國(guó)產(chǎn)諾氟沙星口服固體制劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)

宋麗娟?孫熒?鮑實(shí)?吳蔚?劉晨曦

摘要： 目的 對(duì)國(guó)產(chǎn)諾氟沙星膠囊和片的質(zhì)量現(xiàn)狀進(jìn)行評(píng)價(jià)并提出意見(jiàn)。方法 采用法定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)288批膠囊和13批片抽檢樣品進(jìn)行了檢驗(yàn)，并對(duì)有關(guān)物質(zhì)、雜質(zhì)譜分析、遺傳毒性雜質(zhì)、溶出曲線和水分等關(guān)鍵項(xiàng)目進(jìn)行探索性研究。結(jié)果 301批樣品法定檢驗(yàn)合格率為100%。探索性研究?jī)?yōu)化了有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法，并對(duì)雜質(zhì)來(lái)源進(jìn)行了歸屬；建立了遺傳毒性雜質(zhì)（雜質(zhì)2）的LC/MS檢測(cè)方法；發(fā)現(xiàn)過(guò)評(píng)膠囊與未過(guò)評(píng)膠囊質(zhì)量存在明顯差異，表現(xiàn)為二者的溶出曲線存在顯著差異，過(guò)評(píng)膠囊的溶出量明顯高于未過(guò)評(píng)膠囊，且過(guò)評(píng)膠囊和片劑的水分控制相對(duì)較好，采用PVC加套袋包裝可以有效地阻隔水分的侵入。結(jié)論 諾氟沙星片質(zhì)量總體一般，膠囊質(zhì)量總體較差；通過(guò)一致性評(píng)價(jià)企業(yè)的片/膠囊質(zhì)量整體優(yōu)于未過(guò)評(píng)企業(yè)的產(chǎn)品。建議現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)優(yōu)化有關(guān)物質(zhì)和溶出度測(cè)定方法；增訂雜質(zhì)2和水分檢查；建議片/膠囊生產(chǎn)企業(yè)對(duì)原料的晶型與粒度、產(chǎn)品包裝形式進(jìn)行嚴(yán)格把控；盡快開(kāi)展一致性評(píng)價(jià)工作。

關(guān)鍵詞：諾氟沙星膠囊；諾氟沙星片；質(zhì)量評(píng)價(jià)；有關(guān)物質(zhì)；雜質(zhì)；溶出度；水分；包材

中圖分類(lèi)號(hào)：R978.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Abstract Objective To evaluate the quality of domestic norfloxacin capsules and tablets and put forward a series of improvement suggestions. Methods 288 batches of capsules and 13 batches of tablets were tested using the legal standards; and exploratory studies were carried out on key items like impurity spectrum， genotoxic impurity， dissolution curves and water. Results The qualified rate of 301 batches of samples was 100%. Through the exploratory studies，? testing methods of related substance were optimized， source of major impurities were attributed and analysis methods of genotoxic impurity were established. In addition， according to dissolution curves tests， the dissolution of capsules passing the consistency evaluation were higher than that of unevaluated varieties and the water content of the over-evaluated capsules and tablets were controlled in low level， and the PVC plus sleeve packaging form could effectively block the intrusion of moisture. Conclusion The quality of norfloxacin tablets was under general standards. However， the quality of norfloxacin capsules was of poor quality. It is recommended that the detection methods of related substances and dissolution determination should be optimized， adding the method of genotoxic impurity and water. It is also suggested that the tablet/capsule manufacturers should strictly control the crystal shape and particle size of raw materials and product packaging forms， and carry out the consistency evaluation as soon as possible.

Key wordsNorfloxacin capsules; Norfloxacin tablets; Quality evaluation; Related substances; Impurity; Dissolution; Water; Packaging form

諾氟沙星是杏林制藥株式會(huì)社1978年研制的第三代喹諾酮類(lèi)抗生素，主要用于治療敏感菌所致的感染等[1]。諾氟沙星原研制劑包括片劑和滴眼劑，其中諾氟沙星片分別于1983年在意大利由默沙東公司上市和1984年由杏林制藥在日本上市，商品名分別為Norocin和Baccidal。目前國(guó)內(nèi)使用的諾氟沙星口服固體制劑主要為膠囊和片劑，其中膠囊劑為我國(guó)獨(dú)有的劑型。諾氟沙星膠囊和片劑的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)均收載于《中國(guó)藥典》2020年版，國(guó)外藥典（USP40、BP2021）中收載了片劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，膠囊劑標(biāo)準(zhǔn)為我國(guó)特有劑型的標(biāo)準(zhǔn)。在仿制藥一致性評(píng)價(jià)工作中，日本杏林制藥的諾氟沙星片為國(guó)家藥品監(jiān)督管理局公布的第五批參比制劑，國(guó)產(chǎn)仿制的片劑與膠囊劑均以此為參比制劑進(jìn)行生物等效研究。通過(guò)一致性評(píng)價(jià)（簡(jiǎn)稱(chēng)過(guò)評(píng)）后的產(chǎn)品執(zhí)行各企業(yè)的注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

2022年國(guó)家藥品抽檢任務(wù)共抽取到諾氟沙星膠囊288批、片劑13批，涉及83家生產(chǎn)企業(yè)的88個(gè)批準(zhǔn)文號(hào)，兩種制劑的規(guī)格均為0.1g；其中過(guò)評(píng)企業(yè)的產(chǎn)品有19批，占總數(shù)的6.3%，包括2家膠囊生產(chǎn)企業(yè)（約為過(guò)評(píng)企業(yè)的33.33%）的8批樣品和2家片劑生產(chǎn)企業(yè)（約為過(guò)評(píng)企業(yè)的50%）的11批樣品。本次抽檢工作基于法定檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的有關(guān)物質(zhì)、溶出度等問(wèn)題，針對(duì)性地開(kāi)展探索性研究工作，通過(guò)對(duì)比過(guò)評(píng)制劑和未過(guò)評(píng)制劑的質(zhì)量差異，從安全性和有效性的角度評(píng)價(jià)國(guó)產(chǎn)諾氟沙星固體制劑的質(zhì)量現(xiàn)狀，分析存在的問(wèn)題，進(jìn)而明確提高產(chǎn)品質(zhì)量的方向。

1 儀器及試藥

1.1 儀器

Waters高效液相色譜儀（Waters e2695-2489和Waters e2695-2998）；Agilent高效液相色譜儀（Agilent1260）；液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（日本島津公司IT TOF）；超高效液相與三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)（島津LC30和AB4500QQQ）；溶出儀（SOTAX AT 7smart、SOTAX CE7 smart 和Agilent708+850DS）；卡氏水分儀（Metrohm 890+885）；X射線衍射儀（北京普析XD6）；差示掃描量熱儀（Waters DSC250）；電子天平（Mettler Toledo XS205）。

1.2 試藥

乙腈（色譜純，Merck）、超純水（Millipore儀制備），甲酸（色譜純，F(xiàn)isher），乙酸銨（分析純、國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），高氯酸鈉（分析純、國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）、三乙胺（色譜純，Merck）、磷酸（分析純、國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

對(duì)照品：諾氟沙星（批號(hào)130450-201907，含量99.6%），諾氟沙星雜質(zhì)A（批號(hào)130610-201903，含量99.6%），諾氟沙星雜質(zhì)B（批號(hào)130611-201001，含量100%），諾氟沙星雜質(zhì)E（批號(hào)510121，含量100%），諾氟沙星雜質(zhì)K（批號(hào)510128-201501，含量100%），依諾沙星（批號(hào)130453-201802，含量91.5%）和環(huán)丙沙星（批號(hào)130451-201904，含量83.1%）均來(lái)源于中國(guó)食品藥品檢定研究院；諾氟沙星雜質(zhì)C（批號(hào)0428-RC-0035，含量80.6%），諾氟沙星雜質(zhì)D（批號(hào)0205-RC-0051，含量80.6%），諾氟沙星雜質(zhì)F（批號(hào)0316-RD-0050，含量95.7%），諾氟沙星雜質(zhì)G（批號(hào)0722-RC-0017，含量99.3%），諾氟沙星雜質(zhì)H（批號(hào)0511-RC-0062，含量90.2%），諾氟沙星雜質(zhì)I（批號(hào)0428-RC-0034，含量88.5%），諾氟沙星雜質(zhì)J（批號(hào)0428-RC-0033，含量93.4%）和諾氟沙星遺傳毒性雜質(zhì)2（批號(hào)0429-RD-0080，含量98.7%）均來(lái)源于CATO Research Chemicals Inc。

樣品：301批次諾氟沙星膠囊和片劑（正文中Y代表原料企業(yè)，J代表膠囊，P代表片劑，數(shù)字代表企業(yè)編號(hào)）來(lái)自全國(guó)83家固體制劑生產(chǎn)企業(yè)，為2022年諾氟沙星國(guó)家藥品抽檢樣品。

2 方法

2.1 法定檢驗(yàn)

未過(guò)評(píng)膠囊和片劑按《中國(guó)藥典》2020年版二部進(jìn)行法定檢驗(yàn)；兩家企業(yè)的過(guò)評(píng)膠囊分別執(zhí)行企業(yè)注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)YBH15832020和YBH07902019；兩家企業(yè)的過(guò)評(píng)片劑執(zhí)行注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)YBH12412020和 YBH05432020。主要檢測(cè)項(xiàng)目包括：鑒別、有關(guān)物質(zhì)、溶出度、重量（片重）差異、含量測(cè)定。膠囊劑標(biāo)準(zhǔn)YBH15832020中增加了干燥失重和雜質(zhì)2的檢查；片劑標(biāo)準(zhǔn)YBH12412020中增加了乙醇量檢查。

2.2 探索性研究

針對(duì)法定檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題，通過(guò)文獻(xiàn)檢索[2-3]及對(duì)調(diào)研情況的分析，對(duì)產(chǎn)品的有關(guān)物質(zhì)方法、雜質(zhì)譜分析、遺傳毒性雜質(zhì)、溶出曲線、影響藥物的穩(wěn)定性因素等項(xiàng)目開(kāi)展研究。

2.2.1 有關(guān)物質(zhì)方法優(yōu)化

參考相關(guān)文獻(xiàn)[4-5]及BP2021方法，以可以有效分離國(guó)評(píng)中涉及的所有諾氟沙星已知雜質(zhì)為目標(biāo)進(jìn)行優(yōu)化。

色譜條件：色譜柱為Waters SunFire C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相A：醋酸銨高氯酸溶液（取醋酸銨1.0 g和高氯酸鈉7.0 g，加水1300 mL使溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.4）；流動(dòng)相B：乙腈，按表1線性梯度洗脫。檢測(cè)波長(zhǎng)為265 nm；流速為

1.4 mL/min；柱溫為50℃；進(jìn)樣體積20 μL。

2.2.2 雜質(zhì)譜研究

LC/MS測(cè)定。色譜條件：采用Discovery RP Amide C16（4.6 mm×250 mm，5μm）色譜柱，以0.1%甲酸水（流動(dòng)相A）-乙腈（流動(dòng)相B），按表1進(jìn)行梯度洗脫；柱溫為50℃；流速為1.4 mL/min；進(jìn)樣體積

20 μL；質(zhì)譜條件：離子化方式為E S I （ + ），一級(jí)掃描范圍為100～800，二級(jí)掃描范圍為50～500。離子源電壓：4.5 kV，霧化氣流量：1.5 L/min，Block溫度：200 ℃，DL溫度：200 ℃，干燥氣壓力：100 kPa，離子累積時(shí)間為10 msec，碰撞氣體注入量為50%。

2.2.3 遺傳毒性雜質(zhì)-雜質(zhì)2方法的建立

對(duì)照品溶液：取雜質(zhì)2對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加乙腈溶解制成約含0.05 mg/mL的溶液。精密量取適量，用稀釋劑定量稀釋制成約含雜質(zhì)2為2、5、10、15和20 ng/mL的溶液。

供試品溶液：取諾氟沙星制劑適量，精密稱(chēng)定，加稀釋劑溶解制成約含0.1 mg/mL的溶液。

LC/MS色譜條件：色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18（100 mm×2.1 mm，3.5 μm）；流動(dòng)相A相為0.1%甲酸-水溶液；B相為0.1%甲酸-乙腈溶液；按表2線性梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為278 nm；流速為0.6 mL/min；

柱溫為40℃；進(jìn)樣體積2 μL。質(zhì)譜條件：離子源：ESI（+）；毛細(xì)管電壓：5500 V；霧化器溫度：400℃；掃描方式：MRM，正離子掃描模式；干燥氣流速：35 psi。

2.2.4 溶出曲線及生物等效性研究

以日本杏林制藥的諾氟沙星片為參比制劑，選取大于6批次的10家企業(yè)的樣品，參照日本橙皮書(shū)，采用槳法，分別以pH 1.2、pH4.0、 pH 6.8和水各1000 mL作為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r/min測(cè)定，參考文獻(xiàn)[6]，繪制溶出曲線。采用Gastro plusTM軟件預(yù)測(cè)諾氟沙星固體制劑體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)曲線，進(jìn)行生物等效性預(yù)測(cè)。

新溶出度測(cè)定方法：采用槳法，以pH6.8的磷酸緩沖液1000 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r/min，溫度37℃，取樣時(shí)間60 min，限度80%。色譜條件：采用X-Bridge-C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5μm），以0.1%磷酸溶液-乙腈（85：15， V/V）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為275 nm；流速1.0 mL/min；柱溫40℃；進(jìn)樣量5 μL。

2.2.5 水分與包材相關(guān)性研究

針對(duì)本次抽檢中膠囊套袋包裝有復(fù)合膜袋包裝和復(fù)合膜袋加干燥劑包裝2種包裝形式，片劑包裝有高密度聚乙烯塑料瓶、PVC加套袋、PVC加套袋并內(nèi)置1袋硅膠干燥劑3種包裝形式?？疾焖謱?duì)套袋和未套袋樣品的影響。對(duì)14家企業(yè)樣品在溫度40℃，濕度75%條件下放置0個(gè)月、1個(gè)月和3個(gè)月后測(cè)定水分。

2.2.6 原料晶型及粒度相關(guān)研究

粉末X射線衍射法：射線管為Cu靶，管壓36 kV，管流20 mA，掃描范圍（2θ）為3°～80°；發(fā)射狹縫為1°，接收狹縫為0.15°，防散射狹縫為1°；單色化方法：有濾玻片，采樣步寬0.02；連續(xù)掃描，掃描速度為8°/min。

DSC法：采用鋁坩堝，升溫程序：初始溫度為40℃，以20℃/min升至250℃，恒溫3 min，平衡50℃。

粒度分布分析：采用Malvern Mastersizer 2000粒度儀，按《中國(guó)藥典》通則粒度和粒度分布測(cè)定法第三法[7]測(cè)定；遮光度為4%～7%，顆粒吸收率為1.462。

表觀溶解速率測(cè)定：采用流池法，溶出介質(zhì)為pH 6.8緩沖液，泵速為8 mL/min，測(cè)定不同晶型原料的表觀溶解速率。

利用X-粉末衍射分析法和DSC法考察諾氟沙星原料晶型的一致性；粒度分布分析比較各企業(yè)原料的粒度分布差異；流池法測(cè)定不同晶型原料的溶解速率。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)

法定檢驗(yàn)結(jié)果顯示，雖然所有樣品均符合規(guī)定，但分析過(guò)程提示，有關(guān)物質(zhì)、溶出度、含量測(cè)定項(xiàng)目仍需進(jìn)一步完善。

3.1.1 有關(guān)物質(zhì)

檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，諾氟沙星制劑涉及6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，不同標(biāo)準(zhǔn)對(duì)雜質(zhì)的種類(lèi)和含量要求不同，過(guò)評(píng)企業(yè)的標(biāo)準(zhǔn)也不一致；未過(guò)評(píng)產(chǎn)品的雜質(zhì)總量偏高，其中“其他單雜”的含量可高達(dá)0.4%，其主要原因在于ChP2020標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)雜質(zhì)A進(jìn)行了規(guī)定，未對(duì)諸如雜質(zhì)B、雜質(zhì)E和雜質(zhì)K等特定雜質(zhì)分別進(jìn)行控制。此外，按照ChP2020方法進(jìn)行檢驗(yàn)，樣品主峰前的雜質(zhì)E和主峰不能分離，未能真實(shí)地反應(yīng)各特定雜質(zhì)的量。因而，將建立統(tǒng)一、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)挠嘘P(guān)物質(zhì)檢查方法，分析其雜質(zhì)譜、雜質(zhì)來(lái)源及影響因素，作為探索性研究的方向之一。

3.1.2 溶出度

288批諾氟沙星膠囊的溶出度檢驗(yàn)均符合規(guī)定，但溶出量差異較大，這與不同企業(yè)的處方投藥量和工藝相關(guān)。在法定溶出條件下，介質(zhì)區(qū)分效果較差，所有樣品在15 min內(nèi)均能溶出80%。諾氟沙星為難溶性藥物，由調(diào)研情況看，大部分制劑企業(yè)的原料來(lái)源于同一企業(yè)，輔料來(lái)源于不同企業(yè)。通過(guò)對(duì)調(diào)研回函的分析，認(rèn)為影響溶出度的主要因素為原料的晶型、粒度和制劑的水分。鑒于溶出度是影響體內(nèi)生物利用度的重要因素，探索研究中將對(duì)上述因素對(duì)溶出度的影響展開(kāi)研究。

3.2 探索性研究

3.2.1 有關(guān)物質(zhì)分析方法的優(yōu)化

優(yōu)化后的分析方法可以實(shí)現(xiàn)對(duì)所有諾氟沙星已知雜質(zhì)的有效分離（圖1）；按優(yōu)化方法對(duì)抽取的膠囊和片劑行檢測(cè)，各企業(yè)樣品可檢出7～19個(gè)雜質(zhì)，雜量總量分布于0.11%～0.39%，均值為0.23%，雜質(zhì)數(shù)目及含量均較優(yōu)化前方法提高（圖2）。

3.2.2 雜質(zhì)譜分析

通過(guò)分析諾氟沙星的合成路線[8-11]結(jié)合強(qiáng)制降解試驗(yàn)，對(duì)12種已知雜質(zhì)的來(lái)源進(jìn)行了歸屬。各雜質(zhì)結(jié)構(gòu)圖見(jiàn)表3。雜質(zhì)B和雜質(zhì)K為膠囊和片劑的共有雜質(zhì)。諾氟沙星主要有4個(gè)降解雜質(zhì)，雜質(zhì)B、雜質(zhì)D、雜質(zhì)G和雜質(zhì)2，其中雜質(zhì)B為主要降解雜質(zhì)，可由諾氟沙星經(jīng)多種途徑降解產(chǎn)生，說(shuō)明其既是在原料合成中需要控制的工藝/降解雜質(zhì)，也是制劑生產(chǎn)、儲(chǔ)存過(guò)程中需要控制的降解雜質(zhì)。雜質(zhì)K僅在原料合成過(guò)程中產(chǎn)生，也作為分析制劑中原料來(lái)源的特征性雜質(zhì)。

3.2.3 雜質(zhì)2檢測(cè)結(jié)果

對(duì)諾氟沙星膠囊和片劑中的雜質(zhì)2進(jìn)行測(cè)定[12]，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)圖3。膠囊企業(yè)J9、J13、J15和片劑企業(yè)P1產(chǎn)品中雜質(zhì)2控制得較好，均在15 ppm以內(nèi)。其他企業(yè)產(chǎn)品中的雜質(zhì)2均超出限度。其中膠囊企業(yè)J9和片劑企業(yè)P1為過(guò)評(píng)企業(yè)。雜質(zhì)2屬于芳香胺類(lèi)化合物，屬于潛在基因毒性雜質(zhì)，建議在諾氟沙星制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中增訂雜質(zhì)2檢查項(xiàng)，以進(jìn)一步保證臨床用藥的安全性。

3.2.4 溶出曲線及生物等效性結(jié)果

在4種溶出介質(zhì)中，水和pH6.8的緩沖液有一定的溶出區(qū)分能力，能將通過(guò)一致性評(píng)價(jià)的產(chǎn)品和未通過(guò)一致性評(píng)價(jià)的產(chǎn)品進(jìn)行區(qū)分。在pH6.8的溶出介質(zhì)中，4家過(guò)評(píng)企業(yè)（J9、J10和P1、P3）樣品的溶出曲線與參比制劑的溶出曲線相似；P2企業(yè)片劑雖未通過(guò)一致性評(píng)價(jià)，但在上述兩種介質(zhì)中溶出曲線均與參比制劑相似；其它未過(guò)評(píng)膠囊企業(yè)的產(chǎn)品，在上述兩種介質(zhì)中溶出曲線與參比制劑均不相似（圖4～5）。

采用Gastrol PlusTM軟件，將諾氟沙星片在不同溶出介質(zhì)的體外釋放曲線作為體內(nèi)釋放曲線，預(yù)測(cè)藥物體內(nèi)的PK情況[13]。結(jié)果顯示，以pH6.8溶出曲線作為體內(nèi)釋放曲線時(shí)，預(yù)測(cè)結(jié)果基本能與體內(nèi)PK實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)吻合，且釋放與吸收曲線與日本杏林片劑體內(nèi)數(shù)據(jù)建模得到的結(jié)果一致，故采用新建立的溶出度方法（溶出介質(zhì)為pH6.8）測(cè)定的溶出曲線進(jìn)行生物等效性擬合。

采用上述模擬軟件的群體模擬模型，以Cmax和AUC為指標(biāo)，模擬國(guó)產(chǎn)膠囊和片劑與參比制劑的等效性。模擬結(jié)果均值的90%置信區(qū)間如果在參比均值的80%～125%范圍內(nèi)時(shí)，即認(rèn)為二者生物等效。模擬結(jié)果表明，通過(guò)一致性評(píng)價(jià)的制劑，無(wú)論是片劑還是膠囊劑，都能夠與原研片劑生物等效；但未通過(guò)一致性評(píng)價(jià)的膠囊劑則與原研片劑生物不等效（圖6）。

3.2.5 水分及包材相關(guān)性結(jié)果

影響膠囊劑溶出的主要因素包括囊殼和內(nèi)容物兩部分，內(nèi)容物回填實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，內(nèi)容物在膠囊中結(jié)塊將導(dǎo)致其溶出度低。結(jié)塊的原因可能與諾氟沙星原料有較強(qiáng)的引濕性有關(guān)；按ChP2020附錄明膠空心膠囊項(xiàng)下的方法，通過(guò)干燥失重，測(cè)定膠囊殼中的水分，發(fā)現(xiàn)加速試驗(yàn)前后，僅樣品內(nèi)容物中的水分增加而空膠囊殼中的水分基本不變。說(shuō)明外界環(huán)境中的水分透過(guò)外部包材經(jīng)過(guò)囊殼進(jìn)入到膠囊劑內(nèi)容物內(nèi)部，導(dǎo)致了樣品水分的增加。

加速穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)顯示，在40℃、75%RH條件下加速放置1個(gè)月和3個(gè)月后，再次測(cè)定樣品的水分。諾氟沙星膠囊在較高溫度和濕度條件下水分升高，溶出度下降。

片劑中的水分含量在5%以下，均值低于膠囊，可能與其生產(chǎn)過(guò)程中需要控制水分有關(guān)。過(guò)評(píng)企業(yè)的膠囊和片劑中的水分均控制在6%以下，其溶出曲線與參比制劑相似，溶出度按新建立的溶出度方法測(cè)定平均溶出量在85.2%～94.9%之間；未過(guò)評(píng)膠囊企業(yè)部分產(chǎn)品的水分超過(guò)10%，相對(duì)應(yīng)的溶出曲線與參比制劑不相似，溶出度按新建立的溶出度方法測(cè)定結(jié)果在11.7%～75.2%之間，均低于擬定的80%這一限度值。采用PVC加套袋包裝形式的企業(yè)，膠囊和片劑的水分明顯低于未加套袋的產(chǎn)品。

3.2.6 原料晶型及粒度相關(guān)結(jié)果

文獻(xiàn)[14-15]報(bào)道諾氟沙星有A、B、C 3種常見(jiàn)晶型。C晶型為穩(wěn)定晶型，A晶型為亞穩(wěn)晶型，B晶型為不穩(wěn)定晶型。XRPD測(cè)定4家原料企業(yè)的產(chǎn)品，結(jié)果顯示：Y1產(chǎn)品基本為A晶型，Y2產(chǎn)品有A晶和C晶（圖7），Y3和Y4產(chǎn)品的晶型與C晶型較為一致。DSC分析顯示，Y1產(chǎn)品和Y2產(chǎn)品較為一致；Y3和Y4產(chǎn)品較為一致（圖8）。已過(guò)一致性評(píng)價(jià)企業(yè)（P3）提供的原料Y1產(chǎn)品的低共熔雜質(zhì)較小，純度較高。

不同企業(yè)原料的粒度分布范圍差別較大：Y1產(chǎn)品的d（0.9）范圍區(qū)間最大，為160～1637 μm（圖9a）；膠囊和片劑過(guò)評(píng)企業(yè)均控制原料粒度d（0.9）在360 μm以內(nèi)；P3提供的Y1原料藥粒徑呈現(xiàn)均勻的正態(tài)分布，而Y3原料粒徑分布不均勻，有雙峰顯現(xiàn)（圖9b）。

原料的表觀溶出速率曲線見(jiàn)圖10。結(jié)果顯示：A晶型原料在60 min內(nèi)的溶出較快且溶出曲線平滑、連貫，可能與該晶型具引濕性有關(guān)；C晶型原料的溶出曲線存在浸潤(rùn)、突釋的過(guò)程，可能與C晶型更穩(wěn)定不易吸濕有關(guān)。

4? ? 討論

4.1? ? 整體質(zhì)量評(píng)價(jià)

按照擬定的方法檢驗(yàn)，諾氟沙星片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)“一般”，質(zhì)量狀況“一般”；諾氟沙星膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)“一般”，質(zhì)量狀況“較差”，片劑質(zhì)量整體高于膠囊。

探索性研究顯示，通過(guò)一致性評(píng)價(jià)企業(yè)的片/膠囊的質(zhì)量整體優(yōu)于未過(guò)評(píng)企業(yè)的產(chǎn)品，未過(guò)評(píng)企業(yè)的樣品在溶出度、有關(guān)物質(zhì)等方面均與原研參比制劑不一致，可能存在臨床安全性和有效性風(fēng)險(xiǎn)。本次抽檢數(shù)量顯示，市售樣品仍以未過(guò)評(píng)樣品為主，建議片/膠囊生產(chǎn)企業(yè)盡快開(kāi)展仿制藥的評(píng)價(jià)工作，提高產(chǎn)品的質(zhì)量。

4.2 產(chǎn)品關(guān)鍵質(zhì)量屬性的控制

諾氟沙星作為BCS Ⅳ類(lèi)難溶性藥物，可通過(guò)選擇優(yōu)勢(shì)晶型或?qū)υ线M(jìn)行微粉化來(lái)提高藥物的溶解速率，從而提高口服固體制劑的溶出速率。文獻(xiàn)報(bào)道諾氟沙星有A、B、C 3種常見(jiàn)晶型，其中C晶型為穩(wěn)定晶型，A晶型為亞穩(wěn)晶型，B晶型為不穩(wěn)定晶型。目前國(guó)內(nèi)諾氟沙星的原料主要來(lái)源于四家原料生產(chǎn)企業(yè)，而本次抽檢涉及的六成以上制劑企業(yè)使用的原料來(lái)自于Y1，探索研究顯示該企業(yè)原料晶型主要為A晶型。由調(diào)研可知，過(guò)評(píng)企業(yè)的處方和工藝雖不同，但都采用諾氟沙星A晶型原料，并嚴(yán)格控制粒度d（0.9）小于360 μm，從而保證了過(guò)評(píng)產(chǎn)品與參比制劑具有相似的溶出曲線，提示原料的晶型是影響本品片/膠囊的溶出度關(guān)鍵質(zhì)量屬性。

諾氟沙星A晶型原料雖然是較理想的晶型，但該晶型具引濕性，在生產(chǎn)與貯存中易吸潮，進(jìn)而影響其溶出特性。因此在進(jìn)行仿制藥一致性評(píng)價(jià)工作時(shí)，還應(yīng)注重包裝材料對(duì)制劑在貯存、運(yùn)輸過(guò)程中水分的影響進(jìn)行考察?？蛇x擇使用雙鋁包裝或增加復(fù)合膜套袋等包裝方式避免水分增加導(dǎo)致產(chǎn)品的溶出下降。

4.3 現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有待提高

在本次國(guó)家藥品抽驗(yàn)工作中，發(fā)現(xiàn)諾氟沙星片/膠囊產(chǎn)品中存在遺傳毒性雜質(zhì)（雜質(zhì)2）。諾氟沙星對(duì)光不穩(wěn)定，雜質(zhì)2作為API的光降解產(chǎn)物，化學(xué)式中帶有警示結(jié)構(gòu)[16-17]，目前未見(jiàn)關(guān)于該雜質(zhì)的毒性試驗(yàn)數(shù)據(jù)報(bào)道?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)多將其作為未知雜質(zhì)計(jì)算，應(yīng)按照ICH M7的指導(dǎo)原則進(jìn)行有效控制。此外，還發(fā)現(xiàn)部分未過(guò)評(píng)企業(yè)的溶出度限度偏低、未控制固體制劑水分等潛在風(fēng)險(xiǎn)。建議在ChP2020標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上應(yīng)對(duì)諾氟沙星片/膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行修訂提高，包括：①建立片/膠囊有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法；②增訂LC-MS/MS的遺傳毒性雜質(zhì)2檢測(cè)方法，以毒理學(xué)關(guān)注閾值設(shè)置質(zhì)控限度；③將片/膠囊的溶出度介質(zhì)修訂為pH6.8磷酸鹽緩沖液，規(guī)定60 min溶出不低于80%；④增訂片/膠囊的水分。

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