人胰島素及其類似物中殘留溶劑測定方法研究

孫悅，胡馨月，丁曉麗，李晶，呂萍，張慧，梁成罡

·論著·

人胰島素及其類似物中殘留溶劑測定方法研究

孫悅，胡馨月，丁曉麗，李晶，呂萍，張慧，梁成罡

102629 北京，中國食品藥品檢定研究院激素室/國家藥品監(jiān)督管理局化學藥品質(zhì)量研究與評價重點實驗室

建立人胰島素及其類似物中有機溶劑殘留測定方法，用同一方法測定目前在人胰島素及類似物生產(chǎn)工藝中普遍存在的甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈和正丙醇 5 種殘留溶劑。采用頂空氣相色譜法，使用 DB-624 毛細管柱（30 m × 0.53 mm，3 μm），載氣為氮氣，流速為 2.5 ml/min，檢測器為氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度為 250 ℃，進樣口溫度為 200 ℃，分流比為 5:1，頂空平衡溫度為 85 ℃，平衡時間為 20 min，柱溫程序為：起始溫度 40 ℃，保持10 min，隨后以 5 ℃/min升至 80 ℃，隨后以 20 ℃/min 升至 200 ℃。甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈及正丙醇峰之間分離良好；專屬性、耐用性、精密度良好；甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈和正丙醇分別在 1.5 ～ 60.8、1.1 ～ 98.9、0.8 ～ 100.4、0.7 ～ 10.4、0.8 ～ 100.1 μg/ml濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關系（2均大于 0.99）；甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈和正丙醇檢出限分別為 0.6、0.3、0.2、0.2、0.2 μg/ml，定量限分別為 1.5、1.1、0.8、0.7、0.8 μg/ml；各溶劑在人胰島素及其類似物中平均加標回收率（n = 9）均在 90% ～ 110% 范圍內(nèi)，準確度良好。該方法可操作性強、準確、靈敏度高，適用于人胰島素及其類似物中甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈和正丙醇 5 種殘留溶劑測定。

人胰島素及其類似物； 頂空氣相色譜法； 殘留溶劑； 方法學驗證

人胰島素及其類似物由重組 DNA 技術制備得到，是 1 型糖尿病患者的基本治療方法，也是許多長期 2 型糖尿病患者常見的治療選擇[1]。人胰島素由 A、B 兩條以分子間二硫鍵連接起來的肽鏈組成，A 鏈 21 個氨基酸，B 鏈 30 個氨基酸，胰島素類似物在人胰島素結構基礎上進行氨基酸替換和脂肪酸鏈化學修飾，以改變吸收速率、作用持續(xù)時間、提高作用的再現(xiàn)性，并調(diào)節(jié)各種靶組織中的相對功效[1-3]。

藥品中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產(chǎn)中，以及在制劑制備過程中使用的，但在工藝過程中未能完全去除的有機溶劑[4]。人胰島素及類似物下游生產(chǎn)工藝步驟包括包涵體清洗、包涵體溶解、胰島素原融合蛋白提取、緩沖液交換、胰島素原純化、胰島素原復性、酶切、胰島素純化、結晶和凍干等步驟[5]。以上工藝中常用的有機溶劑有甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈、正丙醇、乙酸等，其中乙腈、甲醇屬于第二類溶劑，應該限制使用，乙醇、異丙醇和正丙醇屬于第三類溶劑，應根據(jù)生產(chǎn)工藝的特點，制訂相應的限度，使其符合產(chǎn)品規(guī)范、藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GMP）或其他基本的質(zhì)量要求[4]。

2020 年版《中華人民共和國藥典》三部、《美國藥典》43 版、《歐洲藥典》10.0 版均收載了人胰島素、甘精胰島素、賴脯胰島素、門冬胰島素、地特胰島素及德谷胰島素，現(xiàn)行標準為國家藥品標準和進口藥品注冊標準。目前，獲得人胰島素及其類似物批準文號的企業(yè)及在注冊的企業(yè)較多，殘留溶劑測定方法各異。針對這一問題，本文對人胰島素及其類似物中殘留溶劑測定進行了研究，建立了一種氣相色譜方法同時測定 5 種殘留溶劑，包括甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈和正丙醇，并進行了方法學驗證。該法可操作性強、專屬性好、準確、靈敏度高，能夠保證產(chǎn)品質(zhì)量可控，節(jié)省檢測成本，為標準提高提供數(shù)據(jù)支持和技術支撐。

1 材料與方法

1.1 材料

7890A型氣相色譜儀和 7890B 型頂空進樣器為美國 Aglient 公司產(chǎn)品；ME155DU 電子天平為瑞士梅特勒-托利多公司產(chǎn)品；人胰島素、門冬胰島素、賴脯胰島素、甘精胰島素、地特胰島素、德谷胰島素為中檢院激素室留樣；甲醇、無水乙醇、異丙醇為國藥集團化藥試劑有限公司產(chǎn)品（含量≥ 99.5%）；正丙醇、乙腈和二甲基亞砜為美國 Sigma Aldrich 公司產(chǎn)品（含量≥ 99.5%）；鹽酸、磷酸購自國藥集團化學試劑有限公司，均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 頂空條件 采用 DB-624 毛細管柱（30 m × 0.53 mm，3 μm），載氣為氮氣，流速為 2.5 ml/min，檢測器為 FID，檢測器溫度為 250 ℃，進樣口溫度為 200 ℃，分流比為5:1，頂空平衡溫度為 85 ℃，平衡時間為 20 min，柱溫程序為：起始溫度 40 ℃，保持 10 min，隨后以 5 ℃/min升至 80 ℃，隨后以 20 ℃/min升至 200 ℃。

1.2.2 供試品與對照品溶液配制

⑴供試品溶液：取人胰島素、門冬胰島素、賴脯胰島素、甘精胰島素、地特胰島素、德谷胰島素，分別精密稱取 50 mg 置 20 ml 頂空瓶中，加 0.01 mol/L 鹽酸溶液 5 ml溶解，搖勻，壓蓋密封，作為供試品溶液。

⑵對照品儲備液：分別精密稱取甲醇 150 mg、乙醇 250 mg、異丙醇 250 mg、乙腈20.5 mg、正丙醇 250 mg 置 50 ml 量瓶中，用 0.01 mol/L 鹽酸溶液稀釋并定容至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。

⑶混合對照品溶液：分別精密量取各對照品儲備液 1.0 ml 置同一 100 ml 量瓶中，用 0.01 mol/L 鹽酸溶液稀釋并定容至刻度，搖勻，量取 5 ml 置 20 ml 頂空瓶中，壓蓋密封，作為混合對照品溶液。

1.2.3 專屬性樣品制備 分別量取混合對照品溶液、0.01 mol/L 鹽酸溶液 5 ml 置 20 ml 頂空瓶中，壓蓋密封，作為專屬性溶液。

1.2.4 線性樣品制備 分別精密量取各對照品儲備液適量置同一量瓶，用 0.01 mol/L 鹽酸溶液梯度稀釋得到 LOQ、L1 ～ L7 系列混合線性溶液，其中甲醇濃度分別為 1.5、5.2、10.0、20.4、30.4、40.4、50.8、60.8 μg/ml，乙醇濃度分別為 1.1、8.4、16.3、33.1、49.4、65.8、82.6、98.9 μg/ml，異丙醇濃度分別為 0.8、8.5、16.6、33.6、50.2、66.8、88.9、100.4 μg/ml，乙腈濃度分別為 0.7、0.9、1.7、3.5、5.2、6.9、8.7、10.4 μg/ml，正丙醇濃度分別為 0.8、8.5、16.5、33.5、50.0、66.5、83.6、100.1 μg/ml，分別量取各混合線性溶液 5 ml 置 20 ml 頂空瓶中，壓蓋密封即得。

1.2.5 精密度樣品制備 取混合對照品溶液，連續(xù)進樣 6 針考察精密度。

1.2.6 檢測限與定量限樣品制備 分別量取甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈、正丙醇對照品儲備液適量，用 0.01 mol/L 鹽酸溶液依次稀釋，量取 5 ml 置 20 ml 頂空瓶中，壓蓋密封，以信噪比 S/N = 3 時相應的濃度確定檢測限，以信噪比 S/N = 10 時相應的濃度確定定量限。

1.2.7 準確度樣品制備 取人胰島素、門冬胰島素、賴脯胰島素、甘精胰島素、地特胰島素、德谷胰島素，分別精密稱取 50 mg 置 20 ml 頂空瓶中，平行 9 份，分為 3 組，分別用 5 ml 線性溶液 L3、L4、L5 溶解，得到 70%、100%、130% 濃度水平準確度考察溶液。

1.2.8 溶液穩(wěn)定性樣品制備 取人胰島素及其類似物 100% 濃度水平準確度考察溶液，于 0、2、24 h 進行檢測，考察溶液穩(wěn)定性。

1.2.9 耐用性樣品制備 分別改變分流比（10:1）、流速（3.0 ml/min）、頂空加熱時間（15 min）、頂空加熱溫度（80 ℃）、氣相色譜柱[DB-624 毛細管柱（30 m × 0.31 mm，1.8 μm）]，取混合對照品溶液進樣測定，考察方法耐用性。

2 結果

2.1 專屬性

如圖 1 所示，空白溶液對甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈和正丙醇檢測無影響，專屬性良好。5 種溶劑峰間分離度分別為 12.4、8.8、2.0、18.2，理論塔板數(shù)分別為 26416、30029、25005、35164、42914，分離度良好，柱效高。

2.2 線性

分別以甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈、正丙醇質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，線性范圍、線性回歸方程見表 1，2均大于 0.99，線性良好。

2.3 精密度

取精密度考察溶液，連續(xù)進樣 6 針，甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈、正丙醇峰面積 RSD% 分別為 0.7%、0.5%、1.1%、0.5%、0.9%，精密度良好。

圖1 空白溶液色譜圖（A）和混合對照品溶液色譜圖（B）

Figure 1 Chromatogram of blank solution (A) and mixed reference solution (B)

表1 5 種殘留溶劑線性關系結果

Table 1 Linear relationship results of 5 residual solvents

名稱 Name線性范圍（μg/ml） Linear range (μg/ml)線性回歸方程 Linear regression equation相關系數(shù)r2 Coefficient r2 甲醇 Methanol1.5 ～ 60.8y = 2.1286x + 0.24580.9998 乙醇 Ethanol1.1 ～ 98.9y = 4.384x – 0.10650.9997 異丙醇 Isopropanol0.8 ～ 100.4y = 8.9556x + 1.06850.9997 乙腈 Acetonitrile0.7 ～ 10.4y = 7.5009x + 0.40930.9985 正丙醇 N-propanol0.8 ～ 100.1y = 8.4692x – 1.07440.9997

2.4 檢測限與定量限

以信噪比 S/N = 3 時相應的濃度確定檢測限，甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈、正丙醇檢測限分別為 0.6、0.3、0.2、0.2、0.2 μg/ml；以信噪比 S/N = 10 時相應的濃度確定定量限，甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈、正丙醇檢測限分別為 1.5、1.1、0.8、0.7、0.8 μg/ml。

2.5 準確度

準確度考察結果見表 2，人胰島素、門冬胰島素、賴脯胰島素、甘精胰島素、地特胰島素、德谷胰島素樣品平均加標回收率均在 90% ～ 110% 范圍內(nèi)，準確度良好。

2.6 溶液穩(wěn)定性

分別于 0、2、24 h 測定人胰島素、門冬胰島素、賴脯胰島素、甘精胰島素、地特胰島素、德谷胰島素 100% 濃度水平準確度考察溶液中各溶劑含量，測定結果見表 3，甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈、正丙醇含量 RSD%（n = 3）均小于5.0%，溶液穩(wěn)定性良好。

2.7 耐用性

在不同耐用性條件下分別采用外標法測定混合對照品溶液中甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈、正丙醇含量，測定結果如表 4 所示，含量 RSD% 均小于 5.0%，方法耐用性良好。

表2 人胰島素及其類似物加標回收率結果

Table 2 Results of spiked recovery of human insulin and its analogues

名稱Name殘留溶劑Residualsolvent濃度水平70%Concentration level 70%濃度水平100%Concentration level 100%濃度水平130%Concentration level 130%平均回收率（%）Averagerecoveries(%)RSD%（n = 9） 理論值（μg/ml）Theoreticalvalue(μg/ml)實測值（μg/ml）Measuredvalue(μg/ml)回收率（%）Recoveryrate(%)理論值（μg/ml）Theoreticalvalue(μg/ml)實測值（μg/ml）Measuredvalue(μg/ml)回收率（%）Recoveryrate(%)理論值（μg/ml）Theoreticalvalue(μg/ml)實測值（μg/ml）Measuredvalue(μg/ml)回收率（%）Recoveryrate(%) 人胰島素Humaninsulin甲醇Methanol20.421.5105.430.431.8104.640.441.3102.0103.12.0 20.7101.531.2102.642.5105.1 21.4104.930.299.341.5102.5 乙醇Ethanol33.132.999.349.449.6100.465.865.799.998.61.2 32.497.848.698.364.998.7 32.497.847.796.664.898.5 異丙醇Isopropanol33.632.997.750.248.496.566.865.698.296.31.4 32.897.548.095.662.793.9 32.396.047.795.064.296.1 乙腈Acetonitrile3.53.6103.75.25.3101.96.96.898.8100.72.4 3.5100.25.198.16.797.5 3.6104.65.3102.06.999.7 正丙醇N-propanol33.532.496.650.048.496.766.565.298.096.21.2 32.697.247.995.762.894.4 32.195.947.394.664.396.6 門冬胰島素Insulinaspart甲醇Methanol20.421.1103.430.430.5100.440.441.3102.2102.11.9 21.1103.729.898.042.1104.1 20.9102.430.9101.541.6102.8 乙醇Ethanol33.132.899.149.449.199.365.865.599.699.11.0 33.199.847.997.064.798.4 33.2100.349.299.465.399.3 異丙醇Isopropanol33.632.095.250.248.596.666.862.994.295.01.0 31.794.247.494.463.194.5 31.794.348.596.663.895.5 乙腈Acetonitrile3.53.497.75.25.2100.26.96.695.198.02.0 3.396.15.3101.06.796.9 3.498.25.197.56.999.3 正丙醇N-propanol33.531.995.050.048.196.066.562.594.094.90.8 31.694.347.194.262.894.4 31.694.348.095.963.595.5 賴脯胰島素Insulinlispro甲醇Methanol20.420.098.130.431.4103.240.440.299.4100.72.2 20.399.731.2102.640.299.4 20.7101.429.998.342.0103.9 乙醇Ethanol33.132.096.749.450.0101.165.864.397.999.71.8 33.5101.248.497.965.9100.2 32.196.949.5100.166.0100.4 異丙醇Isopropanol33.631.794.250.248.797.066.863.895.695.01.1 31.794.147.594.763.294.6 31.994.947.293.964.196.0 乙腈Acetonitrile3.53.497.65.25.197.16.96.695.698.22.2 3.6102.55.095.96.797.5 3.599.05.299.26.999.7 正丙醇N-propanol33.531.594.150.048.596.966.563.194.895.01.2 32.195.747.795.362.593.9 31.995.146.693.164.096.2

續(xù)表 2

名稱Name殘留溶劑Residualsolvent濃度水平70%Concentration level 70%濃度水平100%Concentration level 100%濃度水平130%Concentration level 130%平均回收率（%）Averagerecoveries(%)RSD%（n = 9） 理論值（μg/ml）Theoreticalvalue(μg/ml)實測值（μg/ml）Measuredvalue(μg/ml)回收率（%）Recoveryrate(%)理論值（μg/ml）Theoreticalvalue(μg/ml)實測值（μg/ml）Measuredvalue(μg/ml)回收率（%）Recoveryrate(%)理論值（μg/ml）Theoreticalvalue(μg/ml)實測值（μg/ml）Measuredvalue(μg/ml)回收率（%）Recoveryrate(%) 甘精胰島素Insulinglargine甲醇Methanol20.420.9102.630.429.797.740.443.4107.3101.02.9 20.399.631.0101.840.499.9 20.7101.729.697.441.0101.3 乙醇Ethanol33.135.4107.049.448.497.965.869.0105.0102.72.9 34.0102.551.7104.566.2100.7 34.6104.448.999.067.8103.1 異丙醇Isopropanol33.632.396.050.246.893.266.866.098.895.62.5 31.192.447.795.065.698.3 31.994.946.893.365.698.2 乙腈Acetonitrile3.53.5101.05.25.095.96.96.9100.298.12.2 3.496.55.197.16.999.3 3.497.74.994.96.999.9 正丙醇N-propanol33.532.095.350.046.492.866.565.999.195.12.7 30.691.347.795.464.997.5 31.594.046.492.764.997.6 地特胰島素Insulindetemir甲醇Methanol20.421.1103.730.430.9101.640.442.0103.8103.51.3 21.2104.231.7104.141.0101.3 21.6105.831.3102.842.0103.8 乙醇Ethanol33.133.3100.549.449.199.265.867.7103.0100.41.5 33.2100.149.6100.365.098.9 34.0102.749.199.365.599.7 異丙醇Isopropanol33.632.295.850.247.494.466.865.698.296.01.3 32.195.548.195.864.396.3 32.997.847.794.963.995.7 乙腈Acetonitrile3.53.6102.55.25.299.86.96.897.8101.01.7 3.5101.55.3102.07.0101.2 3.6103.55.3100.96.999.5 正丙醇N-propanol33.532.095.450.047.294.366.565.798.796.31.7 32.797.448.096.063.795.8 33.198.847.394.563.695.5 德谷胰島素Insulindegludec甲醇Methanol20.420.4100.230.430.4100.040.440.299.499.91.9 19.696.230.399.840.098.9 20.098.331.4103.139.597.7 乙醇Ethanol33.132.197.049.447.796.465.863.897.198.12.1 31.494.749.099.164.698.3 33.6101.549.199.365.399.3 異丙醇Isopropanol33.631.493.250.246.592.666.862.393.294.02.3 31.593.745.590.564.796.9 31.693.847.594.565.397.7 乙腈Acetonitrile3.53.496.25.25.198.96.96.898.098.51.2 3.599.25.2100.56.898.6 3.497.65.299.36.898.1 正丙醇N-propanol33.531.794.550.047.394.666.562.193.394.61.4 31.894.746.292.364.296.5 31.794.447.695.164.096.2

表3 溶液穩(wěn)定性結果

Table 3 Solution stability results

名稱Name含量RSD%（n = 3） Content RSD% (n = 3) 甲醇 Methanol乙醇 Ethanol異丙醇 Isopropanol乙腈 Acetonitrile正丙醇 N-propanol 人胰島素 Human insulin3.32.71.53.43.2 門冬胰島素 Insulin aspart2.00.71.31.71.0 賴脯胰島素 Insulin lispro2.70.91.63.02.0 甘精胰島素 Insulin glargine1.22.52.72.72.4 地特胰島素 Insulin detemir2.52.93.60.73.8 德谷胰島素 Insulin degludec1.81.61.23.82.7

表4 耐用性結果

Table 4 Durability results

耐用性改變條件Durability change conditions實測值（μg/ml） Measured value (μg/ml) 甲醇Methanol乙醇Ethanol異丙醇Isopropanol乙腈Acetonitrile正丙醇N-propanol 原方法 Original method20.433.133.63.533.5 分流比10:1 Split ratio 10:121.934.733.43.534.2 流速3.0 ml/min Velocity of flow 3.0 ml/min20.633.634.43.834.3 頂空加熱時間15 min Headspace heating time 15 min20.633.033.53.532.7 頂空加熱溫度80 ℃ Headspace heating temperature 80 ℃20.534.034.83.634.9 氣相色譜柱[DB-624 毛細管柱（30 m × 0.31 mm，1.8 μm）]Gas chromatography column [DB-624 capillary column (30 m × 0.31 mm, 1.8 μm)]20.632.933.63.433.6 RSD（%）2.72.01.73.72.2

3 討論

氣相色譜法是測定殘留溶劑的常用方法，氣相色譜程序主要有三種方法：直接進樣法、頂空分析法和固相微萃取法[6]。本文根據(jù)人胰島素及其類似物和各待測溶劑理化性質(zhì)，選擇頂空-氣相色譜法進行分析研究，頂空法具有樣品前處理簡單、溶劑峰小、更潔凈等優(yōu)勢。本研究考察了人胰島素及其類似物在0.01 mol/L 鹽酸溶液、1% 磷酸溶液、二甲基亞砜中的溶解性，結果顯示在0.01 mol/L 鹽酸溶液中溶解性好，氣液分配系數(shù)小，靈敏度高。采用混合對照品溶液考察頂空加熱時間、頂空加熱溫度，結果顯示溫度越高，溶劑峰面積越大，相同溫度加熱 15 ～ 35 min，溶劑峰面積基本一致，說明加熱 15 min 時即達到氣液平衡。本研究還考察了不同氣相色譜柱、柱溫程序等條件，最終建立了專屬性好、準確、靈敏度高的頂空-氣相色譜法。

有機溶劑殘留關乎制品質(zhì)量的安全性及可控性。近年來，人胰島素及其類似物成為研發(fā)熱點，鑒于生產(chǎn)工藝中使用的有機溶劑種類比較相近或相同，且制品理化性質(zhì)相近，建立通用型測定方法能夠同時應用于 6 個胰島素品種的 5 種有機溶劑殘留測定，應用范圍廣，能夠解決各企業(yè)測定方法各異、部分方法繁瑣等問題。2020 年版《中華人民共和國藥典》三部凡例規(guī)定，生產(chǎn)過程中如采用有機溶劑或其他物質(zhì)進行提取、純化或滅活處理等，生產(chǎn)的后續(xù)工藝應能有效去除。有機溶劑殘留量應符合殘留溶劑測定法的相關規(guī)定（通則 0861）[7]。甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈和正丙醇限度分別為 0.3%、0.5%、0.5%、0.041%、0.5%，本文考察了各有機溶劑定量限至 200% 濃度水平線性范圍及70%、100%、130% 濃度水平加標回收率，線性及準確度良好，能夠用于人胰島素及其類似物中甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈和正丙醇殘留溶劑分析，對標準提高以及殘留溶劑分析方法的進一步標準化提供了參考。

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國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典. 2020年版三部. 北京: 中國醫(yī)藥科技出版社, 2020:XIV-XV.

Determination of residual solvents in human insulin and its analogues

SUN Yue, HU Xin-yue, DING Xiao-li, LI Jing, LYU Ping, ZHANG Hui, LIANG Cheng-gang

Author Affiliation: Division of Hormone, National Institutes for Food and Drug Control, NMPA Key Laboratory for Quality Research and Evaluation of Chemical Drugs, Beijing 102629, China

To establish a method for the determination of organic solvent residues in human insulin and its analogues, and to determine the residual solvents of methanol, ethanol, isopropanol, acetonitrile and N-propanol simultaneously.Headspace gas chromatography using DB-624 capillary column (30 m × 0.53 mm, 3 μm) with conditions as follows: ① the carrier gas is nitrogen; ② the flow rate is 2.5 ml/min; ③ the detector is a flame ionization detector; ④ the detector temperature is 250 ℃; ⑤ the injection port temperature is 200 ℃; ⑥ the split ratio is 5:1; ⑦ the headspace equilibrium temperature is 85 ℃; ⑧ the equilibrium time is 20 min. The column temperature program is as follows: ① the initial temperature is 40 ℃, and maintained for 10 min; ② it is raised to 80 ℃ at 5 ℃/min, and then it is raised to 200 ℃ at 20 ℃/min.The peaks of methanol, ethanol, isopropanol, acetonitrile and N-propanol were well separated with good specificity, durability and precision. Methanol, ethanol, isopropanol, acetonitrile and N-propanol show a good linear relationship in the concentration range of 1.5 - 60.8, 1.1 - 98.9,0.8 - 100.4,0.7 - 10.4, and 0.8 - 100.1 μg/ml,respectively (2> 0.99). The detection limits of methanol, ethanol, isopropanol, acetonitrile and N-propanol were 0.6, 0.3, 0.2, 0.2, 0.2 μg/ml, respectively. The limits of quantification were 1.5, 1.1, 0.8, 0.7, 0.8 μg/ml, respectively. The average recoveries (n = 9) of all solvents in human insulin and its analogues were in the range of 90% - 110%, and the accuracy was good.The method is operable, accurate and sensitive, and is suitable for the determination of methanol, ethanol, isopropanol, acetonitrile and N-propanol in human insulin and its analogues.

human insulin and its analogues; headspace gas chromatography; residual solvent; method validation

s: LIANG Cheng-gang, Email: liangchenggang@nifdc.org.cn; ZHANG Hui, Email: zhanghui313@sina.com

10.3969/j.issn.1673-713X.2023.03.003

梁成罡，Email：liangchenggang@nifdc.org.cn；張慧，Email：zhanghui313@sina.com

2023-02-10