基于UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS技術(shù)的烏鱉返春口服液化學(xué)成分分析

王允吉，潘文華，王海丹，王仲建，葉明燈，張引蘭*（. 南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬南京醫(yī)院/南京市第二醫(yī)院藥學(xué)部，南京 000；. 聯(lián)勤保障部隊第90醫(yī)院藥劑科，合肥 00；. 南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院江蘇省中醫(yī)院藥理實驗室，南京 009）

烏鱉返春口服液是根據(jù)中醫(yī)補腎健脾組方改良而成，主要是由制何首烏、川續(xù)斷、白術(shù)、鱉甲、茯苓、枸杞子以及黃狗腎7味藥材組成，30多年的臨床應(yīng)用證實其對卵巢功能早衰（premature ovarian failure，POF）患者具有很好的治療效果[1]，且藥效顯著優(yōu)于常規(guī)的激素補充療法[2-4]。目前，關(guān)于烏鱉返春口服液的研究大多集中于臨床前藥理和臨床藥效學(xué)觀察，有關(guān)烏鱉返春口服液化學(xué)成分的研究較少，雖有少數(shù)研究表明烏鱉顆粒中含有2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、川續(xù)斷皂苷Ⅵ兩個化學(xué)成分[5-6]，尚缺乏系統(tǒng)性研究，因此表征其全成分迫在眉睫。

Orbitrap高分辨質(zhì)譜技術(shù)利用其高通量、高靈敏度的特性，適用于非目標(biāo)化合物的大規(guī)模范圍篩選、識別、分析及鑒定，并廣泛應(yīng)用于中藥成分分析等領(lǐng)域[7]。本研究采用超高效液相色譜-四極桿-靜電場軌道阱質(zhì)譜（UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS）技術(shù)對烏鱉返春口服液的化學(xué)成分進行快速準(zhǔn)確識別和歸屬，提供全面的化學(xué)輪廓，以期為其質(zhì)量評價體系提升，藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和代謝特征闡釋、臨床合理應(yīng)用研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器

Thermo Ultimate 3000 XRS超高效液相系統(tǒng)、Q-Exactive四極桿-靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜儀、Xcalibur 3.1數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)、Heraeus Multifuge X1R冷凍離心機、脈沖式渦流混合器（Thermo公司），ACQUITY UPLC HSS T3柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm，Serial No.01653502816004）（Waters公司），AB135-S電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司），Milli-Q Direct超純水儀（默克Millipore公司）。

1.2 試藥

烏鱉返春口服液（規(guī)格：10 mL，批號：1905006，江蘇省中醫(yī)院制劑部），對照品甜菜堿（純度：99.29%，批號：MUST-19032105），茯苓酸（純度：98.31%，批號：MUST-18072910），白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ（純度：99.99%，批號：MUST-19030203），川續(xù)斷苷Ⅵ（純度：99.35%，批號：MUST-19042510），2，3，5，4-四羥基二苯乙烯葡萄糖苷（純度：99.44%，批號：MUST-19051603）（成都曼思特生物科技有限公司）；對照品L-脯氨酸（純度＞99%，批號：S30J6G1）、甘氨酸（純度＞99%，批號：SM0315GA14）（上海源葉生物科技有限公司）。甲醇、乙腈（色譜純，Merck公司），甲酸（優(yōu)級純，Sigma-Aldrich公司），超純水（由實驗室超純水儀Milli-Q Direct制備）。

2 方法

2.1 對照品溶液的制備

取甜菜堿、茯苓酸、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、川續(xù)斷苷Ⅵ、2，3，5，4-四羥基二苯乙烯葡萄糖苷、L-脯氨酸、甘氨酸對照品，精密稱取約1 mg，置于1 mL的量瓶中，分別用水（2，3，5，4-四羥基二苯乙烯葡萄糖苷、L-脯氨酸、甘氨酸）和50%甲醇-水（甜菜堿、茯苓酸、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、川續(xù)斷苷Ⅵ）溶解并稀釋至刻度，搖勻，得到質(zhì)量濃度為1.00 g·L－1的儲備液。分別取上述對照品各100 μL，加入200 μL 50%甲醇-水，于2～8℃冰箱保存待用。

2.2 供試品溶液的制備

吸取烏鱉返春口服液約300 μL，加入乙醇700 μL沉淀后以3000 r·min－1渦旋樣品3 min，放置于2～8℃冰箱24 h，24 h后取出樣品于4℃條件下以12 000 r·min－1離心10 min，取上清液并用0.22 μm有機相微孔濾膜過濾，即得。

2.3 液相色譜與質(zhì)譜條件

2.3.1 色譜條件 色譜柱ACQUITY UPLC HSS T3柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；正、負(fù)離子全掃描模式下流動相為0.1%甲酸-水溶液（A）和乙腈（B），梯度洗脫（0～0.5 min，2.0%B；0.5～4.0 min，2.0%～15%B；4.0～15.0 min，15%～25%B；15.0～19.0 min，25%～34%B；19.0～25.0 min，34%～80%B；25.0～28.0 min，80%～98%B；28.0～30.0 min，98%B；30.0～30.5 min，98.0%～2.0%B；30.5～34.5 min，2.0%B），流速為0.3 mL·min－1，柱溫為35℃，進樣量為4 μL，樣品盤溫度為8℃。

2.3.2 質(zhì)譜條件 數(shù)據(jù)處理工作站為Xcalibur 3.1，采用離子源為HESI源，掃描模式為正負(fù)離子Full MS/dd-MS2掃描，F(xiàn)ull MS分辨率70 000 FWHM，dd-MS2分辨率17 500 FWHM，掃描范圍m/z70～1000 Da，MS/MS 模式，噴霧電壓為3000 V，離子傳輸管溫度350℃，鞘氣和輔助氣均為氮氣，鞘氣流量為35 arb，輔助氣流量為15 arb，自動增益控制（AGC）目標(biāo)為3×106個離子，最大離子注入時間（IT）為100 ms，碰撞能為25、35和45 eV。

2.4 數(shù)據(jù)處理

通過查閱SciFinder、ChemSpider、HMDB數(shù)據(jù)庫中涉及烏鱉返春口服液組方中單味藥材中化學(xué)成分的質(zhì)譜信息，建立化學(xué)成分信息庫，根據(jù)烏鱉返春口服液的高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)提供的準(zhǔn)分子離子信息，推測一級質(zhì)譜的精確相對分子量，選擇誤差（δ）在±10 ppm（1 ppm＝1×10－6）以內(nèi)的化合物，運用Xcalibur 3.1軟件擬合計算相應(yīng)的分子式，初步對各化學(xué)成分進行推測，再結(jié)合對照品、相關(guān)文獻對色譜峰進行指認(rèn)和歸屬。

3 結(jié)果

3.1 色譜峰鑒定

采用UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS正、負(fù)離子模式分析烏鱉返春口服液乙醇沉淀后的（＋）HESIMS、（－）HESI-MS的質(zhì)譜總離子流圖（TIC），如圖1所示，將檢測得到離子流峰的保留時間和質(zhì)譜數(shù)據(jù)信息，按照“2.4”項下的數(shù)據(jù)處理方法，最終在烏鱉返春口服液中鑒定出131個化合物[8-23]，其中三萜類化合物19個、亞精胺類化合物18個，萜類化合物17個，酚酸類化合物17個，蒽醌類化合物17個，氨基酸類化合物11個，二苯乙烯類化合物10個，黃酮類化合物5個、脂肪酸類化合物5個，有機酸類化合物5個，生物堿類2個，木脂素類2個，苯丙素類1個，其他類化合物2個。各化學(xué)成分的保留時間、準(zhǔn)分子離子峰質(zhì)荷比的理論值和測量值、碎片離子等數(shù)據(jù)結(jié)果，如表1所示。

圖1 烏鱉返春口服液UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS總離子流圖Fig 1 Total ion chromatogram of Wubie Fanchun oral liquid under positive ion and negative ion modes by UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS

表1 正、負(fù)離子模式下的烏鱉返春口服液中化學(xué)成分鑒定及歸屬Tab 1 Identified chemical constituents of Wubie Fanchun oral liquid by UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS

續(xù)表1

3.2 烏鱉返春口服液中各類化合物成分的分析鑒定

3.2.1 三萜類化合物的結(jié)構(gòu)解析 烏鱉返春口服液中共鑒定出三萜類成分19種，三萜類化合物主要來源于本方中的續(xù)斷、茯苓。續(xù)斷中三萜類化合物屬于五環(huán)三萜類，而茯苓中三萜類化合物屬于四環(huán)三萜類，包括川續(xù)斷皂苷V、川續(xù)斷皂苷Ⅵ、去氫川續(xù)斷皂苷Ⅵ、灰氈毛忍冬次苷A、茯苓酸、氫化茯苓酸、去氫茯苓酸等。以化合物95、130為例闡述三萜類化合物裂解規(guī)律?；衔?5保留時間21.49 min，在負(fù)離子模式下準(zhǔn)分子離子峰為m/z927.4861[M-H]－，同時可觀察到二級碎片離子為丟失葡萄糖和鼠李糖后的特征碎片離子m/z603.3858[M-H-2C6H10O5]－，與對照品比對，保留時間、特征碎片均一致，可確定該化合物為川續(xù)斷皂苷Ⅵ，其二級質(zhì)譜及裂解規(guī)律見圖2。化合物130保留時間28.86 min，在負(fù)離子模式下準(zhǔn)分子離子峰為m/z527.3687[MH]－，同時可觀察到主要的碎片離子分別為m/z465.3346[M-H-H2O-CO2]－、m/z405.2705[M-HH2O-CO2-CH3COOH]－，根據(jù)負(fù)離子模式下的精確分子質(zhì)量及特征碎片的質(zhì)量，結(jié)合文獻[26-28]和數(shù)據(jù)庫，并進一步與對照品比對，保留時間均一致，可確定該化合物為茯苓酸。

圖2 川續(xù)斷皂苷Ⅵ可能的裂解途徑Fig 2 Proposed fragmentation pathways of asperosaponin Ⅵ

3.2.2 亞精胺類化合物的結(jié)構(gòu)解析 烏鱉返春口服液中共鑒定出亞精胺類成分18種，亞精胺類化合物是本方中枸杞的代表性成分，包括苦可胺B、葡萄糖-苦可胺B、二葡萄糖-苦可胺、lycibarbarspermidine F、glucosyl-lycibarbarspermidine F、lycibarbarspermidine M、N1，N10-雙（二氫咖啡酰）亞精胺等。以化合物44為例闡述亞精胺類化合物裂解規(guī)律。

化合物44保留時間為6.70 min，在正離子模式下準(zhǔn)分子離子峰為m/z474.2567[M＋H]＋，同時可觀察到主要的碎片離子分別為m/z310.2112[M＋H-C9H8O3]＋、m/z293.1840[M＋H-C9H8O3-NH3]＋、m/z222.1111[M＋H-C9H8O3-NH3-C4H9N]＋、m/z165.0536[M＋H-C16H27N3O3]＋、m/z123.0434[M＋H-C9H8O3-NH3-C4H9N-C7H8O2]＋、m/z100.0755[M＋H-C9H8O3-NH3-C4H9N-C5H9NO]＋和m/z72.0810[M＋H-C9H8O3-NH3-C12H15NO3]＋，根據(jù)正離子模式下的精確分子質(zhì)量及特征碎片的質(zhì)量，結(jié)合文獻[23-25]和數(shù)據(jù)庫，可推測為N1，N10-雙（二氫咖啡酰）亞精胺，其二級質(zhì)譜及裂解規(guī)律見圖3。

圖3 N1，N10-雙（二氫咖啡酰）亞精胺可能的裂解途徑Fig 3 Proposed fragmentation pathways of N1，N10-bis-dihydrocaffeoyl-spermidine

3.2.3 萜類化合物的結(jié)構(gòu)解析 烏鱉返春口服液中共鑒定出萜類成分17種，萜類化合物包括環(huán)烯醚萜類、倍半萜類化合物，其中本方川續(xù)斷中的獐芽菜苷、馬錢苷酸及其異構(gòu)體、林生續(xù)斷苷Ⅰ、茶茱萸苷等為環(huán)烯醚萜類化合物，本方白術(shù)中的白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、蒼術(shù)酮等為倍半萜類化合物。以化合物30、115為例闡述萜類化合物裂解規(guī)律。

化合物30保留時間為5.74 min，在負(fù)離子模式下準(zhǔn)分子離子峰為m/z375.1268[M-H]－，可觀察到主要的碎片離子分別為m/z332.8820[M-HCO2]－、m/z213.0747[M-H-C6H12O5]－、m/z169.0850[M-H-CO2-C6H10O5]－、m/z151.0742[M-HCO2-C6H12O6]－、m/z119.0327[M-H-CO2-C6H12O6-2O]－、m/z113.0223[M-H-CO2-C6H12O6-C2H4O]－，根據(jù)負(fù)離子模式下的精確分子質(zhì)量及特征碎片的質(zhì)量，結(jié)合文獻信息[19-20]，推測其為馬錢苷酸。化合物115保留時間為24.35 min，在正離子模式下準(zhǔn)分子離子峰為m/z249.1466[M＋H]＋，可觀察到主要的碎片離子分別為m/z231.1362[M＋H-H2O]＋、m/z203.1420[M＋H-H2O-CO]＋、m/z189.0898[M＋H-H2O-C3H6]＋、m/z163.0743[M＋H-H2O-C5H8]＋、m/z175.0749[M＋H-H2O-C3H6-CH2]＋、m/z119.0852[M＋H-H2O-C5H8-CO2]＋、m/z105.0696[M＋H-H2O-C5H8-CO2-CH2]＋、m/z93.0697[M＋H-H2O-C5H8-CO2-C2H2]＋，根據(jù)正離子模式下的精確分子質(zhì)量及特征碎片的質(zhì)量，結(jié)合文獻[23-25]和數(shù)據(jù)庫，并進一步與對照品比對，保留時間、特征碎片均一致，可確定該化合物為白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ，其二級質(zhì)譜及裂解規(guī)律見圖4。

圖4 白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ可能的裂解途徑Fig 4 Proposed fragmentation pathways of atractylenolide Ⅲ

3.2.4 酚酸類化合物的結(jié)構(gòu)解析 烏鱉返春口服液中共鑒定出酚酸類成分17種，主要包括沒食子酸、焦棓酸、綠原酸、隱綠原酸、奎寧酸、咖啡酸等，質(zhì)譜裂解規(guī)律較為簡單，先是各種取代基的裂解，進而H2O，COOH，CO2等中性分子丟失，一般在負(fù)離子模式下存在較高的響應(yīng)，以化合物18、38為例闡述酚酸類化合物裂解規(guī)律。

化合物18保留時間3.05 min，在負(fù)離子模式下的準(zhǔn)分子離子峰m/z169.0119[M-H]－，同時可觀察到主要的碎片離子分別為m/z125.0222[M-H-CO2]－、m/z97.0274[M-H-CO2-CO]－、m/z107.0118[M-HCO2-H2O]－、m/z69.0326[M-H-CO2-2CO]－，根據(jù)負(fù)離子模式下的精確分子質(zhì)量及特征碎片的質(zhì)量，結(jié)合相關(guān)文獻報道[10-11]，故推測化合物18為沒食子酸?；衔?8保留時間6.31 min，在負(fù)離子模式下的準(zhǔn)分子離子峰m/z353.0874[M-H]－，同時可觀察到主要的碎片離子分別為m/z191.0539[M-H-C9H6O3]－、m/z179.0327[M-H-C7H10O5]－、m/z173.0434[M-HC9H6O3-H2O]－、m/z135.0430[M-H-C7H10O5-H2O]－、m/z161.0225[M-H-C7H10O5-CO2]－，根據(jù)負(fù)離子模式下的精確分子質(zhì)量及特征碎片的質(zhì)量，結(jié)合文獻[19，21]和數(shù)據(jù)庫比對，推測其為綠原酸，其二級質(zhì)譜及裂解規(guī)律見圖5。

圖5 綠原酸可能的裂解途徑Fig 5 Proposed fragmentation pathways of chlorogenic acid

3.2.5 蒽醌類化合物的結(jié)構(gòu)解析 蒽醌類為蓼科植物的代表性成分，本方中何首烏含有多種蒽醌苷元及其苷類，共鑒定出蒽醌類成分17種，主要包括大黃酸、大黃酚、大黃素、大黃素甲醚、大黃酸甲醚、羥基大黃素等。以化合物108、120為例闡述蒽醌類化合物裂解規(guī)律。

化合物108保留時間為23.42 min，在負(fù)離子模式下準(zhǔn)分子離子峰為m/z283.0220 [M-H]－，同時可觀察到主要的碎片離子分別為m/z239.0329[M-HCO2]－、m/z211.0383[M-H-CO2-CO]－、m/z184.0507[M-H-CO2-2CO]－，根據(jù)負(fù)離子模式下的精確分子質(zhì)量及特征碎片的質(zhì)量，結(jié)合相關(guān)文獻[10-12]，推測其為大黃酸。化合物120保留時間為25.17 min，在負(fù)離子模式下其準(zhǔn)分子離子峰為m/z269.0433[MH]－，同時可觀察到主要的碎片離子分別為m/z241.0483[M-H-CO]－、m/z225.0534[M-H-CO2]－、m/z210.0296[M-H-CO2-CH3]－、m/z197.0583[M-H-CO2-CO]－碎片離子、m/z181.0633[M-H-CO2-CH3-CO]－，根據(jù)負(fù)離子模式下的精確分子質(zhì)量及特征碎片的質(zhì)量，結(jié)合文獻[10-12]對比，推測其為大黃素，其二級質(zhì)譜及裂解規(guī)律見圖6。

圖6 大黃素可能的裂解途徑Fig 6 Proposed fragmentation pathways of emodin

3.2.6 二苯乙烯類化合物的結(jié)構(gòu)解析 烏鱉返春口服液中共鑒定出二苯乙烯類成分10種，二苯乙烯類化合物是本方中何首烏的代表性成分，包括2，3，5，4-四羥基二苯乙烯葡萄糖苷、2，3，5，4-四羥基二苯乙烯-O-沒食子酰基-葡萄糖苷、2，3，5，4-四羥基二苯乙烯-2-O-乙?；?葡萄糖苷、白藜蘆醇、氧化白藜蘆醇等。以化合物60、65為例闡述二苯乙烯類化合物裂解規(guī)律。

化合物60保留時間為9.93 min，在負(fù)離子模式準(zhǔn)分子離子峰為m/z227.0691[M-H]－，同時可觀察到主要的碎片離子分別為m/z185.0585[M-HC2H2O]－、m/z143.0480[M-H-2C2H2O]－，根據(jù)負(fù)離子模式下的精確分子質(zhì)量及特征碎片的質(zhì)量，結(jié)合相關(guān)文獻[10-12]，推測其為白藜蘆醇?；衔?5保留時間為10.43 min，在負(fù)離子模式準(zhǔn)分子離子峰為m/z405.1163[M-H]－，其脫去葡萄糖后得到特征性碎片離子m/z243.0642[M-H-C6H12O6]－，根據(jù)負(fù)離子模式下的精確分子質(zhì)量及特征碎片的質(zhì)量，結(jié)合相關(guān)文獻[10-12]，并進一步與對照品比對，保留時間、特征碎片均一致，可確定該化合物為2，3，5，4-四羥基二苯乙烯葡萄糖苷，其二級質(zhì)譜及裂解規(guī)律見圖7。

圖7 2，3，5，4-四羥基二苯乙烯葡萄糖苷可能的裂解途徑Fig 7 Proposed fragmentation pathways of 2，3，5，4-tetrahydroxystilbene glucoside

3.2.7 氨基酸類化合物的結(jié)構(gòu)解析 烏鱉返春口服液中共鑒定出氨基酸類成分11種，主要包括精氨酸、纈氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等，氨基酸類化合物含有氨基和羧基官能團，易發(fā)生α-裂解失去氨基或羧基基團?，F(xiàn)以化合物2為例闡述氨基酸類化合物裂解規(guī)律。

化合物2保留時間0.89 min，推測該化合物極性較大，在正離子模式下準(zhǔn)分子離子峰為m/z175.1178[M＋H]＋，可觀察到主要的碎片離子分別為m/z130.0967 [M＋H-COOH]＋、m/z158.0915 [M＋H-OH]＋、m/z116.0701[M＋H-OH-CH7N3＋H2O]＋、m/z112.0865[M＋H-COOH-NH5]＋、m/z70.0654[M＋H-COOH-CH7N3]＋、m/z60.0561 [M＋H-COOH-C4H9N]＋，根據(jù)正離子模式下的精確分子質(zhì)量及特征碎片的質(zhì)量，結(jié)合文獻[7]和數(shù)據(jù)庫，推測其為精氨酸，其二級質(zhì)譜及裂解規(guī)律見圖8。

圖8 精氨酸可能的裂解途徑Fig 8 Proposed fragmentation pathways of argnine

4 討論

根據(jù)對照品對比、裂解規(guī)律總結(jié)，本研究采用LC-MS技術(shù)共鑒定出131個化學(xué)成分，包括三萜類、亞精胺類、萜類、酚酸類、蒽醌類、氨基酸類、二苯乙烯類、黃酮類、脂肪酸類、有機酸類、生物堿類、木脂素類，苯丙素類等。結(jié)合烏鱉返春口服液的藥效基礎(chǔ)，選擇可測的標(biāo)識性成分作為質(zhì)量控制標(biāo)志物（Q-marker），提高制劑質(zhì)量一致性、可控性和溯源性，對質(zhì)量控制有重要意義，而篩選能改善POF作用的藥效成分尤為重要。川續(xù)斷中三萜類化合物川續(xù)斷皂苷Ⅵ可促進大鼠體外骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞增殖和分化，具有促進骨形成的作用，可改善POF患者卵巢分泌的雌激素減少造成的骨質(zhì)疏松癥狀[29]。白術(shù)中萜類成分白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ可通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝改善黃體功能，促進FOGCs雌孕激素分泌相關(guān)的主要信號通路即膽固醇代謝通路和卵巢類固醇激素生成通路，對動物先兆流產(chǎn)起到預(yù)防和治療的效果[30]。枸杞中亞精胺類化學(xué)成分能通過與多種生殖激素建立復(fù)雜的反饋聯(lián)系，進而參與調(diào)控動物繁殖，在維持卵巢類固醇激素水平和生成過程中具有重要作用[31]。何首烏中二苯乙烯苷類化學(xué)成分，能明顯改善大鼠因絕經(jīng)導(dǎo)致的體重增加與子宮萎縮[32]，抑制去卵巢大鼠衰老骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨、成脂分化，能改善去卵巢腎虛大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖能力[33-34]，二苯乙烯苷類化合物白藜蘆醇可通過抑制卵巢氧化應(yīng)激和激活PI3K/Akt/mTOR信號通路來改善POF模型大鼠卵巢功能[35-36]。何首烏和枸杞中黃酮類化合物槲皮素可通過上調(diào)POF模型大鼠卵巢組織中谷胱甘肽的表達，下調(diào)caspase-3、核因子κB及丙二醛的表達以及調(diào)節(jié)PI3K/Akt 信號通路抑制卵巢氧化應(yīng)激，促進卵巢自噬，調(diào)節(jié)性激素水平，增加卵巢組織中各級生長卵泡數(shù)目，來改善卵巢功能[37-38]。上述與藥效相關(guān)的Q-marker可確定為續(xù)斷皂苷類、白術(shù)內(nèi)酯類、亞精胺類、二苯乙烯苷類、槲皮素等，此類化合物的藥理作用與烏鱉返春口服液的恢復(fù)卵巢功能，改善圍絕經(jīng)期臨床癥狀，延緩衰老，治療早發(fā)性卵巢功能不全的功效一致，可能是烏鱉返春口服液主要的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。

本研究利用UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS技術(shù)具有高靈敏度、高質(zhì)量精度、高分辨率等特點，結(jié)合現(xiàn)有烏鱉返春口服液中單味藥材已報道的成分，建立了一種快速分析鑒定烏鱉返春口服液中化學(xué)成分的方法，為其質(zhì)量控制和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究提供了參考。此外，本研究仍有不足之處，由于樣品前處理方式以及LC-MS檢測方式的特殊性未能全面分析，鱉甲、黃狗腎中只檢測出氨基酸、核苷類化合物，表明烏鱉返春口服液中尚有未知成分如多糖、多肽類化合物需要進行系統(tǒng)的化學(xué)分離、鑒定。