海南稻作區(qū)稻瘟病菌AvrPik等位基因的變異監(jiān)測(cè)與多樣性分析

危藝可 王倩 吳偉懷 陸英 賀春萍 梁艷瓊 易克賢

摘要 海南省地處熱帶。由于具有國(guó)內(nèi)其他地區(qū)無(wú)可比擬的光溫資源優(yōu)勢(shì)，每年有大量的水稻材料在南繁區(qū)繁育與種植，給稻瘟病菌的變異及傳播帶來(lái)了極大的便利。自20世紀(jì)70年代以來(lái)，Pik等位基因已被廣泛地用作水稻抗稻瘟病育種的主要抗源。為了解海南稻瘟病菌AvrPik等位基因的變異及多樣性，本研究從海南稻作區(qū)采集穗莖瘟病樣，通過(guò)單孢分離獲得100株稻瘟病菌株。利用AvrPik基因特異性引物擴(kuò)增病原菌DNA，所得PCR產(chǎn)物經(jīng)克隆、測(cè)序后與參考序列進(jìn)行比對(duì)分析。結(jié)果從100株菌株中鑒定出AvrPik_A、AvrPik_B、AvrPik_D、AvrPik_E和AvrPik_F共5種等位基因類(lèi)型。其中AvrPik_D類(lèi)型最多，出現(xiàn)頻率為50.00%;其次為AvrPik_E類(lèi)型，出現(xiàn)頻率為32.08%;第三為AvrPik_B類(lèi)型，出現(xiàn)頻率為8.49%。在A(yíng)vrPik等位基因核苷酸多樣性方面，非信號(hào)肽區(qū)域多樣性要明顯高于信號(hào)肽區(qū)域。就群體受到的選擇壓而言，南繁種植區(qū)與常規(guī)種植區(qū)的稻瘟病菌群體的Ka/Ks值均大于1，分別為2.703 1和1.236 6，表明，無(wú)論是南繁區(qū)還是常規(guī)種植區(qū)，AvrPik等位基因均受到了強(qiáng)烈的正選擇壓，且南繁區(qū)群體受到的選擇壓更強(qiáng)。上述5種不同基因型的代表菌株中菌株20MG48 （AvrPik_F）長(zhǎng)勢(shì)最快，其產(chǎn)孢量卻最少。本研究初步明確了海南稻作區(qū)AvrPik等位基因的群體結(jié)構(gòu)，為本稻作區(qū)抗性品種的布局以及抗瘟育種計(jì)劃提供參考。

關(guān)鍵詞 稻瘟病菌;?AvrPik等位基因;?多樣性

中圖分類(lèi)號(hào)： S 435.111.41

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：?A

DOI：?10.16688/j.zwbh.2021682

Abstract Hainan province is located in the tropical region. Because of the incomparable advantages of light and temperature resources in Hainan over the other regions in China， a large number of rice varieties are bred and planted in off-season breeding areas in Hainan every year， which brings great convenience to the variation and transmission of Magnaporthe oryzae. The major resistant gene Pik for rice blast and its alleles have been extensively exploited as sources of genetic resistance in rice breeding programs since 1970s. In order to understand the variation and diversity of AvrPik alleles in Magnaporthe oryzae in rice-growing areas of Hainan， 100 M. oryzae strains were isolated from the rice growing areas of Hainan. The AvrPik genes were cloned from the genomic DNA， sequenced and then compared with the reference sequences. Finally， five main allele genotypes including AvrPik_A， AvrPik_B， AvrPik_D， AvrPik_E and AvrPik_F were identified. The frequencies of AvrPik_D， AvrPik_E and AvrPik_B were 50.00%， 32.08%， 8.49%， respectively. In terms of the nucleotide diversity of AvrPik alleles， the nucleotide diversity of non-signal peptide regions was obviously higher than that of signal peptide regions. In terms of selection pressure on populations， the Ka/Ks ratios of M.oryzae populations from off-season breeding area and the conventional cultivation area were all greater than 1 （2.703 1 and 1.236 6， respectively）. These results indicated that AvrPik alleles in both growing areas were subjected to strong positive selection pressure， and the pressure on AvrPik alleles in off-season breeding area were stronger than that in the conventional area. The hypha of strain 20MG48 （AvrPik_F） grew fastest， but its spore production was the least among the five representative strains. The population structure of Avrpik alleles was preliminarily clarified in rice-growing areas of Hainan province， which provides a reference for the planting of resistant varieties and the breeding program for blast resistance in the rice growing area.

Key words Magnaporthe oryzae;?AvrPik alleles;?diversity

海南省地處熱帶，素有“天然大溫室”之美稱(chēng)，具有國(guó)內(nèi)其他地區(qū)無(wú)可比擬的光溫資源優(yōu)勢(shì)，是我國(guó)著名的南繁基地。幾十年來(lái)，“南繁”在加速水稻品種改良、原原種擴(kuò)繁和制種方面為國(guó)家農(nóng)業(yè)發(fā)展做出了巨大貢獻(xiàn)。我國(guó)育成的雜交水稻新組合中80%以上經(jīng)過(guò)了南繁加代選育。生產(chǎn)上使用品種的更新周期由過(guò)去的10年以上縮短到目前的5～7年［1］。南繁已經(jīng)成為新品種選育的“孵化器”和“加速器”，而南繁基地則被譽(yù)為中國(guó)種業(yè)的“硅谷”［2］。與此同時(shí)，南繁成為“全國(guó)和世界危險(xiǎn)性有害生物的匯集地及中轉(zhuǎn)站”的風(fēng)險(xiǎn)也逐漸加大。生物安全將成為南繁最大的威脅，如控制不力，海南將成為有害生物的大“染缸”。就水稻稻瘟病而言，作為水稻新品種培育、種子生產(chǎn)和質(zhì)量鑒定的南繁基地，每年都有大批的種子、種苗頻繁出入基地，給稻瘟病菌的變異及傳播帶來(lái)了極大的便利。

稻瘟病是全球水稻生產(chǎn)上最具毀滅性的病害之一［3］。種植抗病品種是防治該病最經(jīng)濟(jì)、環(huán)保的策略。然而，水稻寄主特異抗性的表達(dá)不僅取決于該品種本身的抗病基因型，還取決于稻瘟病菌的無(wú)毒基因型［4-5］。因此，準(zhǔn)確地了解稻瘟病菌無(wú)毒基因的群體結(jié)構(gòu)及其變異規(guī)律，是實(shí)現(xiàn)抗性品種合理培育與利用，以及病情預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)所面臨的課題。

Pik位點(diǎn)是位于水稻第11號(hào)染色體長(zhǎng)臂近端粒處的一個(gè)主效抗稻瘟病位點(diǎn)。由于該位點(diǎn)具有Pi-k、Pi-kp、Pi-km、Pi-kh等多個(gè)等位基因［6-12］，且均對(duì)水稻稻瘟病具有較高的抗性，因此，自20世紀(jì)70年代以來(lái)，這些基因被廣泛地用作水稻抗稻瘟病育種的主要抗源［6， 10， 13-14］。目前該位點(diǎn)的合理持續(xù)應(yīng)用仍有很大的挖掘潛力［6， 13， 15-17］。與Pik等位基因?qū)?yīng)的無(wú)毒基因?yàn)锳vrPi-k/-kp/-km/-kh （后續(xù)簡(jiǎn)寫(xiě)為AvrPik）［16， 18-20］。

無(wú)毒基因AvrPik從稻瘟病菌Magnaporthe oryzae日本菌株Ina168中發(fā)現(xiàn)，編碼由113個(gè)氨基酸組成的分泌蛋白，含有2個(gè)保守結(jié)構(gòu)域，該蛋白能被水稻抗性基因Pik編碼的蛋白識(shí)別，并引起防御響應(yīng)［18］。田間稻瘟病菌群體中AvrPik等位基因既有基因存在/缺失，又有單堿基突變，Yoshida等檢測(cè)了日本田間稻瘟病菌菌株的AvrPik等位基因型，并將不同點(diǎn)突變類(lèi)型命名為AvrPik_A、AvrPik_B、AvrPik_C、AvrPik_D、AvrPik_E等［18］。Wu等分析了來(lái)自我國(guó)廣東、湖南、黑龍江、遼寧的240株稻瘟病菌菌株的AvrPik等位基因，發(fā)現(xiàn)在編碼區(qū)共存在16個(gè)SNP （single nucleotide polymorphism， SNP），其中4個(gè)SNP在所測(cè)試的菌株中廣泛存在，且與Pik等位基因之間存在階梯性“軍備競(jìng)賽”關(guān)系［19］。Zhang等利用Avr基因特異性引物對(duì)1975年－2009年從美國(guó)南部商業(yè)農(nóng)田采集的258株稻瘟病菌基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增及測(cè)序，檢測(cè)出AvrPik_F、AvrPik_G、AvrPik_H、AvrPik_I、AvrPik_J、AvrPik_K等新類(lèi)型［21］。然而，海南作為水稻的南繁區(qū)以及重要生產(chǎn)區(qū)，其稻瘟病菌無(wú)毒基因AvrPik的群體結(jié)構(gòu)及其變異仍不清楚。為此本文開(kāi)展了海南稻作區(qū)無(wú)毒基因群體結(jié)構(gòu)的研究，研究結(jié)果將有助于抗瘟材料的創(chuàng)制及應(yīng)用，對(duì)保障國(guó)家糧食安全和種業(yè)發(fā)展安全具有不可替代的作用。

1?材料與方法

1.1?病樣采集與單孢分離

在水稻生長(zhǎng)季節(jié)，從海南三亞、陵水、樂(lè)東、保亭、東方、瓊中、白沙、屯昌、瓊海、定安、文昌等地水稻田采集穗莖瘟病樣。獲得的稻瘟病樣品于室內(nèi)常溫保濕，24 h后于超凈臺(tái)上進(jìn)行單孢分離。用于本研究的100個(gè)菌株來(lái)源信息見(jiàn)表1。其中61個(gè)菌株來(lái)自三亞、陵水、樂(lè)東、保亭和東方的南繁育種區(qū)，39個(gè)菌株來(lái)自瓊中、白沙、屯昌、瓊海、定安和文昌的常規(guī)種植區(qū)。所獲菌株保存于中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所。

1.2?菌絲體的培養(yǎng)及DNA提取

將單孢菌株從PDA試管轉(zhuǎn)移至PDA平板培養(yǎng)，5 d后挑取2～3個(gè)菌絲塊于液體培養(yǎng)基（1%葡萄糖，0.3%酵母粉）中，28℃，180 r/min振蕩培養(yǎng)4～5 d。用滅菌紗布和濾紙過(guò)濾收集菌絲體，凍干后于-20℃冰箱中保存?zhèn)溆?。病原菌基因組總DNA提取參照OMEGA真菌DNA小量提取試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3?PCR擴(kuò)增與AvrPik基因克隆測(cè)序

參照GenBank登錄號(hào)AB498875～AB498879的序列設(shè)計(jì)AvrPik等位基因的特異性引物AvrPikF （5′-GAAGGTCACGGTTTGAAGAGG-3′）和AvrPikR （5′-ATTATCTTATGAGCCGTCAACCA-3′）。引物由英濰捷基（廣州）貿(mào)易有限公司合成。以該引物擴(kuò)增各菌株的總DNA，預(yù)期大小為615 bp。PCR反應(yīng)總體系為20 μL：包含10×PCR buffer 2 μL，10× dNTPs 1.6 μL，rTaq酶 0.2 μL，10 μmol/L正、反向引物各0.5 μL，模板DNA 1.0 μL，ddH2O 14.2 μL。PCR擴(kuò)增條件為：94℃預(yù)變性3 min;94℃變性30 s，60℃退火15 s，72℃延伸50 s，34個(gè)循環(huán);72℃延伸5 min，最后于4℃保存。PCR產(chǎn)物經(jīng)1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的純度直接或回收后與克隆載體pEASYTM連接。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，經(jīng)藍(lán)白斑篩選后選取3個(gè)陽(yáng)性克隆送英濰捷基（廣州）貿(mào)易有限公司測(cè)序。

1.4?AvrPik等位基因的FNP分型

每個(gè)克隆的序列去除載體序列后，以AB498875～AB498879標(biāo)準(zhǔn)序列［18］作為參考，對(duì)編碼區(qū)第136、139、143、200、233、234等6個(gè)功能性核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)（functional nucleotide polymorphism，F(xiàn)NP）進(jìn)行比對(duì)。上述位點(diǎn)堿基如與AB498876一致則該序列（菌株）記為AvrPik_A型;如與AB498877一致則該序列（菌株）記為AvrPik_B型;如與AB498878一致則該序列（菌株）記為AvrPik_C型;如與AB498875一致則該序列（菌株）記為AvrPik_D型;如與AB498879一致則該序列（菌株）記為AvrPik_E型。其余類(lèi)型則參照Z(yǔ)hang等［21］。

1.5?DNA核苷酸多態(tài)性與選擇壓分析

核苷酸多態(tài)性主要由Tajimas π指標(biāo)［22］來(lái)反映。π值通過(guò)軟件DnaSP version 5.0［23］計(jì)算。選擇壓通過(guò)Ka/Ks值來(lái)反映。利用DnaSP version 5.0分別計(jì)算Ka （非同義替換率， non-synonymous substitution rate）與Ks （同義替換率， synonymous substitution rate），進(jìn)而計(jì)算Ka/Ks值。如果Ka/Ks＞1，則認(rèn)為存在正選擇效應(yīng);如果Ka/Ks=1，則認(rèn)為存在中性選擇效應(yīng);如果Ka/Ks＜1，則認(rèn)為存在負(fù)選擇效應(yīng)。

1.6?具有不同AvrPik等位基因類(lèi)型菌株培養(yǎng)觀(guān)察

經(jīng)序列比對(duì)篩選，選取具有不同AvrPik 等位基因類(lèi)型的菌株，于PDA平板上培養(yǎng)，10 d后測(cè)量菌落直徑。于超凈臺(tái)中，加少量滅菌蒸餾水用藥勺將氣生菌絲刮洗干凈，置于自制產(chǎn)孢箱28℃培養(yǎng)2～4 d，加1 mL滅菌雙蒸水（ddH2O）配制孢子懸浮液，于顯微鏡下觀(guān)察分生孢子形態(tài)，通過(guò)血球計(jì)數(shù)板計(jì)算產(chǎn)孢量。

2?結(jié)果與分析

2.1?AvrPik等位基因關(guān)鍵FNP位點(diǎn)分型

利用AvrPikF/AvrPikR引物擴(kuò)增菌株DNA，100個(gè)菌株DNA中有93個(gè)菌株DNA擴(kuò)增出預(yù)期大?。?15 bp）的特異條帶（圖1），其余7個(gè)菌株擴(kuò)增出雙條帶，其中一條與目標(biāo)條帶大小一致（615 bp），另外一條略大于目標(biāo)條帶（1 115 bp） （圖2）。

93個(gè)條帶單一菌株的PCR產(chǎn)物克隆后經(jīng)測(cè)序比對(duì)發(fā)現(xiàn)，其中6個(gè)菌株（20MG158、20MG167、20MG201、20MG204、20MG206、MG42）存在兩種不同類(lèi)型的AvrPik等位基因，因此共得到99條DNA序列。而7個(gè)雙條帶的菌株（20MG102、20MG103、20MG105、20MG108、20MG122、20MG131、20MG136），經(jīng)膠回收測(cè)序后序列比對(duì)表明，同一樣品的兩個(gè)條帶均含有完整且相同的AvrPik等位基因，只是比目標(biāo)條帶大的條帶（1 115 bp）在編碼區(qū)終止密碼子后有一個(gè)500 bp的序列插入，故均只保留目標(biāo)條帶序列用于后續(xù)分析。

最終，從供試的100個(gè)菌株中共獲得了106條AvrPik等位基因序列。其中來(lái)自南繁區(qū)菌株序列63條，常規(guī)種植區(qū)菌株序列43條。經(jīng)與已報(bào)道的參考序列進(jìn)行比對(duì)，在342 bp的編碼區(qū)中存在6個(gè)FNP位點(diǎn)（#136、#139、#143、#200、#233、#234）。最終鑒定出AvrPik_A、AvrPik_B、AvrPik_D、AvrPik_E、AvrPik_F共5種AvrPik等位基因型（表2）。其中AvrPik_D檢出最多，其檢出頻率為50.00%，為優(yōu)勢(shì)類(lèi)型;其次為AvrPik_E，其檢出頻率為32.08%。然而，在這106條菌株序列中沒(méi)有檢測(cè)到AvrPik_C類(lèi)型。

2.2?AvrPik等位基因核苷酸多樣性與選擇壓分析

將測(cè)序獲得的106條序列輸入MEGA軟件進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)AvrPik等位基因的編碼區(qū)中共存在62個(gè)SNP位點(diǎn)，其中9個(gè)同義突變（#43、#87、#96、#111、#150、#162、#246、#249、#279），53個(gè)非同義突變。非同義突變中C136A、C139G、G143A、C200A、T233A、G234A位點(diǎn)普遍存在，即關(guān)鍵的6個(gè)FNP位點(diǎn)。

進(jìn)一步從結(jié)構(gòu)域與群體水平方面分析AvrPik等位基因核苷酸多樣性。在結(jié)構(gòu)域水平上，整個(gè)編碼區(qū)共檢測(cè)到62個(gè)SNP位點(diǎn)，其中7個(gè)來(lái)自信號(hào)肽區(qū)，55個(gè)來(lái)自非信號(hào)肽區(qū)。非信號(hào)肽區(qū)的核苷酸多樣性（0.008 92）明顯高于信號(hào)肽區(qū)（0.002 97）。表明AvrPik等位基因核苷酸多樣性在這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間存在明顯差異（表3）。在群體方面，南繁區(qū)與常規(guī)種植區(qū)群體檢測(cè)出變異位點(diǎn)數(shù)分別為43個(gè)和24個(gè)，其對(duì)應(yīng)的核苷酸多樣性也是南繁區(qū)（0.009 26）高于常規(guī)種植區(qū)（0.005 02） （表3）。

結(jié)構(gòu)域與群體的Ka/Ks檢驗(yàn)表明，Ka/Ks值在非信號(hào)肽區(qū)與信號(hào)肽區(qū)分別為2.054 8與3.223 8?？梢?jiàn)AvrPik等位基因受到正選擇壓作用（表3）。在群體方面，南繁區(qū)（2.703 1）的Ka/Ks值明顯高于常規(guī)種植區(qū)（1.236 6）。表明，南繁區(qū)的AvrPik等位基因受到了強(qiáng)烈的正選擇壓，且強(qiáng)于常規(guī)種植區(qū)受到的選擇壓（表3）。

2.3?不同AvrPik等位基因的菌株生長(zhǎng)特性比較

經(jīng)序列比對(duì)確認(rèn)后，選取只在6個(gè)FNP位點(diǎn)存在差異（其余位點(diǎn)均一致）的菌株，即20MG56 （AvrPik_A）、20MG189 （AvrPik_B）、20MG108 （AvrPik_D）、20MG27 （AvrPik_E）、20MG48 （AvrPik_F）共5個(gè)菌株進(jìn)行表型觀(guān)察。培養(yǎng)10 d后，5個(gè)菌株的菌落形態(tài)均為圓形;除20MG27 （AvrPik_E）菌絲體為黑灰色外，其余菌株菌絲均為灰白色（圖3）。在生長(zhǎng)速率方面，菌株20MG48 （AvrPik_F）生長(zhǎng)最快，其平均菌落直徑為65.8 mm;菌株20MG189 （AvrPik_B）生長(zhǎng)最慢，其平均菌落直徑為46.9 mm （表4）。顯微鏡觀(guān)察顯示，各個(gè)菌株的孢子形態(tài)無(wú)差異。在產(chǎn)孢方面，菌株20MG189 （AvrPik_B）和20MG108 （AvrPik_D）的產(chǎn)孢量較大，平均產(chǎn)孢數(shù)分別為8.75×107個(gè)/皿和8.55×107個(gè)/皿;菌株20MG48 （AvrPik_F）的產(chǎn)孢量最少，平均產(chǎn)孢數(shù)為9.0×106個(gè)/皿（表4）。

3?結(jié)論與討論

海南省雖然不是中國(guó)的稻米生產(chǎn)大省，但得天獨(dú)厚的氣候優(yōu)勢(shì)使其成為全國(guó)雜交水稻種子生產(chǎn)大省。海南雜交水稻種子生產(chǎn)優(yōu)勢(shì)區(qū)域規(guī)劃面積約為1.27萬(wàn) hm2，主要集中在北部的臨高，南部的樂(lè)東、三亞、陵水及周邊地區(qū)［1］。與南繁基地形成鮮明對(duì)比的是，常規(guī)水稻生產(chǎn)分布于全島，多為小農(nóng)戶(hù)生產(chǎn)模式，管理粗放，部分稻田稻瘟病、白葉枯病、稻飛虱、稻縱卷葉螟等病蟲(chóng)害發(fā)生嚴(yán)重［2］。由于水稻生產(chǎn)在海南尚未形成一個(gè)高效產(chǎn)業(yè)，故在水稻病蟲(chóng)害防控及科研投入方面還比較薄弱。針對(duì)海南稻瘟病菌的研究主要側(cè)重于水稻品種對(duì)稻瘟病的抗性調(diào)查、鑒定與評(píng)價(jià)方面［2， 24］。

然而，無(wú)論是南繁育種區(qū)還是常規(guī)水稻種植區(qū)，稻瘟病均是水稻生產(chǎn)所面臨的障礙。因此，系統(tǒng)、準(zhǔn)確地了解海南稻瘟病菌的群體遺傳結(jié)構(gòu)及其變異規(guī)律是一個(gè)不可回避的課題。朱名海等對(duì)6個(gè)無(wú)毒基因（ACE1、AvrPia、AvrPik、AvrPita、AvrPiz-t和PWL2）在南繁核心區(qū)和非核心區(qū)60個(gè)稻瘟病菌菌株中的分布情況進(jìn)行了PCR檢測(cè)，初步明確了這6個(gè)無(wú)毒基因在南繁區(qū)稻瘟病菌菌株中的分布規(guī)律［25］。本研究利用AvrPik基因特異性引物對(duì)海南稻作區(qū)分離的100株穗莖瘟菌株進(jìn)行DNA擴(kuò)增并對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆和序列分析。結(jié)果鑒定出AvrPik_A、AvrPik_B、AvrPik_D、AvrPik_E和AvrPik_F共5種主要等位基因類(lèi)型，其中AvrPik_D類(lèi)型最多，出現(xiàn)頻率為50.00%。2012年Kanzaki等［26］對(duì)來(lái)自歐洲（3個(gè)）、美洲（6個(gè)）、非洲（7個(gè)）、亞洲（23個(gè)）共計(jì)39個(gè)稻瘟病菌菌株的AvrPik等位基因型進(jìn)行了分析，其中AvrPik_D為主要類(lèi)型，本研究結(jié)果與其一致。不同的是Kanzaki等沒(méi)有檢測(cè)出AvrPik_B類(lèi)型，而本研究未檢測(cè)出AvrPik_C類(lèi)型。Li等對(duì)我國(guó)云南省東南、西南、東北以及西北稻作區(qū)的366個(gè)稻瘟病菌株進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)AvrPik等位基因檢出率為66.7%～90.3%，并且除AvrPik_A、B、C、D、E類(lèi)型之外，還鑒定出5個(gè)不同的等位基因類(lèi)型［27］。由此可見(jiàn)，AvrPik等位基因存在地理分化，在不同水稻生產(chǎn)區(qū)出現(xiàn)了不同的變異，因此在生產(chǎn)應(yīng)用過(guò)程中，種植含有Pik等位基因抗性品種時(shí)，應(yīng)掌握目標(biāo)區(qū)域AvrPik等位基因類(lèi)型的組成和分布情況，科學(xué)地進(jìn)行水稻稻瘟病抗性品種布局，有的放矢地開(kāi)展抗瘟育種工作。

對(duì)南繁區(qū)與常規(guī)種植區(qū)病原菌群體核苷酸多樣性及其所承受的選擇壓分析表明，南繁區(qū)病原菌AvrPik等位基因的核苷酸多樣性與選擇壓均高于常規(guī)種植區(qū)。其原因可能是兩個(gè)區(qū)域稻種資源的抗性水平存在差異。與常規(guī)種植區(qū)相比，南繁區(qū)稻種資源更豐富，每年有大量包括Pik等位基因在內(nèi)的抗源材料或抗性品種進(jìn)入南繁區(qū)選育、加代種植等。而在稻瘟病菌與水稻長(zhǎng)期協(xié)同進(jìn)化過(guò)程中，AvrPik等位基因受到了水稻抗性基因Pik的定向選擇，與此同時(shí)，AvrPik等位基因?yàn)榱颂颖躊ik等位基因的識(shí)別產(chǎn)生了更加豐富的變異。

本研究觀(guān)察了5個(gè)含有不同AvrPik等位基因型的代表菌株的生長(zhǎng)特性和產(chǎn)孢能力。結(jié)果表明，5個(gè)菌株在菌落生長(zhǎng)以及產(chǎn)孢能力方面存在一定差異。這一結(jié)果與郭敬瑋等對(duì)云南羅平120個(gè)田間稻瘟病菌株性狀研究結(jié)果一致［28］。本研究中5個(gè)菌株的差異是否與AvrPik等位基因型相關(guān)聯(lián)，還有待選取更多的田間菌株進(jìn)行培養(yǎng)比較，以及進(jìn)一步通過(guò)克隆與遺傳轉(zhuǎn)化，獲得單個(gè)基因的陽(yáng)性克隆子進(jìn)行深入研究。

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（責(zé)任編輯：楊明麗）