HIV檢測方法的現(xiàn)狀及研究進展

潘曉娟

【摘要】艾滋病是由人類免疫缺陷病毒（HIV）引起的一種傳染病，嚴重危害人類健康。及時準確的早期診斷和盡早啟動抗病毒治療，能夠有效遏制病毒復制并改善患者免疫功能，從而改善患者預后。目前艾滋病診斷主要靠實驗室檢測，隨著研究者們的不斷深入，HIV實驗室檢測方法也越來越完善、快捷、準確。該文就HIV檢測方法以及相關研究進展綜述如下，為實驗室檢測提供參考及幫助。

【關鍵詞】人類免疫缺陷病毒；檢測方法；艾滋病

Current status and research progress of HIV detection methods

PAN Xiaojuan

Department of Clinical Laboratory， Sir Run Run Shaw Hospital， Zhejiang University School of Medicine， Hangzhou， Zhejiang 310016， China

【Abstract】AIDS is an infectious disease caused by human immunodeficiency virus （ HIV ）， which seriously endangers human health. Timely and accurate early diagnosis and early initiation of antiviral therapy can effectively curb viral replication and improve the immune function of patients， thereby improving the prognosis of patients. At present， AIDS diagnosis mainly depends on laboratory testing. With the deepening of researchers， HIV laboratory testing methods are becoming more and more perfect， fast and accurate. This article reviews HIV detection methods and related research progress as follows to provide reference and help for laboratory testing.

【Key Words】Human immunodeficiency virus； Detection method； AIDS

艾滋病傳染性極強，截止到2020年底，全球目前存活的HIV患者達到3770萬，2020年新感染HIV有150萬，正在接收抗病毒治療（Antiretroviral therapy，ART）[1]的人數(shù)達到2750萬人。我國艾滋病患者數(shù)量和死亡人數(shù)近年來呈上升趨勢，因此需要早期檢出HIV及時進行抗病毒治療。

HIV分為HIV-1型和HIV-2型，我國以HIV-1為主要流行株。HIV容易變異，主要原因：逆轉錄酶的隨機變異；病毒在體內高速率復制；宿主的免疫選擇壓力；病毒與宿主DNA之間的基因重組；藥物選擇壓力，其中ART的不規(guī)范以及患者依從性較差是導致耐藥變異非常重要的原因[1]。耐藥變異是抗HIV治療失敗的主要原因，在治療過程中，應該適時進行耐藥性檢測，以獲得較好療效。

HIV主要存在于AIDS患者的各種體液中，經性接觸（同性、異性），經血液，經母嬰傳播[2]。HIV-1主要通過入侵宿主的T淋巴細胞、樹突狀細胞和單核巨噬細胞表面的CD4分子來感染宿主。隨著對HIV的不斷深入研究，研究者們從預防感染上提供了一種新型對抗HIV-1病毒感染的方法，一種可以表達HIV-1入侵抑制劑ECLD而抑制HIV-1感染的重組腺相關病毒[3]。目前實驗室檢測HIV方法操作方便易于普及，隨著分子生物學技術發(fā)展，HIV實驗室檢測手段也越來越完善，本文就近年來關于HIV實驗室檢測的發(fā)展以及研究進展綜述如下。

1 HIV-1/2抗體檢測

HIV抗體檢測包括初篩試驗和抗體補充試驗，篩查方法主要包括酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、化學發(fā)光法、快速試驗（膠體金、膠體硒、免疫層析等），明膠顆粒凝集試驗等，補充試驗包括免疫印跡法（Western blotting，WB）、條帶免疫試驗以及免疫熒光試驗等。

1.1 初篩試驗

血清中檢測HIV抗體適用范圍廣，ELISA（通過將已知抗體吸附在固相表面，使酶標記的抗體在固相表面反應，從而檢測到樣本中抗體）是目前進行HIV抗體篩查最有效也是最常用的檢測手段，具有較高的靈敏度、特異度[4-5]。ELISA試劑經過不斷發(fā)展，在四代試劑中已經可以檢測HIV-1 p24抗原，抗原抗體聯(lián)合檢測縮短了“窗口期”，使得HIV感染早期發(fā)現(xiàn)的機會大大增加。吳忠華等對三種進口的四代試劑進行性能評價，顯示其敏感性均高于三代試劑[6]。

隨著社會發(fā)展需要，HIV的快速檢測試驗（RT）也被應用于實驗室，劉福榮等[8]對RT法與ELISA法進行比較，發(fā)現(xiàn)RT法的假陽性率大大低于ELISA法（23.5%vs80%），說明RT法的特異性高于ELISA法。

1.2 抗體補充試驗

盡管酶聯(lián)免疫技術具有較高的靈敏度和特異性，但是仍舊存在假陽性問題，因此需要抗體補充試驗，目前實驗室最常用的試驗是免疫印跡試驗（Western blotting，WB）（在電場的作用下將電泳分離的蛋白從凝膠轉移至一種固相支持物，然后利用抗原-抗體的特異性反應，從蛋白混合物中檢測出目標蛋白，從而定量或定性的確定正常或實驗條件下細胞或組織中目標蛋白的表達情況）。但是WB存在漏檢的風險，張亞蘭等[10]通過使用四代HIV試劑與WB檢測比較發(fā)現(xiàn)，在四代陽性而三代陰性的樣本中，免疫印跡法存在漏檢的可能性，因此需要補充核酸試驗來確證。董莉娟等[11]通過WB試驗不確定樣本的核酸定量檢測建議此類樣本需要核酸定量檢測同時結合流行病學資料來判斷HIV感染狀態(tài)。

2 CD4+T淋巴細胞檢測

CD4+T淋巴細胞計數(shù)是了解基線免疫狀況的重要指標，主要用于HIV感染的臨床分期、疾病進展監(jiān)測、機會性感染的風險評估、抗病毒治療的療效評價、免疫重建監(jiān)測。HIV感染人體后，CD4+T淋巴細胞進行性減少，HIV病毒載量與CD4+T淋巴細胞數(shù)呈顯著性負相關關系[11]，CD4+/ CD8+T淋巴細胞的比值倒置，細胞的免疫功能受損。目前CD4+T淋巴細胞亞群主要的檢測方法為流式細胞術，分為雙平臺方法（先利用血球儀計數(shù)得到淋巴細胞數(shù)量，再根據流式細胞儀得到的細胞群體百分比計算）和單平臺方法（一步即可獲得T細胞亞群的相對數(shù)和絕對數(shù)），雙平臺方法需要兩種儀器，由于儀器的系統(tǒng)誤差導致試驗誤差較大，同時操作步驟較復雜，單平臺方法能最大程度的降低檢測誤差。

3 HIV核酸檢測

核酸檢測是目前HIV檢測最敏感的手段，但是由于所需的試劑、儀器成本較高，很難運用到日常檢測工作中。目前常用方法有逆轉錄PCR（RTPCR）、實時熒光定量PCR擴增技術（Real-time PCR）以及核酸序列依賴性擴增（NASBA）技術。目前HIV核酸檢測主要作為補充試驗，用于篩查試驗有反應但抗體確證試驗不確定或陰性樣本的判定；對篩查試驗有反應但抗體確證試驗不確定或陰性的疑似艾滋病晚期患者需將核酸檢測、臨床病史和CD4+T淋巴細胞計數(shù)檢測結果綜合判斷。對于抗體篩查試驗陰性但免疫功能低下者，也可進行核酸檢測，結合臨床綜合判斷。HIV核酸檢測在血站中的應用尤為重要，存在“窗口期”獻血者的血液樣本無法檢出HIV，如果只使用單一檢測方法會造成漏檢的可能性，余謹?shù)萚12]對4879例兩遍ELISA法檢測陰性的獻血者標本使用核酸檢測發(fā)現(xiàn)1例HIV陽性標本和6例HBV陽性標本。王麗梅等[13]對無償獻血者的344515例標本進行HIV ELISA和核酸同時檢測，兩種方法互補提高檢出的真陽性率，HIV核酸檢測對判定獻血者HIV感染狀態(tài)具有較高特異性，采用HIV核酸檢測和ELISA聯(lián)合檢測能保障獻血者的獻血權力和血液安全。

4 HIV耐藥檢測

HIV耐藥檢測可輔助臨床醫(yī)生制定抗病毒治療方案以及分析治療失敗的原因，采取一定的補救方案。目前常用的耐藥檢測方法有基因型和表型耐藥檢測?；蛐湍退帣z測是通過檢測耐藥相關基因序列的改變來判斷毒株的耐藥情況，由于該方法花費少，簡便快捷，對檢測條件和人員的要求比較低而被廣泛應用。但是不能有效解釋多種耐藥突變位點的協(xié)同、拮抗效應[14]。表型檢測通過檢測病毒在多種抗病毒藥濃度中的生長能力來判斷。李晶等[15]通過比較In-house HIV-1基因型耐藥檢測方法與兩種商品化的耐藥檢測方法結果的一致性，結果顯示具有較好的一致性，能有效監(jiān)測感染者血液中的耐藥性毒株，結果可靠準確。目前我國的艾滋病患者的呈上升趨勢，耐藥檢測的需求也會隨著治療不斷增大。

綜上所述，HIV檢測方法隨著社會的發(fā)展需求不斷完善中，HIV核酸檢測也縮短了“窗口期”，各種方法的優(yōu)劣明顯，根據不同需求下結合所需要技術，降低漏檢率。同時耐藥檢測也造福了感染者，幫助感染者提高生活質量。每一次的HIV檢測技術的進步都保護了感染者和未感染者，為人類與HIV斗爭中發(fā)揮了重要作用。

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