京斯貝福生物有限公司[SCXK (Beijing) 2019-0010]C57BL/6小鼠(雄性,8周齡,18～22g,n=27),構(gòu)建小鼠心肌缺血再灌注損傷(ischemia-reperfusion injury,IRI)模型。按照隨機(jī)數(shù)表法隨機(jī)將小鼠分為Sham組、IRI組和IRI+SGLT2i組,每組9只。將IRI組和IRI+SGLT2i組小鼠吸入異氟醚麻醉,暴露心臟,在左耳廓下緣2mm處結(jié)扎前降支,快速縫合胸腔,90min后解開[6]。Sham組小鼠采用完全相同的方法,但不結(jié)扎前降支[7]。IRI+SGLT2i組術(shù)后給予含達(dá)格列凈的飲用水,1mg/(kg·d)[8]。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)中國人民解放軍總醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(2022-X18-96)。

1.2 超聲心動(dòng)圖

在術(shù)后28d對(duì)小鼠進(jìn)行經(jīng)胸超聲心動(dòng)圖(Vevo2100成像系統(tǒng),Visual sonic,多倫多,加拿大)檢測(cè),小鼠體溫維持在36.9℃～37.3℃,心率維持在400～550次/min。使用M型超聲心動(dòng)圖記錄至少6個(gè)心動(dòng)周期,計(jì)算左室射血分?jǐn)?shù)(left ventricular ejection fraction, LVEF)、左室舒張期內(nèi)徑(left ventricular internal diastolic diameters, LVIDd)、左室收縮末期容積(left ventricular end-systolic volume, LVESV)、左室舒張末期容積(left ventricular end-diastolic volume, LVEDV)、左室縮短分?jǐn)?shù)(left ventricular shortening fraction, LVFS)和左室收縮期內(nèi)徑(left ventricular internal systolic diameters, LVIDs)。

1.3 免疫組織化學(xué)染色和免疫熒光染色

術(shù)后28d處死小鼠,采用4%多聚甲醛固定心臟并切片,天狼星紅染色和免疫熒光染色檢測(cè)纖維化。用Ⅰ型膠原蛋白(collagen Ⅰ, ColⅠ; Servicebio, GB110223, 1∶200)和Ⅲ型膠原蛋白(collagen Ⅲ, ColⅢ; Servicebio, GB111629, 1∶200)標(biāo)記纖維化。二抗為Cy3-山羊抗小鼠IgG(Servicebio, GB21303, 1∶300)。

1.4 RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)和H/R模型建立

RAW264.7細(xì)胞(Procell Life Science and Technology, CL-0190)在含有DMEM(Gibco,11965092)、10%胎牛血清、1% L-谷氨酰胺和1%青霉素-鏈霉素的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。將RAW264.7分為以下3組:NC組的RAW264.7細(xì)胞在37℃、5% CO2條件下培養(yǎng);缺氧/復(fù)氧(hypoxic/reoxygenation, H/R)組的RAW264.7在94% N2、5% CO2、1% O2的培養(yǎng)箱缺氧培養(yǎng)12h,然后在37℃、5% CO2下復(fù)氧6h;H/R+SGLT2i組在H/R開始時(shí)用SGLT2i(10μmol/L)處理RAW264.7細(xì)胞[9]。

1.5 小鼠CFs原代培養(yǎng)及H/R模型的建立

用眼科剪取小鼠心室,用含0.08%胰蛋白酶(Gibco, 25200056)和0.05% Ⅱ型膠原酶(Sigma, 1148090)的磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer solution, PBS)消化5min,用含10%胎牛血清的完全培養(yǎng)基終止消化。吸出上清液,通過添加消化液繼續(xù)消化剩余的組織碎片,直到組織碎片消失。隨后培養(yǎng)60min,更換培養(yǎng)基以純化CFs。提取成功的原代成纖維細(xì)胞分為以下3組:NC組的CFs在37℃、5% CO2條件下的完全培養(yǎng)基中培養(yǎng);H/R組在培養(yǎng)基中加入H/R組巨噬細(xì)胞培養(yǎng)基上清液后,CFs在94% N2、5% CO2、1% O2的培養(yǎng)箱缺氧培養(yǎng)12h,然后在37℃、5% CO2下復(fù)氧36h;H/R+SGLT2i組在培養(yǎng)基中加入H/R+SGLT2i組巨噬細(xì)胞培養(yǎng)基上清液后,CFs在94% N2、5% CO2、1% O2的培養(yǎng)箱缺氧培養(yǎng)12h,然后在37℃、5% CO2下復(fù)氧36h。

1.6 免疫熒光染色

通過巨噬細(xì)胞標(biāo)記物CD86和Arg1進(jìn)行巨噬細(xì)胞亞型鑒定,通過成纖維細(xì)胞ɑ-SMA和ColⅠ進(jìn)行成纖維細(xì)胞激活鑒定。細(xì)胞在室溫下用4%多聚甲醛溶液固定30min,然后用0.5% Triton-100滲透細(xì)胞30min,用1%牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)在室溫下封閉2h,用抗CD86(Proteintech, 13395-1-AP, 1∶100)、Arg1 (Proteintech, 16001-1-AP, 1∶100)、ɑ-SMA (Cell signaling, 19245s, 1∶200)、ColⅠ(Proteintech, 14695-1-AP, 1∶100)的一抗在4℃下孵育過夜。PBS清洗細(xì)胞,熒光二抗(華興博創(chuàng),HX2027)室溫處理1h。用4,6-二氨基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole, DAPI)染色。從每個(gè)樣本中隨機(jī)選擇三個(gè)區(qū)域,用熒光顯微鏡觀察。

1.7 Western blotting

用放射免疫沉淀法裂解緩沖液(radio immunoprecipitation assay, RIPA;Solarbio, R0020)將細(xì)胞在冰上裂解30min。在4℃下,以14000轉(zhuǎn)/min的轉(zhuǎn)速離心30min,以清除死細(xì)胞碎片。采用二喹啉甲酸法蛋白測(cè)定試劑盒(Solarbio, PC0020)檢測(cè)蛋白濃度。樣品經(jīng)十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳后轉(zhuǎn)移到0.22μm聚偏二氟乙烯膜上。將細(xì)胞膜在5%的牛奶中封閉1h,在4℃下孵育一抗過夜,室溫下與抗兔二抗在搖床上孵育1h。用Image J軟件分析蛋白的相對(duì)表達(dá)量。使用以下抗體: CD86(Proteintech, 13395-1-AP, 1∶100),Arg1(Proteintech, 16001-1-AP, 1∶100),誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS; Abcam, ab213480, 1∶100),甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH; Proteintech, 60004-1-Ig, 1∶50),ɑ-SMA(Cell signaling, 19245s, 1∶200),ColⅠ(Proteintech, 14695-1-AP, 1∶100)。

1.8 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

收集巨噬細(xì)胞上清液,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)試劑盒(Proteintech)檢測(cè)白細(xì)胞介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-ɑ)、白細(xì)胞介素6(interleukin 6,IL-6)、轉(zhuǎn)化生長因子β(transforming growth factor beta,TGF-β)和血小板衍生生長因子a(platelet-derived growth factor a,PDGF-a)含量。操作均嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 模型建立28 d后心功能指標(biāo)的比較

使用小型動(dòng)物超聲系統(tǒng)測(cè)量了Sham、IRI和IRI+SGLT2i組的LVEF、LVEDV、LVESV、LVIDd、LVIDs和FS。結(jié)果顯示,小鼠模型建立后28d,與IRI組相比,IRI+SGLT2i組的LVEF及FS更高(P<0.05);與IRI組相比,LVIDd、LVEDV、LVID及LVESV在IRI+SGLT2i組更低(均P<0.05;圖1)。

圖1 模型建立28d后LVEF,LVFS,LVIDd,LVEDV,LVIDs,LVESV的比較Figure 1 Comparison of LVEF, LVFS, LVIDd, LVEDV, LVIDs, LVESV 28 d after model establishment (n=9)A: echocardiograms; B: LVEF; C: LVFS; D: LVIDd,; E: LVEDV; F: LVIDs; G: LVESV. SGLT2i: sodium-glucose cotransporter 2 inhibitor; AVR: adverse ventricular remodeling; IRI: ischemia-reperfusion injury; LVEF: left ventricular ejection fraction; LVFS: left ventricular shortening fraction; LVIDd: left ventricular internal diastolic diameters; LVEDV: left ventricular end-diastolic volume; LVIDs: left ventricular internal systolic diameters; LVESV: left ventricular end-systolic volume. Compared with sham group, **P<0.01; compared with IRI group, #P<0.05, ##P<0.01.

2.2 模型建立28d后心臟纖維化程度的比較

在術(shù)后28d處死小鼠獲得心臟后,用蘇木紅染色法評(píng)估纖維化。普通光鏡結(jié)果顯示,IRI+SGLT2i組的纖維化面積小于IRI組;偏光顯微鏡結(jié)果顯示,IRI+SGLT2i組的紅綠面積比小于IRI組(均P<0.05)。用組織免疫熒光染色法觀察SGLT2i對(duì)ColⅠ和ColⅢ的影響,結(jié)果顯示ColⅠ的累積光密度(integrated optical density,IOD)和ColⅢ的IOD在IRI+SGLT2i組中都比IRI組少(均P<0.05;圖2)。

圖2 模型建立28d后,纖維化面積,膠原蛋白含量及比例的比較Figure 2 Comparison of fibrosis area, collagen content and proportion 28 d after model establishment (n=3)A: sirius red staining, ordinary light microscopy (scale bar=2000 μm); B: sirius red staining, polarized light microscopy (scale bar=50 μm); C: scale bar=50 μm; D: scale bar=50 μm; E: quantification of fibrosis area; F: quantification of ratio of Col Ⅰ to Col Ⅲ; G: quantification of IOD of Col Ⅰ; H: quantification of IOD of Col Ⅲ. SGLT2i: sodium-glucose cotransporter 2 inhibitor; AVR: adverse ventricular remodeling; IRI: ischemia-reperfusion injury; Col Ⅰ: collagen Ⅰ; DAPI: 4′, 6-diamidino-2-phenylindole; M: merged; Col Ⅲ: collagen Ⅲ; IOD: integrated optical density. Compared with sham group, **P<0.01; compared with IRI group, #P<0.05, ##P<0.01.

2.3 H/R條件下SGLT2i對(duì)巨噬細(xì)胞極化的影響

為了研究H/R對(duì)巨噬細(xì)胞極化的影響以及SGLT2i的調(diào)節(jié)作用,本研究構(gòu)建了巨噬細(xì)胞H/R模型。用蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot, WB)檢測(cè)M1巨噬細(xì)胞的標(biāo)志物(CD86和iNOS)以及M2巨噬細(xì)胞的標(biāo)志物(Arg1)。本研究發(fā)現(xiàn)SGLT2i抑制了巨噬細(xì)胞向M1的極化,并促進(jìn)其在H/R時(shí)向M2的極化。WB顯示,與NC組相比,H/R組的巨噬細(xì)胞表達(dá)Arg1、iNOS及CD86的水平更高;與H/R組相比,H/R+SGLT2i組的巨噬細(xì)胞Arg1表達(dá)水平增加,iNOS及CD86表達(dá)水平下降(均P<0.05)。免疫熒光結(jié)果表明,與NC組相比,H/R刺激的RAW264.7 Arg1及CD86表達(dá)水平升高;H/R+SGLT2i組比H/R組的Arg1表達(dá)水平更高,CD86表達(dá)水平更低(均P<0.05)。流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí),H/R組的F4/80和CD206與F4/80和CD86陽性細(xì)胞比例均高于NC組;H/R+SGLT2i組的F4/80和CD86陽性細(xì)胞比例低于H/R組,F4/80和CD206陽性細(xì)胞比例高于H/R組(P<0.05;圖3)。

圖3 NC組,H/R組和H/R+SGLT2i組巨噬細(xì)胞極化程度的比較Figure 3 Comparison of macrophage polarization in NC, H/R and H/R+SGLT2i groups (n=3)A: expression of iNOS, CD86 and Arg1 deceted by WB; B: quantitative analysis of Arg1 expression; C: quantitative analysis of iNOS expression; D: quantitative analysis of CD86 expression; E: immunofluorescence staining (scale bar=80 μm); F: quantitative analysis of cellular IOD of CD86; G: immunofluorescence staining (scale bar=80 μm); H: quantitative analysis of cellular IOD of Arg1; I: flow cytometry; J: quantitative analysis of CD86-positive cells; K: quantitative analysis of CD206-positive cells. Compared with sham group, **P<0.01; compared with IRI group, #P<0.05, ##P<0.01. SGLT2i: sodium-glucose cotransporter 2 inhibitor; AVR: adverse ventricular remodeling; IRI: ischemia-reperfusion injury; M: merged; H/R: hypoxia/reoxygenation; NC: negative control. iNOS: inducible nitric oxide synthase; WB: Western blotting; GAPDH: glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase.

2.4 H/R條件下SGLT2i對(duì)巨噬細(xì)胞分泌促炎和促纖維化細(xì)胞因子的影響

收集各組巨噬細(xì)胞的上清液,并通過ELISA測(cè)定其細(xì)胞因子含量。與NC組相比,H/R處理增加了PDGF-a、TGF-β、TNF-ɑ、IL-6和IL-1β含量;而PDGF-a、TGF-β、TNF-ɑ、IL-6和IL-1β含量在H/R+SGLT2i組下降(均P<0.05;圖4)。

圖4 RAW264.7上清液中PDGF-a,TGF-β, IL-1β,TNF-ɑ和IL-6含量的比較Figure 4 Comparison of PDGF-a, TGF-β, IL-1β, TNF-ɑ and IL-6 in RAW264.7 supernatants (n=3)A: quantitative analysis of PDGF-a; B: quantitative analysis of TGF-β; C: quantitative analysis of IL-1β; D: quantitative analysis of TNF-ɑ; E: quantitative analysis of IL-6. SGLT2i: sodium-glucose cotransporter 2 inhibitor; H/R: hypoxia/reoxygenation; NC: negative control; PDGF-a: platelet-derived growth factor a; TGF-β: transforming growth factor beta; TNF-ɑ: tumor necrosis factor alpha; IL-6: interleukin 6; IL-1β: interleukin-1 beta; ELISA: enzyme linked immunosorbent assay. Compared with sham group, **P<0.01; compared with IRI group, ##P<0.01.

2.5 SGLT2i處理的巨噬細(xì)胞上清液對(duì)成纖維細(xì)胞活化的影響

在向成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基中添加巨噬細(xì)胞上清液和H/R處理后,測(cè)量成纖維細(xì)胞的激活程度。激活后的成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榧〕衫w維細(xì)胞,高表達(dá)ɑ-SMA和ColⅠ。WB實(shí)驗(yàn)證實(shí),與NC組相比,H/R組成纖維細(xì)胞表達(dá)更高的ɑ-SMA和ColⅠ;H/R+SGLT2i組成纖維細(xì)胞表達(dá)的ɑ-SMA和ColⅠ比H/R組低(均P<0.05)。免疫熒光結(jié)果顯示,與NC組相比,H/R組的成纖維細(xì)胞表達(dá)更高的ɑ-SMA和ColⅠ;H/R+SGLT2i組成纖維細(xì)胞表達(dá)的ɑ-SMA和ColⅠ比H/R組低(均P<0.05)。這些數(shù)據(jù)表明,SGLT2i通過調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的旁分泌來抑制H/R處理的成纖維細(xì)胞激活(圖5)。

圖5 CFs中ɑ-SMA和Col Ⅰ表達(dá)量的比較Figure 5 Comparison of ɑ-SMA and Col Ⅰ expressions in CFs (n=3)A: expression of ɑ-SMA and Col Ⅰ deceted by WB; B: quantitative analysis of ɑ-SMA expression; C: quantitative analysis of Col Ⅰ expression; D: immunofluorescence staining (scale bar=80 μm); E: quantitative analysis of IOD of Col Ⅰ; F: immunofluorescence staining (scale bar=80 μm); G: quantitative analysis of the IOD of ɑ-SMA. SGLT2i: sodium-glucose cotransporter 2 inhibitor; H/R: hypoxia/reoxygenation; NC: negative control; SGLT2i: sodium-glucose cotransporter 2 inhibitor; AVR: adverse ventricular remodeling; IRI: ischemia-reperfusion injury; Col Ⅰ: collagen Ⅰ; DAPI: 4′, 6-diamidino-2-phenylindole; M: merged; Col Ⅲ: collagen Ⅲ. CFs: cardiac fibroblasts; ɑ-SMA: alpha-smooth muscle actin; WB: Western blotting; GAPDH: glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase. Compared with sham group, **P<0.01; compared with IRI group, #P<0.05, ##P<0.01.

3 討 論

在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,我們驗(yàn)證了SGLT2i抑制缺血再灌注后的心肌纖維化,降低了膠原蛋白含量,降低了Ⅰ型與Ⅲ型膠原蛋白的比例,表明SGLT2i對(duì)心肌纖維化的抑制作用。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)SGLT2i促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2極化,從而抑制巨噬細(xì)胞分泌促炎和促纖維化細(xì)胞因子(PDGF-a,TGF-β,IL-1β,TNF-ɑ,IL-6)。因此,SGLT2i發(fā)揮了抗纖維化作用。

在EMPA-REG/EMPEROR-REDUCTION/DAPA-HF試驗(yàn)等臨床試驗(yàn)中,無論心力衰竭患者是否患有糖尿病,SGLT2i均降低了他們心血管死亡或住院的風(fēng)險(xiǎn)[10-12]。SGLT2i發(fā)揮心臟保護(hù)作用的機(jī)制包括降低前負(fù)荷和后負(fù)荷,改善心臟代謝和生物能量,抑制心肌Na+/H+交換,減少壞死和心臟纖維化,以及改變脂肪因子和心外膜脂肪組織含量[13]。然而,SGLT2i調(diào)節(jié)心臟纖維化的主要機(jī)制仍有待研究。SGLT2i減少纖維化可能與其抑制炎癥反應(yīng)、直接抑制CFs活化以及通過巨噬細(xì)胞極化間接調(diào)節(jié)CFs活化和抑制內(nèi)皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化有關(guān)[14]。SGLT2i對(duì)于CFs的活化增殖和遷移具有直接的抑制作用,既往研究證實(shí)SGLT2i可以抑制高糖、TGF-β或血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的CFs活化及膠原蛋白的分泌。但對(duì)于其通過影響巨噬細(xì)胞旁分泌調(diào)節(jié)CFs活化與膠原蛋白分泌的作用尚不清楚,所以我們研究不同條件處理的巨噬細(xì)胞其上清液中促炎及促纖維化細(xì)胞因子的改變,并進(jìn)一步探討上清液中這些因子的改變對(duì)于CFs活化和膠原蛋白分泌的影響。

既往研究已經(jīng)提出了成纖維細(xì)胞和巨噬細(xì)胞之間的相互作用[11]。巨噬細(xì)胞是成纖維細(xì)胞存活所需的PDGF肽的重要來源?；罨木奘杉?xì)胞在體外促進(jìn)成纖維細(xì)胞的遷移和增殖,在PDGF-a阻斷抗體存在時(shí),這種遷移和增殖會(huì)減弱[12]。在成纖維細(xì)胞中,TGF-β將成纖維細(xì)胞活化為肌成纖維細(xì)胞[4]。TGF-β可以通過多種細(xì)胞類型表達(dá),其中包括活化的巨噬細(xì)胞[4]。不同亞型的巨噬細(xì)胞分泌不同的細(xì)胞因子,在纖維化中起不同的作用。以往研究已經(jīng)證實(shí)M2b可以發(fā)揮抗纖維化作用[15]。M2b移植致心肌梗死區(qū)改善大鼠心肌纖維化的研究證實(shí):M2b減小了梗死心肌的纖維化面積,這可能與梗死組織中TGF-β、PDGF-a、血小板衍生生長因子受體(platelet-derived growth factor receptor,PDGFR)的基因表達(dá)量降低有關(guān),并且M2b與CFs共培養(yǎng)可以降低CFs中PDGFR的基因表達(dá)水平[16]。然而,SGLT2i對(duì)這些因子分泌的影響尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)得出結(jié)論,SGLT2i可以通過巨噬細(xì)胞極化,從而調(diào)節(jié)纖維化,與以前的研究一致[4]。我們探索了SGLT2i調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化后巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子改變的研究,并將巨噬細(xì)胞上清液加入成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基,證實(shí)了SGLT2i通過改變巨噬細(xì)胞旁分泌發(fā)揮其抗纖維化作用。我們?cè)贗RI模型中驗(yàn)證了SGLT2i對(duì)心肌纖維化的影響,還發(fā)現(xiàn)SGLT2i不僅降低了膠原蛋白含量,而且還改變了Ⅰ型與Ⅲ型膠原蛋白的比例,進(jìn)一步解釋了SGLT2i對(duì)IRI后心肌纖維化的保護(hù)作用。

綜上,本研究觀察了SGLT2i通過調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞旁分泌改善心肌纖維化的作用,但對(duì)其具體分子機(jī)制缺乏一定的研究,后續(xù)我們將對(duì)其具體分子機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。在此次實(shí)驗(yàn)分組中沒有達(dá)格列凈抑制組,將在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步完善。本實(shí)驗(yàn)表明SGLT2i可以通過促進(jìn)M2極化抑制促纖維化和促炎細(xì)胞因子的分泌,從而發(fā)揮抑制心肌纖維化的作用。為SGLT2i改善心肌缺血再灌注損傷后AVR的作用提供了新的認(rèn)識(shí)和可能的機(jī)制。