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    急性腦梗死患者血清hs-CRP、CaM、miR-365的變化及臨床意義

    2023-06-06 01:51:18徐熾天胡文霞陳生梁正玲
    中南醫(yī)學科學雜志 2023年3期
    關(guān)鍵詞:鈣超載腦缺血試劑盒

    徐熾天, 胡文霞, 陳生, 梁正玲

    1.六安市人民醫(yī)院 安徽醫(yī)科大學附屬六安醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科,安徽六安 237006;2.上海市公共衛(wèi)生臨床中心,上海 200093

    急性腦梗死(acute cerebral infarction,ACI)是臨床常見腦血管疾病,以中老年患者多見,發(fā)病率較高,嚴重者可危及患者生命安全[1]。ACI時腦血管內(nèi)皮細胞損傷,分泌炎癥因子,這些炎癥因子可反映ACI病情變化。超敏C反應蛋白(high sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)是一種炎癥敏感性指標,其含量升高是ACI的獨立危險因素[2]。鈣超載在ACI的發(fā)病中有著重要作用,鈣調(diào)蛋白(calmodulin,CaM)可調(diào)節(jié)鈣離子生理功能,與細胞死亡關(guān)系密切[3]。miR-365屬神經(jīng)特異表達的miRNA[4],有研究發(fā)現(xiàn),miRNA與腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[5],miR-365是ACI的危險因素,在ACI患者血清中表達升高[6],但miR-365與ACI的預后關(guān)系尚不清楚。因此,本文對ACI患者血清hs-CRP、CaM、miR-365的變化及臨床意義進行探討,現(xiàn)報道如下。

    1 資料和方法

    1.1 一般資料

    選取本院2020年2月—2022年2月收治的ACI患者100例(ACI組),男61例,女39例,年齡(62.51±3.62)歲,體質(zhì)指數(shù)(21.56±2.64)kg/m2;吸煙史35例,飲酒史43例,高血壓史37例,糖尿病史31例。另選擇同期體檢健康者50例為對照組,男30例,女20例,年齡(62.45±3.57)歲,體質(zhì)指數(shù)(21.48±2.61)kg/m2;吸煙史18例,飲酒史20例,高血壓史17例,糖尿病史15例。兩組一般資料比較差異無顯著性(P>0.05),具有可比性。本研究經(jīng)本院醫(yī)學倫理委員會批準。ACI組根據(jù)神經(jīng)缺損嚴重程度、預后分為輕中度組和重度組、預后不良組和預后良好組。ACI納入標準:①參照《中國腦梗死中西醫(yī)結(jié)合診治指南(2017)》[7]診斷標準,有短暫性腦缺血發(fā)作史,有偏癱、失語、吞咽困難等癥狀,查體有錐體束征,頭顱CT顯示低密度影;②發(fā)病前1個月內(nèi)無外科手術(shù)史,發(fā)病24 h內(nèi)入院;③患者或者家屬知曉并同意本研究。排除標準:①腦部及其他惡性腫瘤;②嚴重精神類疾病、肝腎疾病;③近期存在感染、凝血功能障礙。

    1.2 神經(jīng)缺損嚴重程度的判定

    采用美國國立衛(wèi)生研究院腦卒中量表[8]評分,對ACI患者神經(jīng)缺損嚴重程度進行評估,≤15分為輕中度組,>15分為重度組。

    1.3 血清hs-CRP和CaM的檢測

    ACI患者入院后立即采靜脈血5 mL,以3 000 r/min離心10 min,取上清,-80 ℃保存待測。采用人hs-CRP ELISA試劑盒(上海初態(tài)生物科技有限公司)檢測血清hs-CRP,采用人CaM ELISA試劑盒(上海心語生物科技有限公司)檢測血清CaM,均根據(jù)試劑盒步驟說明操作。

    1.4 血清miR-365的檢測

    采用美國Invitrogen公司TRIzol reagent RNA提取試劑盒提取總RNA,實時qRT-PCR法檢測血清miR-365相對表達量。以U6為內(nèi)參,RNA催化合成采用cDNA PrimerScriptTMRT試劑盒,RNA擴增采用SYBR Premix Ex TaqTMqRT-PCR試劑盒。引物miR-365正向:5′-UAAUGCCCCUAAAAAUCCUUAU-3′,反向:5′-AAGGAUUUUUAGGGGCAUUAUU-3′;U6正向:5′-GTCCTGGCAGATATACACTAAACAT-3′,反向:5′-CTCACGCTTGAATTCATGCGGCTT-3′。反應條件95 ℃ 10 s預變性,95 ℃ 5 s變性,60 ℃ 20 s退火,72 ℃ 30 s延伸,進行40個循環(huán)。采用2-ΔΔCt法計算血清miR-365相對表達量。

    1.5 預后的評估

    患者入院后給予氧氣吸入,保持呼吸道通暢,采取抗血小板、他汀類藥物等基礎(chǔ)治療。對ACI患者進行3個月隨訪,采用改良Barthel指數(shù)[9]評估患者預后,60~100分為預后良好組,0~59分為預后不良組。

    1.6 統(tǒng)計學分析

    2 結(jié) 果

    2.1 各組hs-CRP、CaM、miR-365水平的比較

    100例ACI患者中,輕中度神經(jīng)缺損55例(55.00%),重度神經(jīng)缺損45例(45.00%),預后良好59例(59.00%),預后不良41例(41.00%)。hs-CRP、CaM、miR-365水平ACI組高于對照組;重度組高于輕中度組;預后不良組高于預后良好組(P<0.05;表1)。

    表1 各組hs-CRP、CaM、miR-365水平的比較

    2.2 血清hs-CRP、CaM、miR-365水平與神經(jīng)缺損嚴重程度的相關(guān)性

    Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示,血清hs-CRP、CaM、miR-365與神經(jīng)缺損嚴重程度呈正相關(guān)(r分別為0.523、0.479、0.498,P分別為0.003、0.010、0.009)。

    2.3 hs-CRP、CaM、miR-365對ACI預后的預測效能

    hs-CRP、CaM、miR-365聯(lián)合預測ACI預后的診斷效能高于單獨預測(P<0.05;表2和圖1)。

    圖1 hs-CRP、CaM、miR-365預測ACI預后的ROC曲線

    表2 hs-CRP、CaM、miR-365對ACI預后的預測效能

    3 討 論

    ACI男性發(fā)病略高于女性,癥狀多變,對ACI病情、預后評估是ACI治療的重要程序,對改善其預后具有重要意義。影像學檢查可直接觀察ACI病灶,但需移動患者,可能會延誤最佳治療時機,影響恢復。hs-CRP是提示機體發(fā)生心血管危險事件較敏感的指標之一。本研究中,ACI患者hs-CRP水平顯著高于健康體檢者,且與神經(jīng)缺損嚴重程度呈正相關(guān),預后不良患者hs-CRP水平較高,hs-CRP預測預后的靈敏度、特異度較高,提示hs-CRP可反映ACI病情變化和神經(jīng)損傷程度,也可預測ACI患者預后。高水平hs-CRP能加劇中性粒細胞對腦組織神經(jīng)元浸潤使其凋亡,導致神經(jīng)功能障礙,李崇祎等[10]研究顯示,hs-CRP在ACI患者血清中的含量高低與神經(jīng)功能預后有關(guān),是ACI患者神經(jīng)功能損傷的獨立危險因素,與本研究結(jié)果相符。因此hs-CRP不僅能反映ACI患者機體炎癥情況,還能評估患者神經(jīng)功能損傷程度,高水平hs-CRP提示預后不良,對ACI患者預后具有預測價值,可作為ACI患者早期病情判斷和預后的一個客觀指標。

    ACI的發(fā)病機制較為復雜,鈣超載是神經(jīng)細胞缺血缺氧后繼發(fā)性損傷的重要環(huán)節(jié)。CaM又稱鈣調(diào)素,屬多功能蛋白質(zhì),能與鈣離子結(jié)合,本身無活性,對鈣具有絕對依賴性,參與細胞內(nèi)多種信號轉(zhuǎn)導途徑,是動態(tài)鈣離子傳感器,對調(diào)節(jié)細胞內(nèi)鈣離子穩(wěn)定具有重要作用。本研究中,ACI患者CaM水平顯著高于健康體檢者,且與神經(jīng)缺損嚴重程度呈正相關(guān),預后不良患者CaM水平較高,CaM預測預后的靈敏度、特異度較高,提示CaM與ACI患者腦缺血后鈣超載有關(guān),可反映病情變化和神經(jīng)損傷程度,也可預測預后。ACI患者鈣離子與CaM結(jié)合后可激活下游一系列信號通路,加重腦組織損傷,而CaM拮抗劑可能是治療腦血管疾病的有效藥。ACI應激可增加谷氨酸受體表達,促進鈣離子內(nèi)流,激活多種信號通路,導致神經(jīng)細胞死亡,鈣超載是ACI病情加重的重要危險因素,鈣超載和鈣離子平衡紊亂可引起CaM含量增加。李楠等[11]研究顯示,CaM與ACI患者神經(jīng)功能損傷程度呈正相關(guān),可用于評估ACI嚴重程度;沈青[12]研究顯示,CaM在ACI患者中水平升高,預后較差患者水平高于預后良好患者,CaM水平能預測ACI嚴重程度和預后,與本研究結(jié)果一致。

    微小RNA在心腦血管疾病的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用,miR-365在不同腫瘤中存在異常表達,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及預后存在密切聯(lián)系。MO等[13]在腦缺血大鼠研究中發(fā)現(xiàn),miR-365在腦缺血組織中表達較高,注射miR-365拮抗劑能增加星形膠質(zhì)細胞新生成熟神經(jīng)元的數(shù)量,減少神經(jīng)功能缺損,提示miR-365異常升高與腦缺血有關(guān)。本研究中,ACI患者miR-365含量顯著高于健康體檢者,且與神經(jīng)缺損嚴重程度呈正相關(guān),預后不良患者miR-365水平較高,miR-365預測預后的靈敏度、特異度較高,提示miR-365可反映病情變化和神經(jīng)損傷程度,也可預測預后。張許平等[14]研究顯示,miR-365與梗死面積、神經(jīng)缺損程度有關(guān),是影響ACI發(fā)生的危險因素,對其預后具有一定預測價值,與本研究結(jié)果相符。

    本研究發(fā)現(xiàn),hs-CRP、CaM、miR-365聯(lián)合預測ACI預后的診斷效能高于單獨預測,但本研究存在一定局限性,未對ACI不同時間點的hs-CRP、hs-CRP、miR-365進行檢測,需臨床進一步深入研究。綜上所述,血清hs-CRP、CaM、miR-365在ACI患者中高表達,對ACI患者預后具有一定預測價值。

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