西湖龍井產(chǎn)區(qū)茶樹炭疽菌分離鑒定及其植物源抑菌劑篩選

李紅莉，周鐵鋒，毛宇驍，黃海濤，崔宏春，鄭旭霞，趙蕓

西湖龍井產(chǎn)區(qū)茶樹炭疽菌分離鑒定及其植物源抑菌劑篩選

李紅莉，周鐵鋒*，毛宇驍，黃海濤，崔宏春，鄭旭霞，趙蕓*

杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 杭州 310024

為篩選出對西湖龍井產(chǎn)區(qū)茶樹炭疽病菌具有較好抑菌活性的植物提取物，對該地區(qū)的茶樹炭疽病菌進(jìn)行了分離鑒定，采用菌絲生長速率法測定了12種植物提取物的抑菌活性，進(jìn)一步采用濃度梯度試驗(yàn)測定了3種抑菌活性較好的植物提取物的抑菌毒力。研究結(jié)果表明，引起西湖龍井產(chǎn)區(qū)茶樹炭疽病的主要病原為山茶炭疽菌（）；在200?mg·L-1時香荊芥酚、牛至精油和紫蘇醛對該菌的抑菌活性較好，菌絲生長抑制率均在68%以上，有效中濃度（EC50）分別為71.459、77.155、110.753?mg·L-1。顯微觀察發(fā)現(xiàn)，在添加有效中濃度的香荊芥酚、牛至精油和紫蘇醛的培養(yǎng)基上進(jìn)行病原菌培養(yǎng)時，菌絲形態(tài)發(fā)生明顯改變，呈現(xiàn)變形扭曲、皺縮干癟等現(xiàn)象。綜上所述，香荊芥酚、牛至精油和紫蘇醛對山茶炭疽菌具有較強(qiáng)的抑菌活性，具有開發(fā)為植物源殺菌劑的應(yīng)用潛力。

茶樹；炭疽菌；植物提取物；抑菌活性；毒力測定

茶樹[（L.）O. Kuntze]起源于中國，茶葉中富含茶多酚、咖啡堿、茶氨酸等多種功能性成分，具有良好的保健功效，深受消費(fèi)者喜愛[1-2]。茶樹病蟲害是茶葉高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的重要限制因素，其中炭疽病是茶樹葉部的主要真菌病害之一，在我國各茶區(qū)均有發(fā)生。西湖龍井茶產(chǎn)區(qū)溫暖濕潤的氣候利于炭疽病發(fā)生蔓延，主栽品種龍井43易感炭疽病，近年來發(fā)病率逐年上升[3]。受害茶樹葉片輕則出現(xiàn)灼燒狀病斑，重則造成大面積葉片脫落和植株枯死，嚴(yán)重影響樹勢和茶葉品質(zhì)，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[4-5]。我國已報道的茶樹炭疽菌有16個種及1個未鑒定種，包括異國炭疽菌（）、隱秘炭疽菌（）、尖孢炭疽菌（）和博寧炭疽菌（）等[6]。不同種的炭疽菌具有不同的地域分布，對茶樹的致病力及對防治藥劑的敏感性存在一定的差異，因此明確茶樹炭疽菌的種類是開展防治技術(shù)研究及抗病品種選育的關(guān)鍵。

目前防治茶樹炭疽病仍以噴施苯并咪唑類、三唑類等化學(xué)農(nóng)藥為主，不僅防效難以保障，還易引起茶葉農(nóng)殘超標(biāo)、病原菌抗藥性增強(qiáng)及茶園生態(tài)環(huán)境破壞等一系列問題。近年來，農(nóng)藥殘留超標(biāo)已成為影響我國茶葉出口的主要因素之一[7]。針對茶樹病蟲害開發(fā)綠色高效的生物農(nóng)藥迫在眉睫。植物提取物因其源于自然植物資源，具有環(huán)保低毒、易降解、對非靶標(biāo)生物相對安全及不易產(chǎn)生抗性等優(yōu)點(diǎn)，其相關(guān)研究越來越受到人們的重視[8]。目前，研究報道較多的天然植物提取物主要有揮發(fā)油（精油）、黃酮類、生物堿、多糖類等。植物精油是存在于芳香植物的葉、根、皮、花和果中的一類重要的次生代謝產(chǎn)物。其成分主要包括萜類化合物、芳香族化合物、脂肪族化合物和含氮含硫化合物等[9]。很多研究表明，植物提取物具有抑菌、殺蟲、殺螨、驅(qū)蟲和抗氧化等活性[10-12]。在美國、以色列等很多國家均有植物提取物類農(nóng)藥投入市場，用于溫室作物、園林花卉的病蟲害防治。本研究從西湖龍井茶產(chǎn)區(qū)龍井43茶園的炭疽病葉片中分離優(yōu)勢致病菌，通過傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)方法并結(jié)合多基因系統(tǒng)發(fā)育分析對病原菌進(jìn)行鑒定，以分離得到的山茶炭疽菌（）為靶標(biāo)，采用菌絲生長速率法測定12種植物提取物對山茶炭疽菌的抑菌活性，篩選出3種效果相對較好的植物提取物進(jìn)行抑菌毒力測定，并通過顯微觀察初步探究其抑菌機(jī)理，以期為茶樹炭疽病天然綠色農(nóng)藥的研制提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試茶樹炭疽病病葉于2021年6月在梅家塢、龍井村等西湖龍井茶主產(chǎn)區(qū)的龍井43茶園采用五點(diǎn)取樣法采集。

試驗(yàn)中所用的百里香精油（百里香酚含量＞40%）、檸檬精油（98%）、肉桂精油（85%）、牛至精油（98%）、柑橘精油（98%）、香茅精油（98%）、薰衣草精油（98%）、薄荷油（98%）、紫蘇醛（≥95%）、香荊芥酚（HPLC 92.5%）、檸檬醛（95%）、肉桂醛（HPLC≥98%）均購自上海源葉生物科技有限公司。

Ezup柱式真菌基因組DNA抽提試劑盒購自生工生物工程（上海）股份有限公司，2×Taq PCR MsaterMix購自天根生化科技（北京）有限公司。本研究所用培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂（Potato dextrose agar，PDA）培養(yǎng)基。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 病菌的分離純化

采用組織分離法[13]進(jìn)行病原菌分離。將新鮮采摘的茶樹病葉沖洗30?min，晾干后在病健交界處剪取5?mm×5?mm組織塊，分別用75%乙醇和5%次氯酸鈉消毒后用無菌水沖洗3次，在無菌濾紙上晾干后置于PDA固體培養(yǎng)基上，在25?℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3?d長出菌絲后取菌落邊緣的菌絲塊轉(zhuǎn)接到新鮮的PDA平板中央，重復(fù)此操作數(shù)次直至獲得純培養(yǎng)物。

1.2.2 病原菌的形態(tài)學(xué)觀察

在純化后的菌落平板邊緣打取直徑5?mm的菌絲塊接種于PDA平板中央，置于26?℃下培養(yǎng)7?d，定期觀察病原菌菌落特征及孢子形態(tài)，計算菌落生長速度，并通過柯赫氏法則（Koch’s Rule）將分離病原菌進(jìn)行初步回接侵染驗(yàn)證。

1.2.3 病原菌的分子鑒定

采用Ezup柱式真菌基因組DNA抽提試劑盒提取病原菌基因組DNA，對分離物DNA的核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（Internal transcribed spaces，ITS），鈣調(diào)蛋白（Calmodulin，CaM）基因，肌動蛋白（Actin，ACT）基因，3-磷酸甘油醛脫氫酶（Glyceraldehyde-3- phosphate dehy-drogenase，GAPDH）基因、-微管蛋白（Beta-tubulin，TUB2）基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，引物序列、退火溫度等見表1。反應(yīng)體系及組分為：10×PCR Buffer 2.5?μL，dNTP 1?μL，Taq酶0.2?μL，10?μmol·L-1引物（正向和反向）各0.5?μL，DNA模板0.5?μL，補(bǔ)足dd H2O至25?μL。PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，所得序列純化后送至生工生物工程（上海）股份有限公司測序。將測得的序列在NCBI中利用BLAST進(jìn)行序列同源性分析，下載參考序列通過DNAMAN軟件按照ITS-ACT-GAPDH- CAL-TUB2基因順序拼接，參考序列登錄號參考文獻(xiàn)[14]，以CBS 123755作為外類群，利用MEGA 7軟件最大似然法（Maximum Likelihood，ML）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，bootstrap設(shè)定為1?000。

1.2.4 分離病原菌的致病性鑒定

取健康的龍井43新梢從上往下數(shù)的第1～5葉位葉片作為一組處理，經(jīng)無菌水沖洗后自然晾干，用75%乙醇進(jìn)行擦拭，將葉片表面劃傷后，用直徑5?mm打孔器打取菌餅，將長有菌絲的一面放于傷口處進(jìn)行接種，以接種無菌PDA培養(yǎng)基塊及無傷接種病原菌作為對照，將接種后的葉片置于26?℃恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)，定期觀察不同葉位葉片的發(fā)病情況。對接種發(fā)病的葉片，再次按照1.2.1章節(jié)的方法分離純化致病菌，觀察其與原接種分離物是否一致。

表1 茶樹炭疽病病原菌鑒定所用引物

1.2.5 抑菌活性的測定

以從茶園分離得到的茶樹炭疽病菌為研究對象，采用菌絲生長速率法[15]測定12種植物提取物對菌絲生長的抑制作用。將植物提取物與等體積的乳化劑吐溫80混合后加滅菌水配成20?g·L-1的母液，使用時用滅菌水稀釋到所需濃度（2?g·L-1和4?g·L-1）。將2?mL一定濃度的植物提取物加入到刻度試管中，再用滅菌后冷卻至50?℃左右的PDA培養(yǎng)基定容至20?mL，充分混勻后倒入90?mm培養(yǎng)皿中配成培養(yǎng)基平板，以不含植物提取物的平板為對照，每個處理重復(fù)3次，所有制劑現(xiàn)用現(xiàn)配。將黑暗培養(yǎng)5?d的供試病原菌用5?mm打孔器打取長勢相同的菌餅，帶有菌絲的一面朝下接入培養(yǎng)基中央，置于26?℃恒溫培養(yǎng)7?d后用十字交叉法測量各處理的菌落直徑，按照下列公式計算菌絲生長抑制率：

式中，ck為對照菌落直徑，b為菌餅直徑，t為處理菌落直徑。

1.2.6 對茶樹炭疽病菌有效中濃度（EC50）的測定

根據(jù)1.2.5章節(jié)的初篩試驗(yàn)結(jié)果，選擇抑菌活性較好的3種植物提取物，按照質(zhì)量濃度梯度制作PDA平板，紫蘇醛的質(zhì)量濃度為50、100、150、200、250?mg·L-1；香荊芥酚的質(zhì)量濃度為20、40、60、80、100?mg·L-1；牛至精油的質(zhì)量濃度為50、60、70、80、100?mg·L-1。采用菌絲生長速率法測定各質(zhì)量濃度植物提取物對茶樹炭疽病菌的菌絲生長抑制率，每個處理重復(fù)3次。以植物提取物質(zhì)量濃度的對數(shù)為自變量，菌絲生長抑制率為因變量，計算出毒力回歸方程和相關(guān)系數(shù)（2），根據(jù)回歸方程求出EC50值。

1.2.7植物提取物對茶樹炭疽病菌菌絲形態(tài)的影響

將抑菌活性較好的3種植物提取物按照EC50濃度制作PDA平板，取5?mm長勢相同的炭疽菌菌餅接種到培養(yǎng)基中央，26?℃恒溫培養(yǎng)7?d后，在顯微鏡（Eclipse 80i，Nikon，Japan）下觀察菌絲形態(tài)特征，以不添加植物提取物的PDA平板為對照。

1.2.8 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2010和SPSS 17.0對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。抑菌率用SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 田間癥狀觀察及致病菌分離純化

田間觀察發(fā)現(xiàn)，炭疽病發(fā)生時初為暗綠色水漬狀病斑，后逐漸擴(kuò)展為黃褐色病斑，最后變?yōu)榛野咨莅?，其上生有粒狀黑色小顆粒，為病原菌的分生孢子盤，個別大型枯斑有時可跨過中央葉脈蔓延至整葉（圖1）。

采用五點(diǎn)取樣法，在種植龍井43的西湖龍井茶主產(chǎn)區(qū)的茶園采集新近發(fā)病的茶樹葉片，并對葉片上的病原菌立即進(jìn)行分離，純化4～5次后，得到該病原菌的純培養(yǎng)物。參照分離獲得的真菌培養(yǎng)性狀和菌落形態(tài)，在茶樹病葉上共分離獲得8個真菌菌株。經(jīng)初步回接驗(yàn)證，結(jié)果顯示，HZ-A8的致病性最強(qiáng)，由此對其開展后續(xù)研究。經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，HZ-A8在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)7?d，其生長速率為11.6～12.9?mm·d-1，菌落呈圓形，邊緣整齊，氣生菌絲致密，絨毛狀，初為白色后為灰白色，背面白色至灰白色（圖2）。顯微鏡下分生孢子透明，圓柱狀，無隔膜，兩端鈍圓。分生孢子大小為(12.62～19.61)?μm×(4.75～5.69)?μm。

2.2 致病性分析

采用有傷和無傷接種的方法對菌株HZ-A8的致病性進(jìn)行測定，接種2?d后，有傷接種的茶樹葉片上產(chǎn)生了紅褐色病斑，邊緣有水漬狀暈圈（圖3）。其中第1～3葉位葉片上的病斑更為明顯。通過觀察和測量病斑面積，發(fā)現(xiàn)幼嫩葉片中病斑面積更大，擴(kuò)展更快，而第4～5葉位相對成熟的葉片病斑面積?。▓D3）。將病斑組織用PDA培養(yǎng)基重新進(jìn)行分離培養(yǎng)，獲得的菌落形態(tài)和原接種菌株HZ-A8一致，結(jié)果符合柯赫氏法則。無傷接種HZ-A8及有傷接種PDA培養(yǎng)基的對照組葉片未出現(xiàn)病斑。

圖1 茶樹炭疽病葉片癥狀（從左至右癥狀由輕到重）

注：a，正面；b，背面

圖3 有傷接種后茶樹葉片上的病斑

2.3 分離菌株的多基因系統(tǒng)發(fā)育分析

相關(guān)序列根據(jù)ITS-ACT-GAPDH-CAL-TUB2的5個基因順序拼接后，構(gòu)建多基因系統(tǒng)發(fā)育樹（圖4）。右圖4可知，所分離到的菌株HZ-A8與山茶炭疽菌（）聚為一類，自展值為100。因此，結(jié)合病原菌的形態(tài)特征和分子生物學(xué)鑒定結(jié)果，確定所分離獲得的菌株HZ-A8為山茶炭疽菌。

2.4 12種植物提取物對茶樹炭疽病菌菌絲生長的抑制作用

以菌絲生長速率法測定了200?mg·L-1和400?mg·L-1兩種質(zhì)量濃度處理下，12種植物提取物對HZ-A8菌絲生長的抑制作用，結(jié)果如表2所示。在質(zhì)量濃度為200?mg·L-1時，香荊芥酚、牛至精油對茶樹炭疽病菌菌絲生長的抑制率最高，達(dá)到了100%；其次為紫蘇醛，抑菌率為68.37%。在質(zhì)量濃度為400?mg·L-1的條件下，香荊芥酚、牛至精油、紫蘇醛和肉桂精油的抑菌率均達(dá)到100%；該質(zhì)量濃度下，除了柑橘精油、檸檬精油和薰衣草精油的抑菌作用較弱（抑菌率小于10%），其余5種植物提取物對茶樹炭疽病菌也表現(xiàn)出一定的抑菌活性。綜合抑菌效果前5的精油為香荊芥酚、牛至精油、紫蘇醛、肉桂精油和百里香精油。

注：分支上的數(shù)值為1?000次重復(fù)后等于或高于50%的bootstrap值；C. boninense CBS 123755為外類群

2.5 植物提取物對茶樹炭疽病菌的毒力測定

根據(jù)2.4章節(jié)的試驗(yàn)結(jié)果，得出香荊芥酚、牛至精油和紫蘇醛3種植物提取物對茶樹炭疽病菌具有較好的抑菌活性，采用濃度梯度法進(jìn)一步測定其抑菌率，依據(jù)試驗(yàn)結(jié)果擬合出各提取物的毒力回歸方程，并計算出EC50值。由表3和圖5可知，3種植物提取物的抑菌效果都隨著濃度的增加而逐漸增強(qiáng)，相關(guān)系數(shù)均大于等于0.92，說明其濃度和菌絲生長抑制率間存在較好的線性關(guān)系。3種植物提取物對茶樹炭疽病菌的EC50在71.459～110.753?mg·L-1，其中香荊芥酚的毒力強(qiáng)度最大，EC50值為71.459?mg·L-1；其次為牛至精油，EC50值為77.155?mg·L-1；紫蘇醛的抑制作用略差，EC50值為110.753?mg·L-1。

2.6 植物提取物對茶樹炭疽病菌菌絲形態(tài)的影響

顯微觀察結(jié)果如圖6所示，對照組菌絲生長正常，形態(tài)完整飽滿，而經(jīng)牛至精油、香荊芥酚和紫蘇醛處理的培養(yǎng)基上生長的菌絲形態(tài)發(fā)生了明顯的變化，菌絲呈現(xiàn)不同程度的變形扭曲、粗細(xì)不勻，甚至出現(xiàn)內(nèi)含物消解，菌絲皺縮干癟等現(xiàn)象，表明3種植物提取物通過破壞菌絲形態(tài)結(jié)構(gòu)，改變其生長狀態(tài)來抑制菌落的擴(kuò)展。

3 討論

炭疽病致病菌種類繁多，不同種間的致病力和生物學(xué)特性存在一定差異。本研究通過形態(tài)學(xué)觀察、多基因聚類分析和柯赫氏法則驗(yàn)證，明確西湖龍井茶產(chǎn)區(qū)茶園所分離到的炭疽病原菌主要為山茶炭疽菌（），接種茶樹葉片顯示其具有較強(qiáng)的致病力。山茶炭疽菌在我國福建、浙江、江西、陜西、貴州等大部分茶區(qū)均有分布[14]。Wang等[16]從中國15個主要產(chǎn)茶省的茶樹病葉上共分離到106株炭疽菌，發(fā)現(xiàn)是危害中國茶樹的優(yōu)勢致病種。貢長怡等[17]對12個省份的茶樹炭疽病菌進(jìn)行鑒定，發(fā)現(xiàn)山茶炭疽菌和果生炭疽菌的分離頻率較高。本研究對西湖龍井茶區(qū)炭疽病病原菌進(jìn)行分離鑒定，明確優(yōu)勢菌種，這對于有針對性地開展防治技術(shù)研究具有重要意義。

表2 12種植物提取物對茶樹炭疽菌的抑菌活性

注：表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，同列中不同小寫字母表示差異顯著（＜0.05），同列中不同大寫字母表示差異極顯著（＜0.01）

Note: All results were expressed as mean±standard deviation. Different small letters in the same column indicate significant difference at 0.05 level. Different capital letters in the same column indicate significant difference at 0.01 level

表3 3種植物提取物對茶樹炭疽病菌的毒力

注：紫蘇醛從左至右質(zhì)量濃度為50、100、150、200、250?mg·L-1；牛至精油從左至右質(zhì)量濃度為50、60、70、80、100?mg·L-1；香荊芥酚從左至右質(zhì)量濃度為20、40、60、80、100?mg·L-1

注：A，對照；B，77.155?mg·L-1牛至精油處理；C，71.459?mg·L-1香荊芥酚處理；D，110.753?mg·L-1紫蘇醛處理

作為植物重要的次生代謝物質(zhì)，植物提取物在多種蔬菜、水果和作物上被證實(shí)具有很強(qiáng)的殺菌活性[18-20]。薰衣草精油[21]、肉桂精油[22]、百里香精油[23]等已廣泛應(yīng)用于果蔬保鮮領(lǐng)域。在植物保護(hù)方面國內(nèi)外學(xué)者也進(jìn)行了大量研究，并篩選到一些具有較好抑菌殺蟲活性的植物提取物。孫偉[24]鑒定了101種植物提取物對蘋果腐爛病菌（）和棉花立枯病菌（）的生物活性情況，發(fā)現(xiàn)苦參、狼毒、藿香等多種植物提取物對兩種病菌的抑制效果都在80%以上。在茶樹研究方面，孫欽玉等[25]發(fā)現(xiàn)，紫蘇和薄荷提取物在40?mg·mL-1質(zhì)量濃度下對茶炭疽病菌菌絲生長抑制率均在75%以上。蘆柑皮、艾蒿、香樟葉和側(cè)柏葉對茶炭疽病菌的96?h EC50分別為8.981、839.575、1?058.682、1?429.094?mg·L-1[26]。本研究采用菌絲生長速率法測定了12種植物提取物對茶樹炭疽病菌的抑菌活性，篩選出的香荊芥酚、牛至精油和紫蘇醛在質(zhì)量濃度為200?mg·L-1時對茶樹炭疽病菌菌絲生長的抑制率可達(dá)到65%以上。毒力測定顯示，香荊芥酚和牛至精油的EC50均低于80?mg·L-1，與上述茶樹炭疽病菌研究結(jié)果相比，其抑菌活性僅次于蘆柑皮，且優(yōu)于其他報道的植物提取物，由此可見香荊芥酚和牛至精油對茶樹炭疽病菌具有較好的抑菌效果，具有開發(fā)成植物源殺菌劑的潛力。牛至提取物具有抑菌、殺菌及抗氧化作用，已廣泛應(yīng)用于食品保鮮、畜牧養(yǎng)殖中[27-28]。很多研究證實(shí)，牛至精油及其主要成分在較低的濃度下就有較好的抑菌及殺蟲活性[28-29]。香荊芥酚是牛至中的主要抗菌成分，對腐皮鐮刀菌等都具有較好的抑菌作用[30]。此外，香荊芥酚還具有較強(qiáng)的殺蟲活性，其對蘋果樹紅蜘蛛（）的LC50值僅為14.7?mg·L-1[31]。本研究為茶樹炭疽病的綠色防控發(fā)掘了更多具有潛在開發(fā)利用價值的植物提取物。

植物提取物的抑菌機(jī)理主要包括破壞微生物的細(xì)胞膜或細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)、影響呼吸和能量代謝、抑制生物大分子的合成等[32]。大部分植物提取物成分復(fù)雜，通常具有多種抗菌機(jī)制和作用靶位，這也是其抗菌譜廣、不易產(chǎn)生耐藥性的原因之一。崔醒等[33]研究發(fā)現(xiàn)，香芹酚通過破壞禾谷鐮刀菌（）細(xì)胞膜的完整性，引起電解質(zhì)滲漏和能量代謝失衡而發(fā)揮抑菌作用。本研究通過顯微觀察發(fā)現(xiàn)，經(jīng)牛至精油、香荊芥酚和紫蘇醛處理后，茶樹炭疽菌呈皺縮干癟狀，推測3種植物提取物能夠破壞菌絲的細(xì)胞膜和細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，使其不能正常生長。

綜上所述，本研究通過菌絲生長抑制試驗(yàn)證實(shí)牛至精油及其主要成分香荊芥酚對茶樹炭疽菌具有較好的抑菌活性。目前由于技術(shù)原因，植物精油等植物提取物的產(chǎn)出效率不高，并且很多物質(zhì)揮發(fā)性較強(qiáng)，將其開發(fā)為植物源殺菌劑應(yīng)用于茶園仍然面臨諸多問題。下一步將深入探究牛至精油等植物提取物的活性成分和抑菌機(jī)制，研發(fā)生物農(nóng)藥新劑型及協(xié)同作用配方，為植物源農(nóng)藥在茶樹病蟲害防控領(lǐng)域的應(yīng)用開發(fā)提供理論依據(jù)。

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Isolation and Identification of Anthracnose Pathogen from Xihu Longjing Plantation and Screening of Its Plant-derived Fungicides

LI Hongli, ZHOU Tiefeng*, MAO Yuxiao, HUANG Haitao, CUI Hongchun, ZHENG Xuxia, ZHAO Yun*

Hangzhou Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou 310024, China

In order to screen out plant extracts with better antibacterial activity against anthracnose in Xihu Longjing tea producing area, the pathogens of tea anthracnose in this region were isolated and identified, and the inhibition activities of 12 plant extracts on the identified pathogen were determined using mycelial growth rate method. Concentration gradient test was further used to determine the antibacterial virulence of the top 3 plant extracts. The results show thatwas the major pathogenic strain in the study region. At the concentration of 200?mg·L-1, the antifungal activities of vitriol, oregano essential oil and perillal aldehyde were better, and their inhibition rates on the growth of anthrax were all above 68%, and their effective medium concentrations (EC50) were 71.459, 77.155?mg·L-1and 110.753?mg·L-1, respectively. Microscopic observation shows that the mycelium morphology ofhad obvious changes in the medium when supplemented with above plant extracts, showing deformation, distortion, shrinkage and shriveled. These results indicate that carvacrol, oregano essential oil and perill aldehyde have strong antibacterial activities againstand possess potential for development as plant-derived fungicides.

tea plant, anthracnose, plant extract, antifungal activity, toxicity determination

S571.1；S435.711

A

1000-369X(2023)02-194-11

2022-11-21

2023-01-29

杭州市農(nóng)業(yè)與社會發(fā)展科研專項(xiàng)（20201203B93）、浙江省（茶樹）農(nóng)業(yè)新品種選育重大科技專項(xiàng)（2021C02067-4）、杭州市農(nóng)科院創(chuàng)新基金項(xiàng)目（2022HNCT-04）、財政部和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部：國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)（CARS-23）

李紅莉，女，農(nóng)藝師，主要從事茶樹病蟲害綠色防控技術(shù)研究。*通信作者：14281858@qq.com；yunzhaohao@sina.com