梯度乙醇沉淀工藝對(duì)靈芝多糖結(jié)構(gòu)特征及生物活性的影響

陸建能　麥碧儀　劉義軍　趙雨詩(shī)　陳云蘭　林麗靜　周大圣　張明

關(guān)鍵詞：靈芝；乙醇；梯度沉淀；多糖；理化特性

中圖分類(lèi)號(hào)：S567.3.11 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

靈芝是我國(guó)重要的藥食兩用真菌，具有扶正固本、滋補(bǔ)強(qiáng)壯、延年益壽等功效[1]。靈芝子實(shí)體中含有糖類(lèi)、三萜類(lèi)、甾醇類(lèi)和氨基酸等成分，在免疫調(diào)節(jié)、降血脂和免疫性肝損傷等方面具有良好的臨床療效[2-3]，靈芝藥效與靈芝多糖活性和含量密切相關(guān)，靈芝多糖成為衡量靈芝產(chǎn)品質(zhì)量?jī)?yōu)劣的最重要指標(biāo)之一[4]。

靈芝多糖（GLPs）的結(jié)構(gòu)和分子量是影響其免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤和調(diào)血脂以及保護(hù)肝臟等生物活性的關(guān)鍵因素[5-7]。靈芝多糖的支鏈種類(lèi)以及支鏈和主鏈間的比例會(huì)隨提取方法的不同而有所變化[8]，靈芝多糖分子量也會(huì)隨分離方法的不同而有所變化，從而影響靈芝多糖的生物活性[9]。醇法、膜法等分離技術(shù)是國(guó)內(nèi)外實(shí)現(xiàn)不同分子鏈靈芝多糖的常見(jiàn)方法。CAI 等[10]利用級(jí)聯(lián)膜技術(shù)從靈芝多糖分離出322.0、18.8、6.4 kDa 3 種呈β 構(gòu)型的多糖，所有分級(jí)的GLPs 均可以延長(zhǎng)老鼠的游泳時(shí)間，提高耐力和促進(jìn)疲勞恢復(fù)，推斷分子量在10 kDa 以上的GLPs 可能是潛在的抗疲勞藥物。MA 等[11]采用超濾膜法從靈芝多糖中分離出GLP1（>10 kDa）、GLP2（8～10 kDa）、GLP3（2.5～8 kDa）和GLP4（<2.5 kDa）4 個(gè)靈芝多糖，GLP1和GLP2 具有更強(qiáng)的抗氧化和抗增殖活性，高分子量靈芝多糖成分具有更強(qiáng)的生物活性。KAN 等[12]從超微靈芝子實(shí)體粉中提取多糖，采用無(wú)水乙醇分級(jí)沉淀得到4 種不同乙醇濃度下的靈芝多糖，GLP80 的抗氧化活性最好，由于該方法獲得的80%濃度下醇沉的靈芝多糖含有GLP40 和GLP60成分，并不能準(zhǔn)確地表達(dá)乙醇濃度對(duì)靈芝多糖的分離效果，而關(guān)于乙醇逐級(jí)分離沉淀靈芝多糖的相關(guān)報(bào)道較少。為了揭示靈芝多糖在不同濃度乙醇中的分布規(guī)律，以及各濃度下分離的靈芝多糖理化特性等相關(guān)性質(zhì)的差異，本研究采用乙醇逐級(jí)分離沉淀得到不同靈芝多糖組分，對(duì)其單糖組成、分子量分布等結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行表征，并研究不同組分的體外抗氧化活性及對(duì)鼠李糖乳桿菌生長(zhǎng)的影響，為靈芝多糖多樣化產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料

靈芝由本實(shí)驗(yàn)室栽培，栽培方法參考LIU 等[13]的方法。D-甘露糖（D-Man）、L-鼠李糖（L-Rha）、D-葡萄糖（D-Glc）、D-半乳糖（D-Gal）、L-阿拉伯糖（ L-Ara ）、D- 巖藻糖（ D-Fuc ）、D- 木糖（D-Xyl）、D-果糖（D-Fru）標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司。DPPH 自由基清除能力試劑盒（分光法）、總抗氧化能力（T-AOC）試劑盒（分光法）、羥自由基清除能力試劑盒（分光法）購(gòu)自北京艾普希隆生物科技有限公司。鼠李糖乳桿菌LGG 購(gòu)自中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心（China General Microbiological Culture CollectionCenter， CGMCC）。

1.2 方法

1.2.1 靈芝多糖的提取 將靈芝切片粉碎，用靈芝粉末和無(wú)水乙醇以1∶15（m/V）的比例，加入圓底蒸餾瓶，在真空提取系統(tǒng)中50 ℃回流提取3 h，過(guò)濾，得濾渣（去除原料中的油脂、色素、低聚糖和小分子物質(zhì)等），50 ℃烘干。取靈芝粉末1000 g，按料水比1∶15（m/V）加入蒸餾水，在90 ℃水浴鍋中提取2 h，過(guò)濾，上清液濃縮至原液的1/3，5000 r/min 離心10 min 進(jìn)一步除雜，得到靈芝多糖溶液。在靈芝多糖溶液中加入適量無(wú)水乙醇，調(diào)節(jié)溶液乙醇濃度為40%（V/V）時(shí)得到絮狀沉淀，5000 r/min 離心10 min，收集沉淀，命名為GLP40；所得上清液繼續(xù)加入適量無(wú)水乙醇，調(diào)節(jié)溶液乙醇濃度為50%（V/V）時(shí)得到絮狀沉淀，5000 r/min 離心10 min，收集沉淀，命名為GLP50；按照上述方法，分別沉淀得到GLP60、GLP70、GLP80、GLP90；所得沉淀置于–40 ℃冷凍干燥機(jī)凍干48 h，然后置于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 多糖含量測(cè)定 采用苯酚-硫酸法測(cè)定靈芝子實(shí)體中的多糖含量。以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，配制0.1 mg/mL 的葡萄糖溶液。分別吸取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mL 葡萄糖溶液于15 mL 具塞玻璃試管中，加蒸餾水補(bǔ)至1 mL配成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液，然后分別加入1.0 mL 6%苯酚溶液，快速加入5.0 mL 硫酸，振蕩20 s 混勻，100 ℃水浴15 min，快速冷卻至室溫，在490 nm 處測(cè)定其吸光值（A）。根據(jù)不同濃度葡萄糖溶液（C）的吸光值建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)A=0.01×C+0.0017（R²=0.9994）。

多糖含量的測(cè)定：稱(chēng)取10 mg 各樣品于10 mL離心管中，加3 mL 水溶解，振蕩20 s 混勻，沸水浴2 h，冷卻至室溫，過(guò)0.45 μm 有機(jī)微孔濾膜至100 mL 容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，即為測(cè)試液。按照上述步驟處理，在490 nm 處測(cè)定其吸光值，根據(jù)曲線(xiàn)計(jì)算多糖含量。

1.2.3 單糖組成分析 根據(jù)鄧永智等[14-15]的方法分析靈芝多糖單糖組成，稍加改進(jìn)。準(zhǔn)確稱(chēng)取10 mg 多糖樣品與2 mL 2 mol/L 三氟乙酸（TFA）在110 ℃烘箱中水解6 h，氮?dú)獯蹈?，加入同體積甲醇沸水浴蒸干，重復(fù)3 次。加入10 mg 鹽酸羥胺和1 mL 吡啶，輕輕搖晃使其充分溶解，于90 ℃水浴鍋中反應(yīng)30 min，冷卻至室溫，加入1 mL 乙酸酐，90 ℃水浴30 min，氮?dú)獯蹈?，加? mL氯仿溶解，過(guò)0.45 μm 微孔濾膜，進(jìn)行GC-MS 分析。另外以D-甘露糖、L-鼠李糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖、D-巖藻糖、D-木糖、D-果糖等標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)相同條件處理，進(jìn)樣。

氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）分析條件。色譜柱：HP-5ms（30 mm×0.25 mm×0.25 μm）毛細(xì)管柱；升溫程序：初始柱溫130 ℃，保持5 min 后，以2.5 ℃ /min 的升溫速度升溫至220 ℃ ， 再以10.0 ℃/min 升溫至260 ℃，進(jìn)樣溫度280 ℃；載氣為99.99%高純度氮?dú)?，柱流量?.0 mL/min，分流比1∶50；進(jìn)樣量為1.0 μL。質(zhì)譜（MS）條件：離子源溫度230 ℃，接口溫度260 ℃，掃描質(zhì)量范圍為30～450 m/z，溶劑延遲時(shí)間5.0 min。

1.2.4 近紅外光譜測(cè)定 將1 mg/mL 多糖水溶液置于金鏡表面上， 滴入一滴樣品溶液， 置于Thermo Nicolet iN10 近紅外分析儀（美國(guó)賽默飛）測(cè)量，整個(gè)測(cè)量過(guò)程采用液氮和氮?dú)獗Ｗo(hù)，每次樣品測(cè)量之前使用相同參數(shù)采集清潔金鏡表面的背景光譜（采集背景），掃描范圍為4000～400 cm^–1，分辨率為4 cm^–1。

1.2.5 分子量分布測(cè)定 采用高效液相凝膠色譜儀（HPGPC）測(cè)定靈芝多糖分子量和純度。將多糖樣品以及5000、11 600、23 800、48 600、80 900、148 000、273 000、409 800、667 800 Da 多糖標(biāo)準(zhǔn)品配制成5 mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)品溶液，12 000 r/min離心10 min，上清液用0.22 μm 微孔濾膜過(guò)濾，移入1.8 mL 進(jìn)樣瓶中。溶液注入高效液相色譜儀（LC-10A， Shimadzu）串聯(lián)凝膠柱中（BRT105-104-102， 8 mm×300 mm）建立保留時(shí)間（RT， min）與峰位分子量（Mp）、重均分子量（Mw）、數(shù)均分子量（Mn）的線(xiàn)性回歸方程，其中檢測(cè)器為示差檢測(cè)器（RI-10A， Shimadzu），流動(dòng)相為0.05 mol/LNaCl 溶液，柱溫40 ℃，流速0.6 mL/min，進(jìn)樣量20 μL。分子量與保留時(shí)間的校正曲線(xiàn)為lgMp=–0.1799RT+11.556，R²=0.995；lgMw=–0.1917RT+12.108，R²=0.9934；lgMn=–0.1776X+11.392，R2=0.9905。

1.2.6 體外抗氧化活性測(cè)定 總抗氧化能力（T-AOC）的測(cè)定。采用FRAP 法測(cè)定，吸取75 μL125 μg/mL 靈芝多糖水溶液于1.5 mL 測(cè)定管中，依次加入75 μL 蒸餾水和850 μL 顯色液（蘇州格銳思生物科技有限公司FRAP 試劑盒試劑），振動(dòng)混勻，置于室溫反應(yīng)10 min，在590 nm 處測(cè)其吸光值（A1），若吸光值>1.8，則采用蒸餾水稀釋至一定的倍數(shù)（D）。蒸餾水作空白對(duì)照，按照上述步驟，在590 nm 處測(cè)其吸光值（A0）。多糖的總抗氧化能力（μmol/mL）=0.36×[（A1–A0）+0.0262）]×D。采用蒸餾水調(diào)零，重復(fù)3 次。

1.2.7 DPPH 自由基清除能力的測(cè)定 吸取400 μL 500 μg/mL 多糖溶液于1.5 mL 測(cè)定管中，然后加入600 μL 工作液（蘇州格銳思生物科技有限公司FRAP 試劑盒試劑），振動(dòng)混勻，置于室溫避光反應(yīng)30 min，4000 r/min 離心5 min，取上清液，在517 nm 處測(cè)其吸光值（A2），作為測(cè)定組。吸取400 μL 500 μg/mL 多糖溶液于1.5 mL 測(cè)定管中，加入600 μL 80%甲醇，振動(dòng)混勻，按照上述步驟，在517 nm 處測(cè)其吸光值（A1），作為對(duì)照組。吸取400 μL 80%甲醇以及600 μL 工作液于測(cè)定管中，振動(dòng)混勻，按照上述反應(yīng)步驟，在517 nm 處測(cè)其吸光值（A0），作為空白組。多糖的DPPH 自由基清除率=[1–（A2–A1）/A0]×100%。采用無(wú)水乙醇調(diào)零，重復(fù)3 次。

1.2.8 羥自由基清除能力的測(cè)定 吸取125 μL試劑盒中的試劑1 于1.5 mL 測(cè)定管中，依次加入125 μL 試劑盒中的試劑2，625 μL 1000 μg/mL 靈芝多糖溶液，125 μL 試劑盒中的試劑3，振動(dòng)混勻，置于37 ℃反應(yīng)20 min，在517 nm 處測(cè)其吸光值（A₂），作為測(cè)定組。吸取125 μL 試劑1 于1.5 mL 測(cè)定管中，依次加入125 μL 試劑2，625 μL1000 μg/mL 靈芝多糖溶液，125 μL 蒸餾水，振動(dòng)混勻，置于37 ℃反應(yīng)20 min，在510 nm 處測(cè)其吸光值（A1），作為對(duì)照組。吸取125 μL 試劑1 于1.5 mL 測(cè)定管中，依次加入125 μL 試劑2，625 μL蒸餾水，125 μL 試劑3，振動(dòng)混勻，置于37 ℃反應(yīng)20 min，在510 nm 處測(cè)其吸光值（A₀），作為空白組。多糖的羥自由基清除率=[A₀–（A₂–A₁）]/A₀×100%。上述測(cè)試采用蒸餾水調(diào)零，所有測(cè)試重復(fù)3 次。

1.2.9 多糖對(duì)鼠李糖乳桿菌生長(zhǎng)的影響 在無(wú)菌條件下，取鼠李糖乳桿菌LGG 200 μL 接種于MRS 肉湯培養(yǎng)基上，（37±1）℃厭氧培養(yǎng)12 h，進(jìn)行菌種活化。在接種2%（體積分?jǐn)?shù)）鼠李糖桿菌LGG 的MRS 液體培養(yǎng)基中添加滅菌1%多糖溶液，以添加去離子水為空白對(duì)照，在（37±1）℃培養(yǎng)20 h，從0 h 開(kāi)始，每隔2 h 測(cè)定菌液OD600值，繪制鼠李糖乳桿菌的生長(zhǎng)曲線(xiàn)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2013 軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，利用Origin 8.0 軟件作圖，采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 靈芝多糖中總糖和單糖含量分析

由圖1 可知，不同濃度醇沉所得靈芝多糖顏色和外觀形貌存在較大差異。由表1 可知，GLP70的總糖含量最高，GLP90 的總糖含量最低，說(shuō)明70%乙醇濃度能將提取液中的大部分靈芝多糖沉淀下來(lái)，同時(shí)90%乙醇濃度有助于將靈芝提取液中的大部分雜質(zhì)沉淀下來(lái)。不同濃度所得粗多糖中均含有6 種單糖，包括鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖。根據(jù)這6 種單糖的摩爾比可知，不同多糖樣本中的單糖占比存在較大差異，GLP40 主要由甘露糖和木糖組成，GLP50、GLP60、GLP70、GLP80 和GLP90 主要由葡萄糖和甘露糖組成，GLP80 和GLP90 的葡萄糖占比較高。

2.2 靈芝多糖近紅外光譜分析

為了進(jìn)一步確定不同濃度醇沉所得靈芝多糖的結(jié)構(gòu)差異，分別對(duì)6 種多糖進(jìn)行紅外光譜分析（圖2）。6 種多糖均在3311～3376 cm^–1之間具有較寬的吸收峰，為O-H 的伸縮振動(dòng)，在2935 cm^–1附近具有弱吸收峰，為烷基的C-H 伸縮振動(dòng)，在1618～1630 cm^–1處出現(xiàn)的較強(qiáng)的峰是C=O 伸縮振動(dòng)，在1404～1411 cm^–1處出現(xiàn)的峰是-CH 的變角振動(dòng)引起的，在1048～1084 cm^–1 附近出現(xiàn)的峰是常見(jiàn)的吡喃糖環(huán)內(nèi)酯和羥基的吸收峰共振吸收峰，是由于糖環(huán)上C-O-C 醚鍵的不對(duì)稱(chēng)伸縮振動(dòng)構(gòu)成了糖類(lèi)的特征吸收峰，也是葡聚糖典型的紅外光譜信號(hào)[16]。此外892.9 cm^–1處是典型的吡喃葡聚糖和β-型糖苷鍵鏈接特征吸收峰[17]，說(shuō)明6 種靈芝多糖均為β-型葡聚糖構(gòu)型。同時(shí)930 cm^–1處的弱峰為端基碳C-H 彎曲振動(dòng)峰[18]，GLP40 和GLP50 在930 cm^–1附近有特征吸收峰，而在890 cm^–1處較弱，說(shuō)明60%及以上濃度醇沉所得的靈芝多糖主要為β-型葡聚糖構(gòu)型，且官能團(tuán)無(wú)明顯差異。

2.3 靈芝多糖分子量分布規(guī)律分析

采用HPGPC 對(duì)不同乙醇濃度所得靈芝多糖的分子量和純度進(jìn)行測(cè)定。由圖3 可知，不同乙醇濃度所得靈芝多糖的高效凝膠滲透色譜圖有明顯差異。利用峰位分子量（Mp）、峰重均分子量（Mw）、數(shù)均分子量（Mn）對(duì)不同乙醇濃度所得靈芝多糖的分子量等參數(shù)進(jìn)行計(jì)算（表2）。由表2 可知，不同乙醇濃度所得粗多糖的分子量分布存在較大差異，重均分子量越大，其數(shù)均分子量與峰均分子量也越大。以重均分子量為例，GLP40 分子量分布在97～14 925 g/mol 之間，GLP50 分子量為99～49 410 g/mol，GLP60 分子量為98～32 030 g/mol，GLP70 分子量分布在3614～19 589 g/mol 之間，GLP80 分子量分布在3614～10 795 g/mol 之間，GLP90 分子量分布在4385～11 084 g/mol 之間。不同靈芝多糖組分中分子量占比也有差異，Mw>10 000 g/moL 中，GLP40、GLP50、GLP60、GLP70、GLP80、GLP90 分別占比55.038%、79.837%、86.355%、84.349%、70.818%和61.059%，且呈先增后降的趨勢(shì)。

2.4 靈芝多糖體外抗氧化活性分析

不同乙醇濃度所得靈芝多糖體外抗氧化活性如圖4 所示，不同濃度醇沉所得靈芝多糖均具有一定的DPPH 清除能力、羥基自由基清除能力及總抗氧化能力，且呈顯著差異。顯著性分析結(jié)果表明：GLP40、GLP50、GLP60、GLP80、GLP90兩兩間的DPPH 清除能力存在顯著性差異，GLP70 與GLP50 的DPPH 清除能力差異不顯著，與其他差異顯著。GLP40、GLP50、GLP60、GLP80、GLP90 兩兩間的羥基自由基清除能力存在顯著性差異，GLP70 與GLP90 的羥基自由基清除能力差異不顯著，與其他差異顯著。GLP40、GLP50、GLP60、GLP70、GLP90 兩兩間的總抗氧化能力存在顯著性差異，GLP70 與GLP80 的總抗氧化能力差異不顯著，與其他差異顯著。其中，羥基自由基清除能力隨著乙醇濃度的增加而增強(qiáng)，而DPPH 清除能力和總抗氧化能力無(wú)明顯的變化規(guī)律，GLP90 的DPPH 清除能力、羥基自由基清除能力、總抗氧化能力均最大。

2.5 靈芝多糖對(duì)鼠李糖乳桿菌LGG 生長(zhǎng)的影響

不同乙醇濃度所得靈芝多糖對(duì)鼠李糖乳桿菌LGG 的生長(zhǎng)曲線(xiàn)如圖5 所示。由圖5 可知，與對(duì)照相比，靈芝多糖能促進(jìn)鼠李糖乳桿菌LGG 的生長(zhǎng)，且不同乙醇濃度沉淀所得多糖的促進(jìn)作用有差異。GLP40 處理的初始刺激效果最強(qiáng)，4 h 以后快速進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；而其他多糖處理在4 h之前比對(duì)照生長(zhǎng)慢，但是4 h 之后快速超過(guò)對(duì)照，進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，同時(shí)對(duì)數(shù)期比對(duì)照延遲2 h 以上。經(jīng)過(guò)培養(yǎng)20 h，GLP40、GLP50、GLP60、GLP70、GLP80、GLP90 處理的生長(zhǎng)曲線(xiàn)有多次重復(fù)交叉，可能源于不同靈芝多糖樣品中含有刺激鼠李糖乳桿菌LGG 不同生長(zhǎng)階段的成分，但是還需進(jìn)一步研究。

3 討論

多糖是靈芝子實(shí)體中重要的功能性成分之一，多糖中單糖種類(lèi)、分子量、官能團(tuán)等影響著多糖的結(jié)構(gòu)特征。靈芝子實(shí)體中多糖種類(lèi)豐富，含巖藻糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、木糖、葡萄糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸等單糖中的一種或幾種，且以α-或β-糖苷鍵相連[19]，其中β 型多糖起主要的生物活性作用[20-21]。同一品種不同狀態(tài)（發(fā)酵液、菌絲體和子實(shí)體）靈芝多糖的組成存在差異[22]，且不同提取方法的靈芝多糖結(jié)構(gòu)和生物活性也存在差異，由于不同濃度乙醇對(duì)不同分子量的靈芝多糖具有不同的沉淀效果[23]，導(dǎo)致本研究中6 種多糖樣本的單糖占比存在較大差異。KAN 等[12]研究表明，分級(jí)沉淀中各組分存在濃度的交叉性，比如GLP60 組分含有40%、50%、60%3 種濃度下沉淀的多糖成分，GLP60 中葡萄糖含量最高，由于沉淀方法的差異導(dǎo)致二者結(jié)果也有差異。官能團(tuán)組成是靈芝多糖結(jié)構(gòu)的另一個(gè)重要特征，本研究所得6 種靈芝多糖組分官能團(tuán)組成無(wú)較大差異，與劉鈞發(fā)等[24-25]的研究結(jié)果一致。由此可見(jiàn)，栽培方式、提取方法等因素對(duì)靈芝多糖結(jié)構(gòu)官能團(tuán)的影響較小。

靈芝多糖的體外抗氧化活性及其生物活性與多糖構(gòu)型、分子量等結(jié)構(gòu)特征緊密相關(guān)[26-27]。ZHEN 等[28]從樹(shù)舌中分離純化出靈芝均質(zhì)多糖，其中分子量為6.82×10⁵Da 的多糖組分能顯著抑制MCF-7 細(xì)胞的增殖。KAN 等[12]采用分級(jí)沉淀得到GLP40、GLP60 和GLP80 三種多糖組分，GLP80 的DPPH 清除能力、羥基自由基清除能力及總抗氧化能力最強(qiáng)，其次是GLP60 和GLP40，高濃度乙醇沉淀物的體外抗氧化活性較強(qiáng)，與本研究結(jié)果一致?？赡苡捎贒PPH 清除能力、羥基自由基清除能力及總抗氧化能力3 種檢測(cè)方法的作用機(jī)理不同，且與KAN 等[12]的提取方法不同，從而導(dǎo)致本研究中6 種多糖組分的3 種體外抗氧化活性的變化規(guī)律不一致。CAI 等[10]采用級(jí)聯(lián)膜技術(shù)分離得到3 種多糖組分，進(jìn)行小鼠實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)分子量在10 kDa 以上的多糖能延長(zhǎng)游泳時(shí)間，提高耐力和促進(jìn)疲勞恢復(fù)。本研究中乙醇濃度大于70%所得分子量在10 kDa 以上的多糖組分呈下降趨勢(shì)，由此可以推斷70%乙醇能將大部分靈芝功效成分分離出來(lái)。吳林秀[29]的研究結(jié)果表明，茶樹(shù)菇多糖可以有效防止鼠李糖桿菌LGG 被活性氧抑制，并且提供碳源能促進(jìn)鼠李糖桿菌生長(zhǎng)，同時(shí)作為益生元能促進(jìn)益生菌的增殖，從而更好地調(diào)節(jié)胃腸道功能。本研究結(jié)果表明，6 種靈芝多糖組分均有助于促進(jìn)鼠李糖乳桿菌LGG 的生長(zhǎng)，為靈芝多糖的產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)支撐，但其作用效果存在一定差異，今后需進(jìn)一步研究靈芝多糖刺激鼠李糖桿菌生長(zhǎng)的作用機(jī)理。

本文研究了梯度乙醇沉淀工藝對(duì)靈芝多糖結(jié)構(gòu)特征及生物活性的影響，結(jié)果表明：靈芝多糖主要由鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖組成，梯度乙醇沉淀工藝未改變6 個(gè)多糖組分中單糖種類(lèi)組成和官能團(tuán)組成，但影響了6 個(gè)多糖組分的各單糖含量、分子量分布、體外抗氧化活性等，靈芝多糖能促進(jìn)鼠李糖乳桿菌LGG 的生長(zhǎng)。本研究為靈芝多糖提取工藝研究及產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)支撐。