痤瘡患者血清中Th1細胞和Th17細胞活化水平與病情嚴重程度的關(guān)系研究

孔玉龍，袁廷艷，沈永強，虞冬琴

[摘要]目的：研究痤瘡患者血清中輔助性T細胞1（T helper cell 1，Th1）和輔助性T細胞17（T helper cell 17，Th17）活化與病情嚴重程度的關(guān)系。方法：選取2019年6月-2021年6月筆者醫(yī)院就診的143例痤瘡患者，根據(jù)Pillsbury法將其分為輕度48例、中度55例及重度40例。比較不同患者病情嚴重程度、一般資料、Th1細胞和Th17細胞水平。采用Pearson相關(guān)系數(shù)分析Th1細胞和Th17細胞水平與病情嚴重程度的關(guān)聯(lián)性，采用Logistic回歸分析重度痤瘡的影響因素。結(jié)果：不同病情嚴重程度痤瘡患者年齡、家族史、治療情況比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；重度痤瘡患者男性、飲食喜好油膩或辛辣、吸煙或喝酒、每天使用手機或電腦時間、皮膚類型為油性占比大于輕中度患者，痤瘡初發(fā)年齡、每日睡眠時間小于輕中度患者（P＜0.05）；隨著痤瘡病情程度的加重，Th1細胞和Th17細胞水平呈逐漸升高趨勢（P＜0.05）；經(jīng)Pearson相關(guān)性分析，痤瘡患者Th1細胞和Th17細胞水平與病情嚴重程度呈正相關(guān)（P＜0.05）；經(jīng)Logistic回歸分析，性別、痤瘡初發(fā)年齡、飲食喜好油膩或辛辣、吸煙或喝酒、每日睡眠時間、每天使用手機或電腦時間、皮膚類型油性、Th1細胞及Th17細胞均為重度痤瘡的影響因素（P＜0.05）。結(jié)論：痤瘡患者病情嚴重程度與Th1細胞和Th17細胞水平呈現(xiàn)密切相關(guān)性，且為重度痤瘡發(fā)生的影響因素。研究Th1細胞和Th17細胞可為痤瘡的病情進展機制研究及臨床治療提供新思路。

[關(guān)鍵詞]痤瘡；Th1細胞；Th17細胞；病情嚴重程度；關(guān)聯(lián)性

[中圖分類號]R758.733? ? [文獻標志碼]A? ? [文章編號]1008-6455（2023）04-0080-04

Activation of Th1 Cells and Th17 Cells in Serum of Patients with Acne and Correlation with the Severity of Illness

KONG Yulong，YUAN Tingyan，SHEN Yongqiang，YU Dongqin

（Department of Dermatology，Nanjing Jiangbei Hospital Affiliated to Nantong University，Nanjing 210048，Jiangsu，China）

Abstract： Objective? To study the relationship between the activation of T helper cell 1 （Th1） and T helper cell 17 （Th17） in patients with acne，and analyze their correlation with the severity of illness. Methods? One hundred and forty-three patients with acne in our hospital from June 2019 to June 2021 were selected and divided into 48 cases of mild， 55 cases of moderate and 40 cases of severe according to Pillsbury method. The general data of different disease severity and Th1 cells and Th17 cells were compared. Pearson correlation analysis was used to analyse the association between Th1 and Th17 cell levels and severity of the condition， and logistic regression was used to analyze the influencing factors of severe acne. Results? There was no significant difference in age， family history and treatment among acne patients with different severity （P＞0.05）. The patients with severe acne， male， the preference for greasy or spicy diet， smoking or drinking， the time of using mobile phone or computer every day， and the skin type of oily accounted for more than those with mild and moderate acne， and the initial age of acne and daily sleep time were less than those with mild and moderate acne （P＜0.05）. With the aggravation of acne， Th1 cells and Th17 cells increased gradually （P＜0.05）. Pearson correlation analysis showed that Th1 cells and Th17 cells were positively correlated with the severity of acne （P＜0.05）. By logistic regression analysis， gender， initial age of acne， dietary preference， greasy or spicy， smoking or drinking， daily sleep time， daily use of mobile phone or computer， skin type， oily， Th1 cells and Th17 cells were the influencing factors of severe acne （P＜0.05）. Conclusion? The severity of acne patients is closely related to Th1 cells and Th17 cells， and they are the influencing factors of severe acne， which can provide new ideas for the study of the mechanism of acne progression and clinical treatment.

Key words： acne; Th1 cells; Th17 cells; severity of illness; relevance

痤瘡是臨床常見慢性炎癥性皮膚病，多見于青春期，好發(fā)于面部及胸背部，表現(xiàn)為丘疹、粉刺、膿皰等，可嚴重影響患者生理與心理健康[1-2]。近年來多項研究指出，免疫功能失衡在炎癥發(fā)展中起關(guān)鍵作用，是痤瘡發(fā)病的重要因素之一[3-5]。Th1細胞、Th17細胞均為CD4+T細胞亞群，可分泌多種促炎因子，促進組織發(fā)生慢性炎癥反應(yīng)，破壞細胞外基質(zhì)，并誘發(fā)自身多種免疫性疾病，對痤瘡等多種皮膚病具有一定影響[6]。本研究選取143例痤瘡患者，分析Th1細胞、Th17細胞與患者痤瘡嚴重程度的關(guān)系，探討Th1、Th17細胞在痤瘡病情發(fā)展中的作用，從而為臨床治療提供理論基礎(chǔ)。現(xiàn)報道如下。

1? 資料和方法

1.1 臨床資料：選取2019年6月-2021年6月就診于筆者醫(yī)院的143例痤瘡患者為研究對象。納入標準：所有患者均符合《中國痤瘡治療指南》中的診斷標準[7]；主要皮損表現(xiàn)為毛囊性丘疹、粉刺黑頭、結(jié)節(jié)、膿皰、瘢痕、囊腫，多發(fā)于面部、上胸部、背部等皮脂腺發(fā)達部位，且一般呈對稱分布；痤瘡分級明確；患者依從性較好；患者或家屬均簽署知情同意書。排除標準：孕婦或哺乳期女性；合并心肝腎或免疫系統(tǒng)疾病者；近1個月內(nèi)使用過糖皮質(zhì)激素或其他類型免疫抑制劑者；合并嚴重過敏性疾病者；精神或意識障礙無法配合治療或檢查者。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 問卷調(diào)查：按照統(tǒng)一標準向患者發(fā)放自制流行病學(xué)調(diào)查問卷，經(jīng)預(yù)實驗，本問卷評估一致性信度Cronbach＇s α=0.94，效度系數(shù)為0.82。問卷由患者自行填寫，并當(dāng)場回收，內(nèi)容包括性別、年齡、家族史、痤瘡初發(fā)年齡、飲食喜好油膩或辛辣、吸煙或喝酒、每日睡眠時間、每天使用電腦時間、皮膚類型為油性、治療情況（維A酸類藥物、過氧化苯甲酰、抗生素、二硫化硒、果酸、光動力療法、激光療法）。

1.2.2 血清Th1細胞和Th17細胞水平測定[8]：所有患者均于入院后第2 天早晨空腹采集3 ml靜脈血于肝素抗凝管中，采用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞（PBMC），采用流式細胞術(shù)檢測Th1細胞和Th17細胞。將CD3-FITC、CD4-PC5單克隆抗體加入至PBMC中，混勻后在室溫、避光下孵育，時間為20 min，采用RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌后，將細胞加入至RPMI-1640培養(yǎng)體系（10%新生牛血清+1 ?g/ml離子霉素+50 ng/ml PMA+3 ?mol/L莫能霉素）中，然后稀釋細胞濃度至1×106/ml，并于37℃培養(yǎng)箱中進行孵育，時間為18 h；然后采用固定破膜劑固定、破膜，加入PE-抗人IL-17單克隆抗體、PE-抗人IFN-γ單克隆抗體（均購自美國eBioscience公司），設(shè)置對照管加入同型對照抗體，孵育30 min并洗滌，采用流式細胞儀（北京友華照欽醫(yī)療器械有限公司，型號Dxflex）檢測Th1、Th17細胞，并計算外周血Th1、Th17占CD4+T細胞的比例。

1.2.3 病情嚴重程度評估：采用Pillsbury法進行臨床分級[9]，其中主要皮損為散發(fā)至多發(fā)的黑頭粉刺，伴有散發(fā)炎性丘疹，總病灶數(shù)10～30個為Ⅰ級（輕度）；主要皮損為粉刺，存在淺在性膿皰與中等數(shù)量丘疹，局限于面部，總病灶數(shù)31～50個為Ⅱ級；主要皮損為炎性膿皰與丘疹，存在深在性膿皰與炎性皮損，多發(fā)于面部、頸部、胸背部，總病灶數(shù)51～100個，且存在結(jié)節(jié)與囊腫，但數(shù)量＜3個為Ⅲ級（Ⅱ、Ⅲ級為中度）；存在大量膿皰與丘疹，多發(fā)于上半身，總病灶數(shù)＞100個，存在結(jié)節(jié)與囊腫，且數(shù)量≥3個為Ⅳ級（重度）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析：采用SPSS 22.0對數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)資料以[例（%）]表示，行χ2檢驗；計量資料以（x?±s）表示，行F檢驗；采用Pearson分析Th1細胞和Th17細胞水平與病情嚴重程度的關(guān)聯(lián)性；采用Logistic回歸分析重度痤瘡的影響因素；以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1 病情嚴重程度情況評估：共發(fā)放問卷143份，回收143份，回收率為100%；143例痤瘡患者中經(jīng)臨床Pillsbury法分級，其中輕度48例，中度55例，重度40例。Pillsbury法臨床分級示意圖，見圖1。

2.2 一般資料：對不同病情嚴重程度的痤瘡患者年齡、家族史、治療情況進行比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；重度痤瘡患者多為男性、飲食喜好油膩或辛辣、吸煙或喝酒、每天使用手機或電腦時間、皮膚類型為油性占比均大于輕中度患者，痤瘡初發(fā)年齡、每日睡眠時間小于輕中度患者，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

2.3 不同病情嚴重程度Th1細胞和Th17細胞水平比較：隨著痤瘡病情程度的加重，Th1細胞和Th17細胞水平呈逐漸升高趨勢（P＜0.05）。見表2。

2.4 Th1細胞和Th17細胞水平與病情嚴重程度的關(guān)聯(lián)性分析：經(jīng)Pearson相關(guān)性分析，痤瘡患者Th1細胞和Th17細胞水平與病情嚴重程度呈正相關(guān)（r1=0.459，P1=0.025；r2=0.510，P2=0.011）。

2.5 重度痤瘡的影響因素分析：以性別、痤瘡初發(fā)年齡、飲食喜好油膩或辛辣、吸煙或喝酒、每日睡眠時間、每天使用手機或電腦時間、皮膚類型油性、Th1細胞、Th17細胞為自變量，以痤瘡嚴重程度為因變量賦值，見表3；經(jīng)Logistic回歸分析，性別、痤瘡初發(fā)年齡、飲食喜好油膩或辛辣、吸煙或喝酒、每日睡眠時間、每天使用手機或電腦時間、皮膚類型油性、Th1細胞、Th17細胞均為重度痤瘡的影響因素（P＜0.05）。見表4。

3? 討論

痤瘡是由多因素引起的毛囊皮脂腺嚴重疾病，與痤瘡丙酸桿菌、皮脂分泌過多、毛囊皮脂腺導(dǎo)管過度角化等原因?qū)е碌钠ぶ僬{(diào)控異常有關(guān)，且飲食習(xí)慣、生活習(xí)慣等會導(dǎo)致痤瘡的發(fā)生，近年來發(fā)現(xiàn)免疫功能異常也是痤瘡發(fā)病因素之一[10-11]。因此，通過對免疫功能指標的監(jiān)測與調(diào)控有助于痤瘡患者病情的評估與治療。

在痤瘡皮損中，皮脂腺細胞、角質(zhì)形成細胞均可誘導(dǎo)多種細胞因子的產(chǎn)生與表達，引起巨噬細胞、粒細胞的聚集趨化[12]；同時體液免疫、細胞免疫均會參與痤瘡的發(fā)病機制，T細胞介導(dǎo)的細胞免疫活化反應(yīng)是其中之一[13]。天然CD4+T細胞亞群在不同細胞因子環(huán)境中激活會分化為不同T細胞亞群，其中Th1細胞會產(chǎn)生IFN-γ、IL-2等細胞因子，而Th17細胞會產(chǎn)生IL-17等細胞因子，兩者均會參與自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展過程，目前也一致認為痤瘡的發(fā)病與Th1、Th17細胞及其細胞因子有重大關(guān)系[14-15]。因此，本研究采用流式細胞儀對痤瘡患者Th1、Th17細胞進行檢測，結(jié)果顯示隨著痤瘡病情程度的加重，Th1細胞和Th17細胞水平呈逐漸升高趨勢（P＜0.05），并經(jīng)Pearson相關(guān)性分析，痤瘡患者Th1細胞和Th17細胞水平與病情嚴重程度呈正相關(guān)（P＜0.05）。分析其原因為Th17細胞在轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)下會產(chǎn)生IL-17，對NF-κB具有活化作用，促進有絲分裂原-活化蛋白激酶級聯(lián)反應(yīng)，刺激孤核受體轉(zhuǎn)錄因子的產(chǎn)生，因此導(dǎo)致強烈的致炎反應(yīng)[16-17]；Th17細胞還可募集中性粒細胞與巨噬細胞，從而加重炎癥反應(yīng)，促進痤瘡病情進展[18]；此外，痤瘡丙酸桿菌會誘發(fā)肉芽腫的形成，此過程涉及固有免疫應(yīng)答、特異性T淋巴細胞反應(yīng)、促炎因子與趨化因子的產(chǎn)生。分泌IFN-γ為主的Th1細胞是參與上述發(fā)生機制的主要淋巴細胞，隨著病情的加重炎性反應(yīng)逐步增強。免疫功能失衡時Th1細胞和Th17細胞均呈現(xiàn)明顯活化狀態(tài)，占比水平也逐漸升高。結(jié)果顯示[19-20]痤瘡患者存在Th1、Th17特征性細胞因子失衡狀態(tài)，體液免疫與細胞免疫應(yīng)答失常與痤瘡患者病情嚴重程度密切相關(guān)，失衡越嚴重，痤瘡嚴重程度越高。本研究為進一步探究Th1細胞、Th17細胞與痤瘡患者病情嚴重程度的關(guān)系，采用Logistic進行回歸分析，結(jié)果表明Th1細胞、Th17細胞均為重度痤瘡的影響因素（P＜0.05），與相關(guān)研究結(jié)果一致[21]，說明免疫功能異常會影響?zhàn)畀彽陌l(fā)生及其嚴重程度。因此，可將Th1、Th17細胞作為痤瘡發(fā)病機制的重點研究路徑，但Th1、Th17細胞在痤瘡免疫功能紊亂中的具體機制及兩者協(xié)同作用尚不明確，臨床可通過進行多項基礎(chǔ)研究進一步探討兩者關(guān)系。

綜上，痤瘡患者病情嚴重程度與Th1細胞和Th17細胞水平呈密切相關(guān)性，且兩者是重度痤瘡發(fā)生的影響因素，在痤瘡等免疫性皮膚病中具有不可忽視作用，可為自身免疫疾病的治療提供新靶點、開辟新道路。

[參考文獻]

[1]Xu H，Li H.Acne，the skin microbiome，and antibiotic treatment[J].Am J Clin Dermatol，2019，20（3）：335-344.

[2]Oge L K，Broussard A，Marshall M D.Acne vulgaris： diagnosis and treatment[J].Am Fam Physician，2019，100（8）：475-484.

[3]Pondeljak N，Lugovi?-Mihi? L.Stress-induced interaction of skin immune cells， hormones，and neurotransmitters[J].Clin Ther，2020，42（5）：757-770.

[4]楊晨，張玲琳，柳小婧，等.免疫療法在痤瘡治療中的研究進展[J].中國皮膚性病學(xué)雜志，2019，33（8）：959-963.

[5]Gudjonsson J E，Kabashima K，Eyerich K.Mechanisms of skin autoimmunity： Cellular and soluble immune components of the skin[J].J Allergy Clin Immunol， 2020，146（1）：8-16.

[6]He Y，Yang Q，Zhang T，et al.Pathogenic characteristics of Th17 cells based on the Il-17 signaling pathway in the regulation of sebaceous gland lipoprotein metabolism in an acne rat model[J].Iran J Immunol，2021，18（3）：203-209.

[7]中國痤瘡治療指南專家組.中國痤瘡治療指南（2014修訂版）[J].臨床皮膚科雜志，2015，44（1）：52-57.

[8]陶國華，曹興建.流式細胞術(shù)檢測TH1/TH2的方法探討[J].臨床檢驗雜志，2006，24（2）：116-118.

[9]趙辨.中國臨床皮膚病學(xué)[M].2版.南京：江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，2017：46-49.

[10]Habeshian K A，Cohen B A.Current issues in the treatment of acne vulgaris[J].Pediatrics，2020，145（Suppl 2）：S225-S230.

[11]Baldwin H，Tan J.Effects of diet on acne and its response to treatment[J].Am J Clin Dermatol，2021，22（1）：55-65.

[12]Bernales S A.Acne vulgaris： role of the immune system[J].Int J Dermatol，2021，60（9）：1076-1081.

[13]Xin Y，Zhang S，Deng Z，et al.Identification and verification immune-related regulatory network in acne[J].Int Immunopharmacol，2020，89（Pt B）：107083.

[14]王惠琳，孟繼龍，李東曉，等.高原環(huán)境下尋常型銀屑病患者Th17和Treg細胞及其相關(guān)因子的表達[J].皮膚病與性病，2018，40（5）：627-630.

[15]陳雪琴，宋志強.銀屑病中主要免疫細胞和相關(guān)細胞因子的研究進展[J].中國皮膚性病學(xué)雜志，2020，34（11）：1321-1325.

[16]Bernardini N，Skroza N，Tolino E，et al.IL-17 and its role in inflammatory， autoimmune，and oncological skin diseases： state of art[J].Int J Dermatol，2020，59（4）：406-411.

[17]蘇曉翠.尋常型銀屑病患者血清Th1，Th17細胞相關(guān)細胞因子的表達及臨床意義[D].南充：川北醫(yī)學(xué)院，2019.

[18]Eliasse Y，Leveque E，Garidou L，et al.IL-17+ mast cell/T helper cell axis in the early stages of acne[J].Front Immunol，2021，28（12）：740540.

[19]Yoshida Y，Oyama N，Iino S，et al.Long-standing refractory hidradenitis suppurativa responded to a brodalumab monotherapy in a patient with psoriasis： A possible involvement of Th17 across the spectrum of both diseases[J].J Dermatol，2021，48（6）：916-920.

[20]王泳，賴胡榕，王慶志，等.Th17/Treg細胞表達失衡與銀屑病關(guān)系的研究進展[J].宜春學(xué)院學(xué)報，2021，20（9）：61-66.

[21]顏雪珍，屈強強，黃麗萍，等.自血療法治療尋常型痤瘡的效果及對免疫功能的影響[J].臨床醫(yī)學(xué)研究與實踐，2020，5（1）：129-131，134.

[收稿日期]2021-12-13

本文引用格式：孔玉龍，袁廷艷，沈永強，等.痤瘡患者血清中Th1細胞和Th17細胞活化水平與病情嚴重程度的關(guān)系研究[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2023，32（4）：80-83.