生脈金刺梨飲對(duì)慢性疲勞綜合征小鼠的影響

齊慶文 陳大琳 郝家翔 曾慶赟 徐林躍 劉楊 曹峰

【摘 要】

目的：通過(guò)小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，觀(guān)察生脈金刺梨飲及金刺梨緩解慢性疲勞綜合征小鼠的作用效果。方法：通過(guò)剝奪睡眠、負(fù)重游泳的方法建立慢性疲勞綜合征小鼠模型。將50只已成功建立CFS模型的雄性KM小鼠隨機(jī)分成模型組、生脈金刺梨飲高濃度組、生脈金刺梨飲中濃度組、生脈金刺梨飲低濃度組、金刺梨組，以10只未造模小鼠為空白對(duì)照組，然后持續(xù)灌胃15 d。觀(guān)測(cè)小鼠體重變動(dòng)以及自主活動(dòng)的程度變化，并檢測(cè)肝糖原、血乳酸和血尿素氮水平。結(jié)果：與空白組相比，造模各組小鼠體重、活動(dòng)次數(shù)、站立次數(shù)顯著降低（P<0.05）；與模型組相比，生脈金刺梨飲高、中劑量組全血乳酸含量顯著降低（P<0.05，P<0.01）；與模型組相比，生脈金刺梨飲高、中、低劑量組尿素氮含量均明顯低于模型組（P<0.01，P<0.01，P<0.05）；金刺梨組肝糖原含量顯著高于模型組（P<0.05）。結(jié)論：生脈金刺梨飲可以提高小鼠活動(dòng)能力，通過(guò)降低血乳酸、血尿素氮含量，緩解小鼠慢性疲勞；金刺梨具有增加慢性疲勞綜合征小鼠肝糖原儲(chǔ)備的功效。

【關(guān)鍵詞】

慢性疲勞綜合征；生脈金刺梨飲；金刺梨；緩解疲勞

【中圖分類(lèi)號(hào)】R285.5?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2023）05-0019-04

Effects of Shengmai Jincili Yin on Chronic Fatigue Syndrome Mice

QI Qingwen CHEN Dalin HAO Jiaxiang ZENG Qingyun XU Linyue LIU Yang CAO Feng*

Guizhou University of Chinese Medicine，Guiyang 550025，China

Abstract：

Objective To observe the effects of ShengMaiJinCiLiYin on relieving chronic fatigue syndrome on mice through in vivo experiments. Methods A mouse model of chronic fatigue syndrome was established by wake-up therapy and weight-loaded swimming test. 50 male KM mice that had successfully established the CFS model were randomly divided into 5groups，namely， the model group， the high concentration group on ShengMaiJinCiLiYin，the medium concentration group on ShengMaiJinCiLiYin， the low concentration group on Shengmai Jincili Yin， and the group on rosa sterilis var. leioclada. 10 mice that had not established the model were used as a blank control group with continuous intragastric administration for 15 days. Results Compared with the blank control group， the weight， times of activities and standing were significantly lower in the mice model groups （P<0.05）; compared with the model group， the content of lactic acid in whole blood specimens was significantly lower in the high and medium dose groups on Shengmai Jincili Yin（P<0.05，P<0.01）; the content of blood urea nitrogen was significantly lower in the high， medium and low dose groups onShengmai Jincili Yin（P<0.01，P<0.01，P<0.05）; the content of hepatic glycogen in the group on rosa sterilis var. leioclada was significantly higher than that in the model group （P<0.05）. Conclusion Shengmai Jincili Yincan improve the activity of mice and relieve chronic fatigue by reducing the content of blood lactic acid and blood urea nitrogen; rosa sterilis var. leioclada has the effect of increasing the reserve of liver glycogen on mice with chronic fatigue syndrome.

Keywords：

CFS；Shengmai Jincili Yin；Rosa Sterilis；Relieve Fatigue

1988年美國(guó)疾病控制中心（CDC）首次提出慢性疲勞綜合征（chronic fatigue syndrome，CFS）。CFS是在長(zhǎng)期生活節(jié)奏加快、壓力不斷增加的社會(huì)生活下逐漸形成的以疲勞、無(wú)力、低熱甚至關(guān)節(jié)疼痛，并伴有認(rèn)知能力下降等身心疲勞為主要表現(xiàn)的臨床綜合征［1-2］。CFS在中醫(yī)學(xué)中屬于“虛勞”范疇，以肢體倦怠、少氣懶言、面色蒼白或萎黃、心虛驚悸、食欲減退等氣血虧虛、臟腑功能不足之癥為多見(jiàn)［3-4］。

無(wú)籽刺梨（Rosa sterilis）又名金刺梨，具有健脾開(kāi)胃、養(yǎng)陰生津等功效。據(jù)研究［5］證實(shí)，其中富含 VC、VB2、SOD，以及多酚、黃酮、角鯊烯、甾醇、羽扁豆醇等活性物質(zhì)，可以有效調(diào)整機(jī)體免疫、延緩衰老、抑制腫瘤、抗瘧疾等。由人參、麥冬、五味子組成的生脈散是自金元起便廣為流傳和應(yīng)用的良方佳劑，對(duì)氣陰兩虛相關(guān)病癥療效極佳；《醫(yī)學(xué)啟源》言其有“生津益氣，斂陰止汗”的效用。金刺梨是性味酸甘的新型保健水果，生脈金刺梨飲使用金刺梨代替生脈飲中不屬于藥食同源目錄藥品的五味子，使其既保留生脈飲益氣養(yǎng)陰的功效，也兼具酸斂之功，同時(shí)符合食品的要求。

本研究將無(wú)籽刺梨和中醫(yī)方劑相結(jié)合，從小鼠活動(dòng)情況、血乳酸堆積、肝糖原含量及尿素氮4個(gè)方面綜合評(píng)價(jià)生脈金刺梨飲對(duì)小鼠抗疲勞的作用。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 60只雄性SPF級(jí)KM小鼠，4～6周齡，體重（25±2）g，購(gòu)自重慶解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)為SCXK （軍） 2012-0011。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品 無(wú)籽刺梨原液（批號(hào)：TC 0001S，貴州天賜貴寶有限公司）；人參9 g（批號(hào)：170401）、麥冬9 g（批號(hào)：170401），均購(gòu)自北京同仁堂集團(tuán)有限公司；煎煮兩藥前預(yù)先浸泡35min，再大火煮沸繼用小火煎煮35min，反復(fù)兩次后合并藥液，經(jīng)過(guò)濾并濃縮為1 mL藥液含生藥1 g，置于4℃冰箱中備用。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑 Thermo Fisher Multiskan FC 酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo公司）、ZZ-6 小鼠自主活動(dòng)儀（成都泰盟科技有限公司）、HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州澳華儀器有限公司）、離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司），乳酸（LD）試劑盒（批號(hào)：20170703）、肝糖原測(cè)試盒（批號(hào)：20170622）和尿素氮（BUN）測(cè)試盒（批號(hào)：20170525）均從南京建成生物工程研究所購(gòu)買(mǎi)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組 造模前將小鼠置于適宜的溫度、濕度條件下喂養(yǎng)1周，使之適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境，觀(guān)察其狀態(tài)穩(wěn)定后采用隨機(jī)數(shù)字分組法將小鼠分為6組，分別命名為空白對(duì)照組、CFS模型組及生脈金刺梨飲高、中、低濃度組和金刺梨組。

1.2.2 動(dòng)物模型 建立模型組，生脈金刺梨飲高、中、低濃度組，金刺梨原汁組采用力竭游泳和剝奪睡眠法，隔天交替進(jìn)行建立CFS小鼠模型。單日進(jìn)行力竭游泳：以小鼠體重4%的鉛皮對(duì)小鼠負(fù)重，并置于溫度為（15±3）℃、水深15 cm的游泳箱中做自由游動(dòng)訓(xùn)練，直至小鼠鼻部浸水10 s不能抬起，視為達(dá)到力竭標(biāo)準(zhǔn)；雙日進(jìn)行剝奪睡眠：每晚9點(diǎn)將小鼠放入水深2～3 cm（約身高五分之二）、水溫（15±3）℃的無(wú)墊料鼠籠中，至次日早晨7點(diǎn)，使其不能入睡，并隔日進(jìn)行；在4周內(nèi)完成CFS小鼠模型的建立。在造模開(kāi)始前和完成后分別稱(chēng)測(cè)小鼠體重，并用小鼠自主活動(dòng)儀測(cè)量其行為活動(dòng)情況。

1.2.3 給藥方法和取材 CFS小鼠模型建立后，以小鼠與人體表面積折算小鼠的等效用藥量，設(shè)置用藥比為1∶2∶4的低、中、高濃度組，給予每組小鼠相同劑量（0.3 mL）不同濃度的水煎液，按照預(yù)設(shè)濃度將濃縮的水煎液分別稀釋?zhuān)⑴c金刺梨原汁等體積混合；金刺梨組用生理鹽水與金刺梨原汁等體積混合；空白組則給與等體積生理鹽水；生脈金刺梨飲低濃度組每日給予濃度為50 mg/20 g的水煎液灌胃；生脈金刺梨飲中濃度組每日給予濃度為100 mg/20 g的水煎液灌胃；生脈金刺梨飲高濃度組每日給予濃度為200 mg/20 g的水煎液灌胃。連續(xù)灌胃15 d。給藥結(jié)束后采用麻醉劑4%的戊巴比妥鈉腹腔注射，成功麻醉后摘取眼球取血1～2 mL用于血乳酸和血尿素氮的測(cè)定。取血后打開(kāi)胸腔取出各組小鼠肝臟用于肝糖原含量測(cè)定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 使用IBM的SPSS 26.0軟件包實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)處理和分析。計(jì)量資料以平均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)誤（x-±s）表示，假設(shè)檢驗(yàn)采用t檢驗(yàn)和單因素方差分析（One-Way ANOVA），以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 造模前后小鼠體重變化 造模前各組小鼠體質(zhì)量均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；造模4周后，5個(gè)造模組小鼠體質(zhì)量均明顯低于空白組（P<0.05）。詳見(jiàn)表1。

2.2 小鼠活動(dòng)情況的變化 造模結(jié)束后，各造模組小鼠活動(dòng)次數(shù)與站立次數(shù)均顯著低于空白組（P<0.05）；各組小鼠活動(dòng)次數(shù)與站立次數(shù)，生脈金刺梨飲高濃度組小鼠活動(dòng)次數(shù)顯著高于模型組（P<0.05）。詳見(jiàn)表2。

2.3 小鼠肝糖原測(cè)量結(jié)果 與模型組相比，金刺梨組肝糖原含量顯著高于模型組（P<0.05），與空白組相比（P>0.05）；與模型組相比，生脈金刺梨飲高、中、低劑量組肝糖原變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見(jiàn)表3。

2.4 小鼠血乳酸測(cè)量結(jié)果 與模型組相比，生脈金刺梨飲高、中劑量組全血乳酸含量顯著低于模型組（P<0.05，P<0.01）。詳見(jiàn)表3。

2.5 小鼠尿素氮測(cè)量結(jié)果 生脈金刺梨飲高、中、低劑量組尿素氮含量均明顯低于模型組（P<0.01，P<0.01，P<0.05）。詳見(jiàn)表3。

3 討論

CFS是以慢性持續(xù)性的體力與精神極度疲勞反復(fù)數(shù)月至半年以上為主要特點(diǎn)的癥候群。其病因復(fù)雜多樣，常見(jiàn)因素有過(guò)度勞累、生活壓力、精神刺激、睡眠障礙等，因此造模方法也十分綜合，常用方式有睡眠剝奪法、游泳負(fù)重法、慢性束縛法、夾尾應(yīng)激法、免疫誘導(dǎo)法等。其中負(fù)重游泳可以誘導(dǎo)小鼠疲勞，引發(fā)小鼠絕望情緒；剝奪睡眠可以誘導(dǎo)小鼠抑郁、焦慮、憤怒等負(fù)面情緒［6］。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)負(fù)重游泳和剝奪睡眠的方法造模后，小鼠體重、活動(dòng)次數(shù)、站立次數(shù)顯著低于空白組（P<0.05），提示小鼠造模成功。在實(shí)驗(yàn)中，造模成功的小鼠經(jīng)過(guò)給藥后，生脈金刺梨飲高濃度組活動(dòng)次數(shù)顯著高于模型組（P<0.05），提示生脈金刺梨飲可以緩解小鼠的慢性疲勞，但可能存在濃度依賴(lài)關(guān)系。

乳酸是細(xì)胞經(jīng)無(wú)氧呼吸代謝葡萄糖的產(chǎn)物，乳酸含量的升高致使機(jī)體PH下降，降低其能量代謝水平，導(dǎo)致疲勞和運(yùn)動(dòng)能力的下降，乳酸濃度可以較為敏感地反應(yīng)機(jī)體疲勞程度，常被用作評(píng)估機(jī)體疲勞的高效指標(biāo)［7］。在實(shí)驗(yàn)中，生脈金刺梨飲高、中濃度組血乳酸濃度明顯低于模型組，提示生脈金刺梨飲可以通過(guò)清除血液中乳酸含量，提高機(jī)體的抗疲勞能力。乳酸脫氫酶（LDH）是乳酸代謝過(guò)程中的重要活性物質(zhì)，可以加速乳酸和丙酮酸的代謝，增加糖酵解過(guò)程中的ATP生成和乳酸清除。因此推測(cè)生脈金刺梨飲能夠增加LDH的活性，從而達(dá)到緩解慢性疲勞的功效。肝糖原為機(jī)體內(nèi)糖儲(chǔ)備的主要形式之一，肝糖原能夠維持疲勞狀態(tài)時(shí)的血糖穩(wěn)定，可長(zhǎng)時(shí)間為機(jī)體供能，緩解疲勞，常作為檢測(cè)藥品食品抗疲勞作用的重要指標(biāo)［8］。在本實(shí)驗(yàn)中，金刺梨組肝糖原含量顯著高于模型組，達(dá)到與空白組肝糖原相近的水平，提示金刺梨可以通過(guò)增加肝糖原儲(chǔ)備，提升運(yùn)動(dòng)耐力，從而達(dá)到緩解疲勞的作用。血液尿素氮主要是蛋白質(zhì)的代謝物質(zhì)，疲勞運(yùn)動(dòng)時(shí)，機(jī)體無(wú)法利用糖類(lèi)和脂類(lèi)的分解得到充足熱能時(shí)，就會(huì)增加對(duì)蛋白質(zhì)和氨基酸的分解代謝，從而導(dǎo)致了血液和組織中氨濃度的增加，通過(guò)尿素循環(huán)使氨轉(zhuǎn)化為血漿尿素。因此尿素氮含量升高，進(jìn)而影響肌肉力量，降低運(yùn)動(dòng)能力，是評(píng)價(jià)疲勞程度的常用指標(biāo)［9-10］。在本實(shí)驗(yàn)中，生脈金刺梨飲高、中、低組血尿素氮含量均明顯低于模型組，表明生脈金刺梨飲可降低血尿素氮含量，緩解疲勞。

當(dāng)前西醫(yī)對(duì)CFS的治療方法以補(bǔ)充維生素、運(yùn)動(dòng)認(rèn)知治療為主［11］。許多學(xué)者希望從中醫(yī)藥中尋找到更好的方法，CFS的中醫(yī)藥研究也逐漸受到關(guān)注，但相應(yīng)的研究成果較少［12］。本研究表明，生脈金刺梨飲能顯著增強(qiáng)小鼠活動(dòng)能力，通過(guò)降低血乳酸含量，增加肌肉力量，可加速慢性疲勞綜合征小鼠血清尿素氮清除，降低蛋白質(zhì)和氨基酸的消耗，從而達(dá)到緩解小鼠慢性疲勞的作用。此外，金刺梨可以通過(guò)增加肝糖原儲(chǔ)備而達(dá)到緩解小鼠慢性疲勞的作用。且金刺梨增加肝糖原儲(chǔ)備的功能優(yōu)于生脈金刺梨飲，但清除血乳酸和血尿素氮的效果不明顯。綜上所述，生脈金刺梨飲可以通過(guò)減少乳酸堆積、清除血尿素氮而緩解小鼠慢性疲勞，但其更多機(jī)制尚需進(jìn)一步研究探索。金刺梨可以有效增加慢性疲勞綜合征小鼠的肝糖原儲(chǔ)備，顯示出其極佳的功效，有繼續(xù)研究與開(kāi)發(fā)的價(jià)值與意義。

參考文獻(xiàn)

［1］邢瀟，馬虹宇，袁曙光，等．參芪貞草湯配合溫和灸關(guān)元穴治療慢性疲勞綜合征臨床研究［J］．河北中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2019，34（3）：19-20，29．

［2］LORUSSO L，MIKHAYLOVA S V， CAPELLI E，et al．Immunological aspect of chronic fatigue syndrome［J］．Autoimmun Rev，2009，8（4）：287-291．

［3］彭敏，馬宏博，司國(guó)民．224例慢性疲勞綜合征患者的中醫(yī)體質(zhì)調(diào)查［J］．世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，8（9）：903-905．

［4］衛(wèi)蓉，潘定舉，劉倩，等．龍膏調(diào)治男子慢性疲勞綜合征（肝腎虧虛型）30例臨床療效觀(guān)察［J］．貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2017，39（5）：56-58，74．

［5］張繼偉，彭凌，趙小紅．無(wú)籽刺梨果醬的工藝研究［J］．農(nóng)產(chǎn)品加工，2017（16）：21-23．

［6］劉偉成，黎杰軒，郭永寧，等．炙甘草湯對(duì)慢性疲勞綜合征大鼠行為和4種白介素水平的影響［J］．動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2018，39（7）：70-73．

［7］胡太超，劉玉敏，陶榮珊，等．鹿茸多肽的抗疲勞作用機(jī)制研究［J］．吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，37（4）：469-476．

［8］胡云峰，李岢祎，胡開(kāi)蕾，等．熟制枸杞提取物抗疲勞效果研究［J］．食品研究與開(kāi)發(fā)，2022，43（4）：29-33．

［9］張雅莉，黃曉旭，黃珍茹，等．枸杞多糖及其配伍茶多酚緩解小鼠體力疲勞作用的研究［J］．上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2016，36（5）：661-665．

［10］烏蘭，劉睿，杜倩，等．核桃肽對(duì)小鼠的抗疲勞作用［J］．中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng)，2018，24（12）：50-54．

［11］張翼飛，吳鳳芝，張澤涵，等．基于數(shù)據(jù)挖掘和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討慢性疲勞綜合征的中藥處方用藥規(guī)律及潛在作用機(jī)制［J］．現(xiàn)代中醫(yī)臨床，2022，29（1）：51-59．

［12］尹艷，王奕丹，左冬冬，等．中西醫(yī)治療慢性疲勞綜合征研究進(jìn)展［J］．中醫(yī)藥信息，2019，36（4）：122-125．

（收稿日期：2022-07-02 編輯：陶希睿）