羥基紅花黃色素A對(duì)MCAO大鼠腦組織XIAP蛋白及細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)作用

郭莉琛,杜鑫苑,許海英,梁冰,張彤,袁慶,胡利民

天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院/組分中藥國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/天津市中藥藥理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/方劑學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,天津 301617

缺血性腦卒中是臨床常見(jiàn)的一種卒中類型,具有發(fā)病率高、致殘率高、病死率高的特點(diǎn)[1]。目前,缺血性腦卒中的治療方法主要為藥物溶栓和機(jī)械取栓,但伴隨著治療窗窄、出血并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)高等限制因素,因此,探索新的有效緩解腦缺血損傷的藥物成為當(dāng)務(wù)之急。中藥紅花是菊科植物紅花的干燥花,性辛、溫,歸心、肝經(jīng),具有活血通經(jīng),散瘀止痛之效[2]?，F(xiàn)代藥理研究表明,羥基紅花黃色素A作為中藥紅花的主要活性成分,在調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、糖脂代謝、血管功能方面發(fā)揮重要作用,在治療心腦血管疾病方面有廣闊的應(yīng)用前景[3-6]。X連鎖凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)是凋亡抑制蛋白(Inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族中抑制Caspase 活性能力最強(qiáng)的因子,是調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的重要蛋白[7]。研究表明,XIAP參與凋亡、自噬、焦亡等多種細(xì)胞程序性死亡方式的調(diào)節(jié)[8-10]。缺血性腦卒中發(fā)生后,由于供血不足能量代謝異常引發(fā)的一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng)造成細(xì)胞大量死亡,因此,細(xì)胞凋亡機(jī)制的調(diào)節(jié)對(duì)疾病的治療有重要意義[11]。目前,內(nèi)源性XIAP在缺血性腦卒中中的細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)機(jī)制尚不明確。本文以細(xì)胞凋亡為出發(fā)點(diǎn),研究羥基紅花黃色素A對(duì)腦缺血后XIAP蛋白的調(diào)節(jié)作用及細(xì)胞凋亡的影響,以探討羥基紅花黃色素A治療缺血性腦卒中的可能機(jī)制。

1 材料

1.1 動(dòng)物75只SPF級(jí)Wistar雄性大鼠,體質(zhì)量250～280 g,購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司,許可證號(hào):SCXK(京)2021-0006,飼養(yǎng)于天津中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,自由進(jìn)食進(jìn)水,室溫20～25 ℃,相對(duì)濕度56%～60%。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)獲得天津中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(審批號(hào):TCM-LAEC2022119)。

1.2 藥物與試劑羥基紅花黃色素A(廣州悅康生物制藥有限公司,規(guī)格:25 mg/瓶,批號(hào):200901);B淋巴細(xì)胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)抗體、Bcl-2同源二聚體X(Bcl-2-Associated X,Bax)抗體、β-actin抗體(英國(guó)Abcam公司,貨號(hào):ab196495、ab199677、ab179467);Caspase-3抗體(美國(guó)Cell Signaling Technology公司,貨號(hào):9662S);XIAP抗體(美國(guó)Bioworld公司,貨號(hào):CAS75122);HE染色試劑盒及Nissl染色試劑盒、RIPA裂解液(北京索萊寶科技有限公司,貨號(hào):C0105、G1430、R0020);TUNEL凋亡檢測(cè)試劑盒(上海碧云天生物技術(shù)有限公司,貨號(hào):C1088);超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)測(cè)試盒(羥胺法)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)測(cè)定試劑盒(TBA法)(南京建成生物工程研究所,貨號(hào):A001-1、A003-1);2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC,美國(guó)Sigma-Aldrich公司,貨號(hào):T8877)。

1.3 儀器HCM100-Pro型恒溫震蕩金屬浴(大龍實(shí)驗(yàn)儀器公司);1658001型Western-blot電泳儀(美國(guó)Bio-Rad公司);trans-blot?型轉(zhuǎn)膜儀(美國(guó)Invitrogen 公司);RM2135型病理切片機(jī)、Leica 750型生物顯微鏡(德國(guó)LEICA公司);Amersham imager 600型超靈敏多功能成像儀(美國(guó)General Electric 公司);Eclipse Ti型倒置熒光顯微鏡(日本Nikon公司);FlexStation3型多功能酶標(biāo)儀(美國(guó)MD公司)。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組、建模及給藥成年健康Wistar大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、永久性大腦中動(dòng)脈梗塞模型組(permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO)、羥基紅花黃色素A低劑量組(2.5 mg·kg-1)、羥基紅花黃色素A中劑量組(5.0 mg·kg-1)、羥基紅花黃色素A高劑量組(7.5 mg·kg-1),每組15只。除假手術(shù)組外,其余大鼠建立永久性大腦中動(dòng)脈梗塞模型[12],具體操作如下:術(shù)前大鼠禁食12 h,3%異氟烷麻醉大鼠,手術(shù)過(guò)程電熱毯維持大鼠體溫,使得大鼠肛溫為(37.0±0.5) ℃,保持室溫25 ℃。備皮消毒后,縱向切開(kāi)頸部皮膚,分離頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈,結(jié)扎頸內(nèi)動(dòng)脈遠(yuǎn)心端,夾閉頸總動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈,在頸外動(dòng)脈近心端剪口,沿著頸外動(dòng)脈向頸內(nèi)動(dòng)脈插入線栓,有輕微阻力感時(shí)停止,深約1.8～2.0 cm。結(jié)扎血管固定好線栓,皮膚縫合并消毒。假手術(shù)組不做插線栓處理。術(shù)后以Longa評(píng)分法[13]對(duì)大鼠進(jìn)行初步神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分,具體評(píng)分原則見(jiàn)表1,評(píng)分為1分和2分的造模大鼠視為模型建立成功,納入后續(xù)實(shí)驗(yàn)。造模3 h后,各組大鼠尾靜脈注射給予相應(yīng)藥物,假手術(shù)組和模型組給予同體積生理鹽水,每日1次,連續(xù)3 d,末次給藥2 h后取材。

表1 Longa評(píng)分細(xì)則

2.2 神經(jīng)功能缺損評(píng)分在造模72 h后,通過(guò)改良大鼠神經(jīng)嚴(yán)重程度評(píng)分法(modified neurological severity score,mNSS)對(duì)大鼠運(yùn)動(dòng)、感覺(jué)、反射和平衡功能進(jìn)行評(píng)估[14]。運(yùn)動(dòng)測(cè)試、平衡木測(cè)試及發(fā)射測(cè)試具體評(píng)分方法見(jiàn)表2;感覺(jué)測(cè)試包括放置實(shí)驗(yàn)和本體感覺(jué)實(shí)驗(yàn),各計(jì)1分;發(fā)射測(cè)試包括耳廓反射、角膜反射、驚恐反射,各計(jì)1分;異常運(yùn)動(dòng)涉及癲癇、肌陣攣后肌張力障礙,計(jì)1分。各項(xiàng)評(píng)分加和為mNSS 評(píng)價(jià)得分,總分18分。

表2 mNSS評(píng)分表

2.3 TTC染色末次給藥2 h后,每組取5只大鼠異氟烷麻醉后處死。取大鼠大腦去除小腦、腦干和嗅球后置于腦槽中連續(xù)切厚度為2 mm的冠狀切片。腦組織切片按照順序置于2% TTC溶液中 37 ℃ 避光孵育10 min。根據(jù)染色情況評(píng)估腦梗死體積。用Image J圖像分析軟件分析各組腦梗死體積,公式如下:腦梗死體積=(6張腦片缺血對(duì)側(cè)面積之和-6張腦片缺血側(cè)未梗死面積)×2 mm/(6張腦片缺血對(duì)側(cè)總面積×2 mm×100%)。

2.4 HE染色及Nissl染色異氟烷麻醉大鼠后,對(duì)大鼠進(jìn)行心臟灌流生理鹽水,取出的腦組織在體積分?jǐn)?shù)4%多聚甲醛溶液中固定,經(jīng)脫水、石蠟包埋及切片處理后,進(jìn)行后續(xù)染色處理。染色前將石蠟切片分別于二甲苯、無(wú)水乙醇、體積分?jǐn)?shù)95%乙醇、體積分?jǐn)?shù)80%乙醇、體積分?jǐn)?shù)70%乙醇、超純水中浸泡脫蠟。HE染色:用蘇木素染液浸泡切片 5 min,流水清洗,鹽酸乙醇分化液分化30 s后,自來(lái)水浸泡15 min。滴加伊紅染液染色1 min,流水清洗。Nissl染色:切片滴加焦油紫染色液,并置于 56 ℃ 恒溫箱1 h。超純水沖洗5 min;尼氏染色分化液分化30 s,顯微鏡下觀察至背景接近于無(wú)色為止。染色結(jié)束后,采用梯度乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹(shù)膠封片,顯微鏡下觀察拍片。

2.5 氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測(cè)大鼠末次給藥2 h后,異氟烷麻醉大鼠,打開(kāi)腹腔,用含抗凝劑的采血管通過(guò)腹主動(dòng)脈取血。血液室溫靜置30 min后,4 ℃,3 000 r·min-1離心10 min,收集上清,即得到血漿,于-80 ℃冰箱保存。取各組大鼠血漿參照MAD和SOD檢測(cè)試劑盒說(shuō)明進(jìn)行檢測(cè),用酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度,計(jì)算各樣品MDA、SOD水平。MDA檢測(cè):取200 μL待測(cè)血漿加入離心管中,按順序分別加入試劑一、試劑二、試劑三各200 μL,保鮮膜封口,95 ℃ 水浴加熱40 min。流水冷卻,4 000 r·min-1離心10 min。取上清,于532 nm波長(zhǎng)檢測(cè)吸光度。標(biāo)準(zhǔn)品管和空白管分別用10 nmol·mL-1標(biāo)準(zhǔn)品和無(wú)水乙醇代替血漿樣品進(jìn)行檢測(cè)。MDA含量(μmol·L-1)=(樣品吸光度-空白吸光度)/(標(biāo)準(zhǔn)品吸光度-空白吸光度)×標(biāo)準(zhǔn)品濃度。SOD檢測(cè):將50 μL待測(cè)血漿加入含1 mL試劑一的離心管中,分別加入試劑二、試劑三、試劑四各100 μL,渦旋混勻,37 ℃恒溫水浴40 min。加入2 mL顯色劑,室溫放置10 min,于550 nm波長(zhǎng)檢測(cè)吸光度。對(duì)照管用50 μL蒸餾水代替血漿樣品進(jìn)行檢測(cè)。

SOD活力=(對(duì)照吸光度-樣品吸光度)/對(duì)照吸光度÷50%×反應(yīng)體系稀釋倍數(shù)

2.6 TUNEL染色石蠟切片用含0.5% Triton的PBS溶液室溫孵育30 min;放入裝有煮沸的 0.01 mol·L-1檸檬酸鈉抗原修復(fù)液(pH 6.0)高壓鍋里進(jìn)行抗原修復(fù);滴加正常山羊血清工作液室溫封閉1 h,PBS溶液漂洗3次;室溫避光滴加DAPI孵育10 min,PBS溶液漂洗3次;避光條件下,每個(gè)組織切片滴加100 μL TUNEL檢測(cè)液,37 ℃避光孵育60 min,PBS洗滌3次。抗熒光淬滅封片劑封片,在倒置熒光顯微鏡下觀察缺血半暗帶TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞,于倒置熒光顯微鏡下觀察缺血半暗帶細(xì)胞凋亡情況。

細(xì)胞凋亡率=凋亡細(xì)胞數(shù)量/總細(xì)胞數(shù)量×100%

2.7 Western blot實(shí)驗(yàn)用含10%蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液超聲破碎提取大鼠腦組織蛋白,12 000×g離心10 min取上清液。BCA蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度,100 ℃沸水浴加熱10 min使蛋白變性。用4%～12% SDS-PAGE進(jìn)行電泳,170 V 電泳40 min;然后轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,PVDF膜在5%脫脂牛奶中封閉2 h,并用TBST緩沖液洗滌3次,滴加稀釋好的一抗(稀釋比例為1：1 000),4 ℃孵育過(guò)夜。用與HRP結(jié)合的二抗(稀釋比例為1：10 000)孵育1 h,顯影。使用Image J軟件分析目的蛋白灰度值。

3 結(jié)果

3.1 羥基紅花黃色素A對(duì)pMCAO大鼠神經(jīng)功能障礙的影響與假手術(shù)組比較,模型組大鼠的mNSS評(píng)分明顯升高(P<0.01);與模型組比較,羥基紅花黃色素A低、中、高劑量組大鼠的mNSS神經(jīng)功能評(píng)分顯著降低(P<0.05)。見(jiàn)圖1。

注:與假手術(shù)組比較,##P<0.01;與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01。圖1 各組大鼠mNSS神經(jīng)功能評(píng)分

3.2 羥基紅花黃色素A對(duì)pMCAO大鼠腦梗死體積的影響與假手術(shù)組比較,模型組可見(jiàn)明顯梗死灶,腦梗死體積顯著增加(P<0.01)。與模型組比較,羥基紅花黃色素A中、高劑量組腦梗死體積顯著減少(P<0.05)。見(jiàn)圖2。

注:與假手術(shù)組比較,##P<0.01;與模型組比較,*P<0.05。圖2 各組大鼠腦組織TTC染色及梗死體積比較

3.3 羥基紅花黃色素A對(duì)pMCAO大鼠腦組織形態(tài)學(xué)的影響HE結(jié)果顯示,假手術(shù)組大腦皮層組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰,染色均勻,細(xì)胞間隙致密;模型組細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞,排列不整齊,細(xì)胞核皺縮,細(xì)胞間隙疏松,可見(jiàn)明顯空洞;與模型組比較,羥基紅花黃色素A各組腦組織病理?yè)p傷均有所減輕。Nissl染色結(jié)果可見(jiàn),假手術(shù)組神經(jīng)元形態(tài)正常,排列規(guī)整,尼氏體數(shù)目豐富,著色均勻;模型組尼氏體著色較淺,神經(jīng)元形態(tài)異常,細(xì)胞核皺縮,呈空泡樣變化,排列紊亂,核膜模糊不清;與模型組比較,羥基紅花黃色素A各組腦組織神經(jīng)元形態(tài)明顯好轉(zhuǎn),染色較均勻。見(jiàn)圖3。

圖3 各組大鼠HE染色及Nissl染色(比例尺:50 μm)

3.4 羥基紅花黃色素A對(duì)pMCAO大鼠血漿中氧化因子MDA和SOD的影響MDA檢測(cè)顯示:與假手術(shù)比較,模型組大鼠血漿中MDA水平顯著升高(P<0.01);與模型組比較,羥基紅花黃色素A各組大鼠血漿MDA水平顯著降低(P<0.01),如圖4A。SOD檢測(cè)顯示:與假手術(shù)組比較,模型組大鼠血漿中SOD水平顯著降低(P<0.01);與模型組比較,羥基紅花黃色素A中、高劑量組大鼠血漿中SOD水平顯著升高(P<0.01),如圖4B;表明羥基紅花黃色素A可通過(guò)提高抗氧化酶SOD的表達(dá)并降低脂質(zhì)過(guò)氧化物MDA含量發(fā)揮抗氧化作用。

注:A:各組MDA水平比較;B:各組SOD水平比較;與假手術(shù)組比較,##P<0.01;與模型組比較,**P<0.01。圖4 羥基紅花黃色素A對(duì)pMCAO大鼠血漿中氧應(yīng)激相關(guān)因子表達(dá)的影響

3.5 羥基紅花黃色素A對(duì)pMCAO大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡率的影響TUNEL染色結(jié)果顯示,與假手術(shù)組比較,模型組大鼠缺血側(cè)大腦皮層TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞顯著增加(P<0.01);與模型組比較,各給藥組大鼠缺血側(cè)皮層TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞顯著減少(P<0.01)。見(jiàn)圖5。

注:A:各組Tunel染色代表性圖像;B:各組Tunel陽(yáng)性細(xì)胞量化結(jié)果;與假手術(shù)組比較,##P<0.01;與模型組比較,**P<0.01;n=3。圖5 各組大鼠缺血半暗帶細(xì)胞凋亡率(比例尺:100 μm)

3.6 羥基紅花黃色素A對(duì)pMCAO大鼠腦組織Bax、Bcl-2蛋白的影響與假手術(shù)組比較,模型組大鼠腦組織缺血半暗帶Bax蛋白表達(dá)水平顯著升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表達(dá)水平顯著降低(P<0.01),Bcl-2/Bax水平明顯降低(P<0.01);與模型組比較,羥基紅花黃色素A中、高劑量組可顯著下調(diào)Bax蛋白表達(dá)水平(P<0.05);羥基紅花黃色素A低、中劑量組可顯著上調(diào) Bcl-2 蛋白表達(dá)(P<0.05);羥基紅花黃色素A低、中、高劑量組顯著升高Bcl-2/Bax水平(P<0.05)。見(jiàn)圖6。

注:A:Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)條帶圖;B:Bax蛋白表達(dá)定量比較;C:Bcl-2蛋白表達(dá)定量比較;D:Bcl-2/Bax相對(duì)蛋白表達(dá)定量比較;與假手術(shù)組比較,##P<0.01;與模型組比較*P<0.05,**P<0.01。圖6 各組大鼠腦組織Bcl-2和Bax 蛋白表達(dá)情況

3.7 羥基紅花黃色素A對(duì)pMCAO大鼠腦組織XIAP、Caspase-3蛋白的影響與假手術(shù)組比較,模型組大鼠腦組織缺血半暗帶XIAP蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.01),Caspase-3蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.05);與模型組比較,羥基紅花黃色素A中劑量組可顯著上調(diào)XIAP蛋白表達(dá)(P<0.01);羥基紅花黃色素A低、中劑量組可顯著下調(diào)Caspase-3蛋白表達(dá)(P<0.05)。見(jiàn)圖7。

注:A:XIAP和Caspase-3蛋白表達(dá)條帶圖;B:XIAP蛋白表達(dá)定量比較;C:Caspase-3蛋白表達(dá)比較;與假手術(shù)組比較,##P<0.01;與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01。圖7 各組大鼠腦組織XIAP和Caspase-3蛋白表達(dá)情況

4 討論

缺血性腦卒中是最常見(jiàn)的卒中類型。中醫(yī)認(rèn)為,痰瘀互結(jié)是卒中發(fā)病的關(guān)鍵病機(jī),血瘀是主要病因和病理產(chǎn)物,瘀阻腦絡(luò)則是缺血性中風(fēng)的病理核心,因此活血化瘀藥在腦卒中治療中被廣泛應(yīng)用[15-16]。中藥常見(jiàn)活血化瘀藥紅花的主要有效成分羥基紅花黃色素A具有抗炎、抗氧化、抑制細(xì)胞凋亡,保護(hù)神經(jīng)元,改善血管功能等作用,在治療心腦血管疾病方面表現(xiàn)出巨大的潛力[17-20]。過(guò)多的氧化物產(chǎn)生會(huì)改變細(xì)胞膜通透性,破壞血腦屏障結(jié)構(gòu)和功能。研究表明,羥基紅花黃色素A可通過(guò)抑制氧化應(yīng)激調(diào)節(jié)線粒體功能,改善缺氧/復(fù)氧造成的細(xì)胞損傷[21]。本研究顯示,pMCAO大鼠給藥羥基紅花黃色素A后血漿中SOD升高、MDA降低,減少缺血引起的細(xì)胞凋亡。

長(zhǎng)時(shí)間的缺血缺氧導(dǎo)致的細(xì)胞發(fā)生不可逆死亡是缺血性腦卒中致殘、致死率高的直接原因[22]。在缺血核心區(qū)引發(fā)的壞死和半暗帶因低灌注和能量代謝障礙導(dǎo)致的凋亡是缺血性腦卒中中最常見(jiàn)的細(xì)胞死亡方式。由于核心區(qū)細(xì)胞死亡的不可逆性,為限制梗死體積進(jìn)一步擴(kuò)大,半暗帶細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)可作為缺血性中風(fēng)發(fā)生后主要的治療方向[23]。XIAP是細(xì)胞凋亡的重要調(diào)節(jié)因子,參與壞死性凋亡等多種細(xì)胞死亡途徑的調(diào)節(jié)。Bcl-2家族和Caspase家族是線粒體介導(dǎo)的內(nèi)源性細(xì)胞凋亡機(jī)制中的重要組成部分。細(xì)胞凋亡過(guò)程中,抗凋亡蛋白Bcl-2被抑制,促凋亡蛋白Bax被激活,導(dǎo)致線粒體外膜透化,線粒體釋放細(xì)胞色素C和半胱氨酸蛋白酶激動(dòng)劑(second mitochondria-derived activator of caspases,Smac)引發(fā)Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)[15]。XIAP通過(guò)抑制凋亡效應(yīng)子Caspase-3發(fā)揮抗凋亡作用,同時(shí)XIAP也受Smac負(fù)調(diào)節(jié),可解除對(duì)Caspase-3的抑制作用,進(jìn)而促進(jìn)凋亡[25]。由于XIAP的結(jié)構(gòu)具有E3泛素化酶活性,可參與NF-κB、MAPK/JNK、Wnt/β-catenin等多條信號(hào)通路的調(diào)節(jié)[26]。Zhou等[27]研究發(fā)現(xiàn)XIAP 可通過(guò)介導(dǎo)NF-κB活化,減少缺血所致的氧化應(yīng)激損傷,抑制細(xì)胞凋亡。近幾年研究表明,XIAP在MCAO大鼠模型中表達(dá)降低[28];通過(guò)上調(diào)XIAP可減少miR-186-5p對(duì)OGD誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡[29];長(zhǎng)鏈非編碼RNA Peg13通過(guò)上調(diào)XIAP 可減輕新生小鼠缺氧缺血性腦損傷所致的海馬神經(jīng)元凋亡[30]。本研究顯示,羥基紅花黃色素A給藥后,pMCAO大鼠Caspase-3表達(dá)降低,Bcl-2/Bax相對(duì)蛋白表達(dá)升高,XIAP表達(dá)升高,提示羥基紅花黃色素A通過(guò)抗細(xì)胞凋亡發(fā)揮腦保護(hù)作用的機(jī)制可能與調(diào)節(jié)XIAP表達(dá)有關(guān)。

綜上所述,羥基紅花黃色素A可改善腦缺血所致的神經(jīng)功能缺損,減少腦梗死面積,其機(jī)制可能與提高XIAP的表達(dá),抑制Caspase-3表達(dá),促進(jìn)Bcl-2/Bax相對(duì)蛋白表達(dá),從而抑制線粒體介導(dǎo)的內(nèi)源性凋亡途徑,同時(shí)抑制過(guò)氧化物產(chǎn)生,減少缺血導(dǎo)致的氧化應(yīng)激損傷,抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)。本研究以XIAP為靶點(diǎn)探討羥基紅花黃色素A對(duì)腦缺血后細(xì)胞凋亡的影響,以期為進(jìn)一步研究羥基紅花黃色素A治療腦卒中的作用機(jī)制提供理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。