基于多元統(tǒng)計方法的百合抗氧化譜效關(guān)系研究

羅毓，田清清，汪梅，鄧?yán)罴t，胡懿，林偉雄，張正，陳清怡

（廣東一方制藥有限公司/廣東省中藥配方顆粒企業(yè)重點(diǎn)實驗室，廣東 佛山 528244）

百合為百合科植物卷丹Lilium lancifoliumThunb.、百合Lilium browniiF. E. Brown var.viridulumBaker或細(xì)葉百合Lilium pumilumDC.的干燥肉質(zhì)鱗葉[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明百合具有抗炎、抗腫瘤、抗抑郁、抗氧化等作用[2-3]?？寡趸饔檬侨粘１＝〉挠行侄沃唬趸瘧?yīng)激與癌癥、心血管疾病等多種慢性疾病相關(guān)[4-5]。在病理條件或環(huán)境壓力下，需要從外部攝入一定量的外源抗氧劑[6-7]，但由于合成抗氧劑難以確定的毒性和致癌性等缺點(diǎn)，天然抗氧劑更受研究者們的青睞[8]。而百合除了藥用外，也是一種常用食材[9]，是一種天然的膳食抗氧化劑。

目前已有研究表明百合的總多酚和總多糖成分具有良好的抗氧化作用[10-12]，但中藥是一個多組分、多靶點(diǎn)共同起效的綜合體，僅僅是某一有效部位的活性難以全面評估和研究百合抗氧化的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。中藥譜效關(guān)系是將中藥指紋圖譜與藥效有機(jī)結(jié)合，通過一定化學(xué)計量學(xué)手段建立譜效關(guān)系數(shù)學(xué)模型，從而確定與藥效相關(guān)的化合物群，建立反應(yīng)中藥品質(zhì)的質(zhì)量評價方法[13]，能夠整體全面的反映藥材的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，控制藥材的質(zhì)量。因此，本研究通過建立百合HPLC指紋圖譜，測定百合的抗氧化能力，結(jié)合灰色關(guān)聯(lián)分析、Pearson 相關(guān)分析以及偏最小二乘回歸分析（PLSR）研究其指紋圖譜與抗氧化能力的譜效關(guān)系。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Arc 高效液相色譜儀（Empower 3 色譜工作站，美國Waters 公司）；KQ-500DE 型數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；ME204E 型電子天平、XP26 型電子天平（瑞士METTLER TOLEDO 公司）；111B 型二兩裝高速中藥粉碎機(jī)（浙江瑞安市永歷制藥機(jī)械有限公司）；MiliQ Direct 8 型超純水機(jī)（德國Merck有限公司）。

1.2 材料

王百合苷A（質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%，批號STC1510120）、王百合苷C（質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%，批號STC5635010），均購自上海詩丹德標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司；王百合苷B（質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%，批號18081001），購自成都普菲德生物技術(shù)有限公司。乙腈（色譜純）購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司，磷酸（色譜純）購自科密歐化學(xué)試劑有限公司?？偪寡趸芰υ噭┖校―PPH法、ABTS法）購自蘇州格銳思生物科技有限公司。

13 批百合藥材均為市售，產(chǎn)地湖南，批號見表1，經(jīng)廣東一方制藥有限公司孫冬梅主任中藥師鑒定為百合科植物卷丹Lilium lancifoliumThunb.、百合Lilium browniiF. E. Brown var.viridulumBaker或細(xì)葉百合Lilium pumilumDC.的干燥肉質(zhì)鱗葉。

表1 13批次百合樣品信息Table 1 Information of 13 batches of Lilii bulbus samples

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

ZORBAX Eclipse XDB-C18Column 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：乙腈（A）-0.1%磷酸水（B），梯度洗脫（0～30 min，10%～15% A；30～40 min，15%～20% A；40～55 min，20%～33% A；55～60 min，33%～50%A；60～70 min，50%A；70～71 min，50%～10% A），流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃，檢測波長305 nm。

2.2 樣品溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的配制 分別取王百合苷A、B、C對照品適量，精密稱定，加甲醇制成質(zhì)量濃度分別為0.031 7、0.075 3、0.035 3 mg/mL 的混合對照品溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取百合藥材粉末（過三號篩）1.0 g 精密稱定置錐形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲30 min，放至室溫，用50%甲醇補(bǔ)足損失質(zhì)量，搖勻。采用0.22 μm 微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 精密度試驗 取百合樣品（B1）適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，照“2.1”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，以4號峰（王百合A）為參照峰計算各共有峰的相對峰面積和相對保留時間，各共有峰相對峰面積的RSD值均小于5.0%，相對保留時間的RSD值均小于0.2%，表明儀器精密度良好。

2.3.2 重復(fù)性試驗 取百合樣品（B1）6份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，照“2.1”項下色譜條件測定，以4 號峰（王百合A）為參照峰計算各共有峰的相對峰面積和相對保留時間，各共有峰相對峰面積的RSD 值均小于5.0%，相對保留時間的RSD 值均小于0.2%，表明方法重復(fù)性良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗 取百合樣品（B1）適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，室溫下放置，在0、2、4、8、12、24 h 照“2.1”項下色譜條件分別進(jìn)樣，以4 號峰（王百合A）為參照峰計算各共有峰的相對峰面積和相對保留時間，各共有峰相對峰面積的RSD 值均小于4.8%，相對保留時間的RSD 值均小于0.3%，表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4 指紋圖譜的建立

2.4.1 共有峰的標(biāo)定 取13 批次百合，按“2.2.2”項下制備供試品溶液，取“2.2.1”項下制備的混合對照品溶液，所有樣品照“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣得各樣品色譜圖。將13批次百合測定數(shù)據(jù)導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（2012 年版）軟件，采用平均數(shù)法，設(shè)置時間寬度為0.10 min，生成百合指紋圖譜疊加圖，同時生成對照圖譜，結(jié)果見圖1和圖2。

圖1 混合對照品（A）及百合對照HPLC色譜圖（B）Figure 1 HPLC of hybrid reference substances（A）and common mode of Lilii bulbus（B）

圖2 13批百合樣品的HPLC指紋圖譜疊加圖Figure 2 HPLC fingerprint overlay of 13 batches of Lilii bulbus

指紋圖譜中，共標(biāo)定17 個共有峰，從峰1 到峰17 各單峰峰面積分別占總峰面積的0.77%、2.44%、5.02%、33.76%、1.08%、0.81%、2.31%、2.57%、1.11%、40.27%、0.66%、0.40%、1.60%、0.43%、0.36%、0.68%、0.48%。非共有峰峰面積總和占總峰面積5.25%。其中4 號峰分離度好，峰面積穩(wěn)定，響應(yīng)值高，故定為參照峰。通過與對照品比對，共指認(rèn)出2、4、10號峰3 個共有峰，分別為王百合苷C、王百合苷A 和王百合苷B。

2.4.2 相似度評價與共有峰差異分析 通過13批次百合指紋圖譜形成的共有模式為對照指紋圖譜，計算各批次之間的相似度，所有批次相似度均在0.990以上。同時計算相對保留時間和相對峰面積，各共有峰的相對保留時間RSD值均小于0.3%，相對峰面積RSD 值在9.92%～57.07%，表明同一產(chǎn)地不同批次百合所含主要成分的種類基本一致，質(zhì)量較為均一，但各批次主要成分含量存在一定差異。

2.5 體外抗氧化活性測定

2.5.1 陽性對照溶液的制備 精密稱取維生素C（Vc）31.00 mg 置于100 mL 容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為陽性對照母液。吸取不同體積母液，用水稀釋，制得濃度分別為0.006、0.012、0.021、0.052、0.103 mg/mL 的系列對照品溶液，用于DPPH 自由基清除率的測定；制得濃度分別為0.031、0.062、0.078、0.124、0.155 mg/mL 的系列對照品溶液，用于ABTS自由基清除率的測定。

2.5.2 供試品溶液的制備 按“2.2.2”項下制備供試品溶液，作為母液，吸取不同體積母液，用50%甲醇稀釋，制得質(zhì)量濃度（以生藥量計）分別為2.00、5.00、10.00、20.00 mg/mL 的系列樣品溶液，連同母液（40.00 mg/mL）用于DPPH 和ABTS 自由基清除率的測定。

2.5.3 自由基清除率的測定 依照DPPH和ABTS自由基清除能力試劑盒說明書，配制工作液，進(jìn)行反應(yīng)和測定。只加入樣品和無水乙醇為對照組，只加入無水乙醇和工作液為空白組，只加入樣品和工作液為測定組，充分振搖。DPPH 自由基避光反應(yīng)30 min，于517 nm 處測定吸光度（A）。ABTS 自由基避光靜置6 min，于734 nm處測定吸光度（A）。按下式計算自由基清除率。

自由基清除率=[1-（Ai-As）/A0]×100%

其中，Ai為測定組吸光度；As為對照組吸光度；A0為空白組吸光度。

使用SPSS20.0 統(tǒng)計軟件對13 批次百合測定值做非線性擬合，計算得到半數(shù)抑制濃度（IC50），擬合相關(guān)系數(shù)及IC50值見表2。由表2 可知，相關(guān)系數(shù)均大于0.990，擬合度均優(yōu)，說明擬合結(jié)果可信度較高。DPPH自由基的IC50值在11.873～21.311 mg/mL范圍內(nèi)波動，其RSD 值為17.08%，ABTS自由基的IC50值在7.723～9.447 mg/mL1范圍內(nèi)波動，其RSD 值為7.38%。百合在兩種自由基上的IC50值差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），對ABTS 自由基的IC50值更小，說明對其清除率更優(yōu)。

表2 13批次百合樣品抗氧化能力結(jié)果Table 2 Antioxidant results of 13 batches of Lilii bulbus

Vc對DPPH自由基的IC50值為0.020 mg/mL，對ABTS 自由基的IC50值為0.058 mg/mL，因此百合的抗氧化能力與之相比仍有一定差距，但結(jié)合部分相關(guān)研究[14-16]，中藥提取液對自由基的有效清除濃度（mg/mL）一般在一到數(shù)十范圍內(nèi)，故百合的抗氧化能力仍較優(yōu)，具有一定的研究意義。

2.6 百合指紋圖譜與抗氧化活性的灰色關(guān)聯(lián)分析

采用SPSSAU在線數(shù)據(jù)分析，選擇質(zhì)量濃度（以生藥量計）為20.00 mg/mL 的百合溶液對DPPH 自由基和ABTS 自由基的清除率，并將13 批次百合共有峰圖譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入SPSSAU。由于數(shù)據(jù)量綱不相同，為消除量綱導(dǎo)致的偏差，需對數(shù)據(jù)統(tǒng)一進(jìn)行無量綱處理，因此選擇均值化變換法對導(dǎo)入數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，將不同批次抗氧化活性（自由基清除率）的藥效指標(biāo)作為母序列，不同批次的共有峰面積作為子序列，軟件自動進(jìn)行處理并計算生成關(guān)聯(lián)度，結(jié)果見表3。通常情況下，關(guān)聯(lián)度值越大，表明該評價項與母序列的相關(guān)性越強(qiáng)[17]，從表中可以看出，標(biāo)定的所有共有峰與DPPH 自由基、ABTS 自由基的關(guān)聯(lián)度均大于0.5，說明所有峰均參與自由基清除反應(yīng)過程，產(chǎn)生正向或負(fù)向的作用，最終形成了百合對DPPH自由基、ABTS自由基清除率的結(jié)果。為了進(jìn)一步篩選出與清除率相關(guān)更強(qiáng)的共有峰，選擇關(guān)聯(lián)度大于0.8的峰并進(jìn)行排序，共篩選出10個峰，結(jié)果如下：對DPPH自由基而言，其關(guān)聯(lián)度大小依次為峰12＞峰14＞峰13＞峰10＞峰5＞峰4＞峰8＞峰9＞峰7＞峰3。對ABTS自由基而言，其關(guān)聯(lián)度大小依次為峰13＞峰12＞峰10＞峰9＞峰5＞峰14＞峰4＞峰3＞峰7＞峰8。從以上結(jié)果可初步認(rèn)定這些共有峰對DPPH自由基和ABTS自由基的清除率的影響能力基本一致，但由于灰色關(guān)聯(lián)分析無法確定這些峰對自由基清除率產(chǎn)生的是正相關(guān)還是負(fù)相關(guān)的影響，且不同分析手段與計算公式產(chǎn)生的結(jié)果可能有所差異，故仍需進(jìn)行其他相關(guān)性分析從而進(jìn)一步確定各共有峰與DPPH、ABTS自由基清除率的關(guān)系。

表3 自由基清除率與百合共有峰峰面積的灰色關(guān)聯(lián)度Table 3 Grey correlation degree between clearance of free radical and common peak area of Lilii bulbus

2.7 百合指紋圖譜與抗氧化活性的Pearson 相關(guān)性分析

采用SPSS20.0 統(tǒng)計軟件以Pearson 相關(guān)性分析評價百合指紋圖譜共有峰面積與抗氧化活性的相關(guān)性，抗氧化活性表征同樣選擇質(zhì)量濃度（以生藥量計）為20.00 mg/mL 的百合溶液對DPPH 自由基和ABTS自由基的清除率，結(jié)果見表4。表中數(shù)據(jù)顯示，與DPPH 自由基清除率相關(guān)的峰有8 個（P＜0.05），按照相關(guān)系數(shù)大小排序為：峰14＞峰12＞峰7＞峰16＞峰15＞峰8＞峰13＞峰1；與ABTS 自由基清除率相關(guān)的峰有7 個（P＜0.05），按照相關(guān)系數(shù)大小排序為：峰13＞峰15＞峰16＞峰7＞峰14＞峰5＞峰17。相關(guān)系數(shù)均為正值，說明這些共有峰均對百合抗氧化清除能力有提高作用。同樣，Pearson相關(guān)性結(jié)果表明了對DPPH 自由基和ABTS 自由基的清除率有顯著性影響的百合共有峰基本一致，且對比灰色關(guān)聯(lián)分析結(jié)果，篩選出影響程度較高的共有峰大部分一致，DPPH 自由基相關(guān)峰重合率為75%，ABTS 自由基相關(guān)峰重合率為71%。

表4 自由基清除率與百合共有峰峰面積的Pearson 相關(guān)性結(jié)果Table 4 Pearson correlation results between clearance of free radical and common peak area of Lilii bulbus

2.8 百合指紋圖譜與抗氧化活性的PLSR分析

以13批百合共有峰峰面積為自變量，質(zhì)量濃度（以生藥量計）為20.00 mg/mL 的百合溶液對DPPH自由基和ABTS 自由基的清除率為因變量，采用SIMCA 14.1 軟件進(jìn)行PLSR 分析，分別建立相關(guān)模型。DPPH 自由基清除率的擬合結(jié)果為：自變量的累計方差解釋率（R2xcum）為0.785，因變量的累計方差解釋率（R2ycum）為0.745，模型預(yù)測指數(shù)（Q2）為0.407。ABTS 自由基清除率的擬合結(jié)果為：自變量的累計方差解釋率（R2xcum）為0.743，因變量的累計方差解釋率（R2ycum）為0.562，模型預(yù)測指數(shù)（Q2）為0.393。一般認(rèn)為，R2和Q2超過0.5 表示模型擬合結(jié)果較好[18]，以上數(shù)據(jù)說明DPPH 自由基和ABTS 自由基清除率的模型和預(yù)測能力略差。計算百合抗氧化能力PLSR 模型變量投影重要性指標(biāo)（VIP），對于DPPH 自由基和ABTS 自由基的具體結(jié)果見圖3。在PLSR模型中，VIP體現(xiàn)變量對模型的整體貢獻(xiàn)水平，值越大則貢獻(xiàn)水平越大，當(dāng)VIP＞1 時，一般認(rèn)為該成分為重要影響指標(biāo)[19]。從圖3 中可以看出，對于DPPH 自由基，VIP 值大于1 的成分包括峰14、峰12、峰11、峰13、峰16；對于ABTS 自由基，VIP 值大于1 的成分包括峰13、峰15、峰16、峰7、峰14、峰17、峰5，通過這兩種自由基清除率篩選出的有效成分，有所差異，相同成分為峰13、峰14 和峰16；VIP值雖然可以衡量不同化學(xué)成分的重要程度，但無法反映成分與指標(biāo)間的促進(jìn)或抑制作用。因此進(jìn)一步計算不同成分的標(biāo)準(zhǔn)回歸系數(shù)，結(jié)果見圖4。通過VIP＞1 篩選出的共有峰，對于DPPH 或ABTS 自由基的清除作用均呈促進(jìn)關(guān)系，說明百合指紋圖譜共有峰中，大部分對自由基清除有正向作用。雖然模型擬合系數(shù)較差，但通過與灰色關(guān)聯(lián)分析和Pearson相關(guān)性分析結(jié)果比對，一致性較高。與灰色關(guān)聯(lián)分析比對：與DPPH 自由基清除率相關(guān)峰重合率為50%，分別為峰12、13、14，與ABTS自由基清除率相關(guān)峰重合率為71%，分別為峰5、7、13、14、15；與Pearson 相關(guān)性分析比對，與DPPH 自由基清除率相關(guān)峰重合率為83%，分別為峰12、13、14、15、16，與ABTS 自由基清除率相關(guān)峰重合率為100%，分別為峰5、7、13、14、15、16、17，說明PLSR 擬合結(jié)果的可信度仍比較高。

圖3 A.DPPH自由基清除活性的VIP值圖；B.ABTS自由基清除活性的VIP值圖Figure 3 A.The VIP values of DPPH radical scavenging activity；B.The VIP values of ABTS radical scavenging activity

2.9 與自由基反應(yīng)前后指紋圖譜變化情況

2.9.1 反應(yīng)前供試品溶液的制備取百合樣品B9，按“2.2.2”項下制備供試品溶液。

2.9.2 反應(yīng)后供試品溶液的制備 取“2.9.1”項下供試品溶液，照“2.5.3”項下分別進(jìn)行ABTS和DPPH自由基清除反應(yīng)。反應(yīng)后采用0.22 μm濾膜過濾，即得。

2.9.3 百合與自由基反應(yīng)前后圖譜測定 取上述反應(yīng)前后供試品溶液，照“2.1”項下色譜條件測定。為了進(jìn)一步直觀地對比百合各共有峰與其抗氧化作用的關(guān)系，測定了百合樣品B9的溶液在以質(zhì)量濃度（以生藥量計）為40.00 mg/mL 時分別與DPPH 和ABTS自由基反應(yīng)前后的圖譜。由圖5可知，百合與DPPH 自由基反應(yīng)后圖譜多個共有峰峰面積減小，部分共有峰完全消失；而與ABTS 自由基反應(yīng)后圖譜僅余峰3、4 和10，且這3 個共有峰峰面積明顯減小，說明百合起抗氧化作用是多個共有峰共同作用的結(jié)果。對比與DPPH 自由基反應(yīng)后和ABTS 自由基反應(yīng)后的圖譜，亦可知更多共有峰作用于ABTS自由基，使之被清除，這與ABTS 自由基的IC50值小于DPPH自由基的結(jié)果一致。

圖5 （A）百合樣品B9的指紋圖譜；（B）與DPPH自由基反應(yīng)后的指紋圖譜；（C）與ABTS反應(yīng)后的指紋圖譜Figure 5 （A）Fingerprint of B9 sample of Lilii bulbus；（B）Fingerprint after reaction with DPPH radical；（C）Fingerprint after reaction with ABTS radical

3 討論

自由基學(xué)的發(fā)展闡明了機(jī)體許多功能障礙和疾病與自由基相關(guān)，而抗氧劑能有效清除自由基從而達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的，且天然抗氧劑比合成抗氧劑具有更低的毒副作用[1]。百合作為極具代表性的藥食兩用的中藥材之一，已有許多關(guān)于百合酚酸類成分及百合多糖的抗氧化研究，但缺乏百合各組分抗氧化的作用和規(guī)律、明晰主要有效成分之間的協(xié)同或拮抗作用的相關(guān)研究。中藥譜效關(guān)系研究被認(rèn)為是能夠解決上述問題的重要手段，因此本研究建立百合指紋圖譜并測定體外抗氧化的主要指標(biāo)——DPPH 和ABTS 自由基清除率，通過多元分析方法將指紋圖譜與百合對DPPH 和ABTS 自由基的清除作用進(jìn)行關(guān)聯(lián)，探討其譜效關(guān)系。

本研究建立了13批百合藥材指紋圖譜，提取出17 個共有峰，對其中3 個共有峰進(jìn)行了指認(rèn)，17 個共有峰相似度均在0.990 以上，說明來源于同一產(chǎn)地的百合質(zhì)量較為穩(wěn)定。在建立指紋圖譜的試驗前期考察了不同提取溶劑（50%甲醇、80%甲醇、50%乙醇、80%乙醇）、提取方式（回流提取和超聲）和提取時間（15、30、60 min），優(yōu)選最佳提取工藝，即50%甲醇超聲提取30 min。

DPPH 自由基是一種人工合成的、穩(wěn)定的有機(jī)自由基，呈紫色，結(jié)構(gòu)中存在一個N 原子，其上有一孤對電子[14]，而ABTS 與過二硫酸鉀反應(yīng)后同樣會生成呈綠色的、帶一孤對電子的自由基[5]，當(dāng)孤對電子被配對，有顏色的自由基被還原后褪色，其褪色程度與所接受的電子數(shù)量呈定量關(guān)系，從而通過吸光度變化對抗氧化劑進(jìn)行定量[15]。采用DPPH 和ABTS 法考察百合的抗氧化活性，13 批次百合清除DPPH 自由基的IC50值在11.873～21.311 mg/mL 之間，RSD 為17.08%，清除ABTS 自由基的IC50值在7.723～9.447 mg/mL 之間，RSD 為7.38%，說明同一產(chǎn)地的抗氧化藥效較為均一。此外，百合對ABTS自由基的清除效果優(yōu)于對DPPH 自由基，這可能與自由基清除機(jī)制有關(guān)。自由基清除機(jī)制基本分為兩種[16]，一種是基于H 原子轉(zhuǎn)移，速度較慢，需要一定的時間才能達(dá)到反應(yīng)平衡；一種是基于電子轉(zhuǎn)移，反應(yīng)迅速。從反應(yīng)時間上看，ABTS 自由基更多通過電子轉(zhuǎn)移方式實現(xiàn)消除，而DPPH 自由基消除則更可能主要通過抗氧化劑轉(zhuǎn)移氫給自由基。此外，兩親的ABTS 自由基的苯并噻唑結(jié)構(gòu)與DPPH自由基的疏水的芳環(huán)結(jié)構(gòu)相比，更容易與多酚類物質(zhì)發(fā)生電子或氫轉(zhuǎn)移，從而對ABTS 自由基表現(xiàn)出更強(qiáng)的清除活性[17]。

為了保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，分別采用灰色關(guān)聯(lián)度、Pearson 相關(guān)性分析及PLSR 分析對測得的數(shù)據(jù)建立百合體外抗氧化活性的譜效關(guān)系。根據(jù)3種化學(xué)計量學(xué)方法的分析結(jié)果，篩選出相同色譜峰，得出主要影響百合清除DPPH 自由基的共有峰為峰12、13、14 和15；影響百合清除ABTS 自由基的共有峰為峰5、7、13 和14，這些色譜峰對DPPH 和ABTS自由基的清除均有促進(jìn)作用。百合指紋圖譜結(jié)果表明占總共有峰峰面積較大的主要成分為王百合苷A（峰4）和B（峰10），分別占總共有峰峰面積的35.5%和42.3%。這兩種成分結(jié)構(gòu)相似，均為苯丙素類化合物[24]，但結(jié)構(gòu)上都存在多個羥基，也可被歸類為酚酸類化合物，而酚酸類化合物通常也被認(rèn)為是較好的抗氧化劑[1]。有研究表明[24]王百合苷A 對DPPH 自由基的清除作用表現(xiàn)出與維生素E 相當(dāng)?shù)男Ч?。但在本研究中，雖然二者峰面積總和約占總共有峰峰面積近80%，研究結(jié)果證實其在抗氧化功效上并非為主效成分。推測可能原因為：單一化合物雖然有一定的抗氧化作用，但百合中成分復(fù)雜，各組分間存在一定的相互影響，從而導(dǎo)致表現(xiàn)出來的抗氧化效果與單一成分不一致。此外，百合譜效研究的結(jié)果表明，百合抗氧化作用與多個成分相關(guān)，這與文獻(xiàn)研究結(jié)果（百合含多種酚酸類成分如綠原酸、沒食子酸、咖啡酸等和多糖類化合物，這些成分也都具有較好的抗氧化作用）相一致[10-12]。

本研究初步揭示了影響百合抗氧化作用的主要成分，進(jìn)一步完善了百合抗氧化活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，為百合的質(zhì)量研究提供參考。同時發(fā)現(xiàn)了占總峰面積比重較大的王百合苷A、B并非為清除DPPH和ABTS 自由基的主效成分，可為篩選百合質(zhì)量標(biāo)志物提供參考。本研究存在一定的局限性，如指認(rèn)的化合物較少，不利于進(jìn)一步深入研究和探討；該方法的色譜條件下，難以兼顧百合酚酸類和多糖類成分達(dá)到更全面比較和篩選抗氧化的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的目標(biāo)，因此有待進(jìn)一步優(yōu)化。