ABCA1基因多態(tài)性與女性2型糖尿病患者心血管事件風險的研究

夏津濱，王昀，王晨，劉鵬

糖尿?。╠iabetes mellitus，DM）是全世界衛(wèi)生保健系統(tǒng)面臨的一個嚴重的持續(xù)問題[1]。且該病呈現(xiàn)高發(fā)病率，根據(jù)國際糖尿病聯(lián)盟（IDF）測算，截至2040年全球?qū)⒓s有6.42億糖尿病患者，約占全球成年人口的8.8%[2]。此外，死于其并發(fā)癥的問題日益突出，在20～79歲年齡范圍內(nèi)，糖尿病占全球死亡率的6.8%，是人類預(yù)期壽命縮短的主要原因[3]。雖然全球成人女性糖尿病患病率比男性略低（9.0% vs.9.6%），然而女性糖尿病患者死亡人數(shù)高于男性[4]。糖尿病是心血管疾病的重要危險因素，但女性因糖尿病引起的冠狀動脈粥樣硬化性心臟病（冠心?。┑南鄬︼L險高于男性[5]。最近一項涉及5 162 654例參與者關(guān)于糖尿病與心血管疾病和各種原因死亡率之間關(guān)系性別差異的薈萃分析顯示，與患有相同疾病的男性相比，患有糖尿病的女性患冠心病死亡的風險高出58%[6]。因此，確定女性糖尿病患者的潛在易感基因位點勢在必行。

ABCA1調(diào)控人體膽固醇流出減少的主要基因之一，ABCA1基因rs2230806的基因座在膽固醇流出中具有重要作用[7]。前期研究發(fā)現(xiàn)rs2230806也是最廣泛研究的常見錯義多態(tài)性，對亞洲人的研究報道ABCA1 SNP（rs2230806，也稱R219K或G1051A）與2型糖尿病相關(guān)[8]。本研究探討ABCA1基因rs2230806位點多態(tài)性與女性糖尿病患者動脈粥樣硬化病變程度的關(guān)系，分析結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象參照WHO（1999）指南對糖尿病診斷標準，在北京中醫(yī)醫(yī)院順義醫(yī)院內(nèi)分泌科納入年齡18～75歲的196例女性2型糖尿病患者及90例女性健康志愿者作為對照組。所有患者均已簽署知情同意書，本研究經(jīng)北京中醫(yī)醫(yī)院順義醫(yī)院倫理委員會審批通過。

1.2 基因多態(tài)性采集研究者的年齡、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）等水平。使用以下方程計算動脈粥樣硬化指數(shù)（AI）：AI =[（TC）-（HDL-C）]/[HDL-C]。收集研究者外周靜脈血，QIAamp DNA Blood Mini Kit（德國Qiagen公司）提取基因組DNA，用TaqMan SNP基因分型分析試劑盒（美國Applied Biosystems公司）和ABI PRISM 7500 fast序列檢測系統(tǒng)對患者樣品進行基因分型。上游引物5’-GTGTCCTGTCATTGT GCCTTGT-3’，下游引物5’-CTCCCAGCCAGCCGTACTTT-3’。PCR程序為95 ℃預(yù)孵育10 min，92 ℃變性15 s，60 ℃延伸60 s，共計40個循環(huán)。隨機選擇PCR產(chǎn)物進行DNA測序驗證以確認基因分型的準確性。

1.3 統(tǒng)計學分析統(tǒng)計分析軟件采用SPSS 22.0軟件包，臨床數(shù)據(jù)計數(shù)資料以例數(shù)（構(gòu)成比）及以均值±標準差（±s）表示，并通過卡方檢驗進行測試以檢測患者臨床特征的差異。使用卡方檢驗比較了SNP的Hardy-Weinberg平衡分析以及SNP的基因型和等位基因頻率。通過三種遺傳模型（加性，顯性和隱性）的多變量邏輯回歸分析，同時對年齡和性別進行校正。

2 結(jié)果

2.1 糖尿病患者及健康志愿者的人口統(tǒng)計學和臨床特征本研究共納入286例參與者，其中糖尿病組196例；健康志愿者組90例。兩組的各臨床特征中，年齡、HDL-C、LDL-C、AI差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），表1。

表1 健康志愿者組與糖尿病組各臨床指標的比較

2.2 ABCA1 rs2230806基因型和等位基因頻率分布糖尿病組與健康志愿者組兩組基因型和等位基因頻率均在Hardy-Weinberg平衡內(nèi)（P＞0.05），且其次要等位基因頻率超過5%。兩組基因型均有統(tǒng)計學差異（基因型頻率，P=0.015）；但等位基因頻率之間無統(tǒng)計學差異（等位基因頻率，P =0.058），表2。

表2 ABCA1 rs2230806基因型和等位基因頻率分布

2.3 ABCA1 rs2230806基因多態(tài)性與女性2型糖尿病的關(guān)系通過三種統(tǒng)計模型（加性，顯性和隱性）來檢驗rs2230806多態(tài)性與女性2型糖尿病的基因型關(guān)聯(lián)。在加性模型中，發(fā)現(xiàn)以AA作為參照，GG基因型的女性2型糖尿病風險顯著降低[AA vs.AG、GG；優(yōu)勢比（OR）1.598；95%CI：0.805～3.147；P=0.016]；在隱性模型中，發(fā)現(xiàn)以AA+AG作為參照，GG基因型的DM風險顯著降低（AG+AA vs.GG；OR=2.040；95%CI：1.217～3.412；P=0.007）；在顯性模型中差異無統(tǒng)計學意義。根據(jù)年齡校正后，三種模型均無統(tǒng)計學意義，表3。

表3 ABCA1 rs2230806基因多態(tài)性與糖尿病的關(guān)系

3 討論

由于女性糖尿病患者的發(fā)生心血管事件的概率大于男性患者，因此，早期預(yù)測女性糖尿病的動脈粥樣硬化發(fā)病風險尤為重要。rs2230806多態(tài)性控制肽的殘基219處的精氨酸被賴氨酸取代，這種替代可能會影響ABCA1的功能，從而導致膽固醇逆向轉(zhuǎn)運的第一步受阻，影響機體膽固醇代謝[9]。肝臟中ABCA1在與TG水平升高和高密度脂蛋白水平降低之間具有相關(guān)性[10]。值得注意的是，ABCA1的功能還與體重、胰島素分泌和敏感性下降及血糖水平升高存在相關(guān)性[11]。ABCA1對心血管疾病和代謝疾病具有重要的有益作用，因此，作為預(yù)防這些疾病的治療靶點，恢復(fù)ABCA1功能具有重要意義[12]。在一個中國隊列中的結(jié)果顯示rs2230806多態(tài)性與妊娠期糖尿病患者的HDL-C濃度具有相關(guān)性，尤其是體質(zhì)指數(shù)較高的患者，這支持了ABCA1作為HDL-C的調(diào)節(jié)劑在膽固醇反向轉(zhuǎn)運中發(fā)揮核心作用的觀點[13-15]。

本研究檢測了196例女性糖尿病患者和90例女性健康志愿者ABCA1基因rs2230806位點多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)女性糖尿病患者存在ABCA1基因多態(tài)性，GG、G等位基因患者糖尿病風險較AA、A等位基因降低，提示攜帶G等位基因具有較高的糖尿病腎病患病風險。針對中國妊娠期糖尿病患者的研究也發(fā)現(xiàn)，具有GG等位基因患者AI指數(shù)顯著低于AA等位基因[12]，與本研究結(jié)果一致。但遺憾的是，根據(jù)年齡進行校正后，未發(fā)現(xiàn)ABCA1基因rs2230806位點多態(tài)性與糖尿病存在相關(guān)性，可能與本研究納入樣本量較少以及健康志愿者年齡與糖尿病患者差異較大有關(guān)。本研究證實攜帶ABCA1基因rs2230806 GG基因型的女性人群中，糖尿病發(fā)病風險及心血管事件的發(fā)生率較低。