三參養(yǎng)胃膠囊質量標準及初步穩(wěn)定性考察

張明 趙賢媚 張育勤 金偉華 易榮 浦志強 劉林森 阮美鳳 于波濤

【摘 要】

目的：考察三參養(yǎng)胃膠囊質量可控制指標，并對初步穩(wěn)定性進行研究。方法：采用薄層色譜（TLC）法對方中丹參、延胡索、甘草、柴胡進行定性鑒別；采用高效液相色譜法對制劑中芍藥苷進行含量測定。結果：TLC斑點清晰、分離度好、專屬性強；芍藥苷進樣濃度16.30～163.00μg/mL范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系（r=0.999），平均回收率為99.38%，RSD=1.18%（n=9）。三參養(yǎng)胃膠囊2年內穩(wěn)定可靠。結論：本方法簡單、易行，適用于三參養(yǎng)胃膠囊的質量控制，有效期暫定為2年。

【關鍵詞】

三參養(yǎng)胃膠囊；質量控制；初步穩(wěn)定性；芍藥苷；高效液相色譜法

【中圖分類號】R284.1?? 【文獻標志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2023）05-0032-06

Quality Standard of Sanshenyangwei Capsules and Study on Its Stability

ZHANG Ming1 ZHAO Xianmei1 ZHANG Yuqin1 JIN Weihua1 YI Rong1

PU Zhiqiang1 LIU Linsen1 RUAN Meifeng2 YU Botao1*

1.Department of Pharmacy， The General Hospital of Western Theater Command PLA，? Chengdu 610083，China；

2.North Sichuan Medical College，Nanchong 637000，China

Abstract：

Objective To establish the quality standard of Sanshenyangwei capsules and to investigate its stability so as to determ its validity duration. Method TLC method was applied to the identification of Salvia miltiorrhiza、Corydalis yanhusuo、Glycyrrhiza uralensis Fisch and Bupleuri Radix .HPLC method was adopted to determine the contents of Paeoniflorin. Result TLC spots were clear， well-separated and spectific. The linear range of Paeoniflorin was 16.30-163.00μg/mL （r=0.999）with an average recovery of 99.38%，RSD=1.18%（n=9）.The validity duration of Sanshenyangwei Capsules was tentatively set as 2 years. Conclusion The established method is simple and feasible，and it can be used to the quality control Sanshenyangwei capsules.

Keywords：

Sanshenyangwei Capsules；Quality Standard；Stability；Paeoniflorin；HPLC

三參養(yǎng)胃膠囊為西部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院臨床經(jīng)驗方，早期被制成胃病康顆粒劑在臨床使用多年，其功效補中益氣，活血化瘀，滋養(yǎng)胃陰，臨床用于慢性胃炎、慢性萎縮性胃炎、胃及十二指腸潰瘍等［1］，患者反映療效準確、攜帶方便，但因該顆粒劑中含原生藥粉，患者服用時口感不佳，難以下咽。筆者參照2020年中國藥典要求，結合該方藥材理化性質，將其首次制成膠囊劑，同時參考胃病康顆粒劑近年來質控提高［2］，建立該膠囊質量標準，并初步考察其穩(wěn)定性。

1 儀器與材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀（Agilent Technologies 1200 series）；AL-204分析天平（梅特勒-托利多儀器上海市有限公司）；HU-3120B型超聲波清洗器（功率240 W，頻率40KHZ，天津市恒奧科技發(fā)展有限公司）；HH-824S型恒溫水浴鍋（上海君竺儀器制造有限公司）；101-2B型電熱鼓風干燥箱（上海市實驗儀器總廠） ；ZF-20D型三用紫外燈（上海市安亭電子儀器廠）；薄層色譜硅膠預制板（青島海浪硅膠干燥劑廠）；ZB-1D型崩解時限檢查儀（天津天光光學儀器廠）。

1.2 材料 三參養(yǎng)胃膠囊由西部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院藥劑科制劑中心提供（批號依次：191009、191010、191011）；延胡索對照藥材（批號：181215）、丹參對照藥材（批號181120）；甘草對照藥材（批號180509）、蘆丁對照品（批號：181201）、芍藥苷（批號：181010）對照藥品均由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇、乙腈、正丁醇、三氯甲烷為色譜純，其他試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 定性鑒別［3］

2.1.1 丹參的TLC鑒別 取本品2g，研細，加入乙醇25mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作為供試品溶液。另取丹參對照藥材1g，加入乙醇5mL，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（2020版《中國藥典》四部通則0502）試驗，吸取上述溶液適量，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，而陰性對照無干擾。結果如圖1所示。

2.1.2 延胡索的TLC鑒別 取本品5mL，加三氯甲烷20mL，超聲處理20min，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷2mL使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索對照藥材0.5 g，加三氯甲烷10mL，同法制成1mL對照藥材溶液。取除延胡索的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。照TLC法試驗，吸取上述4種溶液適量，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。結果如圖2所示。

2.1.3 甘草的TLC鑒別 取本品2 g，研細，加入三氯甲烷50mL，加熱回流1 h，濾過，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，加水10mL 攪拌濕潤，加水飽和正丁醇100mL，超聲處理30 min，濾過，取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取甘草對照藥材1 g，加入三氯甲烷20mL，同法制成1mL對照藥材溶液。取除甘草的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。照薄層色譜法［2020版《中國藥典》四部通則0502］試驗，吸取上述溶液適量，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（ 15∶1∶1∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點。結果如圖3所示。

2.1.4 柴胡的TLC鑒別 取本品10g，研細，加入甲醇30mL，超聲處理15 min，濾過，濾液濃縮至5mL，作為供試品溶液。另取蘆丁對照品，加甲醇制成每1mL含4 mg的溶液，作為對照品溶液。取除柴胡的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。照薄層色譜法（2020版《中國藥典》四部通則0502）試驗，吸取上述溶液適量，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（8∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，在105℃加熱30 min揮干乙醇后，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。結果如圖4所示。

2.2 芍藥苷含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備 取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成163 μg·mL-1的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 隨機選取樣品，混合并研碎，選約0.1 g，精密稱重，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率240 W，頻率40 kHz）20 min，放冷，補足并稱定重量，搖勻，離心，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按處方量取除白芍外的其余藥材，按制劑工藝及“2.2.2”方法制成陰性樣品溶液。

2.2.4 色譜條件 色譜柱：Agilent C18 （150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈（A）∶0.12%磷酸（B）（15∶85）；檢測波長：230 nm；體積流量：1.0mL·min-1；柱溫：30℃；進樣量：10 μL。理論塔板數(shù)不低于3000，分離度不低于1.5。色譜圖如圖5所示。

2.2.5 標準曲線的制備 精密量取“2.2.1”項下不同體積對照品溶液，添加甲醇定容，得到芍藥苷濃度為163.00μg/mL、130.4.00μg/mL、97.8.00μg/mL、65.200μg/mL、32.60μg/mL、16.30μg/mL的對照品溶液，依次進樣分析，以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，回歸方程為Y=11.19X+24.27，r=0.9999。數(shù)據(jù)顯示，芍藥苷在16.30～163.00μg/mL濃度范圍內有良好的線性關系。

2.2.6 精密度試驗［4］ 精密吸取“2.2.1”項下對照品溶液10 μL，重復進樣6次，測得峰面積，峰面積RSD為0.94％，結果表示儀器精密度良好。

2.2.7 重復性試驗［5］ 取同一批號樣品適量，共6份，分別按“2.2.2”方法平行制備供試品溶液，按上述色譜條件測定峰面積并計算含量。結果，芍藥苷含量的RSD為1.25％。結果表示此法可重復性佳。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗［6］ 取同一批號供試品溶液適量，分別在0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h進樣10 μL，測定峰面積，RSD為1.06％ （n=6），表明供試品溶液（避光）至少在24 h內穩(wěn)定。

2.2.9 加樣回收率［7］ 取已知含量樣品（批號：191009）適量，共9份，每份約0.05 g，再分別加入芍藥苷0.5mL、0.5mL、0.5mL、1mL、1mL、1mL、2mL、2mL、2mL，按“2.2.2”方法制成供試品溶液，按上述色譜條件進樣測定，并計算加樣回收率。結果見表1。

2.2.10 樣品測定 取供試品3批，精密稱取樣品適量，按照按“2.2.2”方法，按上述色譜條件測定。結果見表2。

3 穩(wěn)定性考察

3.1 樣品包裝及考察條件 取樣品（批號：191009）以臨床試驗用包裝（包裝材料—鋁塑的質地與結構相當于上市藥品包裝）于室溫下放置，連續(xù)考察12個月。

3.2 考察項目及方法依據(jù) 按2020年版中國藥典中膠囊劑穩(wěn)定性重點考察項目［7］操作，包括性狀、含量、水分、崩解時限、裝量。

3.3 影響因素試驗

3.3.1 高溫試驗 取樣品（批號：191009）適量，除去外包裝，置適宜的開口容器中，于60℃放置10 d，分別于0 d、5 d、10 d時取樣，按“3.2”項下要求檢測。結果見表3。

3.3.2 高濕試驗 取樣品適量，置恒濕密閉容器中，在25℃相對濕度為90%±5%條件下放置10 d，分別于0 d、5 d、10 d時取樣，按“3.2”項下要求檢測。結果見表3。

3.3.3 強光照試驗 ?取樣品（批號191009）開口，于照度為（4500±500）lX條件下放置10 d，分別于0 d、5 d、10 d時取樣，按“3.2”項下要求檢測。結果見表3。

3.4 加速試驗 取樣品（批號191009）適量，按上市包裝，于溫度（40±2）℃、相對濕度75%±5%的條件下放置6個月，分別于第0個月、1個月、2個月、3個月、6個月末取樣1次，按3.2項要求檢測。結果見表4。

3.5 長期試驗 取樣品（批號191009）適量，按上市包裝，于溫度（25±2）℃、相對濕度為60%±5%的條件下放置24個月，分別于第0個月、3個月、6個月、9個月、12個月、18個月、24個月末取樣1次，按3.2項要求檢測。結果見表5。

3.6 考察結論 三參養(yǎng)胃膠囊樣品為期24個月的質量考察結果表明，該品種在24個月內質量穩(wěn)定，所以本品有效期定為2年。

4 討論

本制劑由黨參、當歸、丹參、延胡索等中藥制成顆粒劑型，在臨床應用多年，療效確切，因該制劑有原生藥粉直接入藥，患者服用過程中口感欠佳，且攜帶、儲存皆有不便。筆者將三參養(yǎng)胃顆粒劑改為三參養(yǎng)胃膠囊劑，同時增加TLC、HPLC檢驗，并初步考察了穩(wěn)定性。方中白芍具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗血栓、降血脂、改善心肌肥厚、保肝作用［8-12］；丹參具有養(yǎng)血安神、活血化瘀、涼血消腫等功效［13］，在保護血管內皮細胞、抗心律失常、抗動脈粥樣硬化、促進微循環(huán)等方面發(fā)揮藥理作用［14-16］。

4.1 丹參TLC鑒別 本實驗復核人員重復試驗時，發(fā)現(xiàn)斑點顏色不穩(wěn)定，試驗重現(xiàn)性不理想。分析原因為丹參酮ⅡA性質較不穩(wěn)定，隨著展開后薄層板放置時間的延長，斑點顏色逐漸變淡，通過增加點樣量至8 μL，室溫點板，薄層板取出晾干后立即檢視，并覆蓋保鮮膜，結果斑點清晰明確。

4.2 延胡索TLC鑒別 試驗中，發(fā)現(xiàn)延胡索分離效果不佳，薄層板中上對照品與樣品的藍色和黃色熒光斑點互有干擾，通過加長薄層板長度，減少點樣量，提取殘渣用無水乙醇溶解后，各斑點面積均變小，干擾的兩斑點完全分離。

4.3 甘草的TLC鑒別 試驗中，發(fā)現(xiàn)甘草斑點易出現(xiàn)拖尾和背景干擾，不同的試驗人員操作后，重現(xiàn)性差，分析原因發(fā)現(xiàn)，在進行“105℃加熱至斑點顯色清晰”步驟時，復核試驗人員未對烘烤時間精確把控，烘烤時間不夠時斑點未能顯色完全，烘烤時間過多時，薄板易出現(xiàn)黃黑色雜質干擾顯色斑點。經(jīng)過筆者多次驗證，嚴格將電烤箱溫度維持在（105±1）℃時將樣板放入35min后取出觀察，顯色斑點清晰，分離度好，未出現(xiàn)背景干擾。本文精密度、重復性、穩(wěn)定性、回收率均符合要求，可用于三參養(yǎng)胃膠囊的質量控制，初定本品每膠囊（0.25 g）含芍藥苷不得少于5.09 mg。

4.4 藥物穩(wěn)定性 藥物穩(wěn)定性涉及多方面影響，筆者所處醫(yī)院為我國西南地區(qū)，陰冷、潮濕天氣較為多見，原顆粒劑由于含原生藥粉，成品除菌、存儲方面存在諸多難點。依照2020版藥典要求，按照中藥膠囊劑要求，設計質量測定方法、著重考察穩(wěn)定性方案。根據(jù)影響因素試驗、加速試驗、長期試驗考察結果分析可知，該制劑性狀、鑒別、含量、水分、裝量等各個考察指標在有效期內均檢測合格。

參考文獻

［1］范開華，于波濤，陳華，等.胃病康藥效學實驗［J］.西南國防醫(yī)藥，2010，20（3）：249-251.

［2］王玲潔，宋宗輝，陳相旭，等.胃病康顆粒質量標準提高［J］.解放軍藥學學報，2018，34（4）：309-312.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（四部）［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020.

［4］孟慶慶，特布新，白明剛，等.蝸牛藥材質量標準提升研究［J］.中國民族民間醫(yī)藥，2019，28（1）：39-44.

［5］王銀潔，劉本臣，劉軍，等.消腫止痛液有效部位軟膏的制備工藝及其質量標準研究［J］.中國民族民間醫(yī)藥，2018，27（19）：21-25..

［6］陳新元，李柯，陳丹，等.玄麥利咽口服液質量標準研究［J］.中國民族民間醫(yī)藥，2018，27（19）：37-41.

［7］陳奇，姜英子，徐雅娟，等.參黃養(yǎng)陰膠囊質量標準研究［J］.中國民族民間醫(yī)藥，2018，27（13）：25-27.

［8］吳麗，王麗麗，費文婷，等.芍藥苷和芍藥內酯苷對小鼠疼痛模型的鎮(zhèn)痛作用及對β-EP、PGE2的影響［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2018，33（3）：915-918.

［9］段文娟，李月，楊國紅，等.白芍對斑馬魚促血管生成和抗血栓作用的研究［J］.時珍國醫(yī)國藥，2018，29（4）：834-837.

［10］李寧，李肇進，張博，等.白芍多糖抗糖尿病作用的實驗研究［J］.中藥材，2016，39（6）：1408-1410.

［11］黃楨，魏毅，王卓，等.白芍總苷對NAFLD大鼠炎癥通路中TLR4和JNK蛋白表達的影響［J］.湖南師范大學學報（醫(yī)學版），2018，15（2）：23-27.

［12］鄭亞萍，康紅鈺.Wnt/β-catenin信號通路在白芍總苷干預大鼠心肌肥厚中的作用［J］.中成藥，2018，40（1）：194-197.

［13］史順敏，俞年軍，于凡，等.丹參種質資源的研究進展［J］.現(xiàn)代中醫(yī)藥，2016，36（6）：113-117.

［14］王維蓉，林蓉，彭寧，等.丹參酮ⅡA對過氧化氫損傷人血管內皮細胞的保護作用［J］.中藥材，2006（1）：49-51.

［15］趙梅，郭振豐，李天時，等.丹參酮ⅡA對大鼠實驗性心肌梗死心律失常機制研究［J］.中國醫(yī)院藥學雜志，2016，36（17）：1452-1455.

［16］李麗君，賈鈺華，孫學剛，等.定心方及丹參酮ⅡA對心肌缺血-再灌注損傷大鼠白細胞介素-6的影響［J］.貴陽醫(yī)學院學報，2010，35（2）：118-122.

（收稿日期：2020-07-08 編輯：劉 斌）