急性支氣管肺炎患兒EOS%、CCR3、Eotaxin與病情嚴(yán)重程度的關(guān)系

王雅玲 黃運(yùn)麗 田 密 王順蘭 肖 莉

（1.洪湖市人民醫(yī)院兒科，湖北 洪湖 433200；2.洪湖市中醫(yī)醫(yī)院內(nèi)科，湖北 洪湖 433200；3.洪湖市人民醫(yī)院內(nèi)科，湖北 洪湖 433200）

小兒支氣管肺炎是兒科常見(jiàn)疾病，若未得到及時(shí)控制，可能會(huì)引發(fā)其他重要器官或組織損傷，嚴(yán)重影響兒童健康[1]。因此，尋找敏感的血清學(xué)指標(biāo)對(duì)評(píng)估支氣管肺炎患兒病情發(fā)展具有重要意義。氣道炎癥一般以嗜酸性粒細(xì)胞（eosinophil，EOS）浸潤(rùn)為主[2]。發(fā)生炎性浸潤(rùn)時(shí)，趨化因子會(huì)與靶細(xì)胞相應(yīng)受體特異性結(jié)合，發(fā)揮組織定位、再循環(huán)等病理生理作用[3]。有研究發(fā)現(xiàn)，CC趨化因子受體3（CC chemokine receptor 3，CCR3）主要表達(dá)于EOS表面，通過(guò)與嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子（eotaxin，Eotaxin）特異性結(jié)合來(lái)發(fā)揮作用，可使炎癥細(xì)胞向病灶聚攏，經(jīng)活化、誘導(dǎo)，使更多炎癥因子被釋放，促進(jìn)炎癥發(fā)生、發(fā)展[4]。有研究結(jié)果顯示，EOS、CCR3、Eotaxin分別在支氣管哮喘等呼吸系統(tǒng)疾病患兒中高表達(dá)[5-6]，但其在支氣管肺炎患兒中的表達(dá)水平及與患兒病情嚴(yán)重程度的關(guān)系尚不清楚。為此，本研究擬探討血清CCR3、Eotaxin水平和嗜酸性粒細(xì)胞百分比（eosinophil percentage，EOS%）與急性支氣管肺炎患兒疾病嚴(yán)重程度的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2019年8月—2021年6月洪湖市人民醫(yī)院收治的急性支氣管肺炎患兒126例（支氣管肺炎組），其中男72例、女54例，年齡（5.97±1.22）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：1）均符合第8版《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》[7]中急性支氣管肺炎相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；2）年齡≤12歲；3）均為首次治療，入院前未使用糖皮質(zhì)激素、免疫制劑、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗菌藥物。排除標(biāo)準(zhǔn)：1）合并血液系統(tǒng)疾病或感染性疾??；2）合并腫瘤、免疫系統(tǒng)疾??；3）合并其他肺部疾病，如哮喘、慢性支氣管肺炎、肺結(jié)核；4）合并心、肝、腎等重要臟器功能不全。根據(jù)急性支氣管肺炎患兒入院時(shí)臨床肺部感染評(píng)分（clinical pulmonary infection score，CPIS）[8]將126例患兒細(xì)分為輕癥組（CPIS評(píng)分≤6分）[81例，其中男45例、女36例，年齡（6.04±1.29）歲]和重癥組（CPIS評(píng)分>6分）[45例，其中男27例、女18例，年齡（5.89±1.17）歲]。另選取同期洪湖市人民醫(yī)院體檢健康兒童60名（正常對(duì)照組），其中男36名、女24名，年齡（5.94±1.52）歲。入選標(biāo)準(zhǔn)：1）年齡≤12歲；2）體格檢查均正常；3）配合度良好，可完成相關(guān)研究。支氣管肺炎組與正常對(duì)照組年齡、性別差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。本研究獲得洪湖市人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（LS2019-032），所有研究對(duì)象家屬或監(jiān)護(hù)人均知情同意，并自愿簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 血清CCR3、Eotaxin水平檢測(cè)

采集支氣管肺炎患者確診后次日、正常對(duì)照者體檢當(dāng)日的清晨空腹肘靜脈血5 mL，4 ℃ 1 000×g離心10 min，分離血清，-20 ℃保存，1周內(nèi)統(tǒng)一完成檢測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清CCR3、Eotaxin水平。人CCR3試劑盒購(gòu)自上海聯(lián)邁生物工程有限公司[批號(hào)M100975；線(xiàn)性范圍4.00～50.00 pg/mL，最低檢測(cè)限為2.12 pg/mL，批間變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）<15%，批內(nèi)CV<10%，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)r值為0.996]；人Eotaxin試劑盒購(gòu)自北京百奧萊博科技有限公司（批號(hào)BL60172；線(xiàn)性范圍63.10～300.00 pg/mL，最低檢測(cè)限為13.80 pg/mL，批間CV<15%，批內(nèi)CV<10%，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)r值為0.993）。檢測(cè)儀器為FT-SY96A全自動(dòng)酶標(biāo)儀（山東風(fēng)途物聯(lián)網(wǎng)科技有限公司）。嚴(yán)格按儀器和試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.2.2 外周血EOS%檢測(cè)

采用真空乙二胺四乙酸二鉀抗凝管采集所有研究對(duì)象靜脈血3 mL。采用XE-2100全自動(dòng)血液分析儀（日本希森美康公司）及配套試劑檢測(cè)EOS%。

1.2.3 肺功能檢測(cè)

采用FGC-A+型全自動(dòng)肺功能檢測(cè)儀（安徽安科生物工程股份有限公司）檢測(cè)急性支氣管肺炎患兒肺功能，包括潮氣量（tidal volume，VT）、呼吸頻率（respiratory rate，RR）、達(dá)峰容積比（the ratio of volume to peak expiratory flow to total expiratory volume，VPTEF/VE）、達(dá)峰時(shí)間比（the ratio of time to peak tidal expiratory flow to total expiratory time，TPTEF/TE）。檢測(cè)前清除患兒鼻咽部位分泌物，讓患兒自然睡眠或使用10%水合氯醛對(duì)患兒進(jìn)行催眠，取仰臥位，將儀器面罩扣在患兒口鼻上，壓緊邊緣防止漏氣，每例患兒檢測(cè)5次，取至少3次有效數(shù)據(jù)，檢測(cè)結(jié)束后，取測(cè)量結(jié)果平均值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。呈正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示，2個(gè)組之間比較采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例或率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Pearson相關(guān)分析評(píng)估各項(xiàng)指標(biāo)之間的相關(guān)性。采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線(xiàn)評(píng)價(jià)各項(xiàng)指標(biāo)診斷重癥急性支氣管肺炎的效能。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 支氣管肺炎組和正常對(duì)照組EOS%和血清CCR3、Eotaxin水平比較

支氣管肺炎組EOS%和血清CCR3、Eotaxin水平均顯著高于正常對(duì)照組（P=0.000）。見(jiàn)表1。

表1 支氣管肺炎組和正常對(duì)照組EOS%、血清CCR3、Eotaxin水平比較

2.2 輕癥組和重癥組血清CCR3、Eotaxin水平、EOS%、肺功能指標(biāo)比較

與輕癥組比較，重癥組血清CCR3、Eotaxin水平和EOS%、RR顯著升高（P<0.01），VT、VPTEF/VE、TPTEF/TE顯著降低（P<0.01）。見(jiàn)表2。

表2 輕癥組和重癥組EOS%、血清CCR3、Eotaxin水平及肺功能指標(biāo)比較

2.3 急性支氣管肺炎患兒EOS%、CCR3、Eotaxin與肺功能指標(biāo)的相關(guān)性分析

急性支氣管肺炎患兒EOS%、CCR3、Eotaxin與RR呈正相關(guān)（P<0.05），與VPTEF/VE、TPTEF/TE呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），與VT無(wú)相關(guān)性（P>0.05）。見(jiàn)表3。

表3 急性支氣管肺炎患兒EOS%和血清CCR3、Eotaxin水平與肺功能指標(biāo)的相關(guān)性

2.4 EOS%和血清CCR3、Eotaxin水平對(duì)重癥急性支氣管肺炎患兒的診斷價(jià)值

ROC曲線(xiàn)分析結(jié)果顯示，以輕癥組為對(duì)照，EOS%和血清CCR3、Eotaxin水平單項(xiàng)檢測(cè)和聯(lián)合檢測(cè)（以3項(xiàng)指標(biāo)均陽(yáng)性為聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性）診斷重癥急性支氣管肺炎的曲線(xiàn)下面積（area under curve，AUC）分別為0.861、0.762、0.826、0.931。見(jiàn)表4、圖1。

圖1 EOS%和血清CCR3、Eotaxin水平診斷重癥急性支氣管肺炎的ROC曲線(xiàn)

表4 EOS%、血清CCR3、Eotaxin水平對(duì)重癥急性支氣管肺炎患兒的診斷價(jià)值

3 討論

由EOS、淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等分泌的細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)等產(chǎn)生的浸潤(rùn)性炎癥反應(yīng)是支氣管肺炎的病理學(xué)基礎(chǔ)，其中EOS是引起支氣管肺炎的重要效應(yīng)細(xì)胞之一，在炎癥的發(fā)展過(guò)程中起核心作用[9-10]。有研究認(rèn)為，肺泡或上皮損傷可引起炎癥細(xì)胞的激活，導(dǎo)致白細(xì)胞介素33、白細(xì)胞介素25和胸腺基質(zhì)淋巴蛋白的分泌，這些上皮細(xì)胞因子可刺激2型固有淋巴細(xì)胞并使輔助性T細(xì)胞2（T helper cell 2，Th2）極化，引起肺部EOS激活、聚集，上述細(xì)胞因子的存在又進(jìn)一步放大了EOS的激活效應(yīng)和Th2極化，加重患者病情[11]。Eotaxin是EOS高度特異性的趨化因子，正常情況下，Eotaxin主要由呼吸道上皮細(xì)胞產(chǎn)生；當(dāng)支氣管上皮細(xì)胞處于炎癥狀態(tài)時(shí)，Eotaxin主要由巨噬細(xì)胞和EOS分泌[12]。Eotaxin的活性功能受Eotaxin受體CCR3的調(diào)控。有研究結(jié)果顯示，Eotaxin可與EOS表面的特異性受體CCR3結(jié)合，通過(guò)激活絲裂原活化蛋白激酶途徑使EOS脫顆粒，從而使EOS升高[13]。徐凌云等[14]的研究結(jié)果顯示，支氣管哮喘患兒血清Eotaxin水平明顯高于正常對(duì)照組和肺炎組（P<0.05），且血清Eotaxin可在一定程度上反映呼吸道炎癥狀態(tài)。有研究結(jié)果顯示，慢性喘息組、肺炎組、正常對(duì)照組EOS%依次降低（P<0.05），EOS對(duì)兒童支氣管哮喘具有較高的診斷價(jià)值[15]，與本研究結(jié)果相似。本研究結(jié)果顯示，急性支氣管肺炎患兒EOS%和血清CCR3、Eotaxin水平均顯著高于正常對(duì)照者（P=0.000），且重癥組EOS%和血清CCR3、Eotaxin水平顯著高于輕癥組（P=0.000），表明EOS%、CCR3和Eotaxin可在一定程度上反映急性支氣管肺炎患兒病情的嚴(yán)重程度。ROC曲線(xiàn)分析結(jié)果顯示，EOS%和血清CCR3、Eotaxin水平單項(xiàng)檢測(cè)和聯(lián)合檢測(cè)診斷重癥急性支氣管肺炎的AUC分別為0.861、0.762、0.826、0.931，提示EOS%和血清CCR3、Eotaxin水平對(duì)重癥急性支氣管肺炎均有一定的診斷價(jià)值，聯(lián)合檢測(cè)的診斷效能更高。

本研究結(jié)果還顯示，與輕癥組相比，重癥組VT減少，RR明顯增快，表明隨著支氣管肺炎病情的加重，患兒肺內(nèi)通氣/血流比例失調(diào)，發(fā)生氣體彌散障礙，導(dǎo)致低氧血癥或高碳酸血癥，機(jī)體代償性RR增加，與李春芳等[16]支氣管肺炎患兒每分鐘VT降低的結(jié)論相符。VPTEF/VE、TPTEF/TE是反映氣道阻塞，尤其是小氣道阻塞的重要指標(biāo)[17]，數(shù)值越低，表明小氣道阻塞越嚴(yán)重。本研究Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，EOS%、CCR3和Eotaxin與RR呈正相關(guān)（P<0.05），與VPTEF/VE、TPTEF/TE呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），表明外周血EOS%和血清CCR3、Eotaxin水平可在一定程度上反映急性支氣管肺炎患兒肺功能的變化，具有較高的臨床價(jià)值。

綜上所述，急性支氣管肺炎患兒血清CCR3、Eotaxin水平和EOS%顯著升高，可在一定程度上反映患兒肺功能狀態(tài)，與患兒病情的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，或可作為臨床判斷急性支氣管肺炎病情發(fā)展的血清學(xué)指標(biāo)。