白木香葉總黃酮含量的跟蹤研究

張周英　陳建華　黃群　梁林源

【摘要】 本文對(duì)白木香葉在不同季節(jié)進(jìn)行采摘， 對(duì)其葉子進(jìn)行總黃酮的提純和總黃酮含量的測(cè)定進(jìn)行跟蹤研究， 探討白木香葉總黃酮含量最高的季節(jié)， 得出最優(yōu)的采摘時(shí)間， 為6～9月份的中旬， 這段時(shí)間的總黃酮含量相對(duì)最高。通過進(jìn)一步跟蹤調(diào)查研究， 以最大限度的實(shí)現(xiàn)白木香葉的經(jīng)濟(jì)價(jià)值， 為廣泛的開展該植物的種植技術(shù)提供必要的理論和現(xiàn)實(shí)實(shí)踐價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】 白木香葉；測(cè)量總黃酮；跟蹤對(duì)比；統(tǒng)計(jì)

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.15.114

Follow-up study of total flavonoid content in leaves of Aquilaria sinensis ZHANG Zhou-ying， CHEN Jian-hua， HUANG Qun， et al. Department of Pharmacy， Guangdong Province Maoming City Peoples Hospital， Maoming 525000， China

【Abstract】 This paper is a follow-up study for total flavonoids purification and content measurement of leaves of Aquilaria sinensis when they are collected in different seasons. It is concluded that the best collecting time for leaves of Aquilaria sinensis is from June to middle of September， and the total flavonoids content is relatively high in this period. Further tracking survey research should be made to maximize the economic value of leaves of Aquilaria sinensis， so as to provide the necessary theoretical and practical value for extensive development of the plant cultivation technology.

【Key words】 Leaves of Aquilaria sinensis； Measure of total flavonoid； Tracking comparison； Statistics

沉香是白木香含樹脂類代表木材， 屬瑞香科植物。從其產(chǎn)地來看， 是廣東本土藥材。從中醫(yī)辨證施治治療思想來看， 該植物具有“溫中補(bǔ)氣、疏胃調(diào)肝、鎮(zhèn)痛平喘”之功效[1]。白木香葉為白木香的非藥用部位， 但其具有白木香功效的一些相同特點(diǎn)[2]， 本課題對(duì)其中所含的總黃酮含量進(jìn)行了測(cè)定， 以期為白木香葉得出最優(yōu)的采摘時(shí)間提供參考。本研究基于上述研究方略， 對(duì)實(shí)現(xiàn)白木香葉資源的綜合利用， 具體報(bào)告如下。

1 材料來源

1. 1 儀器與試劑

1. 2 儀器 電子天平， SP-1900/SP-1920雙光束紫外可見分光光度計(jì)， 超聲波清洗機(jī)-AS20500BDT

1. 3 藥品與試劑 蘆丁對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所， 批號(hào)：100081-200406）， 甲醇及乙醇均為色譜純， 水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2. 1 對(duì)照品溶液的制備 應(yīng)用精準(zhǔn)化蘆丁對(duì)照品， 嚴(yán)格稱量技術(shù)， 配置成0.251 mg/ml的60%乙醇合劑。

2. 2 供試品溶液的制備 精密稱定供式樣品0.5 g配比甲醇溶液50 ml后， 在超聲環(huán)境下處理1 h。精密稱定處理后的缺失重量， 同樣補(bǔ)足等量甲醇溶液后， 進(jìn)行搖勻過濾， 獲得制備溶液。

2. 3 最大吸收波長(zhǎng)的選擇 在50 ml容量瓶中， 應(yīng)用容量瓶吸取4 ml對(duì)照品溶液、3.0 ml 0.1 mol/L的AlCl3溶液， 5.0 ml 1.0 mol/L的KAc溶液， 以60 %乙醇稀釋本品并搖勻， 置于刻度后止。處理過的本品， 靜置40 min后， 應(yīng)用超聲波清洗機(jī)-AS20500BDT進(jìn)行自動(dòng)掃描， 掃描波長(zhǎng)多在200～800 nm， 測(cè)定結(jié)果顯示， 419 nm是測(cè)定的最大波長(zhǎng)吸收值。見圖1， 圖2。

2. 4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 選取五種對(duì)照品溶液， 分別為0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ， 在50 ml容量瓶中分別精密吸取0、1、2、3、4、5 ml蘆丁溶液， 同上述最大吸收波長(zhǎng)等量的AlCl3溶液和KAc溶液的60%乙醇稀釋混合溶液。以0試劑瓶中的空白溶液和上述最大吸收波長(zhǎng)為界， 用SP-1900/SP-1920雙光束紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定各濃度吸光度。應(yīng)用現(xiàn)象回歸法方程公式計(jì)算回歸方程， 見圖3。

2. 5 精密度試驗(yàn) 應(yīng)用SP-1900/SP-1920雙光束紫外可見分光光度計(jì)在日前的實(shí)驗(yàn)研究階段， 其精密度是其他測(cè)定儀器不能比擬的。曲線下重復(fù)測(cè)定6次， 顯示測(cè)定均值RSD為0.28%。

2. 6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 供試樣品粉末， 等量6份， 按分光光度計(jì)的樣品測(cè)定方法， 測(cè)定總黃酮含量0.2007%， 顯示測(cè)定均值RSD為0.80 %， 為黃酮重現(xiàn)性效果理想。

2. 7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 樣品溶液5 h內(nèi)穩(wěn)定試驗(yàn)中， 取供試品同樣0.5 g粉末， 顯色放置后， 每隔0.5 h測(cè)定一次， 連續(xù)30次樣品測(cè)定方法測(cè)定。

2. 8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 循證重復(fù)性試驗(yàn)中的研究數(shù)據(jù)， 供試樣品共9份， 每份的重量0.25 g（精準(zhǔn)稱量）， 依照供試品溶液的制備策略， 應(yīng)用200～800 nm掃描范圍內(nèi)最大吸收波長(zhǎng)419 nm的曲線操作策略， 最后再分別加入混合溶液， 最后計(jì)算供試樣品總黃酮含量。樣品的平均回收率為98.40 %， RSD為1.07 %。上述測(cè)定白木香葉藥材總黃酮含量的回收率較高， 取得了較好的回收效果。見表1。

2. 9 樣品中總黃酮的含量測(cè)定 取不同采收期的藥材樣品， 照“供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法進(jìn)行制備， 按標(biāo)準(zhǔn)曲線操作方法， LAlCl3溶液和LKAc溶液的60%乙醇稀釋混合溶液， 起依測(cè)定吸光度， 計(jì)算出樣品中總黃酮的含量。見表2。

2. 10 白木香葉總黃酮含量不同月份的跟蹤對(duì)比 在沉香的前期研究基礎(chǔ)下， 本項(xiàng)目對(duì)白木香葉進(jìn)行定期的采摘收集。并對(duì)每期葉子進(jìn)行提取黃酮的數(shù)據(jù)收集。見表3。

2.11 通過高級(jí)統(tǒng)計(jì)學(xué)得出采摘白木香葉的最優(yōu)時(shí)間 項(xiàng)目小組在組長(zhǎng)帶領(lǐng)下， 對(duì)沉香和沉香葉進(jìn)行了大量的文獻(xiàn)資料收集研究。通過走訪藥農(nóng)， 上山考察， 查閱藥典藥籍， 收集各種有關(guān)白木香葉的文獻(xiàn)資料， 進(jìn)行大量的實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)。得出采摘白木香葉的最優(yōu)時(shí)間為6～9月份的中旬。這段時(shí)間的總黃酮含量相對(duì)最高。見圖4。

3 討論

本研究用總黃酮含量的數(shù)據(jù)證明白木香葉是有巨大的科研價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值的。為白木香葉的產(chǎn)品（如袋泡茶）的進(jìn)一步研發(fā)提供關(guān)鍵的指導(dǎo)數(shù)據(jù)。為白木香葉在制劑藥品開發(fā)應(yīng)用方面[如降血脂， 抑制血栓， 降壓， 雌性激素樣作用（異黃酮）， 抗病毒， 抑菌， 消炎， 保肝等]提供了實(shí)用的參考數(shù)據(jù)。

從白木香葉的藥用價(jià)值來看， 以多糖、氨基酸、黃酮及其苷類、酚類為代表的生物活性產(chǎn)物[3， 4]對(duì)抑制炎性因子， 提升機(jī)體抗炎性因子水平[5-7]、解熱疼痛[8]、在治療便秘、肥胖、出血腦缺血、高血糖等方面具有良好的醫(yī)用價(jià)值[9]、此外研究報(bào)告還證實(shí)其具有止咳平咳的特殊功效[10]近年間在抗腫瘤等方面的治療中， 也獲得了治療的突破性進(jìn)展， 其應(yīng)用前景廣闊。本項(xiàng)目只得出白木香葉總黃酮的最佳采摘時(shí)間為6～9月份的中旬， 其他有效成分尚需進(jìn)一步跟蹤研究。

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[收稿日期：2017-04-20]