基于灰色關(guān)聯(lián)度法的藥用螞蟻品質(zhì)探析

朱瑩瑩，郭巧生*，趙開軍，于尚平

1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 中藥材研究所，江蘇 南京 210018；

2.南京中山制藥有限公司，江蘇 南京 210046

螞蟻是蟻科（Formicidae）昆蟲的總稱，是陸地上分布最廣泛、種類和數(shù)量最多的社會性昆蟲，除了南北極和高山雪線以上的地區(qū)均有分布[1]。螞蟻不僅具有經(jīng)濟(jì)價值和生態(tài)意義，部分品種的螞蟻還具有重要的食藥用功能。我國已有2000 多年的螞蟻藥用歷史，且藥用習(xí)慣表現(xiàn)出典型的地域差異。漢代民間治療筋骨軟弱的“金剛丸”即為螞蟻粉蜜制而成的藥丸。明代李時珍[2]在《本草綱目》中詳細(xì)記載了螞蟻的習(xí)性、毒性和食療作用。清代趙學(xué)敏[3]的《本草綱目拾遺》中記載山螞蟻窠可治“久不收口之爛瘡、刀傷出血、禿瘡”等，山螞蟻可“合壯藥”，即認(rèn)為螞蟻屬于補(bǔ)益類藥材。螞蟻味咸、酸，性平，一般認(rèn)為歸肝、腎經(jīng)，具有扶正固本、補(bǔ)腎壯陽、祛瘀通絡(luò)、解毒消腫之功效，用于腎虛陽痿、風(fēng)濕痹癥、疔毒腫痛、慢性肝炎及某些癌癥的輔助治療。據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前我國已經(jīng)有13 個?。ㄗ灾螀^(qū)）頒布了螞蟻藥材相關(guān)的地方標(biāo)準(zhǔn)，其中收載的藥用螞蟻品種絕大部分是雙齒多刺蟻Polyrhachis divesSmith（過去一直被稱為擬黑多刺蟻或鼎突多刺蟻P.vicinaRoger。1991 年，王常祿等[4]研究證實(shí)兩者乃是同物異名，并獲得國際蟻學(xué)界認(rèn)可。根據(jù)定名先后規(guī)則，本研究沿用“雙齒多刺蟻P.divesSmith”這一中文名與拉丁名），藥材商品名通常稱為黑螞蟻。前期市場調(diào)查發(fā)現(xiàn)，葉形多刺蟻P.lamellidensSmith也被作為黑螞蟻藥材基原之一，其在我國貴州等地區(qū)具有非常廣泛的藥用。2 種藥用螞蟻均屬于多刺蟻屬（Polyrhachis），外觀形態(tài)特征極為相似，藥用及保健范圍也類似，因此都被作為黑螞蟻藥材，并不加以區(qū)分。

灰色關(guān)聯(lián)度分析（GRA）是灰色理論的基本內(nèi)容，是一種針對模糊系統(tǒng)研究的有效手段?；谥兴幊煞峙c中藥質(zhì)量是一種灰色關(guān)系的認(rèn)識，運(yùn)用GRA 評價中藥質(zhì)量具有一定理論基礎(chǔ)[5]。目前GRA已經(jīng)在許多動物類藥材質(zhì)量評價中得到應(yīng)用，如蜈蚣[6]、地龍[7]等。本研究以2 種基原、12 個不同產(chǎn)地的藥用螞蟻為研究對象，以藥用螞蟻中5 類主要藥效成分的含量為指標(biāo)，建立GRA 模型，以期為不同基原與產(chǎn)地的螞蟻藥材資源開發(fā)與利用提供參考。

1 材料

1.1 試藥

12 批藥用螞蟻樣品信息見表1，其種屬均由廣西師范大學(xué)陳志林教授鑒定，分別為雙齒多刺蟻Polyrhachis divesSmith 和葉形多刺蟻P.lamellidensSmith。

表1 藥用螞蟻藥材樣品來源信息

鹽酸（分析純，批號：160725196H，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；硝酸銀（分析純，批號：20121101，科亞精細(xì)化工有限公司）；錳（Mn，1000 mg·L–1，批號：GSB 04-1736-2004）、鐵（Fe，1000 mg·L–1，批號：GSB 04-1726-2004）、銅（Cu，1000 mg·L–1，批號：GSB 04-1725-2004）、鋅（Zn，1000 mg·L–1，批號：GSB 04-1761-2004）均購自國家有色金屬及電子材料分析測試中心；硝酸（分析純，批號：20180718，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司）；濃硫酸（分析純，批號：210419047J，南京化學(xué)試劑股份有限公司）；無水乙醇（分析純，批號：20210427）、氫氧化鈉（分析純，批號：20210406）、硼酸（分析純，批號：20210322）均購于廣東光華科技股份有限公司；對照品甲酸（色譜純，批號：F809712）、甲酸乙酯（分析純，批號：E809008）均購于上海麥克林生化科技有限公司；水為超純水。

1.2 儀器

M82 型中藥磨粉機(jī)（山東九陽股份有限公司）；BMS-120.4 型萬分之一電子天平（上海卓精電子科技有限公司）；MFLC 16/12 B 型馬弗爐（天津市泰斯特儀器有限公司）；Milli-Q 型超純水系統(tǒng)（美國Millipore 公司）；iCAP Qc 型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀、Trace GC Ultra 型氣相色譜儀（美國Thermo Fisher 公司）；ETHOS UP 型微波消解儀（意大利Milestone 公司）；KT8400 型凱氏定氮儀、DT220 型消化爐（丹麥福斯公司）；L-8900 型氨基酸分析儀（日本Hitachi公司）。

2 方法

2.1 雜質(zhì)、水分和灰分測定

參照《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）2020年版（四部）通用技術(shù)要求[8]測定。

雜質(zhì)測定：按照通則2301 雜質(zhì)檢查法。取供試品約25 g，用肉眼或借助放大鏡觀察，將樣品中的泥沙、碎石、植物枯葉及種子等雜質(zhì)揀出，同時注意除去供試品中混入的其他昆蟲。將雜質(zhì)稱定質(zhì)量，計(jì)算其含量。

水分測定：按照通則0832 第三法測定水分含量。取供試品粉末1 g，置于已在供試品同樣條件下干燥并稱定質(zhì)量的稱量瓶中，精密稱定，打開瓶蓋，放入真空干燥箱中，抽氣減壓至2.67 kPa（≈20 mmHg）以下，并持續(xù)抽氣30 min，室溫放置24 h 后打開活塞，待內(nèi)外壓一致，關(guān)閉活塞，打開干燥器，蓋上瓶蓋，取出稱量瓶迅速精密稱定質(zhì)量，計(jì)算供試品中的含水量。

總灰分及酸不溶性灰分測定：按照通則2302 測定總灰分、酸不溶性灰分含量。取供試品粉末2 g，置熾灼至恒重的坩堝中，稱定質(zhì)量（精確至0.01 g），緩緩熾熱，注意避免燃燒，至完全炭化后，逐漸升高溫度至550 ℃，使完全灰化并至恒重。根據(jù)供試品殘?jiān)|(zhì)量，計(jì)算其總灰分的含量。取所得的灰分，在坩堝中小心加入稀鹽酸約10 mL，用表面皿覆蓋坩堝，置水浴上加熱10 min，表面皿用5 mL 熱水沖洗，洗液并入坩堝中，用無灰濾紙濾過，坩堝內(nèi)的殘?jiān)盟从跒V紙上，并洗滌至洗液不顯氯化物為止。濾渣連同濾紙移置同一坩堝中，干燥，熾灼直至恒重。根據(jù)供試品殘?jiān)|(zhì)量，計(jì)算其酸不溶性灰分的含量。

2.2 4種主要微量元素測定

參照《中國藥典》2020 年版（四部）通則2321項(xiàng)下微波消解電感耦合等離子體-質(zhì)譜法（ICP-MS）測定藥用螞蟻樣品中Mn、Fe、Cu、Zn 元素含量[8]。用質(zhì)量濃度均為1000 mg·L–1的Mn、Fe、Cu、Zn標(biāo)準(zhǔn)母液，以5%硝酸為介質(zhì)，配成0、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mg·L–16 個質(zhì)量濃度梯度的混合對照品溶液，過0.22 μm水系微孔濾膜，即得對照品溶液。稱取供試品粉末0.2 g（精確至0.000 1 g），置消煮管中，精密加入硝酸5.0 mL，微波消解儀消煮30 min。將消煮液轉(zhuǎn)移至50 mL 量瓶中，并用純水洗滌消煮管2～3 遍，最后用純水定容至刻度。用0.22 μm 濾膜濾過，即得供試品溶液。精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL 注入電感耦合等離子體質(zhì)譜儀，測定，即得。

2.3 浸出物、總氮和蟻酸含量測定

2.3.1 浸出物測定 參照《中國藥典》2020 年版（四部）通則2201 冷浸法測定浸出物含量[8]：取藥用螞蟻供試品粉末1 g，置具塞錐形瓶中，精密加入60%乙醇30 mL，密塞，冷浸，前6 h 振搖，再靜置18 h，用干燥濾器迅速濾過，精密量取續(xù)濾液15 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻至室溫，迅速精密稱定質(zhì)量。計(jì)算供試品中醇溶性浸出物的含量。

2.3.2 總氮量測定 參照游思亮等[9]的方法，利用凱氏定氮儀測定。

2.3.3 蟻酸含量測定 參照鄒耀華等[10]所建立的衍生氣相色譜法。經(jīng)過方法學(xué)驗(yàn)證，該方法專屬性、精密度、穩(wěn)定性、加樣回收率均良好。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=6 361.2X–1 065 114（r=0.998 9），表明蟻酸在500～7500 μg?mL–1呈良好的線性關(guān)系，該方法適用于螞蟻藥材中蟻酸含量的測定。

2.4 氨基酸類成分的含量測定

參照張曉萍等[11]的方法，利用氨基酸分析儀測得。

2.5 數(shù)據(jù)分析

采用Microsoft Excel 2019 和SPSS 26.0 進(jìn)行相關(guān)數(shù)據(jù)分析，結(jié)果均以（）表示。數(shù)據(jù)差異顯著性分析借助ANOVA與t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 12批藥用螞蟻樣品中雜質(zhì)、水分和灰分含量

12 批藥用螞蟻樣品中的雜質(zhì)、水分和灰分含量見表2。依據(jù)《江蘇省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》2016年版[12]“螞蟻”項(xiàng)下記載，雜質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)應(yīng)≤5%，總灰分不得過11.0%，酸不溶性灰分不得過6.0%，對水分含量未作規(guī)定。結(jié)果表明，3、4、6、7、9、12 號樣品雜質(zhì)符合標(biāo)準(zhǔn)，合格率僅50%。雙齒多刺蟻平均含水量（2.93%）顯著高于葉形多刺蟻（1.96%，P<0.05），其中6 號江西上高縣產(chǎn)雙齒多刺蟻樣品含水量（6.24%）最高。2 種藥用螞蟻灰分含量略有差別，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，均符合含量限定值。灰分含量以貴州產(chǎn)區(qū)的螞蟻?zhàn)罡摺?/p>

表2 12批藥用螞蟻樣品中雜質(zhì)、水分和灰分質(zhì)量分?jǐn)?shù)（,n=3） %

表2 12批藥用螞蟻樣品中雜質(zhì)、水分和灰分質(zhì)量分?jǐn)?shù)（,n=3） %

注：同列不同小寫字母表示P<0.05；表3～表5同。

3.2 12批藥用螞蟻樣品中4種主要微量元素含量

研究發(fā)現(xiàn)扶正固本類中藥中Mn、Fe、Cu、Zn元素的含量相對較高[13]?；谖浵仭昂蠅阉帯钡挠涊d，對不同產(chǎn)地2種基原藥用螞蟻中4種微量元素的含量進(jìn)行測定，結(jié)果見表3。葉形多刺蟻中4 種元素平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為263.29、1 048.03、25.69、129.06 mg·kg–1；雙齒多刺蟻中4種元素平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為255.86、643.82、25.77、112.10 mg·kg–1。經(jīng)t檢驗(yàn)，葉形多刺蟻中Zn 元素含量顯著高于雙齒多刺蟻（P<0.05），其他3種元素含量種間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。除Cu 元素外，不同產(chǎn)地藥用螞蟻其余3種元素的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。廣西產(chǎn)區(qū)樣品中Mn、Zn 元素含量高于其他產(chǎn)區(qū)，江西產(chǎn)區(qū)樣品中Fe元素含量最高。

表3 12批藥用螞蟻樣品中4種微量元素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（,n=3）

表3 12批藥用螞蟻樣品中4種微量元素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（,n=3）

3.3 12 批藥用螞蟻樣品中浸出物、總氮和蟻酸含量

葉形多刺蟻浸出物質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17.70%～27.30%，均值為21.74%；雙齒多刺蟻浸出物質(zhì)量分?jǐn)?shù)為14.16%～33.91%，均值為22.32%。經(jīng)t檢驗(yàn)，雙齒多刺蟻浸出物質(zhì)量分?jǐn)?shù)高于葉形多刺蟻，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。就產(chǎn)地差異來看，浸出物質(zhì)量分?jǐn)?shù)順序?yàn)閺V東（27.30%）>江西（25.49%）>廣西（22.10%）>貴州（葉形多刺蟻，21.74%）>貴州（雙齒多刺蟻，14.52%）。貴州產(chǎn)區(qū)的雙齒多刺蟻含量顯著低于其他產(chǎn)區(qū)的雙齒多刺蟻（P<0.05），亦顯著低于貴州產(chǎn)區(qū)的葉形多刺蟻（P<0.05）；不同基原與產(chǎn)地的螞蟻藥材樣品浸出物質(zhì)量分?jǐn)?shù)均能達(dá)到15%限定值（表4）。

表4 12批藥用螞蟻樣品中浸出物、總氮和蟻酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)（,n=3）

表4 12批藥用螞蟻樣品中浸出物、總氮和蟻酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)（,n=3）

12 批藥用螞蟻樣品中，葉形多刺蟻總氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7.51%～10.12%，均值為8.57%；雙齒多刺蟻總氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7.24%～9.74%，均值為8.04%。經(jīng)t檢驗(yàn)，葉形多刺蟻總氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)高于雙齒多刺蟻，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。就產(chǎn)地差異來看，總氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)順序?yàn)閺V西（8.70%）>貴州（葉形多刺蟻，8.57%）>廣東（7.95%）>貴州（雙齒多刺蟻，7.73%）>江西（7.46%），廣西產(chǎn)區(qū)的雙齒多刺蟻樣品總氮量最高，江西最低（表4）。

蟻酸為藥用螞蟻的特征性成分之一，具有重要的藥理作用。12 批螞蟻樣品中，葉形多刺蟻蟻酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9.93～56.49 mg·g–1，均值為36.50 mg·g–1；雙齒多刺蟻蟻酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9.68～114.01 mg·g–1，均值為75.97 mg·g–1。雙齒多刺蟻蟻酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著高于葉形多刺蟻（P<0.05）。就產(chǎn)地差異來看，蟻酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)順序?yàn)閺V東（104.21 mg·g–1）>江西（94.96 mg·g–1）>廣 西（57.81 mg·g–1）>貴 州（雙齒多刺蟻，55.99 mg·g–1）>貴州（葉形多刺蟻，36.50 mg·g–1）。貴州、廣西兩地的雙齒多刺蟻樣品蟻酸含量顯著低于江西、廣東（P<0.05）。

3.4 12批藥用螞蟻樣品中氨基酸類成分含量

12 批藥用螞蟻樣品中水解氨基酸種類豐富，均檢測出17 種氨基酸，包含7 種人體必需氨基酸（EAA）。葉形多刺蟻總氨基酸（TAA）質(zhì)量分?jǐn)?shù)為37.32%～52.52%，均值為43.20%；總EAA 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12.74%～18.27%，均值為15.09%。雙齒多刺蟻TAA 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為35.24%～47.05%，均值為38.96%；總EAA 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12.08%～16.07%，均值為13.46%。葉形多刺蟻氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)高出雙齒多刺蟻約12%，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。12 批藥用螞蟻氨基酸含量存在產(chǎn)地差異，TAA 質(zhì)量分?jǐn)?shù)貴州（41.12%）>廣西（41.06%）>廣東（38.66%）>江西（36.66%），總EAA含量趨勢相同（表5）。

表5 12批藥用螞蟻樣品中水解氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)（,n=3）

表5 12批藥用螞蟻樣品中水解氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)（,n=3）

注：*表示EAA。

4 基于灰色關(guān)聯(lián)度法的不同產(chǎn)地藥用螞蟻質(zhì)量比較

4.1 樣品數(shù)據(jù)集的建立

通過測定12 批藥用螞蟻樣品的5 類主要藥效成分微量元素（Ⅰ）、浸出物（Ⅱ）、總氮（Ⅲ）、蟻酸（Ⅳ）；TAA（Ⅴ）的含量，建立藥用螞蟻質(zhì)量評價灰色模式識別的數(shù)據(jù)集，見表6。

表6 12批藥用螞蟻5類主要藥效成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)

4.2 灰色關(guān)聯(lián)模型的建立

4.2.1 參考序列的選擇 設(shè)有n個研究樣品，每個樣品有m項(xiàng)評價指標(biāo)，組成評價單元序列{Xik}（i=1，2，3……n；k=1，2，3……m；本研究中n=12，m=5）。設(shè)最優(yōu)參考序列的各項(xiàng)指標(biāo)是n個螞蟻樣品對應(yīng)指標(biāo)的最大值，記作{Xsk}=max(1≤i≤n){Xik}；最差參考序列的各項(xiàng)指標(biāo)是n個螞蟻樣品對應(yīng)指標(biāo)的最小值，記作{Xtk}=min(1≤i≤n){Xik}。

4.2.2 關(guān)聯(lián)系數(shù)與關(guān)聯(lián)度計(jì)算 首先對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行均值化處理[14]。按照公式（1）、公式（2）分別計(jì)算出各評價單元相對最優(yōu)、最差序列的關(guān)聯(lián)系數(shù)，按照公式（3）、公式（4）分別計(jì)算出各評價單元相對最優(yōu)、最差序列的關(guān)聯(lián)度，結(jié)果見表7、表8。

表7 評價單元相對于最優(yōu)參考序列的關(guān)聯(lián)系數(shù)與關(guān)聯(lián)度

表8 評價單元相對于最差參考序列的關(guān)聯(lián)系數(shù)與關(guān)聯(lián)度

公式（1）與公式（2）中，?min=min|Yik-Ysk|，?max=max|Yik-Ysk|；?'min=min|Yik-Ytk|，?'max=max|Yik-Ytk|；ρ為分辨系數(shù)，一般取0.5 即可滿足分辨率要求[15]。

4.2.3 相對關(guān)聯(lián)度（ri）計(jì)算與相關(guān)性分析 灰色關(guān)聯(lián)模型最理想的結(jié)果是各評價單元與最優(yōu)參考序列關(guān)聯(lián)程度最大而同時與最差參考序列關(guān)聯(lián)程度最小，由此按照公式（5）計(jì)算ri。顯然，ri(s)越大，評價單元序列與最優(yōu)參考序列的關(guān)聯(lián)程度越大，評價單元越佳。ri(t)意義相反，其值越小，評價單元越佳。按照公式（5）計(jì)算出12 批藥用螞蟻樣品ri依次為0.455、0.379、0.576、0.296、0.367、0.527、0.364、0.467、0.449、0.482、0.380、0.433。

12批藥用螞蟻樣品的ri為0.296～0.576，其中有2 個產(chǎn)地樣品的ri>0.500，有4 個產(chǎn)地樣品的ri為0.400～0.500。綜合分析藥用螞蟻ri發(fā)現(xiàn)，3 號貴州凱里市產(chǎn)區(qū)的葉形多刺蟻樣品、6 號江西上高縣產(chǎn)區(qū)的雙齒多刺蟻樣品、10 號廣西博白縣產(chǎn)區(qū)的雙齒多刺蟻樣品的ri分別為0.576、0.527、0.482，居前3 位，表明其藥材質(zhì)量相對較優(yōu)。由表9 可知，5 類主要藥效成分中，浸出物含量與ri呈顯著正相關(guān)（P<0.01），其他成分與ri相關(guān)性不顯著。說明浸出物含量是評價藥用螞蟻藥材質(zhì)量的主要指標(biāo)，這一結(jié)論與企業(yè)生產(chǎn)上評價螞蟻藥材質(zhì)量過程中首先對浸出物含量及色度進(jìn)行控制的做法相吻合。

表9 12批藥用螞蟻樣品各成分含量與ri的相關(guān)性分析

5 討論

本研究參考《中國藥典》2020 年版通則對12 批藥用螞蟻樣品進(jìn)行雜質(zhì)、水分與灰分檢測，發(fā)現(xiàn)其含量高低與各地習(xí)用的采收時間及加工方式有關(guān)。貴州、江西兩地常用燙死法處理螞蟻，廣東、廣西地區(qū)則習(xí)用悶死法。本研究發(fā)現(xiàn)江西產(chǎn)區(qū)的螞蟻雜質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)最低，僅1.44%，可見江西螞蟻藥材凈度最高。同時，其含水量（3.99%）也最高。據(jù)了解，江西地區(qū)習(xí)慣于當(dāng)年11 月至次年1 月采挖野生螞蟻巢，將活蟻從巢中抖落后置于熱鐵鍋內(nèi)燙死，推測含水量高是因?yàn)楦邷乜焖僦滤朗刮浵伇M可能地保留了體內(nèi)水分。秋冬季節(jié)采收，避開螞蟻繁殖高峰期，故樣品中螞蟻卵及蛹的占比較?。换钕亸南伋舱鹇?，能夠有效減少雜質(zhì)附著，因此江西螞蟻藥材凈度最高。廣東、廣西習(xí)慣采挖蟻巢后將蟻巢整個置于塑料袋中，密封1～2 d，悶死螞蟻（窒息死亡使得螞蟻體內(nèi)水分慢慢流失）后曬干，此時外力將螞蟻從巢中抖落更易黏附雜質(zhì)。葉形多刺蟻與雙齒多刺蟻相比，蟻體不容易碎裂，藥材完整度較高，但5 號葉形多刺蟻樣品中因含有較多植物種子類雜質(zhì)導(dǎo)致該樣品雜質(zhì)量過高，猜測此類果實(shí)應(yīng)當(dāng)是葉形多刺蟻食物或營巢材料，廣布于其適生環(huán)境中。雙齒多刺蟻蟻體極易碎裂，藥材完整度不高，且樣品中往往含有較多藤本類植物的莖葉，砂礫、碎石占比較大。

本研究發(fā)現(xiàn)12 批藥用螞蟻蟻酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9.68～114.01 mg·g–1，差異幅度較大，2 種藥用螞蟻蟻酸含量種間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。就葉形多刺蟻來看，5 號鎮(zhèn)遠(yuǎn)縣樣品顯著低于甕安縣與凱里市樣品，推測差異原因有2 點(diǎn)：一是該批葉形多刺蟻肢體表面有較多的雜質(zhì)、塵土附著物；二是葉形多刺蟻營暫時性社會寄生，通常與弓背蟻屬（Camponotus）螞蟻或綠蠅等其他親蟻物種形成混合群體[16-17]，該批樣品內(nèi)可能混入了肉眼不易識別的親蟻物種。就雙齒多刺蟻來看，12 號廣西田林縣雙齒多刺蟻樣品蟻酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)不足10 mg·g–1，顯著低于其他產(chǎn)區(qū)的雙齒多刺蟻樣品，推測差異源于采收期與加工方式的不同。12 號樣品采收期為每年的3—6 月，市場上稱為“春蟻”，樣品中含有較多帶翅雄蟻與帶翅雌蟻；同樣11 號廣西田林縣雙齒多刺蟻樣品采收期為每年的12 月至次年2 月，市場上稱為“冬蟻”，帶翅雄蟻與帶翅雌蟻數(shù)量較少，以無翅工蟻為主?？梢姴墒掌诓煌瑢﹄p齒多刺蟻中蟻酸含量的高低產(chǎn)生了很大影響。12 號樣品與2、4、7 號雙齒多刺蟻樣品相比又存在加工方式的差異。有關(guān)不同采收期與加工方式對雙齒多刺蟻蟻酸含量的影響需深入研究。

本研究通過測定不同基原與產(chǎn)地藥用螞蟻的5類主要藥效成分發(fā)現(xiàn)，12 批藥用螞蟻樣品不同指標(biāo)成分含量沒有表現(xiàn)出明顯的規(guī)律性，因此如果僅從某單一成分出發(fā)很難綜合評價不同基原與產(chǎn)地螞蟻藥材的質(zhì)量。本研究通過建立灰色關(guān)聯(lián)度模型對藥用螞蟻質(zhì)量進(jìn)行綜合評價，發(fā)現(xiàn)雙齒多刺蟻的評價結(jié)果與實(shí)際應(yīng)用效果擬合度較高?；诂F(xiàn)有研究結(jié)果，3 號貴州凱里市產(chǎn)區(qū)的葉形多刺蟻樣品具有最高的ri，說明該產(chǎn)區(qū)的葉形多刺蟻或具有與雙齒多刺蟻等同的藥用價值，值得進(jìn)一步探索。這對緩解雙齒多刺蟻野生資源應(yīng)用壓力具有重要意義。此外，本研究結(jié)果顯示雙齒多刺蟻的質(zhì)量評價結(jié)果與企業(yè)實(shí)際應(yīng)用情況擬合度較高，說明GRA 在藥用螞蟻質(zhì)量評價研究方面具備一定的合理性與應(yīng)用價值[18]，為藥用螞蟻藥材的質(zhì)量評價提供了參考。