農(nóng)藥在果蔬中的基質(zhì)效應(yīng)研究

◎ 吳愛金

（桂平市公共檢驗(yàn)檢測中心，廣西 桂平 537200）

由于按照《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》（NY/T 761—2008）標(biāo)準(zhǔn)檢測有機(jī)磷農(nóng)殘時(shí)，存在水果、蔬菜基質(zhì)給農(nóng)殘分析結(jié)果帶來干擾的問題，對分析結(jié)果精準(zhǔn)性帶來影響，這種因果蔬樣品基體物質(zhì)帶來的影響和干擾，就是基質(zhì)效應(yīng)。而在生物檢測中，常見的色譜、質(zhì)譜或者色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測時(shí)，基質(zhì)效應(yīng)較為常見。按照基質(zhì)給檢測信號(hào)帶來的響應(yīng)值不同的特點(diǎn)，基質(zhì)效應(yīng)可分為增強(qiáng)和減弱兩種效應(yīng)。因此，在本研究中，將通過基質(zhì)影響實(shí)驗(yàn)，優(yōu)化NY/T 761—2008的抽樣檢測方法。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

花菜、蘿卜、土豆、蒜苗和蘋果，從梧州市選取市場銷售的陰性果蔬樣品，即果蔬中沒有檢出有機(jī)磷農(nóng)藥；丙酮、乙腈、氯化鈉和農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液（9種，分別是甲胺磷、甲基對硫磷、敵敵畏、樂果、氧樂果、馬拉硫磷、三唑磷、毒死蜱和倍硫磷）。氣相色譜儀、氮吹儀、臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)、振蕩器、電子天平、可調(diào)移液器、勻漿機(jī)、瓶口分液器、超純水機(jī)、超聲儀、烘箱以及冰箱[1]。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 試樣處理

根據(jù)NY/T 761—2008 標(biāo)準(zhǔn)的抽樣方法，抽取水果和蔬菜樣品，將其縮分切碎后，置于勻漿機(jī)打碎，成為待測試樣，并封裝在聚乙烯自封袋中，在-20 ℃環(huán)境下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

本研究的標(biāo)準(zhǔn)溶液均為100 μg·mL-1；標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液為10 μg·mL-1。精準(zhǔn)移取標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00 mL（濃度為100 μg·mL-1）到10 mL 容量瓶中，再添加丙酮稀釋到刻度后，搖勻備用。在配制其他系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度時(shí)，在1.00 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)濃度下，取標(biāo)準(zhǔn)溶液200 μL（濃度為10 μg·mL-1），溶劑為基質(zhì)液1 800 μL；在0.50 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)濃度下，從上一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)溶液取1 000 μL（濃度為1.0 μg·mL-1），溶劑為基質(zhì)液1 000 μL；在0.20 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)濃度下，從上一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)溶液取800 μL（濃度為0.5 μg·mL-1），溶劑為基質(zhì)液1 200 μL；在0.05 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)濃度下，從上一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)溶液取500 μL（濃度為0.20 μg·mL-1），溶劑為基質(zhì)液1 500 μL；在0.02 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)濃度下，從上一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)溶液取400 μL（濃度為0.05 μg·mL-1），溶劑為基質(zhì)液600 μL。其中，基質(zhì)液是從多種不同的陰性水果中提取的基體，再將其分別溶解到含有丙酮的溶液中獲取[2]。

1.2.3 有機(jī)磷農(nóng)藥前處理

稱取5.0 g 處理后的樣品，置于50 mL 離心管，再添加10 mL 乙腈，搖勻后，置于振蕩器振蕩5 min，待混合充分后，置于離心機(jī)離心處理4 min（離心機(jī)轉(zhuǎn)速4 000 r·min-1）。再取上清液10 mL，將其置于含有氯化鈉（1.0 g·L-1）的離心管（50 mL），置于振蕩器振蕩5 min，再置于離心機(jī)離心處理4 min（離心機(jī)轉(zhuǎn)速4 000 r·min-1）。取上清液2 mL，將其置于2 mL離心管中，利用氮吹儀在75 ℃下蒸發(fā)近干后，添加1 mL 丙酮于2 mL 離心管中，將其充分均勻振動(dòng)后，用0.22 μm的濾膜，將其過濾到2 mL進(jìn)樣瓶中，備測[3]。

1.2.4 氣相色譜條件

本試驗(yàn)色譜柱為Agilent DB-1（30 m×250 μm，0.25 μm）。柱溫最初為150 ℃，保持2 min 后，按照8 ℃·min-1的速度升高到250 ℃，再保持5 min。色譜柱的流量為2 mL·min-1。進(jìn)樣口和檢測器的溫度分別為220 ℃與250 ℃。采用火焰光度檢測器與磷濾光片。氫氣、空氣、氮?dú)獾牧魉俜謩e為75 mL·min-1、100 mL·min-1、100 mL·min-1，采取不分流進(jìn)樣的方式進(jìn)樣[4]。

1.2.5 計(jì)算定量結(jié)果

在試樣中，被測的農(nóng)殘按照質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)算，單位為mg·kg-1，計(jì)算公式為

式中：ρ為標(biāo)準(zhǔn)溶液農(nóng)藥質(zhì)量濃度，μg·mL-1；A為標(biāo)準(zhǔn)溶液被測農(nóng)藥峰面積；AS為農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液被測農(nóng)藥峰面積；V1為溶劑提取總體積，mL；V2為用于檢測吸取的溶劑提取體積，mL；V3為樣品溶液的定容體積，mL；m為試樣質(zhì)量，g。

1.2.6 基質(zhì)影響實(shí)驗(yàn)

將5 類陰性果蔬樣品均勻制樣后，添加濃度一致（0.20 mg·kg-1）的9 種不同有機(jī)磷農(nóng)藥，按照上述試驗(yàn)方法進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)。

1.2.7 基質(zhì)干擾消除實(shí)驗(yàn)

本研究結(jié)合以上每種有機(jī)磷農(nóng)藥在每種果蔬中的基質(zhì)效應(yīng)，選擇基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)法開展基質(zhì)干擾消除實(shí)驗(yàn)。選擇蘿卜和蘋果作為樣品，將二者按照1.2.3 所示方法提取陰性空白基質(zhì)，分別選取丙酮（以下簡稱BTO）、含有蘋果基質(zhì)的丙酮（以下簡稱BT1）、含有蘿卜基質(zhì)的丙酮（以下簡稱BT2）作為溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度從大到小分別為1.00 mg·kg-1、0.50 mg·kg-1、0.20 mg·kg-1、0.05 mg·kg-1和0.02 mg·kg-1，將得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率作為縱向坐標(biāo)，將不同農(nóng)藥作為橫向坐標(biāo)，制圖后分析蘋果、蘿卜基質(zhì)對上述9 種有機(jī)磷農(nóng)藥帶來的基質(zhì)效應(yīng)[5]。

2 結(jié)果與分析

2.1 基質(zhì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果

將5 類陰性果蔬樣品均勻制樣后，添加濃度一致（0.20 mg·kg-1）的9 種不同有機(jī)磷農(nóng)藥，按照上述試驗(yàn)方法和表1 所示的標(biāo)準(zhǔn)添加回收率進(jìn)行試驗(yàn)。

表1 果蔬有機(jī)磷農(nóng)藥加標(biāo)回收率表（單位：%）

由表1 可知，每一種有機(jī)磷農(nóng)藥在不同果蔬樣品的基質(zhì)效應(yīng)表現(xiàn)的強(qiáng)度均不同，且每一種果蔬樣品中的每一種有機(jī)磷農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)影響也不同，按照有機(jī)磷農(nóng)藥加標(biāo)回收率范圍，得到每種農(nóng)藥對每種果蔬的基質(zhì)效應(yīng)影響水平，具體結(jié)果如下。①蒜苗中由于含有硫化物，因此整體回收率較高。②敵敵畏的加標(biāo)回收率偏低，這與其沸點(diǎn)只有74 ℃有關(guān)，前處理時(shí)的氮吹溫度為75 ℃，因此會(huì)導(dǎo)致?lián)p失。③回收率較低的農(nóng)藥分別為甲基對硫磷、馬拉硫磷、毒死蜱和倍硫磷，即基體效應(yīng)影響較低。④強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)的農(nóng)藥分別為樂果、氧樂果、三唑磷，即對測定結(jié)果有較大影響。⑤甲胺磷的基質(zhì)效應(yīng)無明顯規(guī)律。

2.2 基質(zhì)干擾消除實(shí)驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)圖1 得到的農(nóng)藥在果蔬（蘋果與蘿卜）中的基質(zhì)效應(yīng)。再往蘋果和蘿卜的陰性樣品添加濃度為0.2 mg·kg-1的9 種有機(jī)磷混合標(biāo)準(zhǔn)（n=2），再分別添加陰性基質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線對回收率進(jìn)行計(jì)算，得到表2所示結(jié)果。

圖1 農(nóng)藥在果蔬（蘋果與蘿卜）中的基質(zhì)效應(yīng)圖

表2 9 種有機(jī)磷農(nóng)藥在蘋果和蘿卜中的加標(biāo)回收率表（單位：%）

由表2 可知，在標(biāo)準(zhǔn)溶液中加入陰性基質(zhì)后，校準(zhǔn)的曲線結(jié)果能確保加標(biāo)回收率在81%～111%，而只有氧樂果的回收率較低，敵敵畏由于氮吹問題在回收率方面有波動(dòng)，因此基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液校準(zhǔn)中，能在有機(jī)磷農(nóng)殘測定時(shí)應(yīng)用氣相色譜法，有效消除基質(zhì)干擾。

3 結(jié)論

綜上，本文對農(nóng)藥在果蔬中的基質(zhì)效應(yīng)研究是基于目前檢測標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行的改進(jìn)和優(yōu)化，利用氣相色譜法按照基質(zhì)給檢測信號(hào)帶來的響應(yīng)值不同的特點(diǎn)對抽樣檢測方法進(jìn)行優(yōu)化和完善，使檢測效率更高，結(jié)果更加精準(zhǔn)。