茶香螺烷對(duì)草莓灰霉病菌（Botrytis cinerea）抑菌活性研究

張艷菊，程旭楠，劉 東，毛鑫琪，張?jiān)唬夹?，欒信哲，張星?/p>

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，哈爾濱 150030）

由灰葡萄孢（Botrytis cinerea）侵染引起的灰霉病是草莓主要真菌病害，種植期和采后均可發(fā)生[1]。尤其在儲(chǔ)藏、運(yùn)輸過程中，輕者造成草莓腐爛、品質(zhì)降低及保存時(shí)限縮短，嚴(yán)重時(shí)失去營養(yǎng)和商品價(jià)值，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失[2-3]。目前，生產(chǎn)上防治草莓灰霉病以化學(xué)防治為主[4]，但會(huì)引起農(nóng)藥殘留、環(huán)境污染等一系列問題，加重病原菌抗藥性，不符合綠色安全要求[5]。因此，開發(fā)安全環(huán)保、對(duì)人類和環(huán)境友好的高效殺菌保鮮產(chǎn)品和技術(shù)是目前亟待解決的研究課題。

生物熏蒸是植物有機(jī)物在分解過程中產(chǎn)生具有殺生性的揮發(fā)性氣體，抑制或殺滅病原菌的方法。該技術(shù)與化學(xué)殺菌劑相比可減少化學(xué)農(nóng)藥殘留，減少環(huán)境污染，適合有機(jī)蔬菜種植。儲(chǔ)運(yùn)期間應(yīng)用植物源揮發(fā)性物質(zhì)熏蒸處理果蔬，不直接接觸食品，無毒、無害、無殘留，安全環(huán)保，可提高水果品質(zhì)，延長保鮮期。蕓薹屬（Brassica L.）植物分解后產(chǎn)生異硫氰酸酯類化合物，具有高效的生物熏蒸作用，可有效防治植物土傳病害，同時(shí)改善土壤質(zhì)量，提高作物產(chǎn)量[6-7]。此外，百里香酚、肉桂醛等植物精油[8]、生防菌揮發(fā)氣體[9]以及丁香等植物源提取物[10]均具有殺菌活性。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，醉蝶花提取物茶香螺烷對(duì)黃瓜、辣椒、番茄和大豆等多種植物土傳病菌具有良好熏蒸作用，效果優(yōu)于十字花科植物。多數(shù)采后和田間病害是同一個(gè)病原菌，茶香螺烷對(duì)采后病害是否具有抑制效果尚無研究報(bào)道。

醉蝶花（Cleome spinosa）是白花菜科醉蝶花屬植物，除具有觀賞價(jià)值外，還具有抗菌、鎮(zhèn)痛、消炎、驅(qū)蟲等藥理作用[11]，Megil 等研究表明，醉蝶花揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)沙門氏菌（Salmonella spp.）、蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus）、綠膿假單胞菌（Psuedonomas aeruginosa）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大腸桿菌（Escherichia coli）、痢疾桿菌（Shigella spp.）具有中等抑菌活性，對(duì)化膿性鏈球菌A組具有顯著抑菌活性[12]。醉蝶花在農(nóng)業(yè)上用于防治植物病害的報(bào)道較少。本課題組對(duì)醉蝶花揮發(fā)性物質(zhì)作鑒定，共鑒定出21 種成分，包括13 種雜環(huán)、1 種色烯、1 種酯、1 種酸、1 種醇和4 種長鏈烷烴[13]，研究21 種成分抑菌活性發(fā)現(xiàn)，牡丹酚、芳樟醇和茶香螺烷對(duì)辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici）、大豆疫霉病菌（Phytophthora sojae）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）、小麥雪腐病菌（Gerlachia nivalis）、大豆根腐病菌（Rhizoctonia solani）和腐皮鐮孢菌（Fusarium solani）具有良好抑菌活性[14-15]。茶香螺烷又稱螺環(huán)氧化物，是用途最廣泛的高檔香料之一，因具有紅茶芳香而得名。常用于飲料、化妝品、香煙中，也是調(diào)味品香精香源。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，茶香螺烷對(duì)尖鐮孢菌（Fusarium oxysporum）、疫霉菌（Phytophthora sojae）、葡萄孢菌（Botrytis cinerea）等多種植物土傳病菌具有抑菌作用，在此基礎(chǔ)上，本文研究茶香螺烷對(duì)草莓灰霉病菌的熏蒸及抑菌作用，探討茶香螺烷對(duì)草莓灰霉病菌抑菌效應(yīng)，可為新型果蔬防腐保鮮劑開發(fā)及其機(jī)理研究提供借鑒和參考。

1 材料與方法

1.1 材料

草莓灰霉病病原菌（Botrytis cinerea）菌株HRB6，分離自草莓，由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理實(shí)驗(yàn)室保存。

茶香螺烷為分析純，購自上海麥克林生化科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 茶香螺烷對(duì)草莓灰霉病菌的抑菌活性

1.2.1.1 茶香螺烷對(duì)草莓灰霉病菌的熏蒸作用

將適量融化的PDA 培養(yǎng)基加入至培養(yǎng)皿中制成均勻平板，取活化好的草莓灰霉病菌，用直徑為0.90 cm 打孔器沿邊緣打取菌餅，接種在平板中心，在培養(yǎng)皿蓋中心加入10%DMSO溶解的茶香螺烷5 μL。試驗(yàn)設(shè)計(jì)茶香螺烷濃度分別為200、400、600、800、1 000 μL·L-1，以加入5 μL 10%DMSO 為空白對(duì)照，每處理5次重復(fù)。用封口膜封口，在26 ℃恒溫黑暗條件下倒置培養(yǎng)5 d，采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，計(jì)算抑菌率。通過DPSv 9.01 軟件，作藥劑濃度與抑菌率之間線性回歸分析，將抑菌率轉(zhuǎn)化為機(jī)率值（Y），藥劑濃度轉(zhuǎn)化為對(duì)數(shù)（X），求出毒力回歸方程Y=A+BX，相關(guān)系數(shù)R2，并根據(jù)方程計(jì)算不同藥劑濃度對(duì)草莓灰霉病菌有效抑制中濃度EC50。

1.2.1.2 茶香螺烷對(duì)草莓灰霉病菌的直接抑菌作用

在融化好的50 mL 定量PDA 培養(yǎng)基中分別加入200、400、600、800、1 000 μL·L-1茶香螺烷5 μL。將直徑0.90 cm 灰霉病菌菌餅接種在含有不同濃度茶香螺烷PDA 培養(yǎng)基上，每處理5 次重復(fù)，用封口膜封口，5 d 后采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，計(jì)算抑菌率。作出毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)R2，計(jì)算EC50值。

1.2.2 最小抑菌濃（MIC）與最小殺菌濃度（MBC）測(cè)定

采用平板稀釋法測(cè)定茶香螺烷對(duì)草莓灰霉病菌最小抑菌濃度和最小殺菌濃度。在融化的PDA培養(yǎng)基中分別加入茶香螺烷，藥劑最終濃度為2、1、0.5、0.25、0.125 和0.0625 μL·mL-1，以加入無菌水為對(duì)照。將直徑0.90 cm 灰霉病菌菌餅接種于含有藥劑PDA 平板上，每處理5 次重復(fù)，26 ℃恒溫黑暗培養(yǎng)48 h 后觀察菌絲生長情況。菌落無生長狀態(tài)處理的最低濃度為最小抑菌濃度（MIC），繼續(xù)培養(yǎng)3 d后，菌落無生長狀態(tài)處理的最低濃度為最小殺菌濃度（MBC）。

1.2.3 茶香螺烷對(duì)草莓灰霉病菌菌絲表面結(jié)構(gòu)的影響

在融化的PDA 培養(yǎng)基中加入茶香螺烷，調(diào)整至濃度為0.5 μL·mL-1，不含藥劑處理為對(duì)照。將灰霉病菌菌餅接種在培養(yǎng)基上，26 ℃恒溫黑暗培養(yǎng)5 d 后，采用掃描電鏡觀察菌絲結(jié)構(gòu)。在培養(yǎng)基上取5個(gè)取樣點(diǎn)，切成2 mm×5 mm小塊，放置在2.5%、pH 7.2 戊二醛中固定并置于4 ℃冰箱過夜。用0.1 mol·L-1、pH 7.2 磷酸緩沖液沖洗3 次，每次10 min。分別用濃度50%、70%、90%乙醇脫水各一次，每次10 min；100%乙醇脫水2 次，每次10 min。100%乙醇∶叔丁醇=1∶1；純叔丁醇各置換一次，每次15 min。放入-20 ℃冰箱冷凍室30 min，冷凍干燥儀對(duì)樣品干燥4 h。樣品表面鍍一層金屬膜，掃描電子顯微鏡觀察拍照。

1.2.4 茶香螺烷處理草莓灰霉病菌菌絲胞外電導(dǎo)率的測(cè)定

無菌水沖洗PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)7 d的草莓灰霉病菌，無菌紗布過濾后得到孢子懸浮液，取100 μL孢子懸浮液加入含有50 mL PDB 培養(yǎng)基的三角瓶中，在26 ℃、180 r·min-1搖床培養(yǎng)48 h，將得到的菌絲過濾后用無菌水清洗。稱取0.50 g菌絲，加入到含有5 mL 無菌水離心管中，在管中加入茶香螺烷，使最終濃度為MIC、MBC，以無菌水為對(duì)照，在26 ℃、180 r·min-1搖床中培養(yǎng)。處理1、2、3、4 h后分別取上清液測(cè)定電導(dǎo)率。

1.2.5 茶香螺烷處理草莓灰霉病菌麥角固醇含量的測(cè)定

菌絲獲取方式同1.2.4。參考Tian[16]、王江來[17]等測(cè)定麥角固醇方法。取一定量菌絲，測(cè)量濕重，將25%乙醇KOH 溶液與菌絲充分混合，在85 ℃水浴皂化4 h，冷卻至室溫，再加入正庚烷劇烈渦旋5 min，放置在室溫靜置2 h分層。取上層溶液測(cè)定230和282 nm處吸光度，根據(jù)公式計(jì)算麥角固醇含量。

1.2.6 茶香螺烷處理草莓灰霉病菌丙二醛（MDA）含量的測(cè)定

采用硫代巴比妥酸比色法測(cè)定菌絲中丙二醛（MDA）含量[18]。菌絲獲得方式同1.2.4。用液氮將菌絲研磨成粉狀，加入4 mL 0.6%TBA 和10%TCA混合溶液，充分混勻后置于沸水浴中水浴20 min，取出后立即冰浴冷卻，經(jīng)4 ℃、10 000 r·min-1離心10 min，取上清液用酶標(biāo)儀測(cè)定450、532和600 nm處吸光值，計(jì)算丙二醛（MDA）含量。

1.2.7 茶香螺烷處理對(duì)草莓灰霉病菌致病力相關(guān)基因表達(dá)量的影響

將灰霉菌接種在PDA 培養(yǎng)基中央，26 ℃恒溫黑暗培養(yǎng)3 d，再向培養(yǎng)皿蓋上加入10%DMSO稀釋的茶香螺烷10 μL，藥劑最終濃度為0.5 μL·mL-1，以加入10%DMSO 為對(duì)照。分別在加入藥劑12、24、36、48 h 后，Trizol 法提取菌絲總RNA，反轉(zhuǎn)錄獲取cDNA（Integrated First-strand cDNA Synthesis Kit），草莓灰霉病菌調(diào)控致病力相關(guān)基因引物見表1。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)致病力基因BcPDR1、細(xì)胞壁降解酶基因Bcpg5 和過氧化物酶基因BccatA 表達(dá)量變化。qPCR 反應(yīng)體系為20 μL：2×Fast qPCR Master Mixture（Green）10 μL，上、下游引物各0.5 μL，cDNA 模版1 μL，DEPCddH2O 8 μL。qPCR 反應(yīng)程序?yàn)椋?4 ℃預(yù)變性2 min，94 ℃變性15 s，56 ℃退火15 s，72 ℃延伸30 s，40次循環(huán)，數(shù)據(jù)采用2-ΔΔCt方法處理。

表1 灰葡萄孢內(nèi)參基因、目的基因引物序列Table 1 Primer sequence of internal reference gene and target gene of Botrytis cinerea

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

利用Excel 2016 和SPSS 26 軟件對(duì)數(shù)據(jù)結(jié)果作方差分析，計(jì)算毒力回歸方程和顯著性檢驗(yàn)（Duncan法、獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05具有顯著性）。

2 結(jié)果與分析

2.1 茶香螺烷對(duì)草莓灰霉病菌的抑菌活性

表2為茶香螺烷對(duì)草莓灰霉病菌熏蒸及直接抑菌活性。從表中可看出，無論采用熏蒸或直接接觸，茶香螺烷對(duì)草莓灰霉病菌均有一定抑制作用，隨著茶香螺烷濃度增加，其對(duì)草莓灰霉病菌抑菌活性逐漸升高。茶香螺烷濃度為1 000 μL·L-1時(shí)，熏蒸及直接接觸對(duì)草莓灰霉病菌抑菌率分別為89.11%和80.95%。茶香螺烷對(duì)草莓灰霉病菌熏蒸毒力回歸方程為：y=3.4024x+2.6422，EC50為4.93 μL·L-1；直接接觸毒力回歸方程為：y=2.7148x-2.5372，EC50為597.50 μL·L-1。從抑制中濃度EC50可看出，茶香螺烷處理草莓灰霉病菌的兩種方法中熏蒸處理的抑菌活性優(yōu)于直接接觸的抑菌活性。

表2 茶香螺烷對(duì)草莓灰霉病菌的抑菌活性Table 2 Inhibitory activity of theospirane against Botrytis cinerea in strawberry

2.2 最小抑菌濃度（MIC）與最小殺菌濃度（MBC）

茶香螺烷處理草莓灰霉病菌48 h后，茶香螺烷對(duì)草莓灰霉病菌最小抑菌濃度MIC為1.0 μL·mL-1。繼續(xù)培養(yǎng)3 d后，茶香螺烷在最小抑菌濃度MIC 下菌絲有生長，2.0 μL·mL-1濃度下菌絲無任何生長，為最小殺菌濃度MBC。

2.3 茶香螺烷處理對(duì)草莓灰霉病菌菌絲形態(tài)的影響

在掃描電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)茶香螺烷處理草莓灰霉病菌后菌絲形態(tài)與對(duì)照相比變化明顯。圖1A 為正常生長在PDA 培養(yǎng)基上未經(jīng)處理的草莓灰霉病菌菌絲，菌絲圓潤飽滿，形態(tài)完整，光滑平整，粗細(xì)均一；圖1B 為茶香螺烷處理后草莓灰霉病菌菌絲形態(tài)。圖中可觀察到茶香螺烷處理后草莓灰霉病菌菌絲受到破壞，表面粗糙，表皮有翹起。

圖1 茶香螺烷處理草莓灰霉病菌菌絲變化Fig.1 Change of mycelium surface of Botrytis cinerea in strawberry treated by theospirane

2.4 茶香螺烷處理對(duì)草莓灰霉病菌菌絲胞外電導(dǎo)率的影響

圖2為茶香螺烷處理草莓灰霉病菌后菌絲胞外電導(dǎo)率變化情況。未經(jīng)茶香螺烷處理的草莓灰霉病菌0～4 h 電導(dǎo)率幾乎無變化。茶香螺烷處理后，電導(dǎo)率明顯上升，與茶香螺烷濃度呈正相關(guān)。在1 h時(shí)，對(duì)照組電導(dǎo)率為91.1 μs·cm-1，茶香螺烷最小抑菌濃度MIC 為101.4 μs·cm-1、最小殺菌濃度MBC 為108.4 μs·cm-1。在0～4 h內(nèi)，茶香螺烷處理組電導(dǎo)率均為上升趨勢(shì)，4 h 時(shí)達(dá)到最大值，茶香螺烷MIC、MBC 與對(duì)照相比電導(dǎo)率分別升高31.20%和44.66%。

圖2 茶香螺烷對(duì)草莓灰霉病菌胞外電導(dǎo)率的影響Fig.2 Effects of theospirane on extracellular conductivity of Botrytis cinerea in strawberry

2.5 茶香螺烷處理對(duì)草莓灰霉病菌麥角固醇含量的影響

圖3為茶香螺烷處理草莓灰霉病菌后菌絲麥角固醇含量變化。從圖3可見，草莓灰霉病菌經(jīng)茶香螺烷處理后麥角固醇含量與未經(jīng)處理空白對(duì)照相比顯著降低（P＜0.05），且與加入的濃度呈負(fù)相關(guān)。相比對(duì)照在最小抑菌濃度MIC 下麥角固醇合成量降低8.18%，在最小殺菌濃度MBC 下，麥角固醇合成量降低12.58%。

圖3 茶香螺烷對(duì)草莓灰霉病菌麥角固醇含量的影響Fig.3 Effects of theospirane on ergosterol content ofBotrytis cinerea in strawberry

2.6 茶香螺烷處理對(duì)草莓灰霉病菌丙二醛（MDA）含量的影響

由圖4 可見，茶香螺烷處理后草莓灰霉病菌菌絲丙二醛含量與未經(jīng)處理對(duì)照丙二醛含量相比顯著升高（P＜0.05）。空白對(duì)照丙二醛含量為0.283 μmol·L-1，相比對(duì)照在最小抑菌濃度MIC 下丙二醛含量升高0.335 μmol·L-1，在最小殺菌濃度MBC下，丙二醛含量升高0.373 μmol·L-1。

圖4 茶香螺烷對(duì)草莓灰霉病菌丙二醛含量的影響Fig.4 Effects of theospirane on malondialdehyde content of Botrytis cinerea in strawberry

2.7 茶香螺烷處理對(duì)草莓灰霉病菌致病力相關(guān)基因表達(dá)量的影響

從圖5 可看出，茶香螺烷處理不同時(shí)間草莓灰霉病菌致病力相關(guān)BcPDR1 基因、過氧化物酶BccatA基因和細(xì)胞壁降解酶Bcpg5基因表達(dá)量與對(duì)照相比差異顯著。與對(duì)照相比，茶香螺烷處理后草莓灰霉病菌BcPDR1基因表達(dá)先下調(diào)后上升，表達(dá)量在12 和24 h 分別下調(diào)61%和74%，之后36 h與對(duì)照差異不顯著，48 h 表達(dá)量為初始1.26 倍；Bcpg5 基因表達(dá)量在12 h 達(dá)到最高，為對(duì)照17.34倍，之后表達(dá)量下降，24 h時(shí)是對(duì)照2.29倍，36 h與對(duì)照差異不顯著，48 h 表達(dá)量為初始1.14 倍；BccatA基因表達(dá)量在12、24 和36 h 均顯著下調(diào)，48 h與對(duì)照組差異不顯著。

圖5 茶香螺烷處理對(duì)草莓灰霉病菌致病力相關(guān)基因表達(dá)量的影響Fig.5 Effects of theospirane treatment on the expression of pathogenicity related genes of Botrytis cinerea in strawberry

3 討 論

生物熏蒸是一種綠色環(huán)保且具有良好發(fā)展前景的技術(shù)，常用于防治植物土傳病害。通過分解植物源體內(nèi)代謝物質(zhì)，產(chǎn)生揮發(fā)性氣體，抑制或殺滅土壤中病原菌[19]。茶香螺烷又稱螺環(huán)氧化物，是用途最廣泛的高檔香料之一，因具有紅茶芳香而得名。常用于飲料、化妝品、香煙中，也是調(diào)味品香精的香源。本文研究茶香螺烷對(duì)草莓灰霉病菌的抑菌活性，結(jié)果表明茶香螺烷通過熏蒸與直接接觸兩種方法處理草莓灰霉病菌，均可抑制草莓灰霉病菌菌絲的生長，其中熏蒸處理抑菌效果更好，原因可能是菌絲在生長過程中，藥劑揮發(fā)狀態(tài)下與其表面接觸面積更大，環(huán)境分布更均勻，藥效發(fā)揮更好[20]。與馬穩(wěn)霞等報(bào)道黃花蒿精油的活性成分體外熏蒸法抑菌更具優(yōu)勢(shì)一致[21]。本研究發(fā)現(xiàn)，茶香螺烷對(duì)菌絲細(xì)胞膜有一定損傷，細(xì)胞膜透性改變，溶液環(huán)境中電導(dǎo)率不斷升高且與藥劑濃度有關(guān)。原因可能是茶香螺烷與膜上的蛋白和脂質(zhì)發(fā)生作用，加大膜通透性，隨著滲透作用一些胞內(nèi)內(nèi)含物泄漏，提高溶液導(dǎo)電性[22]。與劉瓊等研究發(fā)現(xiàn)茼蒿提取物破壞西瓜枯萎病菌細(xì)胞膜，加大膜透性，引起電導(dǎo)率上升的結(jié)果一致[23]。

麥角固醇對(duì)真菌細(xì)胞膜的完整性具有重要作用，是細(xì)胞膜重要組成部分。麥角固醇是真菌膜上物質(zhì)運(yùn)輸、流動(dòng)性、完整性等正常生理生化活動(dòng)必不可缺的物質(zhì)[24]。本試驗(yàn)中，茶香螺烷對(duì)草莓灰霉病菌的麥角固醇合成途徑產(chǎn)生抑制作用，對(duì)膜的完整性也有一定負(fù)面影響。Zhao 等報(bào)道過丁香酚處理立枯絲核菌后，菌體質(zhì)壁分離，細(xì)胞膜成分遭到破壞，下調(diào)C-4 甲基甾醇氧化酶表達(dá)，麥角固醇合成途徑受阻[25]。丙二醛是膜脂過氧化主要降解產(chǎn)物，反映細(xì)胞膜膜脂過氧化程度，含量過高會(huì)對(duì)細(xì)胞膜產(chǎn)生毒害。本試驗(yàn)得出，茶香螺烷處理后菌絲中丙二醛含量顯著升高，與濃度呈正相關(guān)。上述研究結(jié)果表明，茶香螺烷處理草莓灰霉病菌后，麥角固醇含量降低與丙二醛積累共同作用下加速對(duì)菌絲細(xì)胞膜的損傷，達(dá)到抑制病原菌生長的效果。BcPDR1、BccatA、Bcpg5 是草莓灰霉菌致病力相關(guān)基因，分別對(duì)應(yīng)調(diào)控致病力、過氧化物酶和細(xì)胞壁降解酶表達(dá)。BcPDR1在敲除和突變情況下，不產(chǎn)生菌核和分生孢子，且菌絲生長速率變慢，致病力完全喪失[26]。在茶香螺烷熏蒸后灰霉病菌BcPDR1表達(dá)量下降，表明病原菌致病力和侵染能力降低。36 和48 h 表達(dá)量恢復(fù)，可能與藥劑揮發(fā)結(jié)束，新生菌絲致病力恢復(fù)有關(guān)；BccatA下調(diào)，過氧化物酶合成受阻，菌絲細(xì)胞清除活性氧能力降低，過氧化物不斷在菌絲細(xì)胞中積累，對(duì)其產(chǎn)生毒害作用，與MDA 含量升高相對(duì)應(yīng)；Bcpg5表達(dá)量在短時(shí)間內(nèi)急劇升高，細(xì)胞壁降解酶大量合成，菌絲無法正常產(chǎn)生細(xì)胞壁，對(duì)于菌絲細(xì)胞支撐與保護(hù)能力下降，導(dǎo)致細(xì)胞膜更易遭到破壞。綜上，茶香螺烷處理后，草莓灰霉病菌膜結(jié)構(gòu)受損，致病力降低，對(duì)草莓灰霉病菌具有良好抑菌活性，且無毒，對(duì)環(huán)境不造成污染，為草莓保鮮提供新途徑。

本課題組前期采用水蒸汽蒸餾法提取醉蝶花揮發(fā)性物質(zhì)，通過GC-MS 檢測(cè)出茶香螺烷占比為2.51%。因所提取的醉蝶花揮發(fā)性物質(zhì)為多種揮發(fā)性物質(zhì)混合物，為明確茶香螺烷對(duì)草莓灰霉病菌抑菌活性，本文選擇茶香螺烷化學(xué)分析純開展試驗(yàn)。茶香螺烷熏蒸和抑菌試驗(yàn)所用劑量是根據(jù)前期試驗(yàn)中醉蝶花揮發(fā)性物質(zhì)最佳抑菌濃度及茶香螺烷在醉蝶花揮發(fā)性物質(zhì)中占比而確定。茶香螺烷是一種無色透明狀液體，廣泛應(yīng)用于食品增香劑，具有安全、無毒等特點(diǎn)。本試驗(yàn)明確茶香螺烷對(duì)草莓灰霉菌抑菌活性，為今后在草莓灰霉菌防腐保鮮中應(yīng)用奠定基礎(chǔ)，但茶香螺烷易揮發(fā)，果蔬病害防治方面直接應(yīng)用具有一定局限性。今后可進(jìn)行緩釋微膠囊劑等劑型開發(fā)，在草莓運(yùn)輸貯藏期間，茶香螺烷濃度達(dá)到最小殺菌濃度，可發(fā)揮抑菌保鮮作用。