UPLC-MS/MS 法測定食品中5 種非法添加化學降血壓藥物

◎ 方 凌，朱月輝，常婷婷

（銅陵市食品藥品檢驗中心，安徽 銅陵 244000）

隨著生活水平的提高，人們對個人健康越來越關注。為擺脫對化學藥品的依賴性及長時間服藥可能引起的諸多不良反應，高血壓患者往往優(yōu)先考慮購買、食用輔助降血壓類食品。然而，受利益驅(qū)動，一些不法商家為達到快速降壓的“奇效”[1]，在產(chǎn)品中非法添加降壓類藥物成分，用法用量不加控制，患者若長時間服用此類產(chǎn)品或?qū)е轮貜陀盟?，會嚴重危害人們的生命安全和身體健康。

銅陵市食品藥品檢驗中心在近5 年的食品非法添加藥物監(jiān)檢工作中發(fā)現(xiàn)，某些不法分子除了非法添加市場上常見的化學藥品外，還在食品中加入國外常用但未在國內(nèi)上市的化學藥品，具有隱蔽性，且缺乏相對應的檢測方法，難以發(fā)現(xiàn)并追究其違法行為。本文運用液質(zhì)聯(lián)用技術[2]，采用多反應監(jiān)測掃描方式[3]，建立同時檢測食品中5 種降壓類藥物成分的方法。其中，托拉塞米、坎地沙坦酯、拉西地平在我國已批準上市，作為藥品管理多年；阿齊沙坦是一種血管緊張素II 受體拮抗劑，多用于治療高血壓癥，且具有平穩(wěn)持久降壓作用[4-6]，于2021 年在國內(nèi)獲批上市；美托拉宗臨床使用已達30 年，一直被美國藥典所收載，未在我國上市，國內(nèi)對其檢驗研究較少。該方法簡單快速，結果準確可靠，以期為發(fā)現(xiàn)并打擊非法添加行為，完善食品行業(yè)監(jiān)管體系提供技術支持[7]。

1 材料與方法

1.1 對照品與試劑

托拉塞米（批號：100605- 201402；純度：100%；來源：中檢院）；拉西地平（批號：100741- 201903；純度：100%；來源：中檢院）；美托拉宗（批號：1214-RB-0042；純度：99.1%；來源：CATO）；阿齊沙坦（批號：H20D11S134845，純度：98%；來源：源葉生物）；坎地沙坦酯（批號：Y16A9C58724，純度：99%；來源：源葉生物）；甲酸：色譜級；乙腈：質(zhì)譜級；乙酸銨：色譜級；水：超純水。

1.2 儀器

XEVO TQ/S 超高效液相色譜串聯(lián)四級桿質(zhì)譜儀（美國Waters 公司）；BSA224S-CW 電子天平（德國Sartorius 公司）；KQ-250DV 超聲洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；3-30KS 離心機（德國Sigma 公司）。

1.3 實驗方法

1.3.1 色譜條件

色 譜 柱：C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）； 流動相：A 為含0.1%甲酸的20 mmol·L-1乙酸銨溶液，B 為0.1%甲酸的乙腈溶液，梯度洗脫程序見表1；流速：0.2 mL·min-1；柱溫：35 ℃；進樣量：5 μL。

表1 梯度洗脫程序表

1.3.2 質(zhì)譜條件

離子源：ESI 電噴霧離子源；檢測方式：ESI+模式下MRM 多反應監(jiān)測；毛細管電壓：3.0 kV；離子源溫度：160 ℃；脫溶劑氣溫度：450 ℃；脫溶劑氣流量：550 L·Hr-1；5 種目標化合物優(yōu)化后質(zhì)譜參數(shù)見表2。

表2 5 種成分質(zhì)譜參數(shù)表

1.3.3 溶液制備

（1）對照品溶液制備。避光條件下分別精密稱取5 種藥物成分標準品各10 mg 于10 mL 棕色容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，配制成1 mg·mL-1單一成分標準儲備液于-20 ℃避光貯存，有效期3 個月。根據(jù)實際工作需要，用乙腈水溶液（1 ∶1）配制系列濃度的混合標準溶液。

（2）樣品溶液制備。避光條件下取試樣適量混勻，研細，精密稱取1 g（精確至0.001 g）置于50 mL棕色容量瓶中，加乙腈適量，超聲提取30 min，放冷至室溫，用乙腈定容，轉(zhuǎn)移至50 mL 離心管中，4 000 r·min-1離心5 min，上清液經(jīng)微孔濾膜過濾（0.22 μm，有機相），取續(xù)濾液，根據(jù)實際濃度用乙腈水溶液（1 ∶1）適當稀釋至線性范圍內(nèi)，備用，樣品經(jīng)處理后在48 h 內(nèi)盡快測定。

2 結果與分析

2.1 線性范圍、檢出限、定量限

取1.3.3（1）項下單一成分對照品溶液配制混合標準溶液，在0.5 ～10.0 ng·mL-1線性范圍內(nèi)，以質(zhì)量濃度（ng·mL-1）為橫坐標x，以目標成分的峰面積為縱坐標y，進行線性回歸，得到不同基質(zhì)下各組分的回歸方程；取1.3.3（1）項下單一成分對照品溶液逐步稀釋，進行測定，在組分有明顯響應的前提下，根據(jù)3 倍信噪比（S/N=3）和10 倍信噪比（S/N=10）分別計算檢出限和定量限。由表3 可知，各種目標成分在線性范圍內(nèi)的相關系數(shù)（r）均大于0.99，其中拉西地平、托拉塞米、阿奇沙坦線性范圍為1.0 ～10.0 ng·mL-1、檢 出 限 均 為25 μg·kg-1、定 量 限 均 為50 μg·kg-1；美托拉宗、坎地沙坦酯線性范圍為0.5 ～5.0 ng·mL-1、檢出限均為12.5 μg·kg-1、定量限均為25 μg·kg-1。

表3 5 種成分線性方程、檢出限以及定量限結果表

2.2 回收率以及精密度實驗

取空白樣品加標，美托拉宗、坎地沙坦酯的添加水平為25 μg、50 μg、250 μg，拉西地平、托拉塞米、阿齊沙坦的添加水平為50 μg、100 μg、500 μg；每個添加水平共6 組，按照樣品處理后進行測定，記錄峰面積，計算回收率及相對標準偏差，考察方法的回收率及精密度。由表4 可知，5 種成分的平均加標回收率為92.66%～111.17%，相對標準偏差為0.99%～5.00%，適用于測定要求。

表4 5 種成分回收率以及精密度結果表

2.3 樣品測定結果

用該方法對近期收集的市場及網(wǎng)絡平臺銷售的50 批降壓類食品進行測定，結果有6 批樣品檢出上述5 種非法添加，為其中1 ～4 種混合添加。

3 結論

本方法簡便快捷，靈敏度高，檢出限、定量限、線性、精密度和回收率均符合日常檢測工作要求，可為稽查執(zhí)法部門發(fā)現(xiàn)、打擊此類非法添加行為起到技術支撐作用。