直接抗人球蛋白實驗陽性患者的交叉配血方法臨床研究

尹雄 全健 柴方秀

摘要：目的 研究直接抗人球蛋白試驗（DAT）陽性患者的交叉配血方法。方法 選擇我院確診的自身免疫性溶血性貧血、直接抗人球蛋白試驗陽性患者（48例）進行分析，所有參加者接受直接抗人球蛋白試驗、血型鑒定、交叉配血檢測，DAT陽性、血型鑒定、交叉配血檢測，分析交叉配血不合格處理結(jié)果。結(jié)果 直接抗人球蛋白實驗陽性患者中W+-2凝集97.92%。ABO陽性和陰性血型不一致占79.17%；紅細胞自身血清總含量占60.42%；通過冷抗體吸收試驗、乙醚放散試驗，確定血型為A型、B型、O型、AB型的Rh陽性依次為12：11：8：8例。所有參照者配血不合格38例，其中主、次側(cè)均為陽性反應(yīng)19例，主側(cè)陽性和次側(cè)陰性反應(yīng)12例，主側(cè)陰性和次側(cè)陽性反應(yīng)7例。配血不合格原因為冷凝集有15例，冷凝集素效價1：256以上7例，冷凝集素效價1：128有17例。接受冷抗體吸收試驗、乙醚放散試驗、自身抗體吸收試驗后，交叉配血相合31例，交叉配血不合7例。結(jié)論 冷抗體吸收試驗、乙醚放散試驗或自身抗體吸收試驗均可作為血型鑒定和交叉配血的鑒定方法，為直接抗蛋白試驗陽性患者的血型鑒定奠定了有利條件，有效提高臨床交叉配血相合率，確?；颊咻斞踩?/p>

關(guān)鍵詞：直接抗人球蛋白實驗；陽性；交叉配血；血型鑒定

輸血在臨床急救工作中占有重要地位，是治療失血過多、危重患者的重要手段。輸血前，臨床要對每個患者的抗篩、血型進行檢測，并根據(jù)結(jié)果完成配型血選擇，確保患者輸血的安全性。但在臨床配血中，直接抗蛋白質(zhì)實驗陽性的患者由于存在自身抗體，一般會出現(xiàn)與所供血液樣本凝集的現(xiàn)象，進而導致配血困難，同種抗體鑒定難度較大，容易造成安全隱患[1]。為了進一步提高患者的配血成功率，直接進行抗球蛋白實驗檢測及血清學特性檢測的研究非常必要[2～3]。本研究旨在分析直接抗人球蛋白試驗（DAT）陽性患者交叉配血方法。

1資料與方法

1.1 臨床資料

以2021年10月～2022年10月我院確診的48例自身免疫性溶血性貧血、直接抗人球蛋白試驗陽性患者臨床資料為研究樣本，所有病例均已通過血常規(guī)及其他指標檢測確診為自身免疫性溶血性貧血。其中男18例，女30例；年齡15～77歲，平均年齡（47.54±7.62）年；原發(fā)性自身免疫性溶血性貧血20例，繼發(fā)性自身免疫性溶血性貧血28例。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑

邁克公司提供的試劑和儀器：抗人球微柱凝膠卡、ABO正反定型和RhD定型卡、試劑卡孵育器、醫(yī)用離心機。上海血液生物醫(yī)藥有限公司提供的試劑：不規(guī)則抗體檢測細胞，ABO反定型紅細胞；珠海貝索生物技術(shù)有限公司提供的凝聚胺介質(zhì)試劑。深圳愛康生物科技有限公司提供的Aigel 300全自動血型分析儀。

1.2.2 直接抗球蛋白試驗

將新鮮血液標本離心，取壓積紅細胞，配置1%紅細胞作為備用。撕開抗人球蛋白反應(yīng)卡，將50 μl備用紅細胞懸液注入反應(yīng)卡的微管中，用與之配套的離心機進行10 min離心處理后確認結(jié)果。如果紅細胞停留在凝膠上端或凝膠的下半部位，直接抗人球蛋白實驗結(jié)果可能呈陽性。同時，結(jié)合紅細胞滯留的位置、凝膠背景表達等，可將其進一步劃分為5個等級，依次包括4+、3+、2+、1+、W+等級。如果紅細胞完全沉入凝膠介質(zhì)下，其結(jié)果可直接判定為抗人球蛋白實驗結(jié)果陰性。

1.2.3 交叉配血試驗

首先，對采集的血液標本進行離心處理，取壓積紅細胞用生理鹽水配置成2個1 ml濃度為3～5%的紅細胞懸液。提前準備一個帶有主、次側(cè)標記的試管各1個，將受血者的血清或血漿2滴和供血者的紅細胞懸液1滴3%～5%的紅細胞懸液加樣在主側(cè)試管內(nèi)；1滴3%～5%的受血者紅細胞懸液、2滴供血者血清或血漿依次加入次側(cè)試管內(nèi)。然后在試管內(nèi)加入0.65 ml的低離子介質(zhì)溶液混勻后再加入2滴凝聚胺溶液，混勻后進行離心處理，轉(zhuǎn)速控制在3400 rpm/min，離心10 s；取出試管觀察是否溶血，倒掉上清液，讓管底殘留0.1 ml液體，輕輕搖動試管，仔細查看是否有紅細胞凝塊，如果沒有出現(xiàn)凝塊必須重新操作。然后加入2滴懸浮液滴入管中，輕輕搖動試管，使其混合均勻，搖動后觀察試管內(nèi)部情況。

如果凝集現(xiàn)象在60 s內(nèi)散開，說明該凝集現(xiàn)象主要原因在于凝聚胺引起的非特異性凝集，且配血結(jié)果相符合。相反，如果凝集現(xiàn)象超過60 s，則是紅細胞抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，配血結(jié)果不合。此外，對疑難交叉配血進行冷抗體吸收試驗、乙醚放散試驗或自身抗體吸收試驗等，應(yīng)進行交叉配血指導。

1.3 觀察指標

以DAT陽性聚集、血型鑒定、交叉配血檢測結(jié)果、交叉配血不符合處理結(jié)果為觀察指標。

1.4 統(tǒng)計學意義

數(shù)據(jù)處理采用SPSS 13.0統(tǒng)計學軟件，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1 直接抗人球蛋白檢測陽性結(jié)合條件

在參加直接抗球蛋白檢測的48例患者中，W+（弱合并）15例、占31.25%，1+14例、占29.17%，2+18例、占37.50%，3+1例、占2.08%。

2.2 血型檢測

ABO血型正反定型不符合38例（79.17%），患者自身紅細胞、血清凝集29例（60.42%）。A Rh陽性11例（28.95%），B Rh陽性為10例（26.32%）、O Rh陽性為8例（21.05%）、AB Rh陽性為9例（23.68%）。

2.3 交叉配血測試結(jié)果

配血不合格者38例（79.17%），主、次側(cè)均為19例（50.00%、50.00%），主側(cè)陽性和次側(cè)陰性反應(yīng)者12例（31.58%），主側(cè)陰性和次側(cè)陽性反應(yīng)者7例（18.42%）。血液不相容的原因包括冷凝集15例（39.47%），冷凝集素效價1：256以上者7例（18.42%），冷凝集素效價1：128者17例（44.74%）。

2.4 配血不相容性的處理結(jié)果

38例交叉配血不合格患者接受冷抗體吸收試驗、乙醚放散試驗、自身抗體吸收試驗后，交叉配血相合31例（81.58%），交叉配血不合7例（18.42%）。

3討論

直接抗人球蛋白試驗在溶血性貧血鑒別診斷及輸血指導的實施中起著重要作用，特別是對原發(fā)性自身免疫性溶血性貧血、溶血癥等相關(guān)疾病可以提供更科學有效的診斷依據(jù)。如果直接抗人球蛋白試驗結(jié)果呈陽性，則指患者體內(nèi)紅細胞表層伴有不完全性抗體或補體。紅細胞本身伴隨著同一類型的抗體而受到影響；接受輸血的患者體內(nèi)血液中也存在同種抗體，并伴有與獻血者紅細胞上抗原相應(yīng)的抗體；獻血者的血漿和紅細胞之間伴有同一類型的抗體，與受血者的紅細胞抗原發(fā)生某種特殊反應(yīng)；母親體內(nèi)血液中的同種抗體經(jīng)胎盤附著在胎兒紅細胞膜上；補體可以激活自身抗體、同種型抗體，加快紅細胞表面的附著速度；高球蛋白血癥等相關(guān)非特異性吸附蛋白在紅細胞表面。本研究數(shù)據(jù)結(jié)果顯示，DAT陽性凝集強度以中等凝集為主，W+～2+占97.92%。與既往研究結(jié)果一致[4]。

直接抗人球蛋白實驗陽性患者體內(nèi)存在自身抗體，患者易因自身紅細胞過敏，吸附紅細胞可加速抗紅細胞抗體的形成[5]。如果直接抗人球蛋白實驗陽性患者在進行輸血操作時，由于自身抗體的影響，本身或他人紅細胞存在不同程度的凝集現(xiàn)象，使ABO、Rh血型鑒定的難度不斷增加，從而影響交叉配血的試驗程序。特別是一些患者存在同一類型的抗體，會大大增加交叉配血的難度。

本研究發(fā)現(xiàn)，直接抗人球蛋白試驗陽性患者48例中，ABO血型正反定型不符38例（79.17%），患者自身紅細胞、血清凝集29例（60.42%），患者紅細胞內(nèi)存在自身抗體。由于自身抗體分為冷抗體、溫抗體，其中冷抗體大部分分布在人體血清中，常見類型為IgM型，效價較低；伴隨感染、凝血綜合征等，患者血清冷抗體效價有一定程度的上升，常溫狀態(tài)下患者自身冷抗體及其體內(nèi)紅細胞呈反應(yīng)狀態(tài)，影響血型鑒定、交叉配血的進展。相反，溫抗體多見于AIHA患者，表現(xiàn)為溶血性表現(xiàn)，不利于交叉配血。

目前，臨床上進行交叉配血試驗的常用方法主要包括兩種：凝聚胺法和抗球蛋白微柱凝膠法，前者在臨床上大多用于應(yīng)急配血，應(yīng)用年限較長，具有操作方便、檢測結(jié)果快等諸多優(yōu)勢。被稱為高價陽離子多聚體的凝聚胺能快速溶解正電荷，釋放較多正電荷與紅細胞表面的負電荷發(fā)生中和性反應(yīng)，縮小紅細胞間距，進而在正常紅細胞之間產(chǎn)生非特異性凝聚反應(yīng)，同時IgG型抗體直接完成紅細胞凝聚。懸浮液加進去后，僅由凝聚胺引起的非特異性聚集，會因電荷被中和分散，而由抗體介導的特異性凝集不會分散。只有當微管底部沒有紅細胞沉淀時，才能確認結(jié)果為陽性，換言之，若全部的紅細胞沉淀在底部，則判定結(jié)果為陰性，可以表明受血者與供血者的血液混合是一致的。

本研究數(shù)據(jù)顯示，交叉配血不合格者38例（79.17%），主、次側(cè)均為陽性反應(yīng)19例（50.00%、50.00%），主側(cè)陽性和次側(cè)陰性反應(yīng)者12例（31.58%），主側(cè)陰性和次側(cè)陽性反應(yīng)7例（18.42%）。血液不相容的原因包括：配血不合格原因為冷凝集有15例，冷凝集素效價1：256以上7例，冷凝集素效價1：128有17例。臨床上，主、次側(cè)均為陽性反應(yīng)給予患者紅細胞三次清洗，同時進行冷抗體吸收試驗后，將患者自身抗體解離，再采取不規(guī)則抗體檢測和主側(cè)配血干預。在此期間，乙醚放散試驗后的紅細胞、應(yīng)進行獻血者血漿次側(cè)交叉配血；給予主側(cè)陽性反應(yīng)、次側(cè)陰性反應(yīng)，說明患者血清中存在同一類型的抗體，由此可通過乙醚放散試驗處理的紅細胞吸收患者血清自身抗體，被吸收的血清可接受交叉配血試驗。根據(jù)主側(cè)陰性、次側(cè)陽性，可說明患者紅細胞存在自身抗體，對乙醚放散試驗后的紅細胞再次進行次側(cè)配血試驗。針對冷抗體因素、冷凝集素效價等出現(xiàn)異常上升的患者，可先采用溫鹽水來完成對紅細胞的洗滌，并接受自身抗體吸收試驗，而后根據(jù)試驗結(jié)果來做冷抗體吸收試驗以及乙醚放散試驗；經(jīng)過以上流程處理后，交叉配血相合31例（81.58%），交叉配血不合7例（18.42%）。

綜上所述，直接抗人球蛋白實驗陽性患者的血型鑒定、交叉配血實驗均存在較大難度。臨床可合理應(yīng)用過冷抗體吸收試驗、乙醚放散試驗或自身抗體吸收試驗，完成血型鑒定及交叉配血工作，為臨床輸血提供更準確的參考依據(jù)。

參考文獻

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