不同處理中間錦雞兒引發(fā)檸條種子小蜂行為反應(yīng)及其揮發(fā)物成分分析

胡雅茹，張燕如*，姜海燕*，趙勝?lài)?guó)，雷靜文，王曉麗

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 林學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010019；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)林業(yè)和草原有害生物防治檢疫總站，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020）

中間錦雞兒（Caragana liouana）屬豆科（Fabaceae）錦雞兒屬（Caragana），是旱生落葉灌木。分布于中國(guó)寧夏、內(nèi)蒙古、山西、陜西等地，天然分布于草原地帶，生長(zhǎng)于半固定和固定沙地、黃土丘陵，在草原及荒漠草原地帶的固定沙丘或平坦沙地上形成建群種，在中國(guó)干旱、半干旱地區(qū)脆弱生態(tài)系統(tǒng)植被恢復(fù)中發(fā)揮著十分重要的作用［1］。檸條種子小蜂（Bruchophagus neocaraganae），又名錦雞兒廣肩小蜂和檸條廣肩小蜂，屬膜翅目（Hymenoptera）廣肩小蜂科（Eurytomidae），是我國(guó)林業(yè)危險(xiǎn)性有害生物［2］，取食中間錦雞兒種仁，嚴(yán)重影響種子的形成［3-4］。在我國(guó)，主要對(duì)檸條種子小蜂的形態(tài)、危害特點(diǎn)、生活習(xí)性、田間種群消長(zhǎng)規(guī)律以及種群動(dòng)態(tài)方面進(jìn)行研究報(bào)道［4-7］，目前對(duì)檸條種子小蜂的防治主要以化學(xué)防治為主，但長(zhǎng)期使用化學(xué)藥劑會(huì)對(duì)生態(tài)造成嚴(yán)重破壞，還會(huì)帶來(lái)農(nóng)藥殘留以及檸條種子小蜂產(chǎn)生抗藥性的問(wèn)題，且檸條種子小蜂幼蟲(chóng)位于中間錦雞兒豆莢中，體型小、危害隱蔽，常規(guī)的化學(xué)防治難以防治到位，而引誘劑或趨避劑防控技術(shù)具有高效無(wú)毒、針對(duì)性強(qiáng)、誘劑引誘力大、不傷天敵等優(yōu)點(diǎn)，克服了傳統(tǒng)農(nóng)藥防控和燈光誘殺的局限，應(yīng)用前景廣闊［8］，故研究檸條種子小蜂的綠色防控技術(shù)顯得尤為重要。

植物揮發(fā)性有機(jī)物（VOCs），是植物次生代謝產(chǎn)物的一部分［9］，VOCs 影響著昆蟲(chóng)的多種行為反應(yīng)，包括昆蟲(chóng)對(duì)寄主植物的定向和趨性行為、逃避行為、刺激昆蟲(chóng)取食、引誘昆蟲(chóng)選擇產(chǎn)卵場(chǎng)所以及防御害蟲(chóng)等［10］，健康植株與受植食性昆蟲(chóng)取食后的植株的揮發(fā)物在質(zhì)和量上有很大差異［11］，植物在受到植食性昆蟲(chóng)取食危害時(shí)產(chǎn)生有別于健康時(shí)期的揮發(fā)物叫做蟲(chóng)害誘導(dǎo)植物揮發(fā)物（herbivore-induced plant volatiles，HIPVs）［12］，HIPVs對(duì)一些害蟲(chóng)的寄主選擇、產(chǎn)卵、遷移、取食、交配等行為產(chǎn)生直接影響［13］，這在植物抵御外來(lái)侵害中發(fā)揮重要作用［14-15］。目前，大多數(shù)研究集中在植物揮發(fā)物在植物-害蟲(chóng)-天敵三者關(guān)系中的變化［16-17］，而關(guān)于同種或異種昆蟲(chóng)對(duì)植物揮發(fā)物的影響研究也越來(lái)越引起人們的重視，如海灰翅夜蛾（Spodoptera littoralis）雌性成蟲(chóng)喜歡在被同種幼蟲(chóng)取食過(guò)的美洲棉（Gossypium hirsutum）上產(chǎn)卵［18］，象鼻蟲(chóng)（Anthonomus eugenii）更趨向于在被同類(lèi)侵害的辣椒樹(shù)上取食［19］，研究同種昆蟲(chóng)對(duì)植物揮發(fā)物的影響對(duì)于了解和掌握害蟲(chóng)與植物之間的關(guān)系具有重要意義。

本研究采用“Y”型嗅覺(jué)儀測(cè)定了檸條種子小蜂對(duì)3 種不同處理的中間錦雞兒揮發(fā)性物質(zhì)的趨性行為反應(yīng)，采用動(dòng)態(tài)頂空收集裝置收集了3 種不同處理的中間錦雞兒植株揮發(fā)物，利用氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù) （GC-MS） 對(duì)揮發(fā)物進(jìn)行定性和相對(duì)定量分析，并采用“Y”型嗅覺(jué)儀測(cè)定檸條種子小蜂對(duì)其中揮發(fā)物單體的趨性行為反應(yīng)，以期初步篩選對(duì)中間錦雞兒成蟲(chóng)具有引誘或趨避作用的揮發(fā)物，為檸條種子小蜂植物源引誘或趨避劑的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試?yán)ハx(chóng)

檸條種子小蜂幼蟲(chóng)采集時(shí)間為2021 年6 月，采集地點(diǎn)為內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市烏素圖國(guó)家森林公園（40°51'14"N， 111°34'33"E），帶回試驗(yàn)室（室內(nèi)（27±1） ℃、L∶D=14 h∶10 h）放入養(yǎng)蟲(chóng)籠（30 cm×30 cm×60 cm）內(nèi)飼養(yǎng)，保持相對(duì)濕度70%±10%，待羽化后進(jìn)行雌雄配對(duì)，獲得待產(chǎn)雌蟲(chóng)用于接蟲(chóng)試驗(yàn)。

1.1.2 供試植物

中間錦雞兒位于內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市烏素圖國(guó)家森林公園檸條林，為了防止其他害蟲(chóng)對(duì)接蟲(chóng)植株的影響，于冬季害蟲(chóng)未活動(dòng)時(shí)用細(xì)密的網(wǎng)紗罩住植株，花期取下網(wǎng)紗，讓花自然授粉，待結(jié)出嫩果后立即用網(wǎng)紗罩住，以獲得健康的中間錦雞兒36株。中間錦雞兒嫩果期進(jìn)行野外接蟲(chóng)，接蟲(chóng)比例為50%，通過(guò)觀察到檸條種子小蜂在果莢上取食或產(chǎn)卵來(lái)確定中間錦雞兒被害，共接種12 株植株，6 株用于行為實(shí)驗(yàn)，6 株用于植物揮發(fā)物采集試驗(yàn)。在揮發(fā)物收集24 h 前，用75%乙醇清洗過(guò)的刀片在健康植株的果莢上割0.5 cm 的切口，并在揮發(fā)物提取之前再損傷一次［20］，以獲得機(jī)械損傷果枝，受傷率為50%，共破壞 12 株植株，6 株用于行為試驗(yàn)，6 株用于植物揮發(fā)物采集試驗(yàn)。為防止植株過(guò)近導(dǎo)致?lián)]發(fā)物測(cè)量有誤差，健康、蟲(chóng)害以及機(jī)械損傷植株株體分布間隔3～5 m。

1.1.3 供試試劑

色譜純正己烷，上海安譜科學(xué)儀器有限公司，根據(jù)收集到的植株主要成分及成分比例大的有且可購(gòu)買(mǎi)到的供試揮發(fā)性氣味物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)化合物見(jiàn)表1 。

表1 不同處理下中間錦雞兒揮發(fā)性成分的相對(duì)含量Table1 Relative contents of volatiles from C. liouana plants under different treatments

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 檸條種子小蜂對(duì)中間錦雞兒的嗅覺(jué)行為反應(yīng)

“Y”形嗅覺(jué)儀的玻璃管（直徑：3 cm；單臂長(zhǎng)：15cm；選擇臂長(zhǎng)：10 cm）連接到2 個(gè)味源瓶。氣流流速1 L·min-1，通過(guò)大氣采樣儀（QC-1 型，北京市勞動(dòng)保護(hù)科學(xué)研究所）控制，氣流通過(guò)活性炭過(guò)濾、洗氣瓶濕潤(rùn)，然后通過(guò)裝有氣味源的味源瓶和“Y”形管到達(dá)被試蟲(chóng)體的入口處，在放入被試蟲(chóng)體前先開(kāi)通氣流10 min，保證氣味擴(kuò)散到選擇臂中。測(cè)試室內(nèi)光線均勻（利用白熾燈模擬陽(yáng)光），溫度23～25 ℃，相對(duì)濕度50%～60%，試驗(yàn)時(shí)間為9：00-17：00，該時(shí)間段均屬于檸條種子小蜂活躍期，隨機(jī)選擇一頭成蟲(chóng)放在Y 管的入口處，2 個(gè)選擇臂分別是待測(cè)果枝和潔凈的空氣。每個(gè)成蟲(chóng)觀察時(shí)間最多10 min，超過(guò)選擇臂5 cm 處，被認(rèn)為做出選擇，其它情況被認(rèn)為沒(méi)有做出選擇。每個(gè)氣味源測(cè)試30 頭雌蟲(chóng)，每測(cè)試5 頭蟲(chóng)體后調(diào)換兩臂，重復(fù)6 次，所有供試成蟲(chóng)只使用1 次。更換氣味源時(shí)整個(gè)裝置在洗滌劑溶液中清洗，并用75%乙醇沖洗，然后在120 ℃烘箱中烘干。

1.2.2 揮發(fā)物的采集

采用動(dòng)態(tài)頂空吸附法釆集植株枝葉的揮發(fā)物。將植株枝條套入密閉的聚四氟乙稀烤雞袋中，將袋內(nèi)的空氣利用大氣釆樣儀（QC-1 型，北京市勞動(dòng)保護(hù)科學(xué)研究所）抽空后充入經(jīng)活性炭過(guò)濾的干凈空氣，密閉整個(gè)系統(tǒng)進(jìn)行循環(huán)采集活體植物揮發(fā)物，將揮發(fā)物吸附在含有100 mg 的Paropak Q（80～100目，Waters，美國(guó)）的自制吸附管（內(nèi)徑：0.7 cm，長(zhǎng)10 cm）中，采集裝置的連接管為聚四氟乙烯管（內(nèi)徑0.6 cm，外徑0.8 cm），釆氣流量 500 mL·min-1，采集過(guò)程確保在無(wú)損傷植株?duì)顟B(tài)下進(jìn)行，裝置具體情況如圖1。分別收集健康植株、蟲(chóng)害植株和機(jī)械損傷植株的揮發(fā)物，每種處理的植物在相同時(shí)間段內(nèi)重復(fù)釆集6 株，同時(shí)以空袋采集空氣作為對(duì)照試驗(yàn)。每個(gè)樣品連續(xù)收集4 h。采樣結(jié)束后，用500 μL 正己烷淋洗吸附柱，在氮吹儀下濃縮至1/10 后密封放入-20℃冰箱中保存。

圖1 動(dòng)態(tài)頂空收集裝置Fig. 1 Dynamic headspace collection device

1.2.3 揮發(fā)物的鑒定

將保存的濃縮液于氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MC，Agilent Technologies）中進(jìn)行分析。

GC 工作條件：色譜柱為DB-5 柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm，Agilent Technologies，Santa Clara，CA）；程序升溫：開(kāi)始溫度40 ℃，保持2 min 后以每分鐘4 ℃的速度升至160 ℃，后以每分鐘20℃的速率升溫到270 ℃，保持3 min。進(jìn)樣量1 μL，不分流進(jìn)樣。

MC 工作條件：接口溫度250 ℃ ；四級(jí)桿溫度為150 ℃；離子源溫度220 ℃；電子源為EI 源；電子能為70 ev；掃描質(zhì)核比范圍29～60 amu。發(fā)射電流150 μA，全掃描模式，每次掃描0.2 s。用 Turbo Mass 5.4.2 軟件（PerkinElmer，Waltham，MA）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，根據(jù)色譜保留時(shí)間和質(zhì)譜數(shù)據(jù)與Standards and Technology Mass Spectral（NIST）中數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行對(duì)比，并且通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)一步驗(yàn)證。利用總離子流峰面積歸一化法，計(jì)算揮發(fā)物組分的相對(duì)含量，去除空氣中的雜質(zhì)得到試驗(yàn)結(jié)果。

1.2.4 檸條種子小蜂對(duì)植株揮發(fā)物的嗅覺(jué)行為反應(yīng)

裝置連接方式同1.2.1。將10 μL 刺激樣品滴在3 cm×3 mm 的濾紙條上，放入味源瓶中，用色譜純級(jí)的正己烷作為空白對(duì)照。每種化合物每次測(cè)試30 頭雌蟲(chóng)，每測(cè)試5 頭蟲(chóng)體后調(diào)換兩臂，重復(fù)6次，所有供試成蟲(chóng)只使用一次。更換氣味源時(shí)整個(gè)裝置在洗滌劑溶液中清洗，并用75%乙醇沖洗，然后在120 ℃烘箱中烘干。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

使用卡方檢驗(yàn)分析行為反應(yīng)測(cè)試結(jié)果。采用單因素方差分析以及Duncan 多重比較法分析不同處理下的植物揮發(fā)物相對(duì)含量之間的差異顯著性以及各組間的配對(duì)比較，差異顯著水平為P＜0.05。采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)分析兩兩處理方式揮發(fā)物相對(duì)含量之間的差異顯著性，差異顯著水平為P＜0.05。使用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 25.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。使用Origin 2019 軟件對(duì)3 種處理的植物揮發(fā)物成分進(jìn)行主成分分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 檸條種子小蜂對(duì)3 種處理中間錦雞兒的選擇

檸條種子小蜂對(duì)中間錦雞兒不同處理?yè)]發(fā)物的嗅覺(jué)反應(yīng)結(jié)果如圖2 所示，Y 型嗅覺(jué)儀測(cè)定表明，健康的中間錦雞兒揮發(fā)物對(duì)檸條種子小蜂產(chǎn)生顯著的引誘作用（P＜0.05），受檸條種子小蜂危害的中間錦雞兒對(duì)檸條種子小蜂產(chǎn)生顯著的趨避作用（P＜0.05），而機(jī)械損傷的中間錦雞兒揮發(fā)物對(duì)檸條種子小蜂無(wú)明顯引誘或趨避作用（P＞0.05）。

圖2 檸條種子小蜂對(duì)3種處理中間錦雞兒的嗅覺(jué)選擇偏好性Fig.2 Olfactory selective preferences of B. neocaraganae to three treatments of C. liouana

2.2 3 種處理中間錦雞兒揮發(fā)物分析

機(jī)械損傷和檸條種子小蜂危害對(duì)中間錦雞兒揮發(fā)物的種類(lèi)具有一定的影響。3 種處理的中間錦雞兒釋放的揮發(fā)物中共鑒定出35 種化合物，其中健康中間錦雞兒釋放的揮發(fā)物中鑒定出22 種化合物；受機(jī)械損傷釋放的揮發(fā)物鑒定出27 種化合物；檸條種子小蜂危害后植株揮發(fā)物鑒定出31 種化合物，化合物大多數(shù)為萜烯類(lèi)化合物，另外還有少量酯類(lèi)、醇類(lèi)、酮類(lèi)、醛類(lèi)、烷烴和烯烴化合物（表1）。

試驗(yàn)結(jié)果表明，不同的損傷方式對(duì)中間錦雞兒揮發(fā)物大部分組分與相對(duì)含量具有顯著影響（表1）。與健康中間錦雞兒相比，受蟲(chóng)害的中間錦雞兒植株揮發(fā)物中增加了3-蒈烯、α-蒎烯、α-香檸檬、β-波旁烯、β-石竹烯、γ-戊內(nèi)酯、桉葉油醇、二十五烷、三十一烷、正十六烷、正十四烷和紫蘇烯，在健康植株揮發(fā)物中檢測(cè)到了水楊酸甲酯、順-3-己烯醇和環(huán)癸醇，而這些化合物并未在蟲(chóng)害植株中檢測(cè)到；（+）-檸檬烯、β-松油烯、月桂烯在蟲(chóng)害植株揮發(fā)物中的相對(duì)含量顯著高于健康植株中的相對(duì)含量（F= 2.407，df =10，P=0.000；F= 1.519，df =10，P=0.110；F=2.990，df =10，P=0.000）。

與健康中間錦雞兒相比，受機(jī)械損傷的中間錦雞兒植株揮發(fā)物中增加了α-香檸檬、γ-戊內(nèi)酯、對(duì)乙基苯甲醛、二十五烷、三十一烷、正十四烷、正十六烷和紫蘇烯，在健康植株揮發(fā)物中檢測(cè)到了反-3-己烯醇、羅勒烯和水楊酸甲酯，而這些化合物并未在機(jī)械損傷植株中檢測(cè)到。（+）-檸檬烯、β-松油烯、二十七烷、檸檬烯、正壬烷在機(jī)械損傷植株揮發(fā)物中的相對(duì)含量顯著高于健康植株中的相對(duì)含量（F= 0.196，df =10，P=0.000；F= 7.405，df =10，P=0.000；F= 10.115，df =10，P=0.000；F= 0.400，df =10，P=0.001；F= 11.299，df =10，P=0.001）。

與機(jī)械損傷中間錦雞兒相比，受蟲(chóng)害的中間錦雞兒植株揮發(fā)物中增加了3-蒈烯、α-蒎烯、β-波旁烯、β-石竹烯、反-3-己烯醇、桉葉油醇和羅勒烯，在機(jī)械損傷植株揮發(fā)物中檢測(cè)到了對(duì)乙基苯甲醛、環(huán)癸醇和順-3-己烯醇，而這些化合物并未在蟲(chóng)害植株中檢測(cè)到；β-松油烯、鄰苯二甲酸二丁酯、月桂烯在蟲(chóng)害植株揮發(fā)物中的相對(duì)含量顯著高于機(jī)械損傷植株中的相對(duì)含量（F= 3.303，df =10，P=0.000；F= 0.771，df =10，P=0.110；F=2.240，df =10，P=0.000）。

主成分分析中，如圖3 所示，水平軸對(duì)總揮發(fā)物的解釋率為66.8%，垂直軸的解釋率為22.8%，健康植株、蟲(chóng)害植株和機(jī)械損傷植株分別被分到不同的象限。第一象限中有蟲(chóng)害植株，其中的物質(zhì)中，3-蒈烯、α-蒎烯、β-波旁烯、β-石竹烯、桉葉油醇、對(duì)乙基苯乙酮和月桂烯與蟲(chóng)害植株相關(guān)性較大。第二象限為健康植株，其中水楊酸甲酯與健康植株的分布最近，是健康植株的主要成分。位于第三象限的是機(jī)械損傷植株，對(duì)乙基苯甲醛和6-乙基-2-甲基癸烷有較大的正向影響。第四象限中沒(méi)有植株分布，分布的成分中大部分偏向第一象限的蟲(chóng)害植株，而γ-戊內(nèi)酯比較偏向第三象限的機(jī)械損傷植株。

圖3 3 種處理下中間錦雞兒植株揮發(fā)物成分PCA 分析Fig. 3 PCA analysis of volatile components of C. liouana plants under three treatments

2.3 檸條種子小蜂對(duì)中間錦雞兒揮發(fā)物的行為反應(yīng)

以能夠從北京百靈威科技有限公司購(gòu)買(mǎi)到的8個(gè)植株主要成分及成分比例大的水楊酸甲酯、反-3-己烯醇、檸檬烯、3-蒈烯、β-石竹烯、月桂烯、對(duì)乙基苯甲醛和γ-戊內(nèi)酯，進(jìn)行行為反應(yīng)測(cè)試。結(jié)果顯示水楊酸甲酯、反-3-己烯醇和檸檬烯對(duì)檸條種子小蜂產(chǎn)生顯著的吸引作用（P＜0.05），3-蒈烯和β-石竹烯對(duì)檸條種子小蜂產(chǎn)生顯著的趨避作用（P＜0.05），月桂烯對(duì)檸條種子小蜂產(chǎn)生極顯著的趨避作用（P＜0.01），檸條種子小蜂對(duì)對(duì)乙基苯甲醛和γ-戊內(nèi)酯無(wú)明顯的選擇行為（P＞0.05；圖4）。

圖4 檸條種子小蜂對(duì)中間錦雞兒揮發(fā)物組分的嗅覺(jué)選擇偏好性Fig.4 Olfactory preferences of Bruchophagus neocaraganae for volatile fractions of the Caragana liouana

3 討論

植物揮發(fā)物在植食性昆蟲(chóng)的生境定位，寄主或食物搜索等行為中起著重要作用［21］。本研究利用“Y”型嗅覺(jué)儀測(cè)定了檸條種子小蜂對(duì)3 種處理中間錦雞兒的行為選擇，結(jié)果表明健康的中間錦雞兒對(duì)檸條種子小蜂具有明顯的引誘作用，被檸條種子小蜂危害的中間錦雞兒對(duì)檸條種子小蜂具有明顯的趨避作用，機(jī)械損傷的中間錦雞兒對(duì)檸條種子小蜂無(wú)顯著引誘或趨避作用，這說(shuō)明植食性昆蟲(chóng)對(duì)被同種昆蟲(chóng)危害的植物的取食選擇性降低。一些研究表明，被昆蟲(chóng)取食后植物化合物的釋放會(huì)改變昆蟲(chóng)的行為和群落組成［22-23］。植食性昆蟲(chóng)對(duì)被同種昆蟲(chóng)危害的植物的取食選擇性和產(chǎn)卵選擇性下降，如：利馬豆（Phaseolus lunatus）在遭受葉螨（Tetranychus urticae）的取食行為后釋放的揮發(fā)物對(duì)葉螨產(chǎn)生趨避作用［24］；被甜菜夜蛾（Spodoptera exigua）危害后的玉米葉片會(huì)排斥甜菜夜蛾的進(jìn)一步危害［25］；被天蛾（Manduca）幼蟲(chóng)取食過(guò)的植物釋放的揮發(fā)物會(huì)降低其成蟲(chóng)在上面的產(chǎn)卵量［26］。

昆蟲(chóng)的危害會(huì)改變植物釋放的揮發(fā)性物質(zhì)［27］，為確定具體是哪些揮發(fā)性物質(zhì)在檸條種子小蜂定位的過(guò)程中發(fā)揮作用，本研究對(duì)不同處理中間錦雞兒揮發(fā)物進(jìn)行了GC-MS 分析，共鑒定出35 種化合物，這些化合物主要為萜烯類(lèi)、酯類(lèi)、醇類(lèi)、酮類(lèi)、醛類(lèi)、烷烴和烯烴類(lèi)。不同處理中間錦雞兒的揮發(fā)物種類(lèi)組成和相對(duì)含量存在一定差異。有研究表明，不論害蟲(chóng)種類(lèi)，幼蟲(chóng)危害植物釋放的揮發(fā)性物質(zhì)均比未受害植物釋放的揮發(fā)物含量豐富，但其排放強(qiáng)度因危害種類(lèi)而異［28］，同樣的，本文中被檸條種子小蜂危害的中間錦雞兒揮發(fā)物成分較健康中間錦雞兒和機(jī)械損傷中間錦雞兒成分豐富，推測(cè)是昆蟲(chóng)的危害刺激植株釋放特殊揮發(fā)物。根據(jù)揮發(fā)物成分產(chǎn)生方式的不同，HIPVs 可分為新形成的化合物、誘導(dǎo)合成的化合物和植物本身的化合物［29］。本研究發(fā)現(xiàn)，中間錦雞兒在遭受機(jī)械損傷和檸條種子小蜂危害后釋放了一些新的化合物，與健康植株相比較，機(jī)械損傷后植株揮發(fā)物成分中新出現(xiàn)了對(duì)乙基苯甲醛，以及機(jī)械損傷和蟲(chóng)害植株均有的α-香檸檬，γ-戊內(nèi)酯，二十五烷，三十一烷，正十四烷，正十六烷和紫蘇烯，這些化合物在受損后釋放，而檸條種子小蜂的取食也會(huì)造成植株的機(jī)械損傷，表明這些化合物是新形成的化合物，（+）-檸檬烯、β-松油烯、二十七烷、檸檬烯、正壬烷在機(jī)械損傷植株揮發(fā)物中的相對(duì)含量顯著高于健康植株中的相對(duì)含量，有研究表明，人工切割能使植物釋放比未受到破壞時(shí)更高濃度的揮發(fā)性有機(jī)物［30］。植物在遭受植食性昆蟲(chóng)攻擊后，所釋放的揮發(fā)物無(wú)論是在種類(lèi)方面還是在數(shù)量方面都將發(fā)生明顯的變化［31］。與健康植株以及機(jī)械損傷植株相比較，蟲(chóng)害后植株揮發(fā)物成分中新出現(xiàn)了3-蒈烯、α-蒎烯、β-波旁烯、β-石竹烯、桉葉油醇，這些化合物是植株受到檸條種子小蜂口腔唾液或產(chǎn)卵等刺激誘導(dǎo)后出現(xiàn)的，表明這些化合物是誘導(dǎo)合成的化合物。中間錦雞兒受蟲(chóng)害后，揮發(fā)性化合物（+）-檸檬烯、β-松油烯、月桂烯的相對(duì)含量在受損后顯著增加，表明這些化合物為植物本身的化合物。

根據(jù)主成分分析，第一象限中與蟲(chóng)害植株相關(guān)性較大的3-蒈烯、α-蒎烯、β-波旁烯、β-石竹烯、桉葉油醇、對(duì)乙基苯乙酮和月桂烯可能參與對(duì)檸條種子小蜂的趨避作用，第二象限中健康植株的主要成分水楊酸甲酯可能與吸引檸條種子小蜂有關(guān)，與健康植株較為接近的羅勒烯和乙酸己四烯酯可能也參與檸條種子小蜂的吸引。Sun 等［32］利用Y形管發(fā)現(xiàn)羅勒烯和乙酸葉醇酯對(duì)茶麗紋象甲（Myllocerinus aurolineatus）具有吸引作用；水楊酸甲酯和6-甲基-5-庚烯-2-酮對(duì)紅火蟻（Solenopsis invicta）有顯著的引誘效果［33］，水楊酸甲酯是棉蚜（Aphis gossypii）危害后棉花新產(chǎn)生的植物揮發(fā)物，而紅火蟻更偏向受棉蚜危害的棉花，水楊酸甲酯可能在此過(guò)程起到一定作用。在本文中，水楊酸甲酯是健康中間錦雞兒產(chǎn)生的揮發(fā)物，檸條種子小蜂更傾向于健康中間錦雞兒，可能受水楊酸甲酯的影響。但是不同昆蟲(chóng)對(duì)物質(zhì)濃度的敏感度不同，不排除同一物質(zhì)在不同濃度下對(duì)昆蟲(chóng)產(chǎn)生的影響不同。檸條綠虎天牛（Chlorophorus caragana）對(duì)低濃度化合物反應(yīng)較小，而對(duì)高濃度化合物反應(yīng)較為明顯［34］；松阿扁葉蜂（Acantholyda posticalis）成蟲(chóng)對(duì)檸檬烯反應(yīng)強(qiáng)度與化合物的劑量成正相關(guān)［35］。吸引植食性昆蟲(chóng)的化合物劑量也有所不同，低劑量的β-石竹烯對(duì)斑翅果蠅（Drosophila suzukii）具有引誘效果，高劑量的β-石竹烯對(duì)其具有驅(qū)避效果［36］。有時(shí)，吸引植食性昆蟲(chóng)需要的不是單個(gè)化合物，而是HIPV 的混合物［37］，單獨(dú)呈現(xiàn)的（E）-b-法尼烯不會(huì)引起寄生蜂（Chrysonotomyia ruforum）的任何行為反應(yīng)，而當(dāng)呈現(xiàn)在健康松樹(shù)氣味的背景下時(shí)，會(huì)吸引此寄生蜂［38］。在本文中，水楊酸甲酯、反-3-己烯醇和檸檬烯對(duì)檸條種子小蜂的吸引作用以及3-蒈烯和β-石竹烯對(duì)檸條種子小蜂趨避作用是否與其濃度或劑量有關(guān)，是否是多個(gè)化合物或者是不同濃度不同劑量的化合物對(duì)檸條種子小蜂產(chǎn)生作用還有待研究。

4 結(jié)論

本研究通過(guò)對(duì)3 種處理中間錦雞兒揮發(fā)物對(duì)檸條種子小蜂成蟲(chóng)的嗅覺(jué)行為反應(yīng)、對(duì)中間錦雞兒揮發(fā)物進(jìn)行GC-MS 分析以及檸條種子小蜂對(duì)揮發(fā)物單體的行為反應(yīng)，結(jié)合揮發(fā)物成分分析、主成分分析以及行為試驗(yàn)，證明健康中間錦雞兒對(duì)檸條種子小蜂有吸引作用，被檸條種子小蜂危害的中間錦雞兒對(duì)檸條種子小蜂有趨避作用，反-3-己烯醇、檸檬烯和水楊酸甲酯對(duì)檸條種子小蜂產(chǎn)生吸引作用，3-蒈烯、β-石竹烯和月桂烯對(duì)檸條種子小蜂產(chǎn)生趨避作用，檸條種子小蜂對(duì)乙基苯甲醛和γ-戊內(nèi)酯無(wú)明顯的選擇行為。研究結(jié)果對(duì)揭示檸條種子小蜂與其寄主植物中間錦雞兒的相互關(guān)系具有重要意義。也為檸條種子小蜂植物源引誘劑或趨避劑的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用提供了一定的理論基礎(chǔ)。