飼喂葛葉對豆天蛾幼蟲生長性能及腸道菌群多樣性的影響

謝潔微，李雪玲，施慶珊，吳俊松，朱劍鋒，李銳明，胡文鋒

（1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品學(xué)院，廣東 廣州 510642；2.廣東省科學(xué)院 微生物研究所，廣東 廣州 510700；3.廣州崧源農(nóng)業(yè)科技有限公司，廣東 廣州 510640；4.生物源生物技術(shù)（深圳）股份有限公司，廣東 深圳 518118）

豆天蛾（Clanis bilineata tingtauica），別名大豆天蛾，幼蟲俗稱“豆蟲”，又稱“豆丹”，屬鱗翅目天蛾科云紋天蛾亞科豆天蛾屬，常發(fā)生于豆類作物葉部，主要寄主包括大豆、刺槐、洋槐、藤蘿及葛屬、黧豆屬等植物[1]。我國食用豆丹的習(xí)俗由來已久，蒲松齡的《農(nóng)蠶經(jīng)》就有記載，據(jù)考證，食用豆丹是蘇北地區(qū)灌云縣特有的飲食習(xí)慣[2]。隨著人口的增加和生活水平的提高，肉、蛋、奶、豆等食品供給的蛋白質(zhì)已不能滿足人們對高質(zhì)量蛋白質(zhì)的需求[3]，而食用昆蟲不僅養(yǎng)殖轉(zhuǎn)化率高、繁殖速度快、耗能低，而且能提供豐富的蛋白質(zhì)[4-6]。由于豆丹味道鮮美，富含高蛋白、維生素、微量元素，脂肪含量較低，因此在江蘇灌云等地已成為地方的特色美食，是極具開發(fā)潛力的高質(zhì)量蛋白資源[7]。

目前，人工養(yǎng)殖的豆丹主要以大豆葉為食，幼蟲進(jìn)入暴食期可將大豆葉吃光，最后導(dǎo)致大豆不能結(jié)莢[8]；大豆葉一旦被吃光則無法重新長出，若要滿足幼蟲采食，需重新種植大豆葉，而大豆重茬種植會(huì)導(dǎo)致植株生長遲緩、矮小、葉色變黃、易感染病蟲害[9]。葛與大豆同屬豆科，目前，人們對野葛的利用仍是以傳統(tǒng)藥用部位根部入藥或制作葛粉為主，生產(chǎn)和收獲時(shí)多將葛葉作為廢棄物丟掉，不僅造成資源浪費(fèi)，還會(huì)生污染態(tài)環(huán)境[10]。葛葉中含粗蛋白含量較高，并含有16種氨基酸、多種礦物元素（如鈣、磷等）以及粗脂肪、粗纖維、維生素[11-13]和多種活性物質(zhì)[14-16]，具有較高的飼用價(jià)值，已在豬、兔、羊等動(dòng)物飼糧中應(yīng)用，可在一定程度上提高動(dòng)物的生長性能和養(yǎng)殖效益[17-20]，然而有關(guān)葛葉在食用昆蟲飼糧中的應(yīng)用未見報(bào)道。目前，關(guān)于豆天蛾幼蟲的研究大多集中在營養(yǎng)價(jià)值和生物特性方面，在開發(fā)新型食料方面研究較少[21-24]。本試驗(yàn)以葛葉替代大豆葉飼喂豆天蛾幼蟲，旨在探究葛葉對豆天蛾幼蟲生長性能和腸道菌群多樣性的影響。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用豆天蛾蟲卵由河南省漯河市舞陽縣太尉鎮(zhèn)關(guān)寨村養(yǎng)殖基地提供。葛葉、大豆葉采自華南農(nóng)業(yè)大學(xué)啟林農(nóng)訓(xùn)中心葛根研究院豆丹養(yǎng)殖基地。在葛葉與大豆葉生長期間不使用任何農(nóng)藥，及時(shí)除蟲除草，保證葛葉和大豆葉無農(nóng)藥殘留、無蟲，每天現(xiàn)摘現(xiàn)用。

1.2 卵的孵化和幼蟲飼養(yǎng)

挑選顏色均勻的蟲卵，置于溫度為28℃、相對濕度為55%的人工氣候箱內(nèi)進(jìn)行孵化。挑選大小一致、活躍度相同的初孵幼蟲（0日齡），分別用葛葉（試驗(yàn)組）和大豆葉（對照組）進(jìn)行飼喂。每組設(shè)置3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)200頭幼蟲。

將帶枝的葛葉和大豆葉分別放入裝滿水的離心管中，管口塞棉球以防漏水，每片葉子接上20頭幼蟲，并放在塑料透明養(yǎng)蟲盒（24 cm×19 cm×10 cm）中，套上紗布再蓋上蓋子防止蟲子逃出；后期幼蟲迅速長大，養(yǎng)蟲盒要保持合理的幼蟲密度，防止幼蟲因食料不足而自相殘殺。每天更換新鮮葉子、清理和收集蟲砂，飼喂持續(xù)至幼蟲30日齡。試驗(yàn)期間每天早晚記錄幼蟲生長情況，及時(shí)挑出死亡幼蟲，記錄不同日齡幼蟲的生長發(fā)育變化。將幼蟲空腹處理24 h、在無菌條件下，解剖腸道、收集0、10、15、20和 25日齡豆天蛾幼蟲腸道內(nèi)容物約100 mg，用于分析檢測其腸道菌群多樣性差異。收集25日齡豆天蛾幼蟲用于營養(yǎng)成分的測定分析。

1.3 測定指標(biāo)及方法

1.3.1 葛葉和大豆葉營養(yǎng)成分及含量

取試驗(yàn)基地種植的葛葉和大豆葉真空冷凍干燥至恒重、粉碎，測定葉子中水分含量，干重葉中粗蛋白、粗脂肪、灰分以及纖維素等營養(yǎng)成分含量。測定方法包括凱氏定氮法、索氏抽提法、灼燒法以及介質(zhì)過濾法等。

1.3.2 豆天蛾幼蟲生長發(fā)育指標(biāo)

在飼喂的幼蟲達(dá)到 0、5、10、15、20、25、30 日齡時(shí)分別從每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)挑取10頭幼蟲，用游標(biāo)卡尺（精確至0.01 mm）測定幼蟲的體長、體寬、頭殼寬，并取平均值。用分析天平測定幼蟲體重（精確至0.01 g）。試驗(yàn)期間，稱量并計(jì)算幼蟲的平均總攝食量和平均蟲砂量，計(jì)算幼蟲存活率、飼料轉(zhuǎn)化率和料重比并記錄每個(gè)幼蟲齡期蛻皮時(shí)間。

1.3.3 豆天蛾幼蟲營養(yǎng)成分及含量

試驗(yàn)結(jié)束后，取25日齡豆天蛾幼蟲空腹24 h，60℃水浴漂燙150 s后冷卻，真空冷凍干燥至恒重、粉碎，測定幼蟲含水量、幼蟲（干重）粗蛋白、粗脂肪以及灰分含量。

幼蟲（干重）氨基酸測定采用美國產(chǎn)安捷倫Ag1100液相色譜儀，通過OPA FMOC柱前衍生化方法檢測樣品中17種氨基酸組分含量。采用ODS-HYPERSIL（250.0 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，柱溫為40℃，流動(dòng)相A為結(jié)晶乙酸鈉、5%醋酸、四氫呋喃，流動(dòng)相B為結(jié)晶乙酸鈉、5%醋酸、乙腈、甲醇。

1.3.4 豆天蛾幼蟲蟲砂營養(yǎng)成分及含量

試驗(yàn)期間每天收集豆天蛾幼蟲蟲砂，置于105℃烘箱中烘干至恒重，將蟲砂粉碎，測定蟲砂含水量、蟲砂（干重）粗蛋白、粗脂肪以及灰分含量。

1.3.5 幼蟲腸道菌群組成差異分析

在無菌條件下，分別對 0、10、15、20、25 日齡豆天蛾幼蟲進(jìn)行24 h空腹處理。用75%的乙醇溶液將幼蟲浸泡2 min，再用無菌水沖洗干凈、吸干體表水分，在已滅菌的解剖臺上，用無菌解剖剪將幼蟲從尾部到頭部剪開，用無菌注射器吸出腸道內(nèi)容物約100 mg。采用CTAB法提取豆天蛾幼蟲腸道微生物的DNA，然后進(jìn)行16S rRNA基因測序，分析腸道菌群多樣性。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析

采用Excel 2010軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用SPSS 19.0和Origin 23軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 葛葉和大豆葉中的主要營養(yǎng)成分

由表1可知，葛葉中水分、粗蛋白、粗脂肪、粗纖維及灰分含量均高于大豆葉，葛葉中水分比大豆葉高5.71%，粗蛋白含量比大豆葉高15.83%，粗纖維含量比大豆葉高47.08%，葛葉中水分、粗蛋白、粗纖維顯著高于大豆葉（P<0.05），這與葛葉具有較好的持水性有較大關(guān)系。

表1 葛葉和大豆葉的營養(yǎng)成分及含量Table 1 The nutritive composition and content of Pueraria lobata leaf and soybean leaf

2.2 飼喂葛葉和大豆葉對豆天蛾幼蟲生長發(fā)育的影響

2.2.1 對豆天蛾幼蟲存活率、飼料轉(zhuǎn)化率、料重比的影響

由表2可知，葛葉組豆天蛾幼蟲存活率明顯高于大豆葉組（P<0.05），分別為57.54%和43.03%，這說明與大豆葉相比，葛葉對豆天蛾幼蟲無負(fù)面影響。相比大豆葉，葛葉組的飼料轉(zhuǎn)化率更高，葛葉組料重比低于大豆葉組，表明葛葉更適合飼喂豆天蛾幼蟲。為控制成本、經(jīng)濟(jì)利益最大化，在實(shí)際生產(chǎn)中需要高飼料轉(zhuǎn)化率和低料重比，因此葛葉養(yǎng)殖豆天蛾幼蟲具有較好的潛力。

表2 幼蟲存活率、飼料轉(zhuǎn)化率和料重比Table 2 The larval survival rate，digested feed conversion efficiency and gain to feed ratio

2.2.2 對豆天蛾幼蟲生長性能的影響

由圖1可知，試驗(yàn)期間兩組處理豆天蛾幼蟲生長指標(biāo)的變化趨勢相似，均在10～25日齡生長發(fā)育較好，且在10日齡以后葛葉組幼蟲生長性能均優(yōu)于大豆葉組，25～30日齡生長發(fā)育緩慢甚至停止。

圖1 飼喂葛葉和大豆葉的豆天蛾幼蟲平均體長（A）、平均體寬（B）、平均頭殼寬（C）、平均體重（D）Figure 1The mean body length（A），mean body width（B），mean head capsule width（C），mean body weight（D）of Clanis bilineata tingtauica larvae fed with Pueraria lobata leaf and soybean leaf

0日齡豆天蛾幼蟲的平均體長、平均體寬、平均頭殼寬和平均體重分別為（7.96±0.27）mm、（1.57±0.07）mm、（1.65±0.03）mm 和（0.026±0.002）g，葛葉組25日齡幼蟲的平均體長、平均體寬、平均頭殼寬和平均體重分別為分別為（72.27±3.06）mm、（11.99±1.08）mm、（7.88±0.38）mm 和（7.34±0.32）g，其對比0日齡幼蟲的增長率分別為807.91%、663.69%、377.58%和28 130.77%；大豆葉組25日齡幼蟲的平均體長、平均體寬、平均頭殼寬和平均體重分別為（67.61±2.56）mm、（10.82±0.74）mm、（7.62±0.39）mm 和（6.38±0.56）g，其對比 0 日齡幼蟲的增長率分別為749.37%、589.17%、361.82%和24 438.46%。

由圖1A可知，20日齡葛葉組的幼蟲平均體長與大豆葉組存在顯著差異（P<0.05）。由圖1B可知，5日齡幼蟲平均體寬增長緩慢，10日齡開始增長速度加快，但差異不顯著（P＞0.05）；25日齡葛葉組幼蟲平均體寬與大豆葉組存在顯著差異（P<0.05）。由圖1C可知，不同日齡，2個(gè)處理組幼蟲平均頭殼寬均無顯著差異（P＞0.05）。由圖1D可知，飼喂10 d后幼蟲體重增長加快，且葛葉組不同日齡幼蟲平均體重均高于大豆葉組，在15日齡和30日齡存在顯著差異（P<0.05）；20～25日齡增長最快。

2.3 飼喂葛葉和大豆葉對豆天蛾幼蟲營養(yǎng)成分及含量的影響

2.3.1 對豆天蛾幼蟲含水量以及幼蟲（干重）粗蛋白、粗脂肪、灰分含量的影響

由圖2可知，葛葉組幼蟲的粗蛋白、粗脂肪含量高于大豆葉組幼蟲葛葉組粗蛋白含量為（64.12±0.23）%、大豆葉組粗蛋白含量為（63.80±0.99）%，葛葉組粗脂肪含量為（18.15±0.76）%、大豆葉組粗脂肪為（15.96±0.79）%，粗脂肪含量存在顯著性差異（P<0.05）；葛葉組水分含量為（81.74±0.52）%、大豆葉組水分含量為（82.72±1.02）%，葛葉組灰分含量為（5.04±0.43）%、大豆葉組灰分含量為（5.99±0.69）%，葛葉組幼蟲中水分含量和灰分含量低于大豆葉組，差異均不顯著（P>0.05）。

圖2 飼喂葛葉和大豆葉的豆天蛾幼蟲營養(yǎng)成分及含量Figure 2 The nutritive composition and content of Canis bilineata tingtauica larvae fed with Pueraria lobata leaf and soybean leaf

2.3.2 對豆天蛾幼蟲（干重）氨基酸組成及含量的影響

由表3可知，葛葉組和大豆葉組幼蟲體內(nèi)含量最高的氨基酸均為谷氨酸，分別為79.01和88.82 mg/g；含量最低的氨基酸均為半胱氨酸，分別為2.55和2.64 mg/g。除組氨酸、半胱氨酸和纈氨酸外，其他氨基酸在兩組處理中均存在顯著差異（P<0.05）。盡管葛葉組幼蟲體內(nèi)多種氨基酸含量低于大豆葉組，但是葛葉組幼蟲體內(nèi)必需氨基酸含量為212.7 mg/g，占總氨基酸比例為37.72%，略高于大豆葉組（37.18%）。

表3 飼喂葛葉和大豆葉的豆天蛾幼蟲氨基酸含量Table 3 The amino acid content of Clanis bilineata tingtauica larvae fed with Pueraria lobata leaf and soybean leaf 單位：mg/g

2.4 飼喂葛葉和大豆葉對豆天蛾幼蟲蟲砂營養(yǎng)成分及含量的影響

由圖3可知，幼蟲蟲砂中蛋白質(zhì)含量較高，葛葉組為（21.33±0.14）%、大豆葉組為（22.40±0.36）%；葛葉組水分含量為（58.04±1.27）%、大豆葉組水分含量為（54.47±1.31）%；葛葉組灰分含量為（10.33±0.02）%、大豆葉組灰分含量為（9.23±0.02）%；粗脂肪含量為葛葉組（2.60±0.07）%、大豆葉組為（2.90±0.03）%。葛葉組蟲砂水分和灰分含量均高于大豆葉組，粗蛋白與粗脂肪含量均低于大豆葉組，差異顯著（P<0.05）。

圖3 飼喂葛葉和大豆葉豆天蛾幼蟲蟲砂營養(yǎng)成分及含量Figure 3 The nutritive composition and content of frass of Clanis bilineata tingtauica larvae fed with Pueraria lobata leaf and soybean leaf

2.5 飼喂葛葉和大豆葉對豆天蛾幼蟲腸道菌群多樣性的影響

本試驗(yàn)采用16S rRNA測序技術(shù)，取0日齡幼蟲和用葛葉和大豆葉飼養(yǎng)10、15、20、25 d的豆天蛾幼蟲腸道樣本，每個(gè)樣本3次重復(fù)，對幼蟲腸道菌群進(jìn)行分析，經(jīng)過測序，所有樣品一共獲得10 648條OTUs樣本。

2.5.1 OTU-Venn分析

由圖4可知，不同日齡的豆天蛾幼蟲腸道共有4個(gè)OTUs，飼喂葛葉的豆天蛾幼蟲腸道中，10日齡幼蟲特有OTUs為188個(gè)，15日齡幼蟲特有OTUs為100個(gè)，20日齡幼蟲特有OTUs為169個(gè)，25日齡幼蟲特有OTUs為2 621個(gè)；飼喂大豆葉的豆天蛾幼蟲腸道中，10日齡幼蟲特有OTUs為128個(gè)，15日齡幼蟲特有OTUs為39個(gè)，20日齡幼蟲特有OTUs為112個(gè)，25日齡幼蟲特有OTUs為104個(gè)。表明葛葉和大豆葉對豆天蛾幼蟲腸道細(xì)菌均有影響，且葛葉對豆天蛾幼蟲腸道細(xì)菌的影響明顯大于大豆葉。

圖4 豆天蛾幼蟲腸道菌群OTUsFigure 4 The OTUs of intestinal microflora of Clanis bilineata tingtauica larvae

2.5.2 豆天蛾幼蟲腸道菌群在門分類水平上的微生物群落結(jié)構(gòu)特征

由圖5可知，幼蟲腸道菌群在門水平分類上物種相對豐富度排名前10的菌門，包括厚壁菌門（Firmicutes）、變形菌門（Proteobacteria）、放線菌門（Actinobacteria）、擬桿菌門（Bacteroidetes）、藍(lán)菌門（Cyanobacteria）、疣微菌目（Verrucomicrobia）、互養(yǎng)菌門（Synergistetes）、棲熱菌門（Thermi）、酸桿菌門（Acidobacteria）和綠彎菌門（Chloroflexi），其中物種相對豐富度大于1%的菌門依次為厚壁菌門、變形菌門、放線菌門、擬桿菌門。B10～B25組中幼蟲腸道菌群在門分類水平上物種組成多樣性大于C10～C25組，即飼喂葛葉的幼蟲腸道菌群具有更高的物種多樣性。無論是飼喂葛葉還是大豆葉，隨著時(shí)間的增加，幼蟲腸道中厚壁菌門相對豐富度均先增加后減少，而在試驗(yàn)結(jié)束仍高于初始相對豐富度，其中15日齡比例最高，此時(shí)幼蟲開始進(jìn)入4齡期，即暴食期；其次0日齡幼蟲腸道豐富度最高為變形菌門，飼喂過程中不同處理的幼蟲腸道變形菌門呈現(xiàn)先減后增的現(xiàn)象，但至試驗(yàn)結(jié)束時(shí)仍低于初始相對豐富度。

圖5 豆天蛾幼蟲腸道菌群在門水平分類上的物種組成及相對豐富度Figure 5 Species composition and relative abundance of intestinal microflora of Clanis bilineata tingtauica larvae at the phylum level

由表4可知，除0日齡幼蟲腸道樣品中優(yōu)勢菌門為變形菌門（45.55%）外，分別飼喂葛葉、大豆葉的不同日齡幼蟲腸道樣品中優(yōu)勢菌門均為厚壁菌門，所占比例分別為 B10：75.96%、B15：78.73%、B20：54.38%、B25：45.37%、C10：85.48%、C15：96.99%、C20：96.99%、C25：89.69%。飼喂過程中，葛葉組幼蟲腸道中厚壁菌門豐富度由最初的35.52%升高至45.37%，變形菌門由45.55%降至35.43%，放線菌門由原來的1.53%升高至4.95%，擬桿菌門由14.92%略降為12.17%，隨著飼喂天數(shù)的延長，豆天蛾幼蟲腸道內(nèi)的優(yōu)勢菌門出現(xiàn)明顯的變化。

表4 豆天蛾幼蟲腸道菌群相對豐富度Top 4菌門的相對豐富度Table 4 The relative abundance of intestinal microflora of Clanis bilineata tingtauica larvae of Top 4 relative abundance at the phylum level 單位：%

2.5.3 豆天蛾幼蟲腸道菌群在屬分類水平上的微生物群落結(jié)構(gòu)特征

由圖6可知，從豆天蛾幼蟲腸道樣品中在屬水平上豐富度排名前10的菌屬分別是腸球菌屬（Enterococcus）、葡萄球菌屬（Staphylococcus）、羅爾斯通氏菌屬（Ralstonia）、棒狀桿菌屬（Corynebacterium）、代爾夫特菌屬（Delftia）、巨單胞菌屬（Megamonas）、鞘氨醇單胞菌屬（Sphingomonas）、短狀桿菌屬（Brachybacterium）、擬桿菌屬（Bacteroides）、顫螺旋菌屬（Oscillospira）。

圖6 豆天蛾幼蟲腸道菌群在屬水平分類上物種組成及相對豐富度Figure 6 Species composition and relative abundance of intestinal microflora of Clanis bilineata tingtauica larvae at the genus level

如表5所示，不同處理下，幼蟲腸道中優(yōu)勢菌也不一樣。其中，飼喂大豆葉的不同日齡幼蟲腸道中優(yōu)勢菌屬均為腸球菌屬（Enterococcus），豐富度在85%以上，但菌屬多樣性較低，其他菌屬豐富度與初始豐富度相比均明顯降低，甚至未被檢測到；飼喂葛葉的幼蟲腸道樣本中，20日齡幼蟲腸道最大優(yōu)勢菌也是腸球菌屬，而不同日齡幼蟲腸道優(yōu)勢菌也不相同，飼喂25 d的幼蟲腸道中厚壁菌門的腸球菌屬均明顯增加，葛葉組由初始豐富度0.05%提高至11.94%、大豆葉組提高至89.31%；厚壁菌門的葡萄球菌屬相對豐富度在葛葉組中明顯提高、在大豆葉組中略有所上升，由原來的0.12%分別提高至1.57%和0.15%。

表5 豆天蛾幼蟲腸道菌群相對豐富度Top 10菌屬的相對豐富度Table 5 The relative abundance of intestinal microflora of Clanis bilineata tingtauica larvae of Top 10 relative abundance at the genus level 單位：%

無論是飼喂葛葉還是大豆葉，幼蟲腸道菌門菌屬均發(fā)生了明顯變化，且不同日齡的葛葉組幼蟲腸道菌屬組成相對豐富度均高于大豆葉組。采食葛葉的25日齡幼蟲腸道物種組成與初始幼蟲腸道較為相似，同多樣性有所提高，如厚壁菌門的棒狀桿菌屬相對豐富度由初始的0.16%上升至19.82%。

總的來說，經(jīng)過飼喂葛葉，25日齡豆天蛾幼蟲腸道菌群多樣性提高，特別是有益菌如巨單胞菌屬、顫螺旋菌屬。

3 討論與結(jié)論

3.1 飼喂葛葉和大豆葉對生長發(fā)育的影響

試驗(yàn)期間，根據(jù)幼蟲蛻皮情況及頭殼等特征判斷幼蟲所處齡期，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，0～5日齡幼蟲處于1齡期，4～10日齡幼蟲處于2齡期，9～18日齡幼蟲處于3齡，16～24日齡幼蟲出于4齡期，22～30日齡處于5齡期。

10日齡前幼蟲生長發(fā)育較慢，這可能是因?yàn)榇藭r(shí)幼蟲處于1～2齡期，幼蟲進(jìn)食量較小，因此生長性能變化不明顯。10日齡以后幼蟲生長性能明顯提高，這可能是因?yàn)?0日齡以后幼蟲開始進(jìn)入3齡期，攝食量增加；幼蟲平均體重在20～25日齡急劇上升，這可能是由于幼蟲進(jìn)入4齡期，即暴食期，攝食量達(dá)到最大，約為整個(gè)幼蟲期攝食量的90%，這與馮雨艷等[25]研究結(jié)果相似。幼蟲在25～30日齡緩慢甚至停止增長，這可能是因?yàn)橛紫x開始進(jìn)入老熟幼蟲階段，停止攝食、準(zhǔn)備入土化蛹，因此作為商品蟲，在25日齡收蟲為宜。此外，10日齡以后葛葉組幼蟲生長性能均高于大豆葉組，這可能是由于葛葉持水性、適口性均較大豆葉好，提高幼蟲采食量。

3.2 飼喂葛葉和大豆葉對幼蟲主要營養(yǎng)成分和氨基酸含量的影響

試驗(yàn)結(jié)果中，葛葉組粗蛋白含量略高于大豆葉組，分別為（64.12±0.23）%和（63.80±0.99）%，明顯高于雞蛋（49.24%）、牛奶（26.13%）和大豆（40.42%）等蛋白質(zhì)來源，這與夏振軍等[26]、Gao 等[27]、田華等[28]、吳勝軍等[29]研究結(jié)果相似；試驗(yàn)結(jié)果表明，幼蟲富含氨基酸，包括人體8種必需氨基酸，盡管葛葉組幼蟲中多種氨基酸含量低于大豆葉組，而必需氨基酸占氨基酸總量比例中葛葉組高于大豆葉組。葛葉組幼蟲粗脂肪含量高于大豆葉組，這可能是由于葛葉中粗蛋白和粗脂肪含量均高于大豆葉。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，25日齡幼蟲干重中的粗蛋白、粗脂肪含量均高于葉子中的含量，這說明豆天蛾幼蟲具有合成蛋白質(zhì)和脂肪的作用。幼蟲蟲砂具有特殊的芳香氣味，且蛋白質(zhì)含量均達(dá)20%以上?！靶Q砂”是一種特色的產(chǎn)品，豆天蛾幼蟲以無藥無害的植物為食，其蟲砂營養(yǎng)豐富，也可變廢為寶，開發(fā)為類似于“蠶砂”的新產(chǎn)品[30]。

3.3 飼喂葛葉和大豆葉對幼蟲腸道菌群的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明，幼蟲在10日齡以后生長性能的特征較明顯，可能是由于10日齡以后腸道菌群變化差異較大，因此試驗(yàn)采用了第0天、第10天、第15天、第20天、第25天幼蟲腸道作為樣品。葛葉組豆天蛾幼蟲腸道菌群種類豐富度均高于大豆葉組，這可能也是葛葉組幼蟲生長性能優(yōu)于大豆葉組的原因之一。采食大豆葉的不同日齡幼蟲腸道中優(yōu)勢菌屬均為腸球菌屬[7]，葛葉組中幼蟲腸道腸球菌屬、葡萄球菌屬外，還具有巨單胞菌屬、顫螺旋菌屬等有益菌，說明不同食料對幼蟲腸道菌群產(chǎn)生影響[31]。除葛葉組25日齡幼蟲外，其他樣品中幼蟲腸道菌群種類較0日齡幼蟲有所降低，這可能是因?yàn)椴墒澈竽c道中優(yōu)勢菌群逐漸充斥初孵幼蟲腸道菌群。與其他樣品相比，25日齡葛葉幼蟲腸道菌屬豐富度及比例相對較高，這可能也解釋了25日齡幼蟲攝食量達(dá)到最大且葛葉組幼蟲生長性能優(yōu)于大豆葉組的現(xiàn)象。

采食葛葉的豆天蛾幼蟲，具有更高的存活率和飼料轉(zhuǎn)化率、更低的料重比、更優(yōu)的生長指標(biāo)；幼蟲干重中的粗脂肪、粗蛋白含量以及必需氨基酸占比更高；腸道菌群多樣性更豐富。因此，采用葛葉代替大豆葉喂養(yǎng)豆天蛾幼蟲可以促進(jìn)幼蟲生長發(fā)育、改善幼蟲腸道微生態(tài)環(huán)境，提高幼蟲品質(zhì)和經(jīng)濟(jì)效益。