川木瓜水提液降低小鼠酒精性脂肪肝作用的實(shí)驗(yàn)研究

覃洪含 陳琳 黎為能

【摘 要】

目的：觀察川木瓜水提液降低小鼠酒精性脂肪肝的作用。方法：將50只小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、川木瓜水提液低劑量組（2 g/kg）、川木瓜水提液中劑量組（4 g/kg）和川木瓜水提液高劑量組（8 g/kg）。用川木瓜水提液和56%紅星二鍋頭連續(xù)小鼠灌胃30 d（先灌胃川木瓜水提液，半小時(shí)后灌胃56%紅星二鍋頭）制造小鼠酒精性脂肪肝模型，測(cè)定小鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）的活性、甘油三酯（TG）和總膽固醇（TC）的含量以及肝勻漿中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量。結(jié)果：酒精模型組小鼠的TC、TG、ALT、AST和MDA均高于空白對(duì)照組，SOD的活力低于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與模型組比較，川木瓜水提液中劑量組和川木瓜水提液高劑量組均能顯著降低小鼠血清ALT、AST、TG、TC含量，顯著提高SOD的活力，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論：川木瓜水提液具有一定地降低小鼠酒精性脂肪肝的作用。

【關(guān)鍵詞】 川木瓜水提液；酒精性脂肪肝；小鼠

【中圖分類(lèi)號(hào)】R285.6?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2023）06-0023-04

Experimental Study on the Effect of Water Extract of? Chaenomeles Speciosa on Reducing Alcoholic Fatty Liver in Mice

QIN Honghan CHEN Lin LI Weineng*

Youjiang Medical University for Nationalities，School of Pharmacy，Baise 533000，China

Abstract：

Objective To observe the effect of water extract of Chaenomeles speciosa? on reducing alcoholic fatty liver in mice. Methods 50 mice were randomly divided into blank group， model group， low dose group （2 g/kg）， medium dose group （4 g/kg） and high dose group （8 g/kg） of water extract of Chaenomeles speciosa. Alcoholic fatty liver model of mice was made by intragastric administration of water extract of Chaenomeles speciosa and 56% Red star Erguotou for 30 consecutive days （first by intragastric administration of water extract of Sichuan papaya and 56% red star Erguotou half an hour later）. The activities of alanine aminotransferase （ALT） and aspartate aminotransferase （AST）， the contents of triglyceride （TG） and total cholesterol （TC） in serum， and the contents of malondialdehyde （MDA） and superoxide dismutase （SOD） in liver homogenate were determined. Results TC， TG， ALT， AST and MDA in alcohol model group were higher than those in blank group， and SOD activity was lower than that in blank control group， the difference was statistically significant （P<0.01）. Compared with model group， medium dose group and high dose group of water extract of Chaenomeles speciosa significantly reduced the contents of ALT， AST， TG and TC in serum of mice， and significantly increased the activity of SOD， with statistical significance （P<0.01）. Conclusion Water extract of Chaenomeles speciosa can reduce alcoholic fatty liver in mice.

Keywords：

Water Extract of Chaenomeles Speciosa; Alcoholic Fatty Liver; Mice

肝損傷類(lèi)型主要有酒精性、化學(xué)性、藥物性和免疫性損傷，臨床表現(xiàn)主要有肝損傷壞死、變性、肝纖維化、肝組織硬化、肝臟癌癥等［1］。酒精性脂肪肝的形成則是由于酒精中的乙醇，它能使肝細(xì)胞發(fā)生變性和壞死，對(duì)肝臟的代謝功能等產(chǎn)生很大的危害，從而導(dǎo)致肝臟脂肪沉積。酒精性脂肪肝是由于長(zhǎng)期飲酒導(dǎo)致的疾病，發(fā)病率高，多發(fā)于青壯年男性，患病時(shí)間長(zhǎng)，隨著病情加重可能有肝硬化的風(fēng)險(xiǎn)。

川木瓜，學(xué)名Chaenomeles speciosa（Sweet） Nakai，又被稱(chēng)為皺皮木瓜、鐵腳梨、貼梗海棠和宣木瓜等，是一種落葉灌木，屬于薔薇科植物。全果均可入藥，具有平肝舒經(jīng)、和胃化濕之效，而臨床上可用于頑固性風(fēng)濕病、腰膝酸痛等的治療［2-3］。其化學(xué)成分比較復(fù)雜，含多糖、黃酮、有機(jī)酸、氨基酸等多種活性成分，有相關(guān)研究［4-6］報(bào)道表明天然的多糖成分具有抗氧化、抗腫瘤的作用。也有研究［7-8］報(bào)道川木瓜具有保護(hù)CCl4急性肝損傷的作用，但是尚未發(fā)現(xiàn)川木瓜對(duì)酒精性脂肪肝作用的報(bào)道，為此本研究對(duì)川木瓜水提液降低小鼠酒精性脂肪肝的作用進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑 谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT/GPT）測(cè)試盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST/GOT）測(cè)試盒、甘油三酯（TG）測(cè)試盒、總膽固醇（T-CHO）、蛋白定量測(cè)試盒、丙二醛（MDA）測(cè)試盒、超氧化物歧化酶（SOD）測(cè)試盒（均購(gòu)自南京建成生物工程研究所，批號(hào)分別為：20180407、20180409、20180409、20180409、20180615、20180409、20180409）；紅星牌56度二鍋頭（北京釀酒廠）；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.1.2 川木瓜 當(dāng)年6月份采摘于廣西壯族自治區(qū)凌云縣泗城鎮(zhèn)隴浩村種植的新鮮果為樣品，經(jīng)課題組老師集體討論確定為川木瓜，陰涼環(huán)境下曬干備用。

1.1.3 動(dòng)物 ?昆明種健康小鼠50只，體質(zhì)量（18±2）g，由右江民族醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供（生產(chǎn)許可證：SCXK桂2017-0003；使用許可證：SCXK桂2017-0004）。

1.1.4 儀器 便攜式電子天平（型號(hào)：SE602F）、安亭TGL-16G高速離心機(jī)、DY89-11電動(dòng)勻漿機(jī)、THZ-C臺(tái)式空氣恒溫振蕩器、VORTEX-5漩渦振蕩器、T6新世紀(jì)紫外分光光度計(jì)、HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州金壇區(qū)環(huán)宇科學(xué)儀器廠）、粉碎機(jī)。

1.2 方法

1.2.1 制備川木瓜水提液 取已經(jīng)陰干并經(jīng)過(guò)粗粉碎的川木瓜果實(shí)100 g，置于恒溫水浴鍋中用適量自來(lái)水沒(méi)過(guò)藥材浸泡20 min后，加水10倍（1000 mL），用大火煮開(kāi)后改小火煮40 min，用紗布過(guò)濾，濾渣繼續(xù)加入1000 mL水，同上述方法操作，合并兩次濾液濃縮至125 mL。濃縮液則為高劑量（0.8 g/mL），濃縮液10 mL加入純化水20 mL則為中劑量（0.4 g/mL），濃縮液10 mL加入純化水40 mL則為低劑量（0.2 g/mL）。

1.2.2 動(dòng)物分組、造模及給藥 將50只小鼠按照隨機(jī)的原則分為空白對(duì)照組、酒精模型組、川木瓜水提液高劑量組、川木瓜水提液中劑量組和川木瓜水提液低劑量組，共5組。按小鼠體重（0.1 mL/10 g）進(jìn)行灌胃，空白對(duì)照組每天給予生理鹽水；酒精模型組每天給予生理鹽水和56%紅星二鍋頭，按照先灌生理鹽水，半小時(shí)后再灌酒精的方法，連續(xù)灌胃30 d，可造小鼠酒精性脂肪肝模型；按高劑量（8 g/kg）、中劑量（4 g/kg）、低劑量劑量（2 g/kg）組每天先灌小鼠水提液，半小時(shí)后，再灌酒精的方法，連續(xù)灌胃30 d，飼養(yǎng)期間不限制小鼠飲水及進(jìn)食。

1.2.3 生化指標(biāo)測(cè)定 連續(xù)30 d灌胃給藥，最后一次灌胃后，禁食不禁水12 h，眼球靜脈取血，全血離心（4000 r/min），抽取血清，檢測(cè)血清中ALT、AST、TG、TC水平；將小鼠解剖取出肝臟稱(chēng)總重并在肝臟同一部位取約0.5 g肝組織做勻漿（冰浴條件下與0.9%生理鹽水按照1∶9的比例稀釋?zhuān)诓Ａ驖{管中勻漿），勻漿液在低溫離心機(jī)下離心（4000 r/min），測(cè)出勻漿上清液的SOD、MDA的吸光度。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料數(shù)據(jù)以（x-±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用q檢驗(yàn)（Newman-Keuls法），以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 川木瓜水提液對(duì)小鼠血清TG、TC水平的影響 與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠血清TG、TC明顯增加，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組比較，川木瓜水提液高劑量組、川木瓜水提液中劑量組和川木瓜水提液低劑量組小鼠血清TG、TC明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 川木瓜水取液對(duì)各組小鼠血清ALT、AST含量的影響 與空白對(duì)照組比較，模型組血清ALT、AST含量明顯增加，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組比較，川木瓜水提液高劑量組和川木瓜水提液中劑量組小鼠血清ALT含量明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；川木瓜水提液高劑量組、川木瓜水提液中劑量組和川木瓜水提液低劑量組小鼠血清AST含量明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 川木瓜水提液對(duì)小鼠肝臟組織SOD、MDA水平的影響 ?與空白對(duì)照組比較，模型組血清SOD活力、MDA含量明顯降低，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組比較，川木瓜水提液高劑量組、川木瓜水提液中劑量組和川木瓜水提液低劑量組小鼠血清SOD活力明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；川木瓜水提液中劑量組和川木瓜水提液低劑量組小鼠血清MDA含量明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

3 討論

酒精性脂肪肝的形成主要是由于長(zhǎng)期不節(jié)制的飲酒所導(dǎo)致的肝臟疾病，其發(fā)病機(jī)制有諸多因素，其一，是與機(jī)體內(nèi)酒精代謝的酶相關(guān)［9］，因?yàn)榫凭珪?huì)在機(jī)體的代謝過(guò)程中產(chǎn)生許多自由基和活性氧，致氧化應(yīng)激［10］、脂質(zhì)過(guò)氧化［11］、蛋白質(zhì)氧化、DNA損傷和化合物的生成［12-13］及線粒體的代謝功能紊亂［14］;其二，也與氧化應(yīng)激的信號(hào)傳導(dǎo)等相關(guān)，才致使酒精性肝損害［15］。酒精能夠激活氧氣產(chǎn)生自由基，損傷肝細(xì)胞。酒精引起的肝脂肪變性最初表現(xiàn)為肝臟中的脂滴積聚，脂質(zhì)堆積使得血液中TG、TC濃度升高，但隨著肝臟組織因脂質(zhì)過(guò)載而受損，循環(huán)和駐留的免疫細(xì)胞（包括枯否細(xì)胞和浸潤(rùn)的巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞）通過(guò)產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子對(duì)肝損傷作出反應(yīng)，如 TNF-α 和 IL-1β。慢性飲酒和酗酒等飲酒模式會(huì)導(dǎo)致反復(fù)的肝損傷、炎癥和氧化應(yīng)激［16］。而SOD具有抗氧化的作用，能夠清除體內(nèi)代謝所產(chǎn)生的大量自由基，從而達(dá)到保護(hù)肝臟的作用，被視為生命科技中最具神奇魔力的酶，是人類(lèi)體內(nèi)的垃圾清道夫，對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著很重要的作用。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)中最重要的產(chǎn)物之一，它的產(chǎn)生加劇了膜的損傷，因此它的含量高低可以反應(yīng)肝臟所受損的情況及抗逆性。正常血清中的AST含量低，而當(dāng)相應(yīng)的細(xì)胞受損傷時(shí)，細(xì)胞膜通透性增加，胞漿中的AST入血，故其血清中的AST活力升高。ALT正常情況下活力較低，而當(dāng)細(xì)胞受損，只要少量釋放入血中，血清中其酶的活性即會(huì)顯著升高，因此ALT是診斷病毒性肝炎、酒精肝的一個(gè)重要指標(biāo)。飲酒會(huì)促使脂肪在肝臟的積累，含量過(guò)高則會(huì)對(duì)肝臟造成傷害，所以常被用于血脂分析。

本次研究川木瓜藥材來(lái)源于廣西凌云縣，川木爪是凌云縣的特產(chǎn)，種植量面積廣，藥用研究意義大。其化學(xué)成分［17］包括黃酮類(lèi)、皂苷類(lèi)、三貼類(lèi)、多糖類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)等等，國(guó)家藥典［18］規(guī)定川木瓜定量成分為齊墩果酸、熊果酸，其藥理作用有保肝、降血糖、降血壓、軟化血管、提高免疫力。本次實(shí)驗(yàn)中，酒精模型組小鼠的TC、TG、ALT、AST和MDA均高于空白對(duì)照組，SOD的活力低于空白對(duì)照組，表明小鼠酒精性脂肪肝模型造模成功。川木瓜中、高劑量組在一定程度上能夠提高SOD的活力，抑制MDA降低其含量，這表明川木瓜提取液能夠減少酒精對(duì)肝臟的過(guò)氧化損傷，抑制炎癥因子的釋放并且還能增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力，對(duì)酒精性脂肪肝具有一定的保護(hù)作用。

本研究尚存在不足之處：只做了小鼠血清學(xué)的檢測(cè)，沒(méi)有做病理觀察，也沒(méi)有對(duì)基因表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，所以對(duì)川木瓜的保肝作用機(jī)制尚未明確。下一步工作將會(huì)對(duì)川木瓜保肝作用的活性成分及作用機(jī)制研究，從肝細(xì)胞損傷、脂質(zhì)代謝的調(diào)控機(jī)制、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等進(jìn)行作用機(jī)制研究。

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（收稿日期：2022-07-21 編輯：陶希睿）