利拉魯肽上調(diào)miR-93-5p對(duì)缺氧/復(fù)氧H9c2心肌細(xì)胞損傷的影響

摘要目的：探討利拉魯肽上調(diào)miR-93-5p對(duì)缺氧/復(fù)氧H9c2心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。方法：取對(duì)數(shù)期H9c2心肌細(xì)胞，分為對(duì)照組、缺氧/復(fù)氧組、利拉魯肽組、anti-miR-93-5p組、anti-miR-93-5p＋利拉魯肽組。anti-miR-93-5p組和anti-miR-93-5p＋利拉魯肽組細(xì)胞轉(zhuǎn)染anti-miR-93-5p 50 μmol/L，24 h后，anti-miR-93-5p＋利拉魯肽組、利拉魯肽組加入利拉魯肽100 μmol/L，預(yù)處理12 h。除對(duì)照組外，其余組建立缺氧/復(fù)氧模型。檢測(cè)比較各組心肌細(xì)胞存活率、心肌細(xì)胞凋亡率、氧化應(yīng)激指標(biāo)［丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性］、miR-93-5p表達(dá)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Cleaved Caspase-3）和B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（Bcl-2）及Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bax）表達(dá)水平。結(jié)果：與對(duì)照組比較，缺氧/復(fù)氧組心肌細(xì)胞存活率、SOD、GSH-Px活性、miR-93-5p水平、Bcl-2蛋白表達(dá)降低，心肌細(xì)胞凋亡率、MDA含量、Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表達(dá)升高（P＜0.05）；與缺氧/復(fù)氧組比較，利拉魯肽組心肌細(xì)胞存活率、SOD、GSH-Px活性、miR-93-5p水平、Bcl-2蛋白表達(dá)升高，心肌細(xì)胞凋亡率、MDA含量、Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表達(dá)降低，anti-miR-93-5p組心肌細(xì)胞存活率、SOD、GSH-Px活性、miR-93-5p水平、Bcl-2蛋白表達(dá)降低，心肌細(xì)胞凋亡率、MDA含量、Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表達(dá)升高（P＜0.05）；與利拉魯肽組比較，anti-miR-93-5p＋利拉魯肽組心肌細(xì)胞存活率、SOD、GSH-Px活性、miR-93-5p水平、Bcl-2蛋白表達(dá)降低，心肌細(xì)胞凋亡率、MDA含量、Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表達(dá)升高（P＜0.05）；與anti-miR-93-5p組比較，anti-miR-93-5p＋利拉魯肽組心肌細(xì)胞存活率、SOD、GSH-Px活性、miR-93-5p水平、Bcl-2蛋白表達(dá)升高，心肌細(xì)胞凋亡率、MDA含量、Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表達(dá)降低（P＜0.05）。結(jié)論：利拉魯肽可改善缺氧/復(fù)氧心肌細(xì)胞損傷，可能是通過(guò)上調(diào)miR-93-5p表達(dá)、降低細(xì)胞氧化應(yīng)激水平、減少細(xì)胞凋亡發(fā)揮其心肌保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞缺氧/復(fù)氧；利拉魯肽；miR-93-5p；細(xì)胞損傷；實(shí)驗(yàn)研究

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2023.23.008

Effect of Liraglutide Up Regulation of miR-93-5p on the Injury of Hypoxic/Reoxygenated H9c2 Cardiomyocytes

CAO Guanglin， LIU Bin， LIU Na

Cangzhou People′s Hospital， Cangzhou 061000， Hebei， China， E-mail： guoguoya1_0@163.com

AbstractObjective：To investigate the protective effect of liraglutide up-regulation of miR-93-5p on hypoxic/reoxygenated H9c2 cardiomyocyte injury.Methods：Logarithmic H9c2 cardiomyocytes were divided into control group，hypoxia/reoxygenation group，liraglutide group，anti-miR-93-5p group，and anti-miR-93-5p＋liraglutide group.Cells in anti-miR-93-5p group and anti-miR-93-5p＋liraglutide group were transfected with anti-miR-93-5p 50 μmol/L，24 h later，anti-miR-93-5p＋liraglutide group，liraglutide group were added to liraglutide 100 μmol/L and pretreated for 12 h.Except the control group，anoxia/reoxygenation model was established in the other groups.Myocardial cell survival rate，myocardial cell apoptosis rate，oxidative stress index ［malondialdehyde（MDA） content，superoxide dismutase（SOD） and glutathione peroxidase（GSH-Px）］ activity，miR-93-5p expression，activated cysteine aspartase 3（Cleaved），expression levels of Caspase-3，and blymphoblastoma-2 gene（Bcl-2） and Bcl-2 associated X protein（Bax） were detected and compared between all groups.Results：Compared with the control group，myocardial cell survival rate，SOD，GSH-Px activity，miR-93-5p level，and Bcl-2 protein expression" decreased in hypoxia/reoxygenation group，and apoptosis rate，MDA content，Cleaved Caspase-3，and Bax protein expression" increased（P＜0.05）.Compared with hypoxia/reoxygenation group，myocardial cell survival rate，SOD，GSH-Px activity，miR-93-5p level，and Bcl-2 protein expression" increased in liraglutide group，while myocardial cell apoptosis rate，MDA content，Cleaved Caspase-3，and Bax protein expression" decreased;in anti-miR-93-5p group，the survival rate of cardiomyocytes，SOD，GSH-Px activity，miR-93-5p level，and Bcl-2 protein expression" decreased，and the apoptosis rate，MDA content，Cleaved Caspase-3，and Bax protein expression" increased（P＜0.05）.Compared with liraglutide group，the survival rate of cardiomyocytes，SOD，GSH-Px activities，miR-93-5p level，and Bcl-2 protein expression in anti-miR-93-5p＋liraglutide group" decreased，apoptosis rate，MDA content，Cleaved Caspase-3，and Bax protein expression" increased（P＜0.05）.Compared with anti-miR-93-5p group，the survival rate of cardiomyocytes，SOD，GSH-Px activities，miR-93-5p level，and Bcl-2 protein expressionin anti-miR-93-5p＋liraglutide group" increased，apoptosis rate，MDA content，Cleaved Caspase-3 and Bax protein expression" decreased（P＜0.05）.Conclusion：Liraglutide can ameliorate the injury of hypoxic/reoxygenated cardiomyocytes，possibly through up-regulating the expression of miR-93-5p，reducing the level of cellular oxidative stress，and reducing cell apoptosis.

Keywordshypoxia/reoxygenation; liraglutide; miR-93-5p; cell injury; experimental study

利拉魯肽（liraglutide）是一種人胰高糖素樣肽-1類似物，用于2型糖尿病的治療［1］。研究顯示，利拉魯肽可改善壓力超載造成的心肌細(xì)胞凋亡和心肌肥厚、高血壓誘導(dǎo)的心肌纖維化等［2-3］。微小核糖核酸（microRNA，miRNA）是一種非編碼單鏈RNA，miR-93通過(guò)與靶基因mRNA結(jié)合，調(diào)控靶基因表達(dá)，在脂多糖造成的腎損傷、膿毒癥引起的心肌損傷以及高血糖導(dǎo)致的腎臟纖維化等疾病中均發(fā)揮保護(hù)作用［4-6］。本研究探討利拉魯肽通過(guò)調(diào)控miR-93-5p對(duì)缺氧/復(fù)氧（hypoxia/reoxygenation，H/R）H9c2心肌細(xì)胞損傷保護(hù)作用的機(jī)制研究，旨在為臨床治療心肌缺血再灌注損傷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料與方法

1.1細(xì)胞系

大鼠H9c2細(xì)胞購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所。

1.2試劑和儀器

利拉魯肽注射液購(gòu)自丹麥諾和諾德制藥公司；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所；miR-93-5p拮抗劑購(gòu)自上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司；miR-93-5p和U6引物序列由中國(guó)廣州瑞博公司合成；兔抗大鼠活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cysteinyl aspartate specificproteinase-3，Caspase-3）、B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bcl-2 associated X protein，Bax）和甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）抗體購(gòu)自英國(guó)Abcam公司；辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗兔二抗購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；改良Eagle培養(yǎng)基（DMEM培養(yǎng)基）購(gòu)自北京華美試劑公司；超凈工作臺(tái)購(gòu)自沈陽(yáng)市醫(yī)療器械二廠；培養(yǎng)箱購(gòu)自美國(guó)NAPCO公司。

1.3分組、給藥及缺氧/復(fù)氧細(xì)胞模型建立

將H9c2細(xì)胞接種于含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，置于37 ℃、5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中孵育，2 d更換1次培養(yǎng)基，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)90%時(shí)，進(jìn)行傳代。取第4代對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)，根據(jù)細(xì)胞干預(yù)方式不同分為對(duì)照組、缺氧/復(fù)氧組、利拉魯肽組、miR-93-5p拮抗劑（anti-miR-93-5p）組、anti-miR-93-5p＋利拉魯肽組。anti-miR-93-5p組和anti-miR-93-5p＋利拉魯肽組細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染miR-93-5p拮抗劑50 μmol/L，24 h后，anti-miR-93-5p＋利拉魯肽組、利拉魯肽組細(xì)胞加入利拉魯肽100 μmol/L預(yù)處理12 h后，除對(duì)照組外，其余各組建立缺氧/復(fù)氧模型。具體操作如下：將不含血清和糖的DMEM培養(yǎng)基用混合氣體（95%N2和5% CO2）平衡2 h制備飽和缺氧液，然后棄去細(xì)胞中原有培養(yǎng)液，迅速將細(xì)胞接種于飽和的缺氧液中，之后將細(xì)胞置于37 ℃低氧培養(yǎng)箱（95% N2和5% CO2）中培養(yǎng)10 h，即為缺氧模型。10 h后，將缺氧液棄掉，加入含糖和10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，并置于37 ℃、95%空氣和5% CO2的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2 h，即為復(fù)氧模型。對(duì)照組細(xì)胞培養(yǎng)于含糖和10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，置于37 ℃、95%空氣和5%CO2的培養(yǎng)箱中。

1.4實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-qPCR）測(cè)定H9c2細(xì)胞中miR-93-5p的表達(dá)水平

細(xì)胞復(fù)氧結(jié)束后，收集細(xì)胞，利用Trizol法提取細(xì)胞中總RNA，反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。以cDNA為模板，配制熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體系，95 ℃ 2 min，95 ℃ 30 s，58 ℃ 40 s，共40個(gè)循環(huán)。熒光定量PCR儀測(cè)定miR-93-5p表達(dá)，所有樣品均進(jìn)行5次重復(fù)操作。以U6作為內(nèi)參，2－△△Ct法計(jì)算miR-93-5p相對(duì)表達(dá)水平。miR-93-5p的引物序列詳見表1。

1.5二苯基四氮唑溴鹽（MTT）法檢測(cè)H9c2細(xì)胞存活率

細(xì)胞復(fù)氧結(jié)束后，將細(xì)胞制成懸液，以每孔3×103個(gè)細(xì)胞的密度接種于96孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)48 h，之后每孔加入MTT（5 mg/mL）試劑20 μL，37 ℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培育4 h。棄去上層清液，每孔加入200 μL 二甲基亞砜（DMSO），振蕩孵育10 min，酶標(biāo)儀測(cè)定490 nm波長(zhǎng)處的吸光度（A）值，計(jì)算細(xì)胞存活率＝（實(shí)驗(yàn)組A值/對(duì)照組A值）×100%。

1.6流式細(xì)胞儀檢測(cè)H9c2細(xì)胞凋亡率

細(xì)胞復(fù)氧結(jié)束后，胰酶消化，磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌重懸，加入500 μL 結(jié)合緩沖液Binding Buffer混勻，取100 μL細(xì)胞懸液加入異硫氰酸熒光素標(biāo)記的膜聯(lián)蛋白（Annexin V-FITC）孵育10 min，然后加入碘化丙啶孵育15 min。使用流式細(xì)胞儀和Flowjo軟件分析細(xì)胞凋亡率。

1.7酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測(cè)H9c2細(xì)胞中MDA、SOD和GSH-Px水平

細(xì)胞復(fù)氧結(jié)束后，收集細(xì)胞，加入磷酸鹽緩沖液，超聲波細(xì)胞破碎儀處理50 s，該過(guò)程在冰浴中進(jìn)行。4 ℃、4 000 r/min離心10 min，取上清液為待測(cè)樣品。酶標(biāo)包被板設(shè)定空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔，標(biāo)準(zhǔn)孔加標(biāo)準(zhǔn)品50 μL，待測(cè)樣品孔加入樣品稀釋液40 μL，再加待測(cè)樣品10 μL，封板后37 ℃孵育30 min。洗滌5次，除空白孔外，其余孔加酶標(biāo)試劑50 μL，封板后37 ℃孵育30 min。洗滌5次，各孔加入HRP標(biāo)記的四甲基聯(lián)苯胺（TMB）底物顯色液各0.1 mL，緩慢振蕩，37 ℃避光顯色10 min，加入50 μL終止液，置于酶標(biāo)儀450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值。

1.8蛋白印跡法檢測(cè)H9c2細(xì)胞中Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)

細(xì)胞復(fù)氧結(jié)束后，收集細(xì)胞，加入蛋白裂解液，置于冰上30 min。4 ℃ 12 000 r/min離心15 min，離心半徑為10 cm，收集上清液。定量蛋白濃度，加入上樣緩沖液后100 ℃煮沸5 min。按照分組順序，依次上樣，每孔加入50 μg蛋白，120 V電泳2 h。電泳結(jié)束后，聚偏二氟乙烯膜（PVDF）濕轉(zhuǎn)，0.3 A 2 h，濕轉(zhuǎn)完成后，室溫封閉1h，Caspase-3、Bax、Bcl-2、GAPDH（1∶1 000）一抗4 ℃孵育過(guò)夜，洗膜3次，每次5 min。二抗（1∶5 000）室溫孵育2 h。TBST洗膜3次，每次5 min，增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光液（ECL）法顯色。Image J軟件分析蛋白條帶灰度值，以目的蛋白條帶灰度值與GAPDH蛋白條帶灰度值的比值作為目的蛋白相對(duì)表達(dá)水平。

1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，兩組比較采用t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1缺氧/復(fù)氧對(duì)H9c2細(xì)胞中miR-93-5p表達(dá)的影響

缺氧/復(fù)氧細(xì)胞中miR-93-5p表達(dá)水平（3.88±0.25）低于常氧細(xì)胞（9.64±0.27），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝－35.002，P＜0.001）。

2.2各組H9c2細(xì)胞中miR-93-5p表達(dá)水平比較

與對(duì)照組比較，缺氧/復(fù)氧組miR-93-5p表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與缺氧/復(fù)氧組比較，利拉魯肽組miR-93-5p表達(dá)升高，anti-miR-93-5p組miR-93-5p表達(dá)降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與利拉魯肽組比較，anti-miR-93-5p＋利拉魯肽組miR-93-5p表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與anti-miR-93-5p組比較，anti-miR-93-5p＋利拉魯肽組miR-93-5p表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表2。

2.3各組H9c2細(xì)胞存活率比較

與對(duì)照組比較，缺氧/復(fù)氧組心肌細(xì)胞存活率降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與缺氧/復(fù)氧組比較，利拉魯肽組心肌細(xì)胞存活率升高，anti-miR-93-5p組心肌細(xì)胞存活率降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與利拉魯肽組比較，anti-miR-93-5p＋利拉魯肽組心肌細(xì)胞存活率降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與anti-miR-93-5p組比較，anti-miR-93-5p＋利拉魯肽組心肌細(xì)胞存活率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表3。

2.4各組H9c2細(xì)胞凋亡率比較

與對(duì)照組比較，缺氧/復(fù)氧組心肌細(xì)胞凋亡率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與缺氧/復(fù)氧組比較，利拉魯肽組心肌細(xì)胞凋亡率降低，anti-miR-93-5p組心肌細(xì)胞凋亡率升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與利拉魯肽組比較，anti-miR-93-5p＋利拉魯肽組心肌細(xì)胞凋亡率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與anti-miR-93-5p組比較，anti-miR-93-5p＋利拉魯肽組心肌細(xì)胞凋亡率降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表4、圖1。

2.5各組H9c2細(xì)胞中氧化應(yīng)激指標(biāo)比較

與對(duì)照組比較，缺氧/復(fù)氧組MDA含量升高，SOD、GSH-Px活性降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與缺氧/復(fù)氧組比較，利拉魯肽組MDA含量降低，SOD、GSH-Px活性升高，anti-miR-93-5p組MDA含量升高，SOD、GSH-Px活性降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與利拉魯肽組比較，anti-miR-93-5p＋利拉魯肽組MDA含量升高，SOD、GSH-Px活性降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與anti-miR-93-5p組比較，anti-miR-93-5p＋利拉魯肽組MDA含量降低，SOD、GSH-Px活性升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表5。

2.6各組H9c2細(xì)胞中凋亡蛋白表達(dá)水平比較

與對(duì)照組比較，缺氧/復(fù)氧組Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表達(dá)升高，Bcl-2降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與缺氧/復(fù)氧組比較，利拉魯肽組Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表達(dá)降低，Bcl-2升高，anti-miR-93-5p組Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表達(dá)升高，Bcl-2降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與利拉魯肽組比較，anti-miR-93-5p＋利拉魯肽組Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表達(dá)升高，Bcl-2降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與anti-miR-93-5p組比較，anti-miR-93-5p＋利拉魯肽組Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表達(dá)降低，Bcl-2升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表6、圖2。

3討論

目前，心肌缺血再灌注損傷是嚴(yán)重的冠心病類型，其造成的心肌細(xì)胞凋亡、心肌纖維化、心臟功能障礙等是病人死亡的主要原因［7］。缺血使心肌細(xì)胞處于應(yīng)激狀態(tài)，導(dǎo)致不可逆的心肌損傷，當(dāng)血流再灌注時(shí)，氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的大量吸入會(huì)提高氧化應(yīng)激水平，進(jìn)一步加重心肌細(xì)胞損傷［8-10］。心肌缺血再灌注造成的線粒體功能障礙，活性氧過(guò)度產(chǎn)生，氧化應(yīng)激水平升高，是發(fā)生心肌細(xì)胞凋亡、心肌纖維化的主要原因，所以防治氧化應(yīng)激可能是治療缺血再灌注損傷的有效途徑［11］。本研究探討利拉魯肽對(duì)缺氧/復(fù)氧心肌細(xì)胞損傷的作用，為臨床治療心肌缺血再灌注提供理論依據(jù)。

細(xì)胞凋亡是心肌損傷的主要機(jī)制，心肌細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行性減少，成纖維細(xì)胞進(jìn)行性增殖，造成心肌纖維化，心肌硬度增加，心肌收縮和舒張障礙，最終發(fā)生心力衰竭［12］。研究表明，利拉魯肽通過(guò)降低線粒體功能障礙和代謝紊亂，從而抑制白介素1β誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡，抑制炎癥反應(yīng)，增強(qiáng)SOD活性，降低MDA含量，從而降低氧化應(yīng)激水平，抑制高糖誘導(dǎo)的乳鼠心肌細(xì)胞凋亡［13-14］。本研究結(jié)果表明，心肌細(xì)胞發(fā)生缺氧/復(fù)氧時(shí)，MDA水平升高，SOD、GSH-Px活性降低，氧化應(yīng)激水平升高，心肌細(xì)胞存活率降低、凋亡率升高，經(jīng)利拉魯肽治療后，MDA水平降低，SOD、GSH-Px活性升高，氧化應(yīng)激水平降低，心肌細(xì)胞存活率升高、凋亡率降低，說(shuō)明利拉魯肽可降低氧化應(yīng)激水平，發(fā)揮抗細(xì)胞凋亡作用。

miRNA是一種微小RNA，由20～25個(gè)核苷酸組成。研究表明，缺血再灌注心肌組織中多種miRNA表達(dá)異常，其中miR-93表達(dá)下調(diào)，靶向作用于下游靶基因，加重心肌損傷［15］。此外，miR-93表達(dá)上調(diào)在心肌梗死及脂多糖造成的心肌損傷中發(fā)揮抗心肌細(xì)胞凋亡作用［16-17］。miR-93參與抑制炎癥反應(yīng)改善肺損傷，靶向作用于α-絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶B（AKT）抑制細(xì)胞自噬［18-19］。細(xì)胞凋亡受促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白的調(diào)控，Bcl-2家族和Caspase家族在細(xì)胞凋亡中具有重要作用，Bcl-2具有抑制細(xì)胞凋亡的作用，而Caspase-3是多條促凋亡途徑的共同下游效應(yīng)蛋白［20］。Bax作為一種促凋亡基因不僅具有拮抗Bcl-2的抑凋亡作用，而且可以直接促進(jìn)細(xì)胞凋亡［21］。本研究將H9c2心肌細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-93-5p拮抗劑，同時(shí)給予利拉魯肽，結(jié)果表明，miR-93-5p拮抗劑使miR-93-5p表達(dá)明顯降低，細(xì)胞凋亡蛋白Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表達(dá)增加，Bcl-2蛋白表達(dá)降低。應(yīng)用利拉魯肽后，miR-93-5p表達(dá)水平升高，細(xì)胞凋亡蛋白Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表達(dá)降低，Bcl-2蛋白表達(dá)增加，提示利拉魯肽上調(diào)缺氧/復(fù)氧心肌細(xì)胞中miR-93-5p的表達(dá)，發(fā)揮抗心肌細(xì)胞凋亡作用。

綜上所述，利拉魯肽可有效抑制缺氧/復(fù)氧心肌細(xì)胞凋亡，可能是通過(guò)上調(diào)miR-93-5p表達(dá)，降低心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激水平發(fā)揮調(diào)控作用，為利拉魯肽應(yīng)用于臨床治療心肌缺血再灌注損傷提供實(shí)驗(yàn)支持。

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（收稿日期：2021-05-26）

（本文編輯鄒麗）