鰤諾卡氏菌滅活疫苗對(duì)大口黑鱸非特異性免疫指標(biāo)的影響

楊星　張美彥　張效平　趙振新　商寶娣　周勇

摘要：研究大口黑鱸（Micropterus salmoides）對(duì)鰤諾卡氏菌（Nocardia seriolae）滅活疫苗非特異性免疫應(yīng)答的變化過(guò)程，為預(yù)防鰤諾卡氏菌病提供理論依據(jù)，可促進(jìn)養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展。大口黑鱸平均體長(zhǎng)（10±2） cm、平均體重（30±2） g，鰤諾卡氏菌從患病大口黑鱸身上分離鑒定獲得。600 尾大口黑鱸隨機(jī)分為免疫組和對(duì)照組，每組300 尾，免疫組通過(guò)腹腔注射菌濃度為1.0×109 CFU/mL 的鰤諾卡氏菌滅活疫苗0.5 mL/尾，對(duì)照組注射同等劑量的磷酸鹽緩沖液。免疫后的第1、7、14、21、28和35天采集血液樣品，測(cè)定血細(xì)胞數(shù)量、吞噬細(xì)胞吞噬活性、溶菌酶活力、酸性磷酸酶活力以及超氧化物歧化酶活力等非特異性指標(biāo)。免疫接種第35天后進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，計(jì)算相對(duì)免疫保護(hù)率。結(jié)果表明：免疫組血細(xì)胞數(shù)量顯著增加，紅細(xì)胞和白細(xì)胞數(shù)量均于第7天達(dá)峰值，分別為（4.49±0.23）×106 個(gè)/mm3和（3.88±0.24）×103 個(gè)/mm3；免疫組吞噬指數(shù)和吞噬百分比均在第7天達(dá)到最高值，分別為2.65和29.85％；血清中溶菌酶活力和酸性磷酸酶活力均于免疫后第7天達(dá)到峰值，分別為199.98 U/mL和29.88 U/mL，極顯著高于對(duì)照組；超氧化物歧化酶活力于免疫后第14天達(dá)到峰值，為37.59 U/mL，極顯著高于對(duì)照組；大口黑鱸的相對(duì)免疫保護(hù)率為61.54％。鰤諾卡氏菌滅活疫苗能顯著誘導(dǎo)大口黑鱸產(chǎn)生非特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)，主要通過(guò)增加血細(xì)胞數(shù)量，提高吞噬細(xì)胞活性和免疫相關(guān)酶活性等增強(qiáng)機(jī)體抵抗鰤諾卡氏菌的能力。

關(guān)鍵詞：鰤諾卡氏菌；滅活疫苗；大口黑鱸；非特異性免疫

中圖分類號(hào)：S966? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? ? ? 文章編號(hào)：1674-3075（2023）03-0144-07

大口黑鱸（Micropterus salmoides） 原產(chǎn)美國(guó)，為肉食性魚(yú)類，經(jīng)馴化后可攝食人工配合飼料，具有生長(zhǎng)快、適應(yīng)性強(qiáng)和病害少等優(yōu)點(diǎn)，目前已成為熱門特種水產(chǎn)養(yǎng)殖品種之一，由于近幾年大口黑鱸市場(chǎng)價(jià)格漲勢(shì)較快，養(yǎng)殖效益顯著，導(dǎo)致市場(chǎng)對(duì)大口黑鱸的需求越來(lái)越大（楊星等，2019）。隨著大口黑鱸養(yǎng)殖規(guī)模的日益擴(kuò)大及集約化程度的不斷提高，大口黑鱸養(yǎng)殖水體環(huán)境日趨惡化，導(dǎo)致其病害頻發(fā)，給大口黑鱸養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失（劉夢(mèng)梅和高賢濤，2022）。

諾卡氏菌（Nocardia） 是一類廣泛分布在水體和土壤中的革蘭氏陽(yáng)性絲狀桿菌，是人類和動(dòng)物重要的條件致病菌（張建麗和劉志恒，2001）。近年來(lái)，諾卡氏菌病 給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，尤其是在大口黑鱸的養(yǎng)殖過(guò)程中，當(dāng)養(yǎng)殖環(huán)境惡化，魚(yú)體免疫力低下時(shí)極易感染該致病菌（杜佳垠，2007）。魚(yú)類諾卡氏菌病的致病菌主要有鰤諾卡氏菌（Nocardia seriolae）（何晟毓等，2020）和星狀諾卡氏菌（N. asteroids）（林偉等，2012）。大口黑鱸諾卡氏菌病表現(xiàn)癥狀主要為體表潰爛出血，內(nèi)臟和肌肉出現(xiàn)大量乳白色結(jié)節(jié)，肝和腎臟等器官充血并腫大等；該病發(fā)病持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，死亡率高，傳染性強(qiáng)，嚴(yán)重威脅鱸魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展（何晟毓等，2020）。針對(duì)該病的主要預(yù)防措施有減少冰鮮魚(yú)的投喂，防止污染水體，定期調(diào)節(jié)水質(zhì)，維持穩(wěn)定良好的水體環(huán)境，合理搭配養(yǎng)殖品種，定期使用保肝護(hù)膽藥物一起拌料投喂，提高魚(yú)體免疫力（朱志東等，2018）。

免疫防控被認(rèn)為是預(yù)防魚(yú)類疾病發(fā)生與流行較有效的途徑（Sommerset et al，2005；Plant & LaPatra，2011）。本研究以鰤諾卡氏菌全菌滅活疫苗免疫健康大口黑鱸，對(duì)其血細(xì)胞數(shù)量、吞噬細(xì)胞吞噬活性、溶菌酶活力、酸性磷酸酶活力以及超氧化物歧化酶活力等非特異性免疫指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，分析大口黑鱸對(duì)鰤諾卡氏菌滅活疫苗非特異性免疫應(yīng)答的變化過(guò)程，為大口黑鱸諾卡氏菌病的預(yù)防提供理論依據(jù)，促進(jìn)大口黑鱸養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。

1? ?材料與方法

1.1? ?試驗(yàn)材料

供試大口黑鱸取自貴州省水產(chǎn)研究所試驗(yàn)基地，個(gè)體健康，平均體長(zhǎng)（10±2） cm，平均體重（30±2） g，暫養(yǎng)在直徑60 cm、高80 cm的塑料養(yǎng)殖桶中，水溫控制在（25±2）℃，每天投喂人工配合飼料，室內(nèi)暫養(yǎng)1周后進(jìn)行免疫試驗(yàn)。

1.2? ?試驗(yàn)菌株及其培養(yǎng)

鰤諾卡氏菌由貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水產(chǎn)研究所微生物鑒定實(shí)驗(yàn)室從養(yǎng)殖場(chǎng)患病大口黑鱸身上分離鑒定獲得。將菌株接種于腦心浸液培養(yǎng)基（Brian Heart Infusion，BHI）中，28 ℃恒溫?fù)u床振蕩培養(yǎng)3～5 d后，離心收集菌體，稀釋至一定濃度，置4 ℃冷藏備用。

1.3? ?疫苗制備和檢驗(yàn)

在已培養(yǎng)好的鰤諾卡氏菌菌液中加入福爾馬林溶液至終濃度為0.3%，恒溫37 ℃滅活24 h，即得鰤諾卡氏菌全細(xì)胞滅活疫苗。無(wú)菌檢驗(yàn)采用常規(guī)平板培養(yǎng)法，后離心沉淀菌體，采用麥?zhǔn)媳葷岱ń?jīng)磷酸鹽緩沖液（Phosphate Buffered Saline，PBS）稀釋至終濃度為1.0×109 CFU/mL，置4 ℃冷藏備用（楊星等，2014）。

1.4? ?疫苗的安全性檢驗(yàn)

鰤諾卡氏菌滅活疫苗通過(guò)腹腔注射接種30 尾健康大口黑鱸，每尾0.3 mL，對(duì)照組取30 尾健康大口黑鱸注射等量的PBS，觀察7 d內(nèi)2組魚(yú)的健康狀況及存活情況。

1.5? ?免疫與采血

600 尾試驗(yàn)魚(yú)隨機(jī)分為免疫組和對(duì)照組，每組300 尾，免疫組通過(guò)腹腔注射菌濃度為1.0×109 CFU/mL 的鰤諾卡氏菌滅活疫苗0.5 mL/尾，對(duì)照組注射同等劑量的PBS。分別于免疫接種后第1、7、14、21、28和35天，從各組中隨機(jī)取試驗(yàn)魚(yú)30 尾，尾靜脈取血0.5 mL/尾，每尾血液?jiǎn)为?dú)分裝。其中一半血液加肝素抗凝，用于血細(xì)胞計(jì)數(shù)和吞噬活性測(cè)定；另一半血液不加抗凝劑，室溫靜置2 h，于4 ℃靜置5 h，4500 r/min 離心10 min，取上清，用于酸性磷酸酶活力和血清溶菌酶活力等免疫指標(biāo)的檢測(cè)。每份血樣重復(fù)試驗(yàn)3次。

1.6? ?免疫指標(biāo)檢測(cè)

1.6.1? ?血細(xì)胞數(shù)量? ?取事先配制的Dacie 氏稀釋液將抗凝血稀釋 200 倍，通過(guò)血球計(jì)數(shù)板計(jì)算血細(xì)胞數(shù)量，重復(fù)計(jì)數(shù)3次（楊星等，2014）。

1.6.2? ?吞噬細(xì)胞吞噬活性? ?取0.4 mL抗凝血加入0.1 mL滅活的金黃色葡萄球菌，充分混勻后置于28 ℃恒溫水浴鍋中孵育60 min，1000 r/min離心5 min；棄上清后，取白細(xì)胞層制作3張涂片，利用瑞氏-吉姆薩（Wright-Giemsa）復(fù)合染色液染色，后油鏡下觀察并記錄結(jié)果。以吞噬百分比（Phagocytic Percentage，PP）和吞噬指數(shù)（Phagocytic Index，PI）表示白細(xì)胞吞噬活性（楊星等，2014）。

1.6.3? ?血清溶菌酶活力? ?溶菌酶活力測(cè)定參考周勇等（2018）的方法。取 0.02 mL 血清，使用購(gòu)于南京建城生物工程研究所研制的溶菌酶檢測(cè)試劑盒進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算公式如下：

溶菌酶活力（μg/mL）=[（測(cè)定管 OD2 -測(cè)定管ODl）/（標(biāo)準(zhǔn)管 OD2-標(biāo)準(zhǔn)管ODl）]×標(biāo)準(zhǔn)管濃度（200 U/mL）× 樣本測(cè)試前稀釋倍數(shù)。

1.6.4? ?血清酸性磷酸酶活力? ?酸性磷酸酶（ACP）活力測(cè)定參考周勇等（2018）的方法。取 0.05 mL 血清，使用購(gòu)于南京建城生物工程研究所研制的酸性磷酸酶檢測(cè)試劑盒進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算公式如下：

酸性磷酸酶（U/100 mL）=（測(cè)定管OD值/標(biāo)準(zhǔn)管OD值）×標(biāo)準(zhǔn)管酚的含量（0.005 mg）×（100 mL/0.05 mL）

1.6.5? ?血清超氧化物歧化酶活力? ?超氧化物歧化酶（SOD）活力測(cè)定參考周偉東等（2017）的方法。使用購(gòu)于南京建城生物工程研究所研制的超氧化物歧化酶檢測(cè)試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

1.7? ?攻毒試驗(yàn)

免疫接種第35天后用鰤諾卡氏菌對(duì)試驗(yàn)魚(yú)進(jìn)行攻毒，從免疫組中隨機(jī)取30 尾試驗(yàn)魚(yú)，對(duì)照組隨機(jī)選取30 尾，通過(guò)腹腔注射濃度為1×109 個(gè)/mL的鰤諾卡氏菌菌懸液0.3 mL，連續(xù)觀察14 d，記錄發(fā)病和死亡情況，并按下列公式計(jì)算相對(duì)免疫保護(hù)率。

相對(duì)免疫保護(hù)率=（1－免疫組死亡率/對(duì)照組死亡率）×100％

1.8? ?數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)通過(guò)SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

2? ?結(jié)果與分析

2.1? ?無(wú)菌檢驗(yàn)與安全性

BHI 固體培養(yǎng)基上均無(wú)菌落生長(zhǎng)，表明鰤諾卡氏菌已全部滅活，無(wú)活菌存在。所有接種魚(yú)均未出現(xiàn)死亡，其攝食、運(yùn)動(dòng)等無(wú)異常，表明所制備的疫苗安全性好，其對(duì)大口黑鱸是安全可靠的。

2.2? ?血細(xì)胞計(jì)數(shù)

大口黑鱸免疫接種鰤諾卡氏菌滅活疫苗后，其外周血紅細(xì)胞和白細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比均顯著提高，且二者變化趨勢(shì)大致相同。其中紅細(xì)胞數(shù)量于免疫后第7天達(dá)峰值（圖 1），為（4.49±0.23）×106 個(gè)/mm3，極顯著高于對(duì)照組（P<0.01），隨后逐漸下降，但免疫后第14天仍極顯著高于對(duì)照組（P<0.01），第21天和第28天顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。白細(xì)胞數(shù)量于免疫后第7天達(dá)最大值，為（3.88±0.24）×103 個(gè)/mm3 （圖 2），極顯著高于對(duì)照組（P<0.01），在接種后第14天與對(duì)照組存在極顯著差異（P<0.01），且接種后第21天與對(duì)照組存在顯著差異（P<0.05），其他時(shí)間與對(duì)照組差異不顯著（P>0.05）。

2.3? ?吞噬活性

大口黑鱸免疫接種鰤諾卡氏菌滅活疫苗后，其外周血吞噬細(xì)胞的吞噬百分率（PP）和吞噬指數(shù)（PI）與對(duì)照組相比均顯著提高，且二者變化趨勢(shì)大致相同。其中PP于免疫后第7天達(dá)峰值（圖 3），為29.85%，極顯著高于對(duì)照組（P<0.01），隨后逐漸下降，但免疫后第14天和第21天仍極顯著高于對(duì)照組（P<0.01）。PI于免疫后第7天達(dá)最大值，為2.65（圖 4），極顯著高于對(duì)照組（P<0.01），且免疫后第14天仍極顯著高于對(duì)照組（P<0.01），免疫后第21天顯著高于對(duì)照組（P<0.05），其他時(shí)間差異不顯著（P>0.05）。

2.4? ?溶菌酶活力變化

大口黑鱸免疫接種鰤諾卡氏菌滅活疫苗后，其溶菌酶活力逐漸增強(qiáng)（圖5），于免疫后第7天達(dá)到峰值199.98 U/mL，其中第7天和第14天免疫組溶菌酶活力極顯著高于對(duì)照組（P<0.01），第21天顯著高于對(duì)照組（P<0.05），隨后逐漸下降，但整體水平一直高于對(duì)照組。

2.5? ?酸性磷酸酶活力變化

大口黑鱸在注射鰤諾卡氏菌滅活疫苗免疫后，其ACP活力逐漸增強(qiáng)（圖6），于免疫后第7天達(dá)到峰值29.88 U/mL，隨后逐漸下降，其中第7天和第14天免疫組ACP活力極顯著高于對(duì)照組（P<0.01），第21天顯著高于對(duì)照組（P<0.05），而對(duì)照組ACP活力一直保持在19.97 U/mL左右。

2.6? ?超氧化物歧化酶（SOD）活力變化

大口黑鱸在注射鰤諾卡氏菌滅活疫苗免疫后，其SOD活力逐漸增強(qiáng)（圖7），于免疫后第14天達(dá)到峰值37.59 U/mL，隨后逐漸下降，其中第7天和第14天免疫組SOD活力極顯著高于對(duì)照組（P<0.01），而對(duì)照組SOD活力一直保持在19.99 U/mL左右。

2.7? ?相對(duì)免疫保護(hù)率

用鰤諾卡氏菌攻毒感染免疫組和對(duì)照組大口黑鱸后第14天，免疫組死亡率為33.33%，而對(duì)照組死亡率為86.67%，鰤諾卡氏菌滅活疫苗對(duì)免疫組大口黑鱸相對(duì)免疫保護(hù)率為61.54%，見(jiàn)表1。

3? ?討論

目前關(guān)于諾卡氏菌的相關(guān)研究主要集中在病原菌的鑒定分析和抗藥研究等方面（Kono et al， 2002; Itano & Kawakami， 2002; Itano et al， 2006; Ismail et al， 2011），而關(guān)于諾卡氏菌滅活疫苗免疫水產(chǎn)動(dòng)物的相關(guān)研究鮮有報(bào)道。Shimahara 等（2010） 研究表明，用混有弗氏不完全佐劑的諾卡氏菌免疫大口黑鱸，其溶菌酶活性并未明顯升高，且在多次免疫后攻毒感染死亡率并未降低。Nayak等（2014）研究表明諾卡氏菌滅活疫苗免疫鯽（Carassius auratus auratus）后可產(chǎn)生較好的免疫保護(hù)效果。魚(yú)類免疫接種疫苗后，可刺激魚(yú)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫和體液免疫，同時(shí)也可增強(qiáng)相關(guān)免疫酶的活性，從而防御致病微生物的感染（Zhou et al，2015）。在本試驗(yàn)中，大口黑鱸在免疫鰤諾卡氏菌滅活疫苗后，其外周血中紅、白細(xì)胞數(shù)量顯著增加，均于免疫后第7天達(dá)峰值，這與青魚(yú)（Mylopharyngodon piceus）免疫接種嗜水氣單胞滅活疫苗后，其外周血紅、白細(xì)胞數(shù)量變化趨勢(shì)相似 （張波等，2012）。白細(xì)胞吞噬作用在水產(chǎn)動(dòng)物非特異性免疫中發(fā)揮重要作用，可通過(guò)測(cè)定白細(xì)胞的吞噬活性來(lái)反映機(jī)體的免疫水平（Yakhnenko & Klimenlov，2009）。在本實(shí)驗(yàn)中，大口黑鱸免疫接種鰤諾卡氏菌滅活疫苗后，其外周血吞噬細(xì)胞的吞噬百分率（PP）和吞噬指數(shù)（PI）與對(duì)照組相比均顯著提高，PP和PI于免疫后第7天均達(dá)峰值，且二者變化趨勢(shì)大致相同，隨后逐漸下降。該結(jié)果表明，大口黑鱸的早期免疫主要是通過(guò)白細(xì)胞的吞噬作用來(lái)抵抗病原微生物的入侵。這與氣單胞菌免疫虹鱒（Oncorhynchus mykiss）（K?llner & Kotterba，2002）的研究結(jié)果相似。

溶菌酶是一種水解酶，主要存在于水產(chǎn)動(dòng)物的血清、黏液和吞噬細(xì)胞中，其通過(guò)水解細(xì)菌細(xì)胞壁來(lái)殺滅，是機(jī)體非特異性免疫中較重要的防御因子，可通過(guò)測(cè)定其活性來(lái)反映吞噬細(xì)胞殺滅致病微生物的程度（Chen et al，1996）。李圓圓等（2008）研究得出，西伯利亞鱘（Acipenser baerii）在免疫接種嗜水氣單胞菌滅活疫苗后，可顯著增強(qiáng)其血清溶菌酶活力。嗜水氣單胞菌滅活疫苗免疫銀鯽（Carassius gibelio）后，血清溶菌酶活力增強(qiáng)（毛會(huì)麗等，2014）。在本實(shí)驗(yàn)中，大口黑鱸免疫鰤諾卡氏菌滅活疫苗后第7天，其溶菌酶活力達(dá)到峰值，表明鰤諾卡氏菌滅活疫苗可明顯增強(qiáng)大口黑鱸溶菌酶活力。本研究還發(fā)現(xiàn)大口黑鱸在注射鰤諾卡氏菌滅活疫苗后，其血清中酸性磷酸酶活力逐漸增強(qiáng)，于免疫后第7天達(dá)最大值，隨后逐漸下降。毛會(huì)麗等（2014）研究結(jié)果表明，嗜水氣單胞菌滅活疫苗免疫銀鯽后第 14天，其血清中酸性磷酸酶活力顯著高于對(duì)照組。施氏鱘（Acipenser schrencki）免疫嗜水氣單胞菌滅活疫苗后第14天，其血清中酸性磷酸酶活力達(dá)到峰值，表明酸性磷酸酶在水產(chǎn)動(dòng)物非特異性免疫中發(fā)揮一定作用（Cheng，1978；周勇等，2018）。超氧化物歧化酶（SOD）在水產(chǎn)動(dòng)物非特異性免疫中發(fā)揮重要作用，其可以通過(guò)去除機(jī)體內(nèi)的超氧陰離子自由基來(lái)保護(hù)細(xì)胞，對(duì)機(jī)體的免疫功能有一定促進(jìn)作用（李赫等，2010）。 本研究顯示，大口黑鱸在注射鰤諾卡氏菌滅活疫苗后，其SOD活力逐漸增強(qiáng)，于免疫后第14天達(dá)到峰值，隨后逐漸下降。免疫后第35天對(duì)大口黑鱸進(jìn)行攻毒感染試驗(yàn)結(jié)果得出，鰤諾卡氏菌滅活疫苗對(duì)免疫組大口黑鱸相對(duì)免疫保護(hù)率為61.54％，高于鰻弧菌疫苗對(duì)大口黑鱸的相對(duì)免疫保護(hù)率（余俊紅等，2001；肖慧等，2003），也進(jìn)一步驗(yàn)證了鰤諾卡氏菌滅活疫苗能夠?qū)Υ罂诤邝|產(chǎn)生有效的免疫保護(hù)。

綜上，將鰤諾卡氏菌滅活疫苗接種大口黑鱸后，能夠顯著誘導(dǎo)大口黑鱸產(chǎn)生非特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)，主要通過(guò)增加血細(xì)胞數(shù)量，提高吞噬細(xì)胞活性和免疫相關(guān)酶活性等方式增強(qiáng)機(jī)體抵抗病原微生物的能力。本研究結(jié)果也為深入研究大口黑鱸病害的免疫防控提供了理論支撐。

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（責(zé)任編輯? ?張俊友? ?熊美華）

Effect of Formalin-inactivated Nocardia seriolae Vaccine on Non-specific

Immune indices of Micropterus salmoides

YANG Xing1， ZHANG Mei‐yan1， ZHANG Xiao‐ping1， ZHAO Zhen‐xin1， SHANG Bao‐di1， ZHOU Yong2

（1. Fisheries Research Institute of Guizhou Academy of Aquaculture Sciences，

Guiyang 550025， P.R. China;

2.Yangtze River Fisheries Research Institute， Chinese Academy of Fishery Sciences，

Wuhan 430223， P.R. China）

Abstract：In this study， a whole cell vaccine of Nocardia seriolae， inactivated by formalin， was used to immunize healthy Micropterus salmoides by peritoneal injection. Development of the non-specific immune response of? M. salmoides was then analyzed. We aimed to provide theoretical evidence for the prevention and control of pathogenic N. seriolae? and promote the sustainable and healthy development of M. salmoides aquaculture. Six hundred healthy M. salmoides of body length （10±2）cm and body weight （30±2）g were acclimated for a week before testing and randomly divided into an immunized treatment group and a non-immunized control group. A N. seriolae strain was isolated from diseased M. salmoides for vaccine preparation. Each test fish? in the vaccine group was dosed by abdominal injection with 0.5 mL of the vaccine at a strain concentration of 1.0×109 CFU/mL and fish in the control group were injected with 0.5 mL of phosphate buffered saline （PBS）. Blood samples were drawn from test fish on day 1， 7， 14， 21， 28 and 35 post immunization and non-specific immune indices were measured， including blood cell count， phagocytic activity， lysozyme activity， acid phosphatase activity， and superoxide dismutase activity. The challenge infection test was initiated 35 days post immunization and the relative immunity protection rates were calculated. The number of blood cells increased significantly in the immunized group， and the number of erythrocytes and leucocytes both reached maximum values （4.49±0.23）×106 cells/mm3 and （3.88±0.24）×103 cells/mm3 on day 7 post immunization. The phagocytic index and phagocytic percentage also reached maximum values （2.65 and 29.85%） on day 7. The lysozyme and acid phosphatase activities reached maximum values （199.98 U/mL and 29.88 U/mL） on day 7， and the superoxide dismutase activity peaked （37.59 U/m） on day 14. All parameter values were significantly higher in the treatment group than in the control group （P<0.01）. The challenge infection test gave a relative immunity protection rate of 61.54%. In summary， the inactivated N. seriolae vaccine induces a significant immune response in M. salmoides and enhances the immune response of fish by increasing blood cell counts and the activity of phagocytic cells and enzymes related to immunity.

Key words：Nocardia seriolae; inactivated vaccine; Micropterus salmoides; non-specific immune

收稿日期：2021-09-30? ? ? 修回日期：2023-02-05

基金項(xiàng)目：貴州省農(nóng)科院青年科技基金項(xiàng)目（黔農(nóng)科院青年基金[2019]27號(hào)）；國(guó)家特色淡水魚(yú)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目（CARS-46）；國(guó)家大宗淡水魚(yú)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目（CARS-46-49）；貴州省特色水產(chǎn)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目（GZCYTX2013-01102）。

作者簡(jiǎn)介：楊星，1987年生，男，助理研究員，主要從事水產(chǎn)動(dòng)物病害防控研究。E-mail：xingy87@163.com