赤桉樹蜂蜜對免疫功能低下模型小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用

王麗霞 林韋康 陶春霖

免疫系統(tǒng)是機體執(zhí)行免疫應(yīng)答和免疫功能的重要系統(tǒng)，機體健康與免疫系統(tǒng)穩(wěn)定運行息息相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，在感染新冠肺炎死亡的患者中，多為免疫功能低下的老年人，因此提高自身機體抵抗力非常重要。

蜂蜜具有多種功能活性及健康益處，如抗氧化、抑菌活性、抗炎活性、免疫調(diào)節(jié)活性等。根據(jù)蜜源植物種類的不同，蜂蜜分為多種蜜種，其中桉樹蜜的抑菌效果要優(yōu)于一般蜂蜜?；诖耍疚闹饕剿鞒噼駱浞涿郏‵ewsters Farm Jarrah Honey，F(xiàn)FJH）對免疫功能低下模型小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用，以期為增強免疫低下人群的免疫功能及后疫情時代提高抗病能力提供營養(yǎng)支持。

一、材料與儀器

1.實驗動物。C57BL/6小鼠，雄性，SPF級，個體質(zhì)量為（20±2）g，6-8周齡，購買于北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號為SCXK（京）2019-0008。在動物適宜條件下并可自由取食和喝水，喂養(yǎng)7d用于實驗。

2.蜂蜜與試劑。赤桉樹蜂蜜（FFJH），洋妝源（上海）網(wǎng)絡(luò)科技有限公司；環(huán)磷酰胺（CTX），通化茂祥制藥有限公司；IL-2 ELISA試劑盒、TNF-α ELISA試劑盒、IFN-γ ELISA試劑盒、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）、ELISA試劑盒（LOT20200911A）、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ），上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

3.主要儀器。XPR電子分析天平，梅特勒托利多科技（中國）有限公司；5804R型低溫高速離心機，德國Eppendorf公司；DK-S24電熱恒溫水浴鍋，上海精宏實驗設(shè)備公司；BIO-RAD680型酶標儀，美國BIO-RAD公司。

二、實驗與方法

1.造模與給藥。將實驗小鼠隨機分為7組，對照組、模型組、藥物組（給藥劑量參考張喜武的研究）、市售蜂蜜組以及FFJH低、中、高劑量組，每組10只。除對照組小鼠外，均一次性腹腔注射CTX 200mg/kg，對照組注射等體積生理鹽水。藥物組（人參提取液10mL/kg）、市售蜂蜜組（10g/kg）、FFJH低劑量組（1.25g/kg）、FFJH中劑量組（5g/kg）和FFJH高劑量組（10g/kg）均從第2天開始灌胃給藥；對照組及模型組每天灌胃等體積生理鹽水，連續(xù)灌胃14d。

2.標本采集與指標檢測。（1）器官指數(shù)檢測。給藥結(jié)束后次日稱量各組小鼠體質(zhì)量，頸椎脫臼處死小鼠，解剖取出胸腺、脾臟、肺臟，除去血污，吸干表面水分后，放于電子分析天平上稱重。計算公式如下：

器官指數(shù)=器官重量（mg）/體質(zhì)量（g）

（2）血清細胞因子表達水平檢測。眼球取血，在4℃、4500r/min條件下，離心10min，收集上層血清。血清中IL-2、IFN-γ、TNF-α水平的測定，按照試劑盒操作說明書進行。

（3）肺組織勻漿液ACE2和AngⅡ表達水平檢測。首先制備10%的肺組織勻漿液，取適量肺組織，加入9倍磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4），勻漿后，在4500r/min條件下，離心10min收集上清，用蛋白定量后備用。ELISA操作按照試劑盒操作說明書進行。

3.統(tǒng)計學(xué)分析。數(shù)據(jù)分析使用GraphPad Prism v.8.0統(tǒng)計軟件。組間分析使用One-way ANOVA或T-test進行分析。P＜0.01表示具有顯著性差異。

三、結(jié)果與分析

1.FFJH對免疫抑制小鼠臟器指數(shù)的影響。如圖1a所示，與對照組相比，模型組小鼠的胸腺指數(shù)顯著降低（P＜0.01），模型建立成功；與模型組相比，藥物組、FFJH高劑量組小鼠的胸腺指數(shù)均升高（P＜0.01），說明高劑量FFJH可以減緩小鼠胸腺的萎縮程度。

如圖1b所示，與對照組相比，模型組小鼠的脾臟指數(shù)降低（P＜0.05）；與模型組相比，F(xiàn)FJH高、中、低劑量組小鼠的脾臟指數(shù)均有所升高，但差異性無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

如圖1c所示，與對照組相比，模型組小鼠的肺臟指數(shù)顯著升高（P＜0.01）；與模型組相比，F(xiàn)FJH高劑量組的肺臟指數(shù)顯著降低（P＜0.01）。

2.FFJH對免疫抑制小鼠血清細胞因子表達水平的影響。如圖2a所示，與對照組相比，模型組小鼠血清中的細胞因子IL-2表達水平顯著降低（P＜0.01）；與模型組相比，藥物組和FFJH高、中劑量組小鼠血清中的細胞因子IL-2表達水平顯著升高（P＜0.01）。

如圖2b所示，與對照組相比，模型組小鼠血清中的細胞因子IFN-γ表達水平顯著降低（P＜0.01）；與模型組相比，藥物組和FFJH高、中劑量組小鼠血清中的細胞因子IFN-γ表達水平顯著升高（P＜0.01）。

如圖2c所示，與對照組相比，模型組小鼠血清中的細胞因子TNF-α表達水平顯著升高（P＜0.01）；與模型組相比，F(xiàn)FJH高、中劑量組小鼠血清中的細胞因子TNF-α表達水平顯著降低（P＜0.01）。

3.FFJH對免疫抑制小鼠肺組織勻漿液ACE2和AngⅡ表達水平的影響。如圖3a所示，與對照組相比，模型組小鼠的肺組織勻漿液中ACE2表達水平顯著降低（P＜0.01）；與模型組相比，F(xiàn)FJH高、中小鼠的肺組織勻漿液中ACE2表達水平顯著升高（P＜0.01）。

如圖3b所示，與對照組相比，模型組小鼠的肺組織勻漿液中AngⅡ表達水平顯著升高（P＜0.01）；與模型組相比，F(xiàn)FJH高、中劑量組小鼠的肺組織勻漿液中AngⅡ表達水平顯著降低（P＜0.01）。

四、結(jié)論與討論

胸腺指數(shù)的變化直接反映機體細胞免疫水平的高低。IL-2、IFN-γ是具有調(diào)節(jié)機體免疫作用的細胞因子，也是評價機體細胞免疫功能狀態(tài)的重要指標。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）與非小細胞肺癌進展有關(guān)，ACE2還可以將腎素-血管緊張素系統(tǒng)中的AngⅡ降解成血管緊張素1-7，從而發(fā)揮抗炎、抗纖維化作用。ACE2活性功能受阻將導(dǎo)致AngⅡ升高，進一步誘導(dǎo)炎癥因子（如IL-1β、IL-6、TNF-α）、趨化因子等多種物質(zhì)的表達。

與模型組相比，小鼠按照FFJH低、中、高劑量給藥后，高劑量組小鼠的胸腺指數(shù)、肺臟指數(shù)顯著降低；FFJH高、中劑量組小鼠血清中的細胞因子IL-2表達水平顯著降低（P＜0.01），IFN-γ表達水平顯著升高（P＜0.01），TNF-α表達水平顯著降低（P＜0.01）；FFJH高、中劑量組小鼠肺組織勻漿液中ACE2表達水平顯著升高（P＜0.01），AngⅡ表達水平顯著降低（P＜0.01）。實驗結(jié)果表明，F(xiàn)FJH可能通過改善胸腺組織結(jié)構(gòu)、調(diào)節(jié)炎癥胞因子、調(diào)節(jié)肺組織AngⅡ的表達水平而影響環(huán)磷酰胺所致免疫缺陷小鼠的免疫功能。

作者簡介：王麗霞（1986-），女，漢族，北京大興人，大學(xué)本科，研究方向為功能性食品。