UPLC-MS/MS法同時(shí)快速測(cè)定保健食品中10種降壓類非法添加化學(xué)藥

王曉峰 許琨琨 盧文斌 吳芳海 蔡振世 林曉明

摘 要：目的：建立同時(shí)測(cè)定保健食品中10種降壓類非法添加化學(xué)藥的UPLC-MS/MS快速檢測(cè)方法。方法：液相采用ACQUITY UPLC?BEH C18（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）柱，以超純水（含0.1%甲酸）-乙腈（0.1%甲酸）為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫，進(jìn)樣量2 μL，流速0.3 mL·min-1，柱溫30 ℃。質(zhì)譜采用ESI，正、負(fù)離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式，進(jìn)行定性分析和定量分析。結(jié)果：鹽酸普萘洛爾、酒石酸美托洛爾、艾司洛爾、比索洛爾、坎地沙坦、厄貝沙坦、替米沙坦、氯沙坦、纈沙坦和吲達(dá)帕胺的分離度良好，線性范圍內(nèi)相關(guān)性均較好，R2均大于0.996 3；平均回收率為93%～118%；RSD為1.4%～4.9%（n=6）；方法檢出限為0.10～5.00 μg·kg-1；方法定量限為0.30～15.00 μg·kg-1；單次分析僅需12 min。結(jié)論：該方法操作便捷、檢測(cè)時(shí)間短、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確，適用于保健食品中10種降壓類非法添加化學(xué)藥的快速篩查及定量檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：UPLC-MS/MS；保健食品；降壓類藥物

Abstract： Objective： To establish a UPLC-MS/MS rapid detection method for simultaneously determining 10 illegally added chemical antihypertensive drugs in health foods. Method： ACQUITY UPLC?BEH C18（ 2.1 mm×100 mm， 1.7 μm） column was used in the liquid phase with ultrapure water （containing 0.1% formic acid）-acetonitrile （0.1% formic acid） as the mobile phase for gradient elution， the injection volume was 2 μL， flow rate was 0.3 mL·min-1，?and column temperature was 30 ℃. The mass spectrometry was performed by ESI， positive/negative ion multiple reaction?monitoring mode for qualitative and quantitative analysis. Result： The separation degree of propranolol， metoprolol， amlodipine， bisoprolol， candesartan， irbesartan， telmisartan， losartan， valsartan， and indapamide was good， and the linear range correlations were good， all R2 values were greater than 0.996 3. The average recovery rate was 93%～118%. RSD was 1.4%～4.9% （n=6）. The LOD was between 0.10～5.00 μg·kg-1， and the LOQ was between 0.30～15.00 μg·kg-1. A single analysis only requires 12 min. Conclusion： The method is simple to operate， has short detection time， high sensitivity， and accurate results， and it is suitable for the rapid screening and quantitative detection of 10 illegally added chemical antihypertensive drugs in health foods.

Keywords： UPLC-MS/MS; health food; antihypertensive drugs

隨著近年來我國經(jīng)濟(jì)的迅速發(fā)展，人們的生活質(zhì)量得到了很大提高，同時(shí)老年人口不斷增加，導(dǎo)致出現(xiàn)越來越多的高血壓患者，市場(chǎng)上也出現(xiàn)了越來越多的輔助降壓類保健食品。為了牟取不當(dāng)利益，一些不法分子會(huì)在保健食品中非法添加化學(xué)藥物，以增強(qiáng)其產(chǎn)品功效。非法添加化學(xué)藥物的保健食品很可能給服用者帶來一定的副作用和不良反應(yīng)，嚴(yán)重的甚至導(dǎo)致死亡。因此國家嚴(yán)厲打擊化學(xué)藥物在保健食品中被非法添加的違法違規(guī)行為，而對(duì)這類非法保健食品進(jìn)行檢測(cè)，成為相關(guān)部門監(jiān)管執(zhí)法的重要依據(jù)。目前，我國頒布的針對(duì)輔助降血壓類保健食品中非法添加化學(xué)藥物的檢驗(yàn)方法有藥品監(jiān)督管理局藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件2009032、2014008兩份文件，主要針對(duì)利血平、硝苯地平等12種降壓類化學(xué)藥物的檢驗(yàn)[1]。本文篩選了另外10種降壓類化學(xué)藥物，建立了用UPLC-MS/MS快速定性和定量分析保健食品中這10種化學(xué)藥物的方法[2-8]。

本方法增加了篩查覆蓋面、提高了檢驗(yàn)效率，可為監(jiān)管部門的監(jiān)管工作提供技術(shù)保障。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

鹽酸普萘洛爾（批號(hào)：ALT600791）、酒石酸美托洛爾（批號(hào)：ALT702199）、艾司洛爾（批號(hào)：ALT701847）、比索洛爾（批號(hào)：FS1619422）、纈沙坦（批號(hào)：ALT601380）、氯沙坦（批號(hào)：ALT601382）、厄貝沙坦（批號(hào)：ALT601379）、坎地沙坦（批號(hào)：FS1619633）、替米沙坦（批號(hào)：FS1606242）、吲達(dá)帕胺（批號(hào)：FS1605112），均購自天津阿爾塔科技有限公司；色譜純乙腈（品牌：默克）；色譜純甲酸（品牌：ROE）；水為超純水；三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀（愛博才思公司，Triple Quad 5500）。

1.2 色譜與質(zhì)譜條件

1.2.1 色譜條件

色譜柱：ACQUITY UPLC?BEH C18（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相：A相為超純水（含0.1%甲酸），B相為乙腈（含0.1%甲酸）；流速：0.3 mL·min-1；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：2 μL；梯度洗脫見表1。

1.2.2 質(zhì)譜條件

（1）鹽酸普萘洛爾等9種化合物。離子源：ESI；掃描方式：MRM，正離子模式；氣簾氣：20 psi；離子化電壓：5 500 V；溫度：500 ℃；噴霧氣（GS1）：50 psi；輔助加熱氣（GS2）：50 psi。

（2）纈沙坦。離子源：ESI；掃描方式：MRM，負(fù)離子模式；氣簾氣：20 psi；離子化電壓：-4 500 V；溫度：500 ℃；噴霧氣（GS1）：50 psi；輔助加熱氣（GS2）：50 psi。各化合物質(zhì)譜參數(shù)見表2。

1.3 混合標(biāo)準(zhǔn)曲線系列的制備

精密稱取上述10種化合物的對(duì)照品各10 mg，用乙腈溶解，并轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中定容，配制成濃度為1.0 mg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。用乙腈將混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1.0 mg·mL-1）稀釋1 000倍，配制成1 000 ng·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。用超純水將混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（1 000 ng·mL-1）分別稀釋成濃度為10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1、200 ng·mL-1、300 ng·mL-1和500 ng·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)曲線系列。

1.4 樣品處理方法

稱取1 g（精確到0.001 g）樣品置于50 mL離心管中，往離心管中加入20 mL乙腈，渦旋混勻后超聲提取15 min，用離心機(jī)（轉(zhuǎn)速：5 000 r·min-1）離心10 min，然后轉(zhuǎn)移上清液到50 mL容量瓶中，重復(fù)上述步驟，將上清液合并，用乙腈定容至50 mL，搖勻，取上清液過0.22 μm微孔濾膜，濾液直接供測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 專屬性試驗(yàn)

分別將混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 ng·mL-1）、加標(biāo)供試品溶液（加標(biāo)濃度100 ng·mL-1），按“1.2”項(xiàng)下測(cè)定，結(jié)果見圖1、圖2。結(jié)果顯示對(duì)照品與加標(biāo)供品中各組分色譜峰保留時(shí)間一致，且各組分間無干擾，表明方法專屬性良好。

2.2 線性范圍與檢出限、定量限試驗(yàn)

將“1.3”項(xiàng)下的混合標(biāo)準(zhǔn)曲線系列溶液按“1.2”項(xiàng)下測(cè)定，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，橫坐標(biāo)（X）為混合標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，縱坐標(biāo)（Y）為各成分峰面積。取陰性樣品，按100 μg·kg-1的添加量加入混合對(duì)照品溶液，經(jīng)適當(dāng)稀釋后進(jìn)樣，分別以S/N=3時(shí)和S/N=10時(shí)計(jì)算各化合物的檢出限和定量限，結(jié)果見表3。10種化合物在線性范圍內(nèi)相關(guān)性均較好，且具有較高的靈敏度，能夠滿足檢測(cè)要求。

2.3 加標(biāo)回收率及重復(fù)性試驗(yàn)

按“1.4”項(xiàng)下方法平行制備6份加標(biāo)濃度為100 ng·mL-1的加標(biāo)供試品溶液，并按“1.2”項(xiàng)下測(cè)定，記錄色譜峰面積，計(jì)算RSD，同時(shí)代入“2.2”項(xiàng)下線性回歸方程中計(jì)算平均濃度，并計(jì)算平均回收率，結(jié)果見表4。該方法各化合物的平均回收率在93%～118%，結(jié)果比較滿意；RSD范圍在1.4%～4.9%，重復(fù)性較好。

2.4 進(jìn)樣精密度試驗(yàn)

取100 ng·mL-1混合標(biāo)準(zhǔn)溶液平行測(cè)定6次的RSD評(píng)價(jià)精密度。由表5可知，各化合物的精密度均符合檢測(cè)要求。

2.5 基質(zhì)效應(yīng)考察結(jié)果

將不含目標(biāo)待測(cè)物的膠囊樣品按“1.4”項(xiàng)下方法處理后得到基質(zhì)空白溶液，分別向基質(zhì)空白和乙腈中添加一定濃度的待測(cè)物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行UPLC-MS/MS分析。通過計(jì)算各化合物在基質(zhì)溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液中峰面積的比值，用來評(píng)價(jià)樣品的基質(zhì)效應(yīng)。若兩者的峰面積之比在80%～120%，表明基質(zhì)效應(yīng)不明顯；在50%～80%或120%～150%，表明存在輕微的基質(zhì)效應(yīng)；低于50%或高于150%則表明基質(zhì)效應(yīng)極其顯著[4-5]。測(cè)得結(jié)果分別為鹽酸普萘洛爾126%、酒石酸美托洛爾109%、艾司洛爾122%、比索洛爾117%、氯沙坦121%、厄貝沙坦136%、坎地沙坦122%、替米沙坦96%、吲達(dá)帕胺111%和纈沙坦103%，由此可知，鹽酸普萘洛爾、艾司洛爾、氯沙坦、厄貝沙坦、坎地沙坦均存在輕微的基質(zhì)效應(yīng)，酒石酸美托洛爾、比索洛爾、替米沙坦、吲達(dá)帕胺、纈沙坦基質(zhì)效應(yīng)不明顯。因此，可采用配制基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法來減少基質(zhì)對(duì)目標(biāo)化合物的影響，以提高定量分析的準(zhǔn)確度。

2.6 供試品的含量測(cè)定

采用所建立的方法對(duì)5種輔助降壓類保健食品進(jìn)行了檢測(cè)，均未檢出上述10種化合物。同時(shí)做加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，加標(biāo)水平均為5.00 mg·kg-1，結(jié)果見表6，10種化合物回收率均在86%～118%，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

3 結(jié)論

隨著治療高血壓的化學(xué)藥品種越來越多，在輔助降壓類保健食品中可能被非法添加的種類和方式也越來越多樣，需要通過不斷的研究和試驗(yàn)，以滿足現(xiàn)實(shí)檢測(cè)的需要。本方法的前處理簡(jiǎn)單快速、樣品檢測(cè)時(shí)間短、靈敏度高且結(jié)果準(zhǔn)確可靠，擴(kuò)大了降壓類非法添加化學(xué)藥物的篩查范圍，為保障公眾食品安全，打擊違法添加行為，監(jiān)管保健食品市場(chǎng)提供了有力的技術(shù)支持。

參考文獻(xiàn)

[1]王超，祝波，楊釗.RRLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定保健食品中31種降糖、降壓、降血脂類非法添加化學(xué)藥物[J].中國藥師，2019，22（10）：1946-1950.

[2]王偉姣，龍凌云，姜成君，等.UPLC-MS/MS法測(cè)定保健食品中添加的114個(gè)化學(xué)藥[J].藥物分析雜志，2019，39（12）：2157-2170.

[3]丁寶月，屠婕紅，薛磊冰，等.UPLC-MS/MS法快速測(cè)定降壓類中成藥及保健食品中非法添加34種化學(xué)藥的研究[J].中草藥，2015，46（5）：688-696.

[4]劉子雄，黃景輝，譚貴良，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定保健食品中78種非法添加化學(xué)藥物[J].現(xiàn)代食品科技，2020，36（12）：283-292.

[5]李錦清，綦艷，酈明浩，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定保健品中三種違禁成分[J].現(xiàn)代食品科技，2014，30（11）：246-250.

[6]鄭叢忠，肖亮，薛芳.高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定輔助降壓類保健食品中的5種非法添加物[J].福建分析測(cè)試，2020，29（4）：13-16.

[7]曾羲，戚平，汪寧，等.HPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定口服液保健食品中非法添加的降壓和壯陽抗疲勞類藥物[J].農(nóng)產(chǎn)品加工，2020，512（18）：55-58.

[8]黃柳倩，壽林均，胡磊，等.HPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定三高（高血糖、高血脂、高血壓）人群用保健食品中添加的45個(gè)化學(xué)藥物[J].藥物分析雜志，2019，39（3）：484-495.