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    采收方式對調(diào)制后煙葉葉片和主脈TSNAs 及前體物含量的影響

    2023-04-07 07:52:32張晶云榮仕賓秦艷青李晶晶馮雨晴趙園園史宏志
    河南農(nóng)業(yè)科學(xué) 2023年2期
    關(guān)鍵詞:主脈摘葉雪茄煙

    張晶云,榮仕賓,2,秦艷青,吳 疆,王 俊,李晶晶,馮雨晴,趙園園,鐘 秋,史宏志

    (1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 煙草學(xué)院/煙草農(nóng)業(yè)減害研究中心,河南 鄭州 450002;2.河南省煙草公司許昌市公司襄城縣分公司,河南 襄城 461700;3.中國煙草總公司四川省公司,四川 成都 600041;4.河南省南陽市煙草專賣局,河南南陽 473000;5.四川省煙草公司德陽市公司,四川 德陽 618400)

    煙草特有亞硝胺(TSNAs)是由煙草生物堿和亞硝酸發(fā)生亞硝化反應(yīng)生成的存在于煙葉和煙氣中的具有動(dòng)物致癌性的N-亞硝基化合物[1]。隨著吸煙損害健康的問題越來越受到人們的重視,降低TSNAs相關(guān)研究得到世界的廣泛關(guān)注。TSNAs主要有8 種[2-3],其中以N-亞硝基去甲基煙堿(NNN)、4-(N-甲基-亞硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)、N-亞硝基新煙草堿(NAT)和N-亞硝基假木賊堿(NAB)4 種含量較高。TSNAs 前體物主要包括生物堿、硝酸鹽和亞硝酸鹽,生物堿主要有4種:煙堿、降煙堿、新煙草堿和假木賊堿,其中煙堿占生物堿總量的92%以上,屬于叔胺類生物堿,其吡咯環(huán)被氧化后生成假氧化煙堿(PON),進(jìn)而生成NNK,降煙堿、新煙草堿和假木賊堿等仲胺類煙堿可直接生成NNN、NAT 和NAB[4-5]。關(guān)于硝酸鹽和亞硝酸鹽與TSNAs 的 關(guān) 系 討 論 眾 多,BRUNNEMANN 等[6]和FISCHER 等[7-8]認(rèn)為總TSNAs 與硝酸鹽之間存在顯著正相關(guān)關(guān)系,硝酸鹽水平是TSNAs 積累的一個(gè)指示物,硝酸鹽還原成亞硝酸鹽的過程則是TSNAs 積累的限制階段。BURTON 等[9]研究表明,TSNAs 在煙葉中的分布更類似于亞硝酸鹽的分布,引起TSNAs積累的主要因素是亞硝酸鹽。史宏志等[10]認(rèn)為TSNAs 的形成受到生物堿和亞硝酸鹽的雙重影響。TSNAs 的形成和積累主要發(fā)生在調(diào)制過程和貯藏過程中,在調(diào)制階段,由于微生物的作用,硝酸鹽被硝酸還原酶還原生成亞硝酸鹽,進(jìn)而與生物堿發(fā)生反應(yīng)形成TSNAs[11-12]。此后的研究表明[13-16],調(diào)制結(jié)束后的貯藏階段也會(huì)形成大量的TSNAs,在貯藏過程中,硝酸鹽可產(chǎn)生氣態(tài)氮氧化物,其與生物堿發(fā)生亞硝化反應(yīng)生成TSNAs。

    煙梗是煙葉的重要組成部分,是卷煙生產(chǎn)中的原料之一??緹煹暮B蕿?5%~35%。煙梗具有填充值高、焦油釋放量低的優(yōu)點(diǎn),是卷煙降焦和降低配方成本的重要手段[17-19]。煙葉葉片和主脈中TSNAs 前體物含量有較大差異,靳彤等[20]、劉扣珠等[21]對初烤煙葉片和主脈間TSNAs及前體物進(jìn)行差異分析,結(jié)果表明,主脈中生物堿含量低于葉片,但硝態(tài)氮含量和TSNAs 含量顯著高于葉片。不同采收方式對葉片和主脈間TSNAs 含量有重要影響,采收方式不同,葉片和主脈的失水速率有所差異,楊煥文等[22]對白肋煙葉片和主脈中TSNAs進(jìn)行了相關(guān)研究,但是由于不同類型煙葉所采用的調(diào)制方法不同,因而調(diào)制后煙葉中TSNAs 含量也有所差異。多年來,有關(guān)采收方式的研究多集中在對煙葉產(chǎn)質(zhì)量的影響方面[23-24],對TSNAs 的影響研究較少,為探究采收方式對不同類型煙葉葉片和主脈間TSNAs 及前體物的影響差異,以烤煙品種云煙87、曬煙什煙1號(hào)和雪茄煙德雪3 號(hào)為材料,設(shè)置摘葉采收、片脈分離采收和帶莖采收3 種采收方式,探究其對葉片和主脈中TSNAs 及前體物含量的影響,為選擇適宜的采收方式,有效降低煙葉葉片和主脈中TSNAs 及前體物含量,實(shí)現(xiàn)優(yōu)質(zhì)低害煙葉生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

    1 材料和方法

    1.1 選材與地點(diǎn)

    烤煙品種試驗(yàn)地點(diǎn)設(shè)在河南省南陽市方城縣清河鎮(zhèn)金葉園園區(qū)。供試材料為當(dāng)?shù)刂髟云贩N云煙87 的上部6 片葉。云煙種植面積為666.67 m2,煙苗于2020 年4 月15 日移栽,行株距為120 cm×55 cm。試驗(yàn)于8月19日開始采收,8月20日開始烘烤,于8 月27 日烘烤結(jié)束。施肥方式為當(dāng)?shù)亓?xí)慣施肥,每公頃45 kg 氮,供試肥料包括煙草專用復(fù)合肥(N∶P∶K=10∶10∶20)、硝酸鉀、硫酸鉀、液態(tài)鉀肥、芝麻餅肥、沼渣有機(jī)肥。田間管理按照當(dāng)?shù)貎?yōu)質(zhì)煙葉生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范進(jìn)行。

    雪茄煙和曬煙試驗(yàn)地點(diǎn)設(shè)在四川省什邡市師古鎮(zhèn)。供試材料為當(dāng)?shù)刂髟云贩N雪茄煙德雪3號(hào)和曬煙什煙1 號(hào)的上部煙葉,各供試品種種植面積均為333.33 m2。煙苗于2020 年4 月30 日移栽,行距120 cm,株距40 cm。供試土壤屬紫色土,土壤肥力中等,前作為水稻,田間管理按照當(dāng)?shù)貎?yōu)質(zhì)煙葉生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范統(tǒng)一管理。

    1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    采取隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)設(shè)計(jì),對采收方式設(shè)置3 個(gè)處理:摘葉采收(T1),即上部6片葉成熟后一次性采收進(jìn)行調(diào)制;片脈分離采收(T2),即上部6片葉成熟后一次性采收,將葉片和主脈分開進(jìn)行調(diào)制;帶莖采收(T3),即上部6 片葉成熟后帶莖一次性砍收進(jìn)行調(diào)制。

    烤煙上部葉(頂部3 片葉)正常成熟時(shí)對上部6片葉全部進(jìn)行采摘烘烤,T2、T1、T3 處理烘烤周期為5、6、7 d;雪茄煙采收后在鋼結(jié)構(gòu)現(xiàn)代化晾房調(diào)制,T2-T1-T3 處理周期為22、25、30 d;曬煙在自然環(huán)境下,白天陽光下直曬與夜晚曬棚內(nèi)掛晾反復(fù)交替進(jìn)行,T2、T1、T3處理時(shí)間周期為15、19、25 d。具體工藝流程和技術(shù)操作分別按烤煙烘烤技術(shù)規(guī)程[25]和什邡當(dāng)?shù)貎?yōu)質(zhì)雪茄煙葉生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范進(jìn)行統(tǒng)一管理,調(diào)制結(jié)束后,將煙葉葉片和主脈分開,磨碎,過孔徑0.25 mm篩子,待測。

    1.3 測定項(xiàng)目和方法

    1.3.1 煙葉和主脈硝酸鹽和亞硝酸鹽含量 煙葉硝酸鹽含量采用濃H2SO4-水楊酸法測定[26],煙葉亞硝酸鹽含量采用對氨基苯磺酸法測定[27]。

    1.3.2 煙葉和主脈生物堿含量 準(zhǔn)確稱取200 mg煙末置于15 mL 試管中,加入內(nèi)標(biāo)溶液100 μL、10% NaOH 溶液1.5 mL 及甲基叔丁基醚(MTBE)3 mL,旋緊旋蓋,充分振蕩5 min 后,室溫放置過夜(24 h±2 h),取上層清液進(jìn)行GC(氣相色譜法)分析。每個(gè)樣品應(yīng)平行測定2次。其原理是在堿性條件下,利用甲基叔丁基醚等有機(jī)溶劑提取煙草或煙草制品中的生物堿類物質(zhì),通過氣相色譜-氫火焰離子化檢測器(GC-FID)定量分析檢測其中4 種生物堿含量。

    1.3.3 煙葉和主脈TSNAs 含量 樣品均由上海煙草集團(tuán)北京卷煙廠進(jìn)行測定。測定方法為在線SPE-液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法(SPE-LC-MS/MS)[SPELC:Spark Holland,Symbiosis(Pico);MS/MS:AB Sciex triple quad 5500]。稱取1.0 g 煙樣,將其放入50 mL 錐形瓶中,加入40 μL 4 種氘代TSNAs(內(nèi)標(biāo))溶液(5 000 ng/mL)和30 mL 100 mmol/L乙酸銨水溶液,在室溫下用振蕩器(200 r/min)萃取60 min,萃取液過0.45 μm 水相濾膜后使用LC-MS/MS 檢測TSNAs 含量。NNN、NNK、NAT 和NAB 含量之和即為TSNAs總量。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    采用Excel 2019 軟件制表繪圖,采用DPS 7.05數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)的單因素試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析進(jìn)行方差分析,顯著性檢驗(yàn)用F檢驗(yàn)法,多重比較采用LSD法。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同采收方式對調(diào)制后煙葉葉片和主脈硝酸鹽含量的影響

    如圖1所示,從烤煙結(jié)果可以看出,烤煙葉片中硝酸鹽含量以片脈分離采收最低,較摘葉采收降低35.29%,帶莖采收處理最高;主脈中硝酸鹽含量以摘葉采收處理最低,帶莖采收處理最高。從曬煙和雪茄煙結(jié)果可以看出,葉片和主脈硝酸鹽含量均高于烤煙,且二者葉片中硝酸鹽含量均以片脈分離采收最低,分別比摘葉采收低24.53%和34.25%;二者主脈中硝酸鹽含量均表現(xiàn)為摘葉采收<片脈分離采收<帶莖采收。

    圖1 不同采收方式調(diào)制后煙葉硝酸鹽含量比較Fig.1 Comparison of nitrate content of tobacco leaves after modulation by different harvesting methods

    2.2 不同采收方式對調(diào)制后煙葉葉片和主脈亞硝酸鹽含量的影響

    如圖2所示,由烤煙結(jié)果可以看出,烤煙葉片中亞硝酸鹽含量以帶莖采收最高,其他2 個(gè)處理無顯著差異;烤煙主脈中亞硝酸鹽含量以片脈分離采收處理最低,較摘葉采收降低14.34%。由曬煙和雪茄煙結(jié)果可以看出,二者葉片和主脈中亞硝酸鹽含量均高于烤煙,且二者葉片中亞硝酸鹽含量均以片脈分離采收處理最低,分別比摘葉采收降低29.35%和40.44%;二者主脈中亞硝酸鹽含量均以摘葉采收處理最低,其他2個(gè)處理無顯著差異。

    圖2 不同采收方式調(diào)制后煙葉亞硝酸鹽含量比較Fig.2 Comparison of nitrite content of tobacco leaves after modulation by different harvesting methods

    2.3 不同采收方式對調(diào)制后煙葉葉片和主脈生物堿含量的影響

    從表1 可以看出,3 個(gè)類型之間葉片煙堿含量差異不大,但是曬煙和雪茄煙葉片生物堿總量略高于烤煙,主要是曬煙和雪茄煙葉片的降煙堿含量高于烤煙??緹熑~片生物堿總量以帶莖采收處理最高,比摘葉采收增加3.49%;曬煙和雪茄煙葉片生物堿總量以片脈分離采收處理最低,分別比摘葉采收低18.48%和12.12%,以帶莖采收處理最高。

    表1 不同采收方式調(diào)制后煙葉葉片生物堿含量比較Tab.1 Comparison of alkaloid content of lamina after modulation by different harvesting methods %

    由表2 可知,3 種類型煙葉主脈中生物堿含量差異不大??緹熤髅}中生物堿總量以片脈分離采收處理最高,比摘葉采收增加26.25%,另外2 個(gè)處理無顯著差異;曬煙和雪茄煙主脈中生物堿總量以片脈分離采收處理最高,分別比摘葉采收增加69.62%和79.10%,以摘葉采收處理最低。

    表2 不同采收方式調(diào)制后煙葉主脈生物堿含量比較Tab.2 Comparison of alkaloid content of stem after modulation by different harvesting methods %

    2.4 不同采收方式對調(diào)制后煙葉葉片和主脈TSNAs含量的影響

    從表3 可以看出,曬煙和雪茄煙葉片TSNAs 含量高于烤煙;烤煙、曬煙和雪茄煙3種類型煙葉葉片TSNAs 含量均以片脈分離采收處理最低,TSNAs 總量分別比摘葉采收降低26.65%、60.53%和48.48%,三者葉片TSNAs 總量均以帶莖采收處理最高,分別比摘葉采收增加7.87%、40.23%和72.12%。

    表3 不同采收方式調(diào)制后煙葉葉片TSNAs含量比較Tab.3 Comparison of contents of TSNAs in lamina after modulation by different harvesting methods ng/g

    從表4 可以看出,曬煙和雪茄煙主脈TSNAs 總量高于烤煙;烤煙主脈TSNAs 含量以片脈分離采收處理最低,帶莖采收處理最高,片脈分離采收處理的烤煙主脈TSNAs 含量比摘葉采收處理降低42.08%,而曬煙和雪茄煙主脈TSNAs 含量均以摘葉采收處理最低,帶莖采收處理最高,二者分別比摘葉采收增加25.59%和29.80%。

    表4 不同采收方式調(diào)制后煙葉主脈TSNAs含量比較Tab.4 Comparison of contents of TSNAs in stem after modulation by different harvesting methods ng/g

    3 結(jié)論與討論

    生物堿、硝酸鹽、亞硝酸鹽皆是TSNAs 的前體物質(zhì),不同類型煙葉TSNAs 及前體物含量有所差異。眾多研究表明[28-29],雪茄煙中的TSNAs 及前體物硝酸鹽、亞硝酸鹽、生物堿含量均高于烤煙,這與本試驗(yàn)研究結(jié)果相一致。不同類型煙葉葉片和主脈中TSNAs 含量測定結(jié)果表明,烤煙葉片TSNAs 含量高于主脈,而曬煙和雪茄煙葉片TSNAs 含量低于主脈,推測出現(xiàn)這一結(jié)果可能與不同類型煙葉所采用的調(diào)制方式有關(guān),烤煙在烘烤過程中,相對較高溫度下微生物活性弱,變黃時(shí)間短,煙葉失水相對較快,不利于硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,主要是生物堿發(fā)揮作用發(fā)生亞硝化反應(yīng)生成TSNAs,而葉片生物堿含量高于主脈,因此烤煙葉片中TSNAs 含量高于主脈;曬煙和雪茄煙采用曬制和晾制方式進(jìn)行調(diào)制,相對低溫條件有利于微生物活動(dòng),變黃時(shí)間長,葉片失水速度相對較慢,在微生物作用下,硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,進(jìn)而促進(jìn)TSNAs 的生成,加上曬煙和雪茄煙主脈中硝酸鹽和亞硝酸鹽含量均高于葉片,因此二者主脈中TSNAs含量高于葉片。

    不同采收方式調(diào)制后煙葉葉片和主脈TSNAs含量有顯著差異,烤煙葉片和主脈中TSNAs 總量表現(xiàn)為帶莖采收>摘葉采收>片脈分離采收,猜測這與煙草中水分有關(guān),調(diào)制過程中煙葉水分變化與細(xì)胞膜透性及細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)外滲密切相關(guān)[30],在烘烤過程中,帶莖采收的煙株莖稈里的水分向葉片和主脈不斷運(yùn)輸,烘烤時(shí)間延長,煙葉干燥速度慢,且莖稈中生物堿向主脈中轉(zhuǎn)運(yùn),繼而向葉片中轉(zhuǎn)運(yùn),因此葉片生物堿含量以帶莖采收處理最高,促進(jìn)了TSNAs的形成和積累。同理,片脈分離采收的煙葉干燥最快,烘烤及變黃時(shí)間最短,各前體物質(zhì)來不及轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)化較少,葉片和主脈中TSNAs 形成較少。曬煙和雪茄煙葉片TSNAs 含量在采收方式間表現(xiàn)為片脈分離采收<摘葉采收<帶莖采收,這與楊煥文等[22]研究結(jié)果相一致,這可能是因?yàn)槎咴谡{(diào)制過程中,帶莖采收處理的煙株調(diào)制時(shí)間更長,促進(jìn)大量TSNAs 的形成和積累,而片脈分離采收的葉片失水較快,變黃時(shí)間相對較短,TSNAs 的形成相對較少;主脈中TSNAs 含量在采收方式間表現(xiàn)為摘葉采收<片脈分離采收<帶莖采收,這可能是由于莖稈中硝酸鹽含量高于葉片和主脈,莖稈中的硝酸鹽隨著水分遷移向主脈運(yùn)輸,因此主脈中TSNAs 含量以帶莖采收處理最高,而片脈分離采收處理的主脈中硝酸鹽無法向葉片運(yùn)輸,摘葉采收處理主脈中硝酸鹽可向葉片轉(zhuǎn)運(yùn),加上主脈中硝酸鹽含量高于葉片,因此片脈分離采收主脈中TSNAs 含量高于摘葉采收。采用不同采收方式進(jìn)行研究有利于揭示煙葉TSNAs 的形成機(jī)制,但在實(shí)際應(yīng)用中,采收方式的確定還要綜合考慮其對煙葉質(zhì)量的影響。

    近年來關(guān)于帶莖采收對烤煙產(chǎn)質(zhì)量的影響研究較多,前人認(rèn)為[31-34],帶莖烘烤可以降低煙葉酶促褐變反應(yīng),改善上部煙葉烤后品質(zhì),提高經(jīng)濟(jì)效益等。本試驗(yàn)中,相比于摘葉采收,雖然帶莖采收增加了烤煙TSNAs 含量,但增加比例小,為7.87%,遠(yuǎn)低于曬煙和雪茄煙TSNAs 的增加比例,曬煙和雪茄煙增加比例分別為40.23%和72.12%,推測是因?yàn)闀駸熀脱┣褵煹恼{(diào)制時(shí)間較烤煙長,帶莖采收后調(diào)制時(shí)間延長更久,硝酸鹽向亞硝酸鹽的轉(zhuǎn)化更加充分,因此曬煙和雪茄煙帶莖采收后TSNAs 含量增加較多。對于烤煙而言,帶莖烘烤處理的莖稈里儲(chǔ)存的水分具有緩沖作用,使烘烤時(shí)間相應(yīng)延長,TSNAs含量比摘葉采收處理稍有增加,但有利于大分子物質(zhì)的充分轉(zhuǎn)化和香氣物質(zhì)的形成[35]。片脈分離采收處理雖然可降低烤煙葉片TSNAs 及前體物含量,但是由于烘烤過程中葉片與主脈分離,主脈中的水分不能向葉片遷移,會(huì)因葉片失水過快[36],導(dǎo)致內(nèi)含物質(zhì)轉(zhuǎn)化不充分,香氣質(zhì)差,香氣量少,刺激性和雜氣增加,煙葉品質(zhì)急劇下降[37]。因此,在實(shí)際生產(chǎn)中選擇采收方式應(yīng)綜合權(quán)衡其對煙葉質(zhì)量和安全性的影響。

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