HPLC法同時測定消炎止咳片中3種黃酮類成分

周興卓

【摘 要】

目的：建立高效液相色譜法（HPLC）同時測定消炎止咳片中蘆丁、槲皮素、芹菜素含量。方法：以phenomonex-C18 （4.6 mm×250 mm， 5 μm）為色譜柱，以甲醇（A）-0.4%磷酸水（B）為流動相，梯度洗脫，檢測波長為360 nm，流速為1.0 mL·min-1，柱溫為30 ℃。結(jié)果：蘆丁、槲皮素、芹菜素在質(zhì)量濃度分別為1.108～110.8 μg·mL-1、1.264～126.4 μg·mL-1、1.016～101.6 μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，加樣回收率分別為99.24%、98.93%和100.98%。結(jié)論：所建立的方法簡便易行、準(zhǔn)確可靠且重復(fù)性好，適用于消炎止咳片的質(zhì)量控制，可作為其質(zhì)量評價方法。

【關(guān)鍵詞】

HPLC；消炎止咳片；蘆?。婚纹に?；芹菜素

【中圖分類號】R927.2?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2023）05-0038-04

Simultaneous Determination of Three Components in Xiaoyan Zhike Tablets by HPLC

ZHOU Xingzhuo

The affiliated hospital of Qingdao university， Qingdao 26600， China

Abstract：

Objective To establish an HPLC method for the simultaneous determination of rutin， quercetin and apigenin in Xiaoyan Zhike tablets. Methods Phenomonex- C18 （4.6 mm×250 mm， 5 μ m） As a chromatographic column， with methanol （A）-0.4% phosphoric acid water （B） as the mobile phase， gradient elution， the detection wavelength is 360 nm， the flow rate is 1.0 mL·min-1， and the column temperature is 30 ℃. Results The mass concentrations of rutin， quercetin and apigenin were 1.108-110.8， 1.264-126.4 and 1.016-101.6 respectively μ There was a good linear relationship with the peak area in the range of 1.108-110.8μg·mL-1、1.264-126.4μg·mL-1、1.016-101.6 μg·mL-1. The recoveries were 99.24%， 98.93% and 100.98% respectively. Conclusion The established method is simple， accurate， reliable and reproducible. It is suitable for the quality control of Xiaoyan Zhike tablets and can be used as a quality evaluation method.

Keywords：

HPLC; Xiaoyan Zhike Tablets; Rutin; Quercetin; Apigenin; Quality Control

消炎止咳片由胡頹子葉、太子參、百部、桔梗等 9 味中藥組成，用于治療氣管炎、胸滿氣逆、咳嗽痰多等［1］，其現(xiàn)行質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（YBZ19262005）中僅收載了以穿心蓮為指標(biāo)成分的含量測定方法和以麻黃為對照的薄層色譜定性鑒別方法，但仍無法全面體現(xiàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的可控性、科學(xué)性。處方中君藥胡頹子葉具有止咳平喘、止血解毒的功效［2］，含有黃酮、生物堿、萜等類等化合物［3］。目前，消炎止咳片制劑還未見以君藥胡頹子葉主要活性成分為指標(biāo)成分的質(zhì)量控制方法研究報道，故本實驗以蘆丁、槲皮素、芹菜素為指標(biāo)成分，建立了消炎止咳片制劑中3種黃酮類成分的HPLC含量測定方法，以期為消炎止咳片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高完善提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器 Waters2695高效液相色譜儀（Waters公司）；KQ-500DE型超聲機（昆山市超聲儀器有限公司）；CPA225D十萬分之一型電子天平（德國賽多利斯）。

1.2 試藥 對照品：蘆?。ㄅ枺?00080-201811）、槲皮素對照品（批號：100081-200406）、芹菜素對照品（批號：AF9032008）購自中國藥品生物制品檢定所，不同批次消炎止咳片購自平和藥房。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 以phenomonex-C18 （4.6 mm×250 mm， 5 μm）為色譜柱，以甲醇（A）-0.4%磷酸水（B）為流動相，梯度洗脫，檢測波長為360 nm，流速為1.0 mL·min-1，柱溫為30 ℃；進樣量10 μL。梯度洗脫程序為：0～15 min，40%～45%（A）；15～20 min，45%～52%（A）；20～40 min，52%～55%（A）；40～55 min，55%～80%（A）。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取干燥后的蘆丁對照品11.08 mg、槲皮素對照品12.64 mg、芹菜素對照品10.16 mg至100 mL的量瓶中，加甲醇制成質(zhì)量濃度分別為110.8、126.4和101.6 μg·mL-1的混合對照溶液，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取消炎止咳片20片，去除包衣，研細(xì)，取約1.0 g，置25 mL錐形瓶中，加入10 mL甲醇，稱重，超聲提取30 min，放冷，稱重，用甲醇補齊至失重，過濾，搖勻，即得。

2.2.3 陰性溶液的制備 按處方比例及生產(chǎn)工藝制備不含胡頹子葉的陰性樣品，同法制備陰性對照溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性試驗 分別精密吸取上述制備的對照品、供試品、陰性對照溶液10 μL，注入HPLC色譜儀，按“2.1”項下色譜條件分析。色譜圖如圖1所示。

2.3.2 線性關(guān)系考察 分別精密吸取“2.2.1”項下溶液0.1 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL、10.0 mL至10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度。分別吸取10 μL注入HPLC分析，以峰面積Y對進樣濃度X進行線性回歸計算，結(jié)果蘆丁、槲皮素、芹菜素在質(zhì)量濃度為1.108～110.8 μg·mL-1、1.264～126.4 μg·mL-1、1.016～101.6 μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，回歸方程分別為Y=37518X+2089（r=0.9997）、Y=50143X-6472（r=0.9998）和Y=42812X+8835（r=0.9996）。

2.3.3 精密度試驗 精密吸取上述混合對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，連續(xù)6次，記錄峰面積并計算RSD，結(jié)果見表1。結(jié)果顯示，蘆丁、槲皮素、芹菜素的RSD分別為1.07%、0.81%、1.85%。表明儀器精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性試驗 取同一批號（200916）樣品，按“2.2.1”項下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算RSD，結(jié)果見表1。結(jié)果顯示，蘆丁、槲皮素、芹菜素的RSD分別為1.97%、0.49%、2.01%。表明方法重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗 取同一批號（200916）供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分別在0 h、2 h、4 h、8 h、10 h、12 h、24 h進樣測定，記錄峰面積并計算RSD，結(jié)果見表2。結(jié)果顯示，蘆丁、槲皮素、芹菜素的RSD分別為1.62%、1.59%、0.64%。表明3種成分在甲醇溶液中24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6 加樣回收試驗 取已知含量（200916）的樣品6份，每份約0.5 g，按1∶1的比例加入3種對照品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分析，計算回收率。結(jié)果見表3。

2.3.7 樣品含量測定 取不同批次樣品約1. 0 g，每個批次平行3份，按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分析。測定結(jié)果見表4。

3 討論

3.1 流動相的選擇 本試驗分別考察了甲醇、乙腈以及甲醇-水、甲醇-酸水、乙腈-水、乙腈-酸水等不同組成和比例的流動相［4］。結(jié)果顯示，以甲醇-0.4%磷酸水為流動相為流動相時，各色譜峰之間能夠有效分離，峰形相對較好，無拖尾現(xiàn)象。因此，選擇甲醇-0.4%磷酸水為流動相進行洗脫。

3.2 提取方法的選擇 本實驗分別考察了甲醇、乙醇提取，超聲、回流提取，40%、60%、80%的甲醇提取，1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30的料液比，以及15 min、30 min、45 min、60 min的提取時間，結(jié)果顯示以甲醇為溶劑，1∶25的料液比，超聲提取30 min最佳。

3.3 檢測波長的選擇 據(jù)報道［5］，蘆丁的檢測波長為254 nm，槲皮素的檢測波長為360 nm，芹菜素的檢測波長為365 nm。分別考察254 nm、360 nm、365 nm波長下的測定效果，發(fā)現(xiàn)以360 nm為檢測波長時，3個峰的峰型和分離度最好，基線最平。

4 小結(jié)

不同批次的消炎止咳片3種黃酮類成分的HPLC含量測定結(jié)果顯示，不同批次之間的消炎止咳片中3種黃酮類成分含量存在一定的差異，可能和原藥材的質(zhì)量及片劑的制劑工藝等因素相關(guān)。本實驗建立的消炎止咳片中3種黃酮類成分的HPLC含量測定方法，所建立的方法快速簡便，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性好，專屬性強，可為消炎止咳片的質(zhì)量控制和質(zhì)量評價提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

［1］徐飛鶴. 高效液相色譜法測定消炎止咳片中鹽酸麻黃堿的含量［J］. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志， 2012， 32（23）：1931-1932.

［2］楊夢璇， 莊秀玲， 孫雪雁， 等. 大葉胡頹子葉止咳作用的研究［J］.? 時珍國醫(yī)國藥， 2014， 25（6）：1343-1344.

［3］覃勤， 鐘大妹， 呂倩， 等. 胡頹子葉中總黃酮及三種指標(biāo)成分的含量測定方法研究［J］. 時珍國醫(yī)國藥， 2016， 27（3）：535-538.

［4］毛坤軍， 黃平， 周慧云， 等. HPLC同時測定祛痰止咳膠囊中3種活性成分含量［J］. 中國合理用藥探索， 2017， 14（6）：57-59，63.

［5］李進， 謝云， 定天明， 等. 一測多評法測定金櫻子中黃酮類成分的含量［J］. 中藥材， 2021， 44（2）：399-402.

（收稿日期：2020-07-13 編輯：劉 斌）