• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    百合組培鱗莖一次性成球技術(shù)體系的構(gòu)建

    2023-06-04 22:15:44趙乙璉席夢利
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2023年9期

    趙乙璉 席夢利

    摘要:為簡化百合組培操作流程,減少鱗莖培養(yǎng)基配方的種類,縮短種球繁育周期,滿足企業(yè)及種球生產(chǎn)用戶百合繁育的需求,以百合品種“幸運花束”為試材,通過對百合組培生長過程中的溫度、光照等培養(yǎng)環(huán)境及激素、蔗糖、培養(yǎng)基等進(jìn)行優(yōu)化,并結(jié)合實際生產(chǎn)進(jìn)行了篩選。結(jié)果表明,25 ℃條件下有利于百合鱗莖的發(fā)育,溫度過高(≥30 ℃)或過低(≤15 ℃)都會嚴(yán)重抑制鱗莖的生長;而在光照培養(yǎng)過程中,全暗培養(yǎng)不僅有利于鱗莖的發(fā)育,而且節(jié)約能源,更能滿足實際生產(chǎn)的需求;在激素組合誘導(dǎo)鱗片成芽及促進(jìn)鱗莖發(fā)育的過程中,6-BA和NAA依然是百合組培的最佳組合,但在鱗片誘導(dǎo)成芽及小鱗莖發(fā)育膨大的過程中,其激素組合濃度雖有差異,但通過對比研究表明6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L激素組合能夠同時滿足百合鱗片不定芽誘導(dǎo)和小鱗莖發(fā)育的需求;在蔗糖的添加中,60 g/L的蔗糖濃度有利于百合鱗莖的生長發(fā)育,過高易造成鱗莖發(fā)育畸形,過低導(dǎo)致營養(yǎng)不足;1/2MS、MS等2種培養(yǎng)基對組培鱗莖根的發(fā)育差異性較小、生根狀態(tài)都良好,且都顯著好于1/4MS和2MS。研究表明,MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+蔗糖60 g/L,瓊脂6 g/L,pH值5.8~6.0,在25 ℃和全暗條件下培養(yǎng)45 d的百合組培技術(shù)體系,可以滿足百合組培規(guī)?;瘜嶋H生產(chǎn)的需求,為百合種球繁育提供技術(shù)支撐。

    關(guān)鍵詞:百合;組培;一次性成球;規(guī)模化繁育

    中圖分類號:S644.104+.3??文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A??文章編號:1002-1302(2023)09-0162-04

    基金項目:國家自然科學(xué)基金(編號:31670603)。

    作者簡介:趙乙璉(1995—),女,江蘇連云港人,博士研究生,從事植物細(xì)胞工程及分子細(xì)胞遺傳學(xué)研究。E-mail:719591137@qq.com。

    通信作者:席夢利,博士,教授,主要從事植物細(xì)胞工程及分子細(xì)胞遺傳學(xué)研究。E-mail:ximenglinjfu@126.com。

    百合(Lilium brownii var. viridulum)屬于百合科百合屬,為多年生宿根草本植物[1]。作為世界上最重要的商品和公園花卉,在切花、庭院及公園綠化等方面得到廣泛的應(yīng)用[2],有力助推了鄉(xiāng)村產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和美麗中國的建設(shè)。近年來,隨著市場需求和種植面積的增加,百合種球的需求量越來越大,但由于百合株芽、種子和鱗片扦插等傳統(tǒng)的繁殖方法存在易帶病、感病、種球品質(zhì)差等缺點[3],嚴(yán)重制約了百合產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。而百合組培具有保持繁殖系數(shù)高、縮短種球繁育周期、種球品質(zhì)好等特性[4],有利于百合種球的規(guī)?;?biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)及百合新品種的培育。

    目前,關(guān)于百合組培的報道較多,大多以鱗片、葉片為外植體,通過誘導(dǎo)愈傷、轉(zhuǎn)化成苗、鱗莖生根等步驟進(jìn)行并建立了高效的組培體系[5]。但由于所需培養(yǎng)基配方較多,培養(yǎng)周期較長,實際操作過程較為繁瑣,生產(chǎn)的百合組培鱗莖質(zhì)量參差不齊,因此在繁育過程中難以標(biāo)準(zhǔn)化實施及普及。簡化組培操作流程,減少鱗莖培養(yǎng)基配方種類,構(gòu)建一次性成球的百合組培技術(shù)體系,才能滿足企業(yè)及種球生產(chǎn)用戶繁育需求。然而關(guān)于百合組培鱗莖一次性成球體系的研究卻相對較少。百合組培鱗莖一次性成球技術(shù)體系,就是通過1~2種鱗莖培養(yǎng)基配方,在基本相同的培養(yǎng)環(huán)境體系下,培養(yǎng)高品質(zhì)組培鱗莖的過程。本研究是在傳統(tǒng)百合鱗莖組培的基礎(chǔ)上,通過對溫度、光照等培養(yǎng)環(huán)境以及蔗糖、植物生長調(diào)節(jié)劑、培養(yǎng)基等培養(yǎng)體系的綜合優(yōu)化和篩選,建立了高效的百合組培鱗莖一次性成球的技術(shù)體系,可為百合種球規(guī)?;M培擴(kuò)繁提供技術(shù)支撐。

    1?材料與方法

    1.1?材料與處理

    供試百合品種為“幸運花束”,選取無病蟲害、無機(jī)械損傷的“幸運花束”種球中層鱗片為試驗材料,用自來水流水沖洗30 min后,先用75%乙醇浸泡搖動30 s,再用0.5%次氯酸鈉消毒10 min,用無菌水漂洗4次后備用。每個試驗重復(fù)3次,每個處理5個外植體。試驗于2022年1—12月在南京林業(yè)大學(xué)林學(xué)院進(jìn)行。

    1.2?溫度及光照對百合組培鱗莖發(fā)育的影響

    把消毒后的百合鱗片接種于培養(yǎng)基(MS+6-BA 0.8mg/L+NAA 0.3 mg/L+60 g/L蔗糖,瓊脂6 g/L,pH值5.8~6.0)上,分別在15、20、25、30 ℃ 的溫度和全暗條件下培養(yǎng)45 d,測定其生長變化情況;25 ℃條件下,分別在自然光、光—暗(3 000 lx光照16 h—黑暗8 h)和全暗條件下培養(yǎng) 45 d,測定其生長變化情況。

    1.3?不同激素組合對鱗片不定芽誘導(dǎo)的影響

    把消毒后的百合鱗片,切成約5 mm2的方形小塊,在無菌條件下接種到培養(yǎng)基(MS+60 g/L蔗糖,瓊脂6 g/L,pH值5.8~6.0)上。誘導(dǎo)培養(yǎng)基選擇MS為基本培養(yǎng)基,配合2種激素組合,濃度梯度為 6-BA(0.5、1.0、1.5 mg/L);NAA(0.1、0.3、0.5 mg/L),正交組合。在25 ℃和全暗條件下培養(yǎng) 45 d,統(tǒng)計不定芽的誘導(dǎo)率以及觀察其生長變化情況。

    1.4?蔗糖濃度對鱗莖發(fā)育的影響

    把消毒后的百合鱗片分別接種于不同濃度蔗糖(0、30、60、90、120 g/L)的培養(yǎng)基(MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.3 mg/L,瓊脂6 g/L,pH值5.8~6.0)上,在25 ℃和全暗條件下培養(yǎng)45 d,測定其生長變化情況。

    1.5?不同激素組合對百合鱗莖生長的影響

    將鱗片誘導(dǎo)形成的小鱗莖(直徑0.2~0.3 cm)通過繼代培養(yǎng)的方式接種于含有不同生長激素組合的培養(yǎng)基中(MS+60 g/L蔗糖,瓊脂 6 g/L,pH值5.8~6.0),其激素濃度設(shè)置梯度分別為 6-BA(0.5、1.0、1.5 mg/L),NAA(0.1、0.3、0.5 mg/L),通過正交試驗組合。在25 ℃和全暗條件下培養(yǎng) 45 d,觀察統(tǒng)計百合鱗莖生長變化情況。

    1.6?不同培養(yǎng)基對百合生根的影響

    將鱗片誘導(dǎo)形成的小鱗莖(直徑0.2~0.3 cm)分別接種于1/4MS、1/2MS、MS、2MS培養(yǎng)基(6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.3 mg/L,蔗糖60 g/L、瓊脂 6 g/L,pH值5.8~6.0)上,在25 ℃和全暗條件下培養(yǎng)45 d,觀察測定其生長變化情況。

    2?結(jié)果與分析

    2.1?溫度對鱗莖發(fā)育的影響

    由表1可以看出,在15、20、25 ℃等3種溫度條件下,試管鱗莖生成數(shù)量差異較小,而在30 ℃培養(yǎng)條件下試管鱗莖生成數(shù)量顯著減少;不同培養(yǎng)溫度下鱗莖質(zhì)量及直徑均存在差異,以25 ℃條件下形成鱗莖的質(zhì)量及直徑最大,鱗莖質(zhì)量由大至小的順序分別是:25 ℃>20 ℃>15 ℃>30 ℃,鱗莖直徑由大至小的順序分別是:25 ℃>30 ℃>15 ℃>20 ℃;15、20、25 ℃等3種培養(yǎng)溫度下鱗莖生根數(shù)較多,差異不顯著,而30 ℃溫度下鱗莖生根數(shù)很少。通過以上指標(biāo)可以看出,25 ℃條件有利于百合鱗莖的發(fā)育,溫度過高(≥30 ℃)或過低(≤15 ℃)都會嚴(yán)重抑制鱗莖的生長發(fā)育。

    2.2?光照對鱗莖發(fā)育的影響

    從表2可以看出,在自然光、光—暗(3 000 lx光照16 h—黑暗8 h)條件下,平均每個鱗莖分別有1.5個和2.6個鱗片葉生成,在全暗培養(yǎng)條件下,則只有0.5個鱗片葉生成;全暗條件下形成鱗莖的質(zhì)量、直徑及每個鱗莖生根數(shù)都顯著大于自然光及 3 000 lx 光照16 h—黑暗8 h條件;而自然光由于光照環(huán)境差異較大,生成的鱗莖質(zhì)量大小不一,而在光—暗(3 000 lx光照16 h—黑暗8 h)和全暗2種培養(yǎng)條件下生成的鱗莖大小比較一致;在自然光、光—暗(3 000 lx光照16 h—黑暗8 h)和全暗3種培養(yǎng)條件下鱗莖生成的數(shù)量生成的數(shù)量無顯著性差異 而在自然光、 光—暗(3 000 lx光照16 h—黑暗8 h)和全暗2種培養(yǎng)條件下質(zhì)量卻差異顯著,全暗培養(yǎng)不僅質(zhì)量大,而且節(jié)省能源。因此,全暗培養(yǎng)是鱗莖發(fā)育的最佳培養(yǎng)方式。

    2.3?不同激素組合對鱗片不定芽誘導(dǎo)的影響

    由表3可以看出,百合各激素配比處理間的誘導(dǎo)率差異顯著,但對單個鱗片誘導(dǎo)芽數(shù)和幼苗長勢的影響不明顯。當(dāng)6-BA濃度在0.5 mg/L和 1.0 mg/L 時,鱗片不定芽誘導(dǎo)率都隨NAA濃度增大而相應(yīng)增加,并在NAA濃度為0.5 mg/L時達(dá)到最大,達(dá)80.23%,但此時幼苗長勢細(xì)弱,無法滿足實際生產(chǎn)的需求,隨著6-BA濃度的繼續(xù)增大,當(dāng) 6-BA 濃度為1.5 mg/L時,鱗片不定芽誘導(dǎo)率都隨NAA濃度增大而減少;而當(dāng)6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L時,鱗片不定芽誘導(dǎo)率和增殖系數(shù)雖然不是最高,但鱗莖發(fā)育較好,幼苗生長健壯。

    2.4?蔗糖濃度對鱗莖發(fā)育的影響

    由表4可見,當(dāng)蔗糖濃度達(dá)到30 g/L時形成鱗莖數(shù)量最多,平均達(dá)4.23個,高于其他蔗糖濃度處理,且每個鱗莖生根數(shù)最多,在不含蔗糖的培養(yǎng)條件下幾乎沒有鱗莖形成或形成的鱗莖很??;蔗糖濃度在120 g/L和90 g/L時,生成鱗莖的鮮質(zhì)量都較大,但每個鱗片上再生鱗莖數(shù)量都較少,且都畸形最嚴(yán)重,鱗莖發(fā)育不正常;只有蔗糖濃度在30 g/L和60 g/L時形成的鱗莖發(fā)育正常,而60 g/L的蔗糖條件下形成鱗莖的直徑顯著大于30 g/L條件下形成的鱗莖,故60 g/L的蔗糖濃度有利于百合鱗莖的生長發(fā)育。

    2.5?不同激素組合對百合鱗莖生長的影響

    從表5可以看出,當(dāng)6-BA的濃度為 0.5 mg/L和1.0 mg/L時,鱗莖鮮質(zhì)量都分別隨著NAA濃度的增加而增大,當(dāng)激素組合在6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L時達(dá)到最大,為3.8 g,伴隨6-BA的濃度增加到1.5 mg/L時,隨著NAA濃度的增大,鱗莖分球數(shù)逐漸增多,但此時,無論NAA濃度的大與小,鱗莖鮮質(zhì)量都較小。綜合以上分析,6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L的激素組合效果最好。

    2.6?不同培養(yǎng)基對百合生根的影響

    由表6可以看出,百合鱗莖在這4種培養(yǎng)基上均能生根,但是在生根率、平均根長及根的生長狀態(tài)等指標(biāo)上有所差異。在百合生根培養(yǎng)的過程中,隨著培養(yǎng)基成分比例的增大,生根率和平均根長都呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢,其中以1/2MS培養(yǎng)基的生根率和平均根長都最大,分別達(dá)到?76.7%?和2.07 cm;1/2MS、MS等2種培養(yǎng)基根的生長狀態(tài)顯著好于1/4MS和2MS等2種培養(yǎng)基,且1/2MS、MS等2種培養(yǎng)基在生根率及根長方面差異性較小,生根狀態(tài)良好。因此,1/2MS及MS培養(yǎng)基均可作為百合生根的基本培養(yǎng)基。

    3?結(jié)論與討論

    在百合組培繁育過程中,影響百合鱗莖誘導(dǎo)、轉(zhuǎn)化等的關(guān)鍵培養(yǎng)環(huán)境及激素種類都已有較多的研究[6-8]。本研究在前人研究的基礎(chǔ)上,對培養(yǎng)基、培養(yǎng)環(huán)境等進(jìn)行了綜合研究和優(yōu)化,并根據(jù)實際生產(chǎn)需求合理選擇培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境,優(yōu)化了培養(yǎng)體系,簡化了繁瑣的培養(yǎng)步驟,并沒有像張進(jìn)忠等根據(jù)培養(yǎng)效果篩選最優(yōu)培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境[9-11],而是結(jié)合生產(chǎn)需求及對鱗莖生長的影響程度合理簡化培養(yǎng)環(huán)境及培養(yǎng)基配方。

    本研究以百合鱗片為外植體,在培養(yǎng)溫度和光暗培養(yǎng)環(huán)境過程中,百合鱗莖容易組培成球,這與前人的研究結(jié)果[12-13]較為一致。而在培養(yǎng)基選擇上,通過不同大量元素濃度的培養(yǎng)基篩選,發(fā)現(xiàn)MS培養(yǎng)基不僅滿足百合鱗莖的發(fā)育,也滿足百合生根的需求,這與Monemi等在生根培養(yǎng)基的選擇上[14-15]不同。作為組培過程中最重要的碳源物質(zhì),蔗糖對鱗莖的膨大具有重要的意義,本研究表明適宜的蔗糖濃度為60 g/L,這與前人研究[16]一致,組培鱗莖能正常生長,沒有形成畸形鱗莖,隨著蔗糖濃度的提高,當(dāng)蔗糖濃度為90 g/L和120 g/L時,組培鱗莖雖比60 g/L蔗糖濃度時要大,但畸形率較高,鱗莖的整體質(zhì)量下降嚴(yán)重。激素對鱗莖的生長發(fā)育具有重要的作用,陳麗靜等通過6-BA和NAA的激素組合篩選了從愈傷到鱗莖生長的全過程[17-18],而本研究則在他們研究的基礎(chǔ)上,通過降低激素濃度組合及優(yōu)化激素配置,篩選出從鱗片誘導(dǎo)成芽到小鱗莖生長膨大的整個過程。本研究不僅簡化了操作步驟及培養(yǎng)基配方,而且也減少了生根培養(yǎng)基的步驟,直接發(fā)育成可以煉苗的百合鱗莖,其效率更高,更適用于企業(yè)的規(guī)?;?、標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)。

    本研究通過優(yōu)化百合培養(yǎng)條件及配方,研究過程中在篩選最優(yōu)的基礎(chǔ)上,從實際生產(chǎn)需求及百合鱗莖品質(zhì)等方面綜合考量,建立了更加簡潔高效的百合組培鱗莖一次性成球技術(shù)體系,即MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+蔗糖60 g/L,瓊脂 6 g/L,pH值5.8~6.0,在25 ℃和全暗條件下培養(yǎng)45 d。該技術(shù)體系不僅減少了不同培養(yǎng)時期培養(yǎng)基的配方,縮短了鱗莖成球的培養(yǎng)周期,而且所組培的小鱗莖也完全滿足實際生產(chǎn)需求。

    參考文獻(xiàn):

    [1]李介文,杜運鵬,賈桂霞,等. 我國部分百合野生資源的親緣關(guān)系及其分布特點[J]. 北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報,2019,41(10):74-82.

    [2]楊?晶,商萬有. 百合的觀賞價值研究[J]. 吉林農(nóng)業(yè),2011(9):171.

    [3]陳?華,鄭傳奇,蘇海鋒. 卷丹百合種球繁育及組織培養(yǎng)技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 現(xiàn)代食品,2021(16):29-32,36.

    [4]呂翠竹,王有國,王?立. 綠花百合組培芽增殖與試管鱗莖膨大的影響因素研究[J]. 西南林業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)),2020,40(1):38-45.

    [5]孫紅梅,李?敏,付麟嵐,等. 基于文獻(xiàn)計量的百合研究趨勢分析[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報,2021,37(31):151-158.

    [6]孫明偉,邵小斌,趙統(tǒng)利,等. 切花百合木門組培鱗莖煉苗移栽技術(shù)規(guī)程[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2018,46(3):34-35,43.

    [7]梁春輝,閆曉東,黃?敏,等. 降低卷丹百合組培褐變技術(shù)研究[J]. 亞熱帶植物科學(xué),2017,46(2):122-125.

    [8]Hossein N,Amir H G. Innovative optimal approach to implement fast propagation tissue culture[J]. Biosciences Biotechnology Research Asia,2017,14(2):615-620..

    [9]張進(jìn)忠,韋紹龍,孫嘉曼,等. 蘭州百合組培鱗莖發(fā)育研究[J]. 廣西植物,2016,36(3):297-302.

    [10]秦新惠,崔興林,陳學(xué)紅,等. 不同因子對蘭州百合組培小鱗莖膨大的影響研究[J]. 林業(yè)科技通訊,2015(12):44-47.

    [11]孫紅梅,宋勝利,申屠玥,等. 亞洲百合花器官組培快繁技術(shù)研究[J]. 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2015,46(1):7-12.

    [12]崔?祺,賈桂霞. 3種百合組培快繁體系的優(yōu)化[J]. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2014,40(6):621-626.

    [13]張?杰,李?洋,孫紅梅. LA系列百合‘Eyeliner花器官組培快繁技術(shù)研究[J]. 西北植物學(xué)報,2014,34(9):1894-1899.

    [14]Monemi M B,Kazemitabar S K,Bakhshee K G,et al. Tissue culture study of the medicinal plant leek (Allium ampeloprasum L.)[J]. International Journal of Molecular and Cellular Medicine,2014,3(2):118-125.

    [15]杜?帥,李?丹,杜喜春,等. 綠花百合組培快繁技術(shù)研究[J]. 現(xiàn)代園藝,2014(8):12-13.

    [16]張彥妮,李兆婷,張艷波,等. 毛百合試管鱗莖形成和膨大的培養(yǎng)優(yōu)化[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2016,44(4):74-78.

    [17]陳麗靜,殷小娟,李俊嵐,等. 細(xì)葉百合鱗片誘導(dǎo)與遺傳轉(zhuǎn)化組培體系的建立[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報,2013,26(2):718-722.

    [18]Min H K,Young H L,Wook O H,et al. Effects of hot water and chilling treatments of bulblets propagated by tissue culture on sprouting and bulb development in Korean native lilies[J]. Korean Journal of Horticultural Science & Technology,2011,29(2):87-94.

    91字幕亚洲| 久久久久视频综合| 热re99久久精品国产66热6| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 中文字幕人妻丝袜制服| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产亚洲欧美在线一区二区| 精品国内亚洲2022精品成人 | 亚洲精品久久午夜乱码| av不卡在线播放| 欧美成人午夜精品| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 国产主播在线观看一区二区| 999久久久精品免费观看国产| 9191精品国产免费久久| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 在线播放国产精品三级| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 色老头精品视频在线观看| 亚洲人成电影观看| 999精品在线视频| 三级毛片av免费| 久久久国产欧美日韩av| 精品欧美一区二区三区在线| 99re在线观看精品视频| 国产高清videossex| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 女人久久www免费人成看片| 国产欧美日韩精品亚洲av| 在线观看免费视频网站a站| 精品视频人人做人人爽| 91国产中文字幕| av福利片在线| 大香蕉久久成人网| 国产亚洲精品久久久久5区| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产色视频综合| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲久久久国产精品| 亚洲成人免费av在线播放| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产亚洲精品一区二区www | 国产成人免费无遮挡视频| 一夜夜www| 成人特级黄色片久久久久久久| 视频区图区小说| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲在线自拍视频| 亚洲av电影在线进入| 岛国在线观看网站| 亚洲人成电影观看| 国产精品偷伦视频观看了| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产欧美日韩一区二区精品| 自线自在国产av| 国产精品免费大片| 99国产精品免费福利视频| 黑人操中国人逼视频| av网站免费在线观看视频| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲人成伊人成综合网2020| 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 99国产综合亚洲精品| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 黄色片一级片一级黄色片| 免费少妇av软件| 黄色a级毛片大全视频| 中文字幕人妻丝袜制服| 999久久久精品免费观看国产| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日日爽夜夜爽网站| 大型av网站在线播放| 黄色视频不卡| 国产精品久久久人人做人人爽| 成人国产一区最新在线观看| 亚洲专区国产一区二区| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 丁香六月欧美| 青草久久国产| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 看片在线看免费视频| 十八禁人妻一区二区| 午夜影院日韩av| 91老司机精品| 狠狠狠狠99中文字幕| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 91麻豆av在线| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 精品免费久久久久久久清纯 | 香蕉久久夜色| 水蜜桃什么品种好| 国产亚洲精品一区二区www | 久久中文看片网| 精品国产一区二区三区四区第35| 久久久久久久国产电影| 国产精品一区二区免费欧美| 麻豆av在线久日| 亚洲国产看品久久| 91九色精品人成在线观看| 国产av又大| 久久久精品免费免费高清| 国产免费男女视频| 在线观看免费午夜福利视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 99精品久久久久人妻精品| 国产精品影院久久| 在线av久久热| 好男人电影高清在线观看| xxx96com| 最近最新免费中文字幕在线| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产黄色免费在线视频| 搡老岳熟女国产| 丝袜美足系列| 青草久久国产| 一进一出好大好爽视频| 欧美性长视频在线观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲熟妇熟女久久| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产精品久久电影中文字幕 | 中亚洲国语对白在线视频| 午夜福利视频在线观看免费| 国产激情欧美一区二区| 久久精品亚洲av国产电影网| 午夜福利一区二区在线看| 不卡av一区二区三区| 精品久久久久久电影网| 国产午夜精品久久久久久| 久久久久久免费高清国产稀缺| 精品久久久久久久久久免费视频 | 亚洲国产精品一区二区三区在线| 大香蕉久久网| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 九色亚洲精品在线播放| 国产亚洲欧美精品永久| 天堂中文最新版在线下载| 久久久国产欧美日韩av| 91九色精品人成在线观看| 亚洲欧美激情综合另类| 成人免费观看视频高清| 999久久久国产精品视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 嫁个100分男人电影在线观看| 午夜精品在线福利| 成人手机av| 国产成人欧美在线观看 | 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲全国av大片| 亚洲全国av大片| 嫩草影视91久久| 男人舔女人的私密视频| 99国产精品99久久久久| 亚洲欧美激情综合另类| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 91成人精品电影| 成人永久免费在线观看视频| 女人被狂操c到高潮| 亚洲七黄色美女视频| 一a级毛片在线观看| 亚洲五月色婷婷综合| 中文字幕最新亚洲高清| 欧美成狂野欧美在线观看| 捣出白浆h1v1| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 色播在线永久视频| 成人国语在线视频| 69av精品久久久久久| 一区福利在线观看| 久久国产精品影院| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 亚洲精品国产区一区二| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 两性夫妻黄色片| 久久久久精品人妻al黑| 成人国产一区最新在线观看| 成人永久免费在线观看视频| 成熟少妇高潮喷水视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 日日摸夜夜添夜夜添小说| tocl精华| 天天添夜夜摸| 一级a爱片免费观看的视频| 久久久久久久午夜电影 | 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲第一青青草原| 三上悠亚av全集在线观看| 亚洲国产欧美网| 99久久综合精品五月天人人| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲成人国产一区在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲熟妇熟女久久| 露出奶头的视频| 日本a在线网址| 国产黄色免费在线视频| 男人操女人黄网站| 欧美在线一区亚洲| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 激情在线观看视频在线高清 | 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产乱人伦免费视频| 看免费av毛片| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 日本黄色视频三级网站网址 | 老鸭窝网址在线观看| 日韩有码中文字幕| 精品一区二区三区av网在线观看| 一级毛片精品| 超碰成人久久| 久久香蕉精品热| 三上悠亚av全集在线观看| tube8黄色片| 美女午夜性视频免费| 悠悠久久av| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 丁香六月欧美| 国产精品 欧美亚洲| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲av成人av| 精品一品国产午夜福利视频| 12—13女人毛片做爰片一| 中文字幕精品免费在线观看视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲av欧美aⅴ国产| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 欧美在线黄色| 国产高清视频在线播放一区| 欧美激情久久久久久爽电影 | 嫩草影视91久久| 国产精品亚洲一级av第二区| 美国免费a级毛片| 精品第一国产精品| 久久香蕉精品热| 日本精品一区二区三区蜜桃| 精品国产一区二区三区四区第35| 欧美日韩黄片免| a级毛片黄视频| 亚洲成人手机| 最近最新中文字幕大全电影3 | av天堂在线播放| 热re99久久精品国产66热6| 又黄又粗又硬又大视频| 脱女人内裤的视频| svipshipincom国产片| 日日夜夜操网爽| 久久久久久久国产电影| 国产精品免费一区二区三区在线 | 在线永久观看黄色视频| 精品人妻1区二区| 婷婷成人精品国产| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 久久国产精品影院| av线在线观看网站| 午夜免费观看网址| 俄罗斯特黄特色一大片| 久久性视频一级片| 免费看十八禁软件| 一级片免费观看大全| 国产精品1区2区在线观看. | 精品国产国语对白av| 淫妇啪啪啪对白视频| 色尼玛亚洲综合影院| 精品欧美一区二区三区在线| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 大香蕉久久成人网| 午夜福利在线观看吧| 免费av中文字幕在线| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 99精国产麻豆久久婷婷| 精品久久久久久久毛片微露脸| 久久性视频一级片| 国产精品免费大片| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产成人系列免费观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 一夜夜www| 午夜精品久久久久久毛片777| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 一级片'在线观看视频| 首页视频小说图片口味搜索| 国产欧美日韩一区二区精品| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 色老头精品视频在线观看| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 亚洲午夜理论影院| 在线国产一区二区在线| 欧美最黄视频在线播放免费 | 色94色欧美一区二区| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 深夜精品福利| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 人妻 亚洲 视频| 两个人免费观看高清视频| 成年动漫av网址| 一a级毛片在线观看| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产男靠女视频免费网站| 嫩草影视91久久| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 免费看a级黄色片| a级毛片在线看网站| 91国产中文字幕| 两性夫妻黄色片| 免费观看a级毛片全部| 一区在线观看完整版| 18禁观看日本| 飞空精品影院首页| 国产91精品成人一区二区三区| 天天添夜夜摸| 久久精品国产亚洲av高清一级| 久久久久久久精品吃奶| 久久精品91无色码中文字幕| 又大又爽又粗| 中文欧美无线码| 欧美日韩福利视频一区二区| 母亲3免费完整高清在线观看| 韩国av一区二区三区四区| 看免费av毛片| 久久久国产一区二区| 欧美大码av| 精品卡一卡二卡四卡免费| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲少妇的诱惑av| 久久天堂一区二区三区四区| 欧美日韩乱码在线| 欧美丝袜亚洲另类 | 大香蕉久久网| 久久九九热精品免费| 久久久久视频综合| 99精品在免费线老司机午夜| 国产视频一区二区在线看| 在线观看一区二区三区激情| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 69av精品久久久久久| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲伊人色综图| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 不卡av一区二区三区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产午夜精品久久久久久| 两性夫妻黄色片| 色综合欧美亚洲国产小说| 久久久久国产精品人妻aⅴ院 | 18禁黄网站禁片午夜丰满| 久久人妻av系列| 国产亚洲av高清不卡| 亚洲国产看品久久| 欧美日韩乱码在线| 91麻豆av在线| 国产精品一区二区精品视频观看| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲国产中文字幕在线视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院 | 国产精品成人在线| 国产在线精品亚洲第一网站| 一区二区三区激情视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 超色免费av| 久久ye,这里只有精品| 国产精品98久久久久久宅男小说| 午夜福利欧美成人| 久久久久久久精品吃奶| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产免费男女视频| 久久国产乱子伦精品免费另类| 老司机影院毛片| 国产97色在线日韩免费| 香蕉久久夜色| 欧美av亚洲av综合av国产av| 午夜亚洲福利在线播放| 欧美丝袜亚洲另类 | 精品福利永久在线观看| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 老司机深夜福利视频在线观看| 免费黄频网站在线观看国产| 18禁美女被吸乳视频| 欧美成人免费av一区二区三区 | 久久久久久免费高清国产稀缺| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| a在线观看视频网站| 制服人妻中文乱码| 免费在线观看影片大全网站| 免费高清在线观看日韩| 国产成人欧美在线观看 | a级片在线免费高清观看视频| 亚洲人成电影观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 韩国精品一区二区三区| 51午夜福利影视在线观看| 国产激情久久老熟女| 欧美日韩av久久| 99re6热这里在线精品视频| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 真人做人爱边吃奶动态| 成人国产一区最新在线观看| 露出奶头的视频| 日本wwww免费看| 91在线观看av| 国产xxxxx性猛交| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 久久久国产一区二区| 亚洲专区国产一区二区| 日韩欧美三级三区| 久99久视频精品免费| 咕卡用的链子| 国产不卡一卡二| 超色免费av| 国产99久久九九免费精品| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 免费高清在线观看日韩| 精品欧美一区二区三区在线| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 黄色女人牲交| 中国美女看黄片| 国产激情欧美一区二区| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲一区高清亚洲精品| 欧美精品亚洲一区二区| 99热只有精品国产| 美女 人体艺术 gogo| 女性被躁到高潮视频| 人妻一区二区av| 精品国产一区二区久久| 757午夜福利合集在线观看| 国产主播在线观看一区二区| 中文字幕制服av| 久久中文字幕一级| 中文字幕色久视频| 日日爽夜夜爽网站| 一级a爱片免费观看的视频| 国产三级黄色录像| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 无限看片的www在线观看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 欧美精品啪啪一区二区三区| 天堂动漫精品| 中出人妻视频一区二区| 一边摸一边做爽爽视频免费| 美女高潮到喷水免费观看| 人妻久久中文字幕网| av片东京热男人的天堂| 搡老乐熟女国产| 久久精品国产a三级三级三级| 交换朋友夫妻互换小说| 黄色毛片三级朝国网站| 一进一出好大好爽视频| 女人被狂操c到高潮| 亚洲欧美激情在线| 女人久久www免费人成看片| 久久久国产一区二区| ponron亚洲| 性色av乱码一区二区三区2| 国产精品一区二区免费欧美| videos熟女内射| 中文欧美无线码| 美国免费a级毛片| 1024香蕉在线观看| 色婷婷av一区二区三区视频| 在线观看66精品国产| 黄色视频,在线免费观看| 正在播放国产对白刺激| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产精华一区二区三区| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 在线观看免费视频网站a站| 制服诱惑二区| 成人永久免费在线观看视频| 1024香蕉在线观看| 成人国语在线视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产精品一区二区在线不卡| 十八禁高潮呻吟视频| 黄片大片在线免费观看| 99国产精品一区二区三区| 亚洲中文av在线| 欧美一级毛片孕妇| 丝袜在线中文字幕| 人成视频在线观看免费观看| 国产99久久九九免费精品| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 成年人黄色毛片网站| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 99在线人妻在线中文字幕 | 变态另类成人亚洲欧美熟女 | www.熟女人妻精品国产| videos熟女内射| 日韩有码中文字幕| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲中文av在线| 久久影院123| 国产不卡一卡二| 久久这里只有精品19| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲性夜色夜夜综合| 人妻丰满熟妇av一区二区三区 | 亚洲av熟女| 又黄又粗又硬又大视频| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 黄色丝袜av网址大全| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 久久香蕉激情| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 午夜亚洲福利在线播放| 久久青草综合色| 国产精品国产av在线观看| 国产亚洲欧美98| 三上悠亚av全集在线观看| 一级片免费观看大全| 亚洲午夜理论影院| 91精品三级在线观看| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产成人影院久久av| 亚洲成人手机| 99国产精品免费福利视频| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲伊人色综图| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 麻豆成人av在线观看| 亚洲av熟女| 无限看片的www在线观看| 成人免费观看视频高清| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲国产看品久久| 成人国语在线视频| 老熟女久久久| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 麻豆成人av在线观看| 交换朋友夫妻互换小说| 超碰成人久久| 亚洲九九香蕉| 国产1区2区3区精品| 91精品三级在线观看| 正在播放国产对白刺激| 日韩精品免费视频一区二区三区| 国产精品亚洲av一区麻豆| av天堂在线播放| 三级毛片av免费| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 成人黄色视频免费在线看| 妹子高潮喷水视频| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲精品美女久久av网站| 欧美大码av| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 久99久视频精品免费| 999精品在线视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 少妇 在线观看| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲一区二区三区不卡视频| 午夜福利在线免费观看网站| 国产激情欧美一区二区| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 黄片播放在线免费| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 女人被狂操c到高潮| 亚洲美女黄片视频| 国产97色在线日韩免费| 村上凉子中文字幕在线| 女人精品久久久久毛片| 亚洲伊人色综图| 老司机午夜十八禁免费视频| 日韩免费av在线播放| 欧美日韩一级在线毛片| 中文字幕制服av| 女警被强在线播放| av天堂在线播放| 性少妇av在线| 国产男靠女视频免费网站| 免费在线观看亚洲国产| 99久久人妻综合| 国产成人免费观看mmmm| 波多野结衣av一区二区av| 欧美一级毛片孕妇| 一区福利在线观看| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产av一区二区精品久久| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 日日夜夜操网爽| 女人久久www免费人成看片| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 精品久久久久久久毛片微露脸| 在线国产一区二区在线| 99精国产麻豆久久婷婷| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 老司机影院毛片| 亚洲专区字幕在线| 亚洲一码二码三码区别大吗| 9热在线视频观看99| 麻豆av在线久日| 亚洲欧美激情在线|