龍眼多糖的結構表征及其激活巨噬細胞的作用

張 靜，馮 潮，王勝威，楊瑞麗，李 武,3,*

（1.海南大學食品科學與工程學院，海南 ?？?570228；2.華南農(nóng)業(yè)大學食品學院，廣東 廣州 510642；3.五邑大學生物科技與大健康學院，廣東 江門 529020）

多糖是由10 個以上的單糖通過糖苷鍵連接而成的大分子碳水化合物。作為構成生命體的基本分子之一，多糖廣泛地參與細胞的增殖、分化和信號傳導等生理活動[1]。研究表明，多種天然多糖具有抗凝血[2]、免疫調節(jié)[3]、抗腫瘤[4]、調節(jié)腸道菌群[5]等多種生物活性。

目前對于天然來源的多糖，通常采用水提醇沉的方法獲得粗多糖，采用Sevag法[6]、三氯乙酸[7]或大孔樹脂吸附[8]等方法去除粗多糖的蛋白和色素等雜質，并進一步采用離子層析和分子篩純化獲得組分較為均一的多糖[9-10]。一些天然來源的多糖，可以通過分級醇沉的方法分離獲得純度較高的多糖。Wang Lei等[11]采用30%、50%和80%分級醇沉的方法，從刺梨中分離到不同分子質量的多糖組分；Feng Lei等[12]采用分級醇沉的方法從決明子中分離到分子質量為9.56×105Da和0.94×105Da的兩個均一多糖組分。

研究顯示，多糖的生物活性與其糖基的組成、連接方式等結構密切相關。Yang Xiaolong等[13]從生姜中分離出一種以(1,4)-α-D-葡萄糖（glucose，Glc）為主鏈的低分子質量多糖，其具有促進巨噬細胞增殖，誘導NO、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）-α、白細胞介素（interleukin，IL）-1β和IL-6分泌的作用。Zhou Shiyang等[14]從山藥中分離出一種由(1,4)-α-D-Glcp組成的摩爾質量為7.28×104g/mol的多糖，其具有清除羥自由基的活性。同時研究顯示，相同來源的植物中可能存在多種結構的活性多糖。Yang Yu等[15]分離到一種以→6)-β-半乳糖（galactose，Gal）(1→為主鏈的枸杞多糖，其C3具有α-阿拉伯糖（arabinose，Ara）、β-Galp和α-鼠李糖（rhamnose，Rha）分支，這種枸杞多糖具有調節(jié)腸道菌群、降低高脂誘導的小鼠脂肪堆積的作用。Wu Jiaxin等[16]分離出一種以1,3-β-Galp為主鏈的枸杞多糖，其C6具有(1,5)-α-Araf、(1,6)-β-Galp、(1,3)-α-Araf、(1,4)-α-Araf分支，這種多糖顯示出神經(jīng)保護的作用。從前期多糖的報道可以發(fā)現(xiàn)，不同或相同來源的植物多糖，其結構和活性呈現(xiàn)多樣性的特點。但是，由于天然來源多糖的分子質量較大、組成復雜，結構分析較困難。目前，天然多糖的結構解析仍然是限制多糖研究應用的瓶頸。

龍眼是我國南方特色水果，干制龍眼（桂圓）為《中華人民共和國藥典》收錄的一味中藥，具有養(yǎng)血安神、補益心脾、益智健腦等功效[17-18]。藥理學研究表明，龍眼多糖具有免疫調節(jié)[19]、抗腫瘤[20]等生物活性。研究人員前期已從龍眼果肉中分離到幾種活性多糖。Gan Tingsheng等[9]從新鮮龍眼中分離出1 種由(1→6)-α-D-Glcp組成的多糖；并從干制龍眼中分離出1 種由(1→6)-α-D-Glcp、(1→3)-β-D-Glcp、(1→3)-β-DGalp及(1→3)-α-L-Rhap組成的多糖，上述兩種多糖均具有促進脾淋巴細胞增殖和巨噬細胞NO、IL-1β和IL-6分泌的作用。Bai Yajuan等[21]報道了1 種以(1→3,4)-α-Rhap、(1→4)-β-Galp、(1→6)-β-Galp和(1→3,6)-β-Galp為主鏈的龍眼多糖，其具有抑制脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導的提升巨噬細胞TNF-α、IL-6、NO和前列腺素E2分泌的作用。Rong Yu等[19]純化獲得了1 種以(1→4)-β-Glc和(1→6)-β-甘露糖（mannose，Man）為主鏈的具有免疫調節(jié)活性的龍眼多糖。綜合前期龍眼多糖的文獻可知，龍眼中存在多種結構的活性多糖。對不同龍眼多糖的結構與活性的研究可以為明確龍眼的主要活性物質基礎與龍眼的精深加工提供依據(jù)。本實驗通過分級醇沉的方法從龍眼果肉中純化獲得1 種活性多糖組分（記為LP），并對其結構進行表征，同時分析其激活巨噬細胞的作用，旨在為龍眼的高值化開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

‘儲良’龍眼2020年7月采摘自廣東省高州市龍眼種植基地，去皮去核，熱風干燥至水分質量分數(shù)為12%，-20 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

小鼠單核巨噬細胞RAW264.7購自中國科學院細胞庫。

D301R大孔交換樹脂 天津興南允能高分子技術有限公司；重蒸酚 北京索萊寶公司；3,5-二硝基水楊酸美國默克公司；無水乙醇、硫酸、鹽酸、氫氧化鈉、牛血清白蛋白 中國醫(yī)藥集團有限公司；二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白濃度測定試劑盒上海碧云天生物技術公司；小鼠TNF-α、IL-6、IL-1β酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑盒 美國R&D公司。

1.2 儀器與設備

細胞計數(shù)器 美國BIO-RAD有限公司；CR22N高速冷凍離心機 日本日立公司；LGJ-10真空冷凍干燥機北京松源華興科技公司；Frontier傅里葉變換紅外光譜儀美國珀金埃爾默有限公司；1260高效液相色譜 美國安捷倫科技公司；BI-MwA多角度激光光散射儀 美國布魯克海文儀器公司；AV-600 MHz核磁共振儀 瑞士Bruker公司；紫外-可見分光光度計 美國PE公司；311型二氧化碳培養(yǎng)箱 賽默飛世爾科技（中國）有限公司；CytoFLEX LX型流式細胞儀 美國Beckman Coulter公司。

1.3 方法

1.3.1 龍眼多糖LP的提取

依照文獻[22]提取龍眼多糖LP：100 g龍眼干加入體積分數(shù)85%乙醇溶液浸泡48 h后，通風陰干。浸泡后的龍眼果肉打漿，按照料液比為1∶20（g/mL）加入蒸餾水，80 ℃水浴攪拌提取2 h。提取液經(jīng)9 000 r/min離心15 min，收集上清液。取沉淀采用上述方法復提2 次，合并3 次提取液，55 ℃減壓蒸發(fā)濃縮至原體積的1/10。按料液比0.61∶1（m/V）向濃縮后的多糖溶液中加入D301R大孔樹脂，48 ℃吸附2 h，除去色素和蛋白。使用紗布過濾除去大孔樹脂及殘渣。待提取液冷卻至室溫，加入無水乙醇至乙醇終體積分數(shù)為20%，然后4 ℃沉淀10 h，10 000 r/min離心15 min，收集上清液。在上清液中加入無水乙醇至乙醇終體積分數(shù)為33.3%，4 ℃沉淀10 h，10 000 r/min離心15 min，收集沉淀。隨后加入適量蒸餾水重懸沉淀，55 ℃減壓蒸發(fā)除去乙醇。濃縮液經(jīng)透析、凍干后得到龍眼多糖樣品LP，稱質量并按下式計算龍眼多糖LP得率。

1.3.2 龍眼多糖LP中總糖、糖醛酸、蛋白質量分數(shù)測定

采用苯酚-硫酸法[23]測定樣品中的總糖質量分數(shù)。取1 mL 0.1 mg/mL龍眼多糖LP溶液于玻璃試管中加入質量分數(shù)6%苯酚水溶液1 mL，混勻后加入5 mL質量分數(shù)98%濃硫酸，靜置30 min，測定490 nm波長處吸光度，根據(jù)SN/T 4260—2015《出口植物源食品中粗多糖的測定 苯酚-硫酸法》計算總糖質量分數(shù)。

采用咔唑-硫酸法[24]測定樣品中的糖醛酸質量分數(shù)。取1 mL10 mg/mL龍眼多糖LP溶液于玻璃試管中加入0.25 mL咔唑-乙醇溶液，充分混勻后加入5 mL濃硫酸，85 ℃水浴10 min，測定525 nm波長處吸光度。

采用BCA蛋白濃度試劑盒測定樣品中的蛋白質量分數(shù)。

1.3.3 龍眼多糖LP的紫外-可見光譜分析

取1 mg/mL龍眼多糖LP溶液，使用紫外-可見光分光度計分析，掃描范圍190～800 nm，記錄光譜圖。

1.3.4 龍眼多糖LP分子質量的測定

取3 mg多糖樣品溶于1 mL、0.1 mol/L的硝酸鈉溶液中，55 ℃水浴超聲20 min，過0.45 μm微孔濾膜備用。凝膠滲透色譜激光光散射（gel permeation chromatography with laser light scattering，GPC-LLS）條件：流動相為0.1 mol/L的硝酸鈉溶液，色譜柱為Ultrahydrogel 1000柱（7.8 mm×300 mm，12 μm）串聯(lián)Ultrahydrogel 2000柱（7.8 mm×300 mm，12 μm），激光光散射及示差檢測器，柱溫50 ℃，流速0.6 mL/min，進樣量為100 μL。采用BIC ParSEC軟件分析數(shù)據(jù)并計算數(shù)均分子質量（mn）、重均分子質量（mw）、峰值分子質量（mp）、Z均分子質量（mz）以及分散系數(shù)（mw/mn）。

1.3.5 龍眼多糖LP中單糖組成分析

取10 mg龍眼多糖LP樣品于鉗口瓶中，加入5 mL 2 mol/L三氟乙酸，氮氣封瓶，100 ℃水解2 h；冷卻至室溫，取1 mL混合液加入1 mL無水甲醇，采用氮氣吹干后再加入1 mL甲醇復溶，氮氣吹干，重復兩次，以除去三氟乙酸。干燥樣品加入1 mL 0.3 mol/L NaOH溶液充分溶解制得龍眼多糖LP水解液。

衍生化處理：取400 μL龍眼多糖LP水解液加入等體積1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮甲醇溶液，渦旋混勻，70 ℃水浴2 h，冷卻至室溫。樣品加入400 μL 0.3 mol/L HCl溶液然后加入1 200 μL蒸餾水，再加入等體積的氯仿充分混勻后靜置，棄去氯仿，重復上述操作萃取2 次。萃取后樣品進行高效液相色譜分析：色譜柱C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相A為90 mmol/L磷酸鈉緩沖液（pH 7.8）；流動相B為色譜純乙腈；柱溫30 ℃；流速1 mL/min；進樣量10 μL；檢測器為二極管陣列檢測器。

1.3.6 龍眼多糖LP的傅里葉變換紅外光譜分析

將龍眼多糖LP樣品粉末及KBr在60 ℃烘干至恒質量。采用KBr壓片法將樣品制成透明均勻壓片，掃描范圍400～4 000 cm-1，記錄紅外光譜圖。

1.3.7 龍眼多糖LP的核磁共振波譜分析

將70 mg龍眼多糖LP樣品溶解于700 μL重水中，采用AV-600MHz核磁共振儀測定記錄1H、13C波譜以及異核單量子相干譜（heteronuclear single quantum coherence，HSQC）、1H異核多碳相關譜（1H detected heteronuclear multiple bond correlation，HMBC）和同核氫-氫相關譜（homonuclear1H-1H correlation spectroscopy，1H-1H COSY）。

1.3.8 巨噬細胞吞噬能力測定

將對數(shù)生長期的巨噬細胞以2×105個/mL接種至24 孔板中，每孔1 mL。37 ℃、5% CO2培養(yǎng)24 h；吸棄上清液，分別加1 mL含不同終質量濃度（50、100、200 μg/mL）LP的完全培養(yǎng)基（含體積分數(shù)10%胎牛血清的Dulbecco’s改良Eagle培養(yǎng)基（Dulbecco’s modified Eagle medium，DMEM）），LPS組和空白對照組分別加入1 mL含5 μg/mL LPS的完全培養(yǎng)基和完全培養(yǎng)基，每組3 個復孔，刺激培養(yǎng)24 h；吸棄上清液，各孔分別加入1 mL含異硫氰酸熒光素酯（fluorescein 5-isothiocyanate，F(xiàn)ITC）熒光微球的完全培養(yǎng)基（熒光微球與完全培養(yǎng)基按照1∶10 000的體積混合均勻，37 ℃培養(yǎng)箱孵育30 min，超聲5 min），37 ℃、5% CO2避光培養(yǎng)6 h，用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）（0.01 mol/L、pH 7.2）清洗2 次，去除未被吞噬的熒光微球；加入500 μL PBS重懸細胞，采用流式細胞儀分析，以具有熒光信號的細胞數(shù)占總細胞數(shù)的比例表征巨噬細胞吞噬率。

1.3.9 TNF-α、IL-6和IL-1β分泌量的測定

巨噬細胞以2×105個/mL接種至24 孔板中，每孔1 mL，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)24 h，吸去培養(yǎng)基，樣品組加入1 mL含不同終質量濃度（50、100、200 μg/mL）LP的完全培養(yǎng)基，LPS組和空白對照組分別加入1 mL含5 μg/mL LPS的完全培養(yǎng)基和完全培養(yǎng)基，37 ℃孵育48 h，每組設置3 個復孔，隨后1 000 r/min離心5 min，收集上清液并在-20 ℃下保存。根據(jù)相應酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑盒說明書分別測定細胞培養(yǎng)液中TNF-α、IL-1β和IL-6細胞因子的質量濃度。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

每組數(shù)據(jù)重測定復3 次，結果以平均值±標準差表示，采用SPSS Statistics 25軟件進行單因素方差分析，采用Duncan檢驗進行顯著性分析，P＜0.05表明具有顯著性差異，采用Origin 2019軟件作圖。

2 結果與分析

2.1 龍眼多糖LP的組成及其紫外-可見光譜

采用分級醇沉的方法對龍眼粗多糖進行分離純化，最終獲得0.8 g多糖組分LP，得率為0.8%。如表1所示，LP中總糖、糖醛酸、蛋白質量分數(shù)分別為（96.85±0.61）%、（0.14±0.01）%、（0.53±0.23）%。如圖1所示，LP在260 nm和280 nm處無明顯的吸收峰，表明其蛋白和核酸含量較低。以往研究中龍眼多糖多采用離子層析和分子篩的方法分離純化[10-12]，本研究采用分級醇沉的方法獲得純度較高的龍眼多糖LP，且本研究中龍眼多糖提取方法簡便、快速，易于進一步工業(yè)化應用。

表1 龍眼多糖LP的組成Table 1 Chemical compositions of LP

圖1 龍眼多糖 LP的紫外-可見光譜Fig.1 Ultraviolet-visible absorption spectrum of LP

2.2 龍眼多糖LP的分子質量

如圖2所示，龍眼多糖LP的激光光散射及示差檢測器信號均呈現(xiàn)為單一的對稱峰（示差檢測器在洗脫體積22.5 mL附近的信號峰為流動相），表明LP均一性較好。如表2所示，LP的mn、mw、mp、mz分別為8.25×105、8.42×105、7.67×105、8.63×105Da，分散系數(shù)為1.21，分散系數(shù)約接近1，表明LP的均一性較高。多糖的生物活性與其分子質量有著緊密的聯(lián)系。對于相同來源的多糖，高分子質量多糖通常比其低分子質量多糖顯示出較強的免疫調節(jié)活性[19,25]。與前期報道的龍眼多糖分子質量（104～107Da）相比[26]，本研究中LP分子質量中等。龍眼多糖分子質量的差異可能與分離純化方法不同有關。

圖2 龍眼多糖LP的GPC-LLS結果Fig.2 GPC-LLS chromatogram of LP

表2 龍眼多糖LP的分子質量參數(shù)Table 2 Molecular mass parameters of LP

2.3 龍眼多糖LP的單糖組成

如圖3所示，龍眼多糖LP主要由甘露糖醛酸（7.97 min（保留時間，后同））、Man（8.79 min）、Rha（10.54 min）、Glc（17.12 min）、Gal（19.08 min）和Ara（19.82 min）組成，相應物質的量分數(shù)比為0.09%∶0.35%∶0.12%∶98.70%∶0.57%∶0.20%組成。其中Glc為構成LP的主要單糖組分。

圖3 龍眼多糖LP的單糖組成高效液相色譜圖Fig.3 Chromatogram of the monosaccharide composition of LP

2.4 龍眼多糖LP的傅里葉變換紅外光譜分析結果

如圖4所示，龍眼多糖LP的紅外光譜圖中3 412 cm-1處特征吸收為O-H的伸縮振動引起；2 924 cm-1處特征吸收為C-H的伸縮振動引起[27]。1 635 cm-1處附近有較強的吸收峰，表明龍眼多糖LP可能含有糖醛酸[28]；1 423 cm-1處特征吸收是C-H的變形振動引起；1 156、1 105 cm-1和1 014 cm-1處出現(xiàn)的連續(xù)峰為吡喃環(huán)中C-O-C的吸收振動引起，表明龍眼多糖LP中可能存在α型吡喃環(huán)[29]；916 cm-1附近的吸收峰表明LP可能含有α-D-葡聚糖[30]；762 cm-1處的吸收峰可能與吡喃糖對稱環(huán)的伸縮振動有關[31]。

圖4 龍眼多糖LP的傅里葉變換紅外光譜Fig.4 Fourier transform infrared spectrum of LP

2.5 龍眼多糖LP的核磁共振波譜分析結果

龍眼多糖LP的核磁共振波譜分析結果如圖5所示。在異頭質子區(qū)域（δ4.4～5.5）中存在2 個信號峰，分別為δ5.27和δ4.92（圖5A）。由圖5B可知，存在δ99.28和δ97.68兩個異頭碳信號峰，結合二維1H-13C HSQC光譜的交叉峰位置（圖5D），將異頭氫信號/異頭碳信號（H1/C1）的交叉峰歸屬為δ4.92/97.68和δ5.27/99.28，分別標記為殘基A和B。

圖5 龍眼多糖LP的一維和二維核磁共振波譜圖Fig.5 One- and two-dimensional NMR spectra of LP

殘基A、B中H、C的化學位移歸屬如表3所示。殘基A的異頭質子為δ4.92，表明其為α-構型的糖苷鍵[32]；殘基A上的其他質子信號（H2～H6）依據(jù)1H-1H COSY譜圖（圖5C）顯示的交叉峰進行歸類，分別對應為δ3.52（H2）、3.66（H3）、3.46（H4）、3.86（H5）、3.93（H6）；依據(jù)二維譜1H-13C HSQC顯示的交叉峰，確定C2～C6的碳譜信號峰，分別歸屬為H2/C2（δ3.52/71.73）、H3/C3（δ3.66/73.38）、H4/C4（δ3.46/69.50）、H5/C5（δ3.86/70.15）及H6/C6（δ3.93/65.51）。未被取代的C6化學位移一般在60左右[33]。單糖殘基A中C6的出峰位移為65.51，與未被取代的C6化學位移相比，C6處的化學位移向低磁場發(fā)生了位移，表明單糖殘基A的C6處有被取代[34-35]。結合LP的單糖組成與相關文獻[36]，推斷殘基A為6)-α-D-Glcp-(1。類似的，依據(jù)殘基B的H和C的化學位移及相關文獻[37]，推斷殘基B為4)-α-D-Glcp-(1。

表3 龍眼多糖LP的1H和13C核磁共振波譜圖中的化學位移Table 3 Chemical shifts in 1H and 13C NMR spectra of LP

如圖5D所示，LP殘基A中C1與其H6信號峰相互耦合，表明殘基A中C1連接在其C6位，殘基A中C1（δ97.68）和H6（δ3.93）具有相關的信號峰（AC1/AH4），表明殘基A（→6)-α-D-Glcp-(1→）是以α-1,6-糖苷鍵自相連接。殘基A中C1與殘基B中H4信號峰相互耦合，表明殘基A的C1連接在殘基B的O4位。結合對殘基A、B中H、C化學位移歸屬，推測龍眼多糖LP的主糖鏈由殘基6)-α-D-Glcp-(1和4)-α-D-Glcp-(1鏈接組成，其結構如圖6所示。

本研究中由6)-α-D-Glcp-(1和4)-α-D-Glcp-(1為主鏈的龍眼多糖LP與前期報道的龍眼多糖結構存在差異[21]。多糖提取、純化方法或加工（如干燥等）方式的不同可能會引起龍眼多糖結構及其生物活性的變化[9,38]。研究表明，以6)-α-D-Glcp-(1為主鏈的天然活性多糖在微生物中分布較為廣泛[39-40]。同時研究者從一些果蔬和中草藥中也分離到一些以(1→6)-α-D-Glcp為主鏈的活性多糖，如Zhao Guohua等[41]從番薯中分離到1 種分子質量為53.2 kDa的(1,6)-α-D-葡聚糖，其具有促進淋巴細胞和自然殺傷細胞增殖，促進小鼠分泌免疫球蛋白G的作用。Sun Lin等[42]從人參中分離到1 種分子質量為17 kDa的(1,6)-α-D-葡聚糖，具有促進淋巴細胞增殖的作用。前期報道表明，具有6)-α-D-Glcp-(1結構的龍眼多糖表現(xiàn)出促進脾淋巴細胞增殖和巨噬細胞NO、IL-1β與IL-6分泌的作用[9]。關于6)-α-D-Glcp-(1結構與龍眼多糖免疫調節(jié)活性的聯(lián)系，還有待進一步研究。

2.6 龍眼多糖LP對巨噬細胞吞噬能力的影響

龍眼多糖LP對巨噬細胞吞噬能力的影響如圖7、8所示，質量濃度為50、100、200 μg/mL的LP具有促進巨噬細胞吞噬的作用，并呈現(xiàn)一定的劑量效應關系，其吞噬率分別為（15.01±0.43）%、（16.56±1.06）%和（20.88±0.71）%，分別是空白對照組的1.41、1.56、1.96 倍。

圖7 龍眼多糖LP對RAW264.7細胞吞噬能力的影響Fig.7 Effect of LP on the phagocytic capacity of RAW264.7 cells

圖8 龍眼多糖LP對RAW264.7細胞吞噬率的影響Fig.8 Effect of LP on the phagocytosis rate of RAW264.7 cells

2.7 龍眼多糖LP對巨噬細胞TNF-α、IL-1β和IL-6分泌的影響

如圖9所示，質量濃度50、100、200 μg/mL的LP誘導巨噬細胞TNF-α分泌量分別為（5 567.46±24.46）、（6 269.84±47.95）pg/mL和（5 908.73±34.13）pg/mL，分別為空白對照組的2.24、2.52、2.38 倍；誘導巨噬細胞IL-1β分泌量分別為（19.28±0.85）、（33.31±2.19）pg/mL和（50.81±3.22）pg/mL，分別為空白對照組的3.99、6.89、10.51倍；誘導巨噬細胞IL-6分泌量分別為（884.88±43.12）、（2 049.10±108.02）pg/mL和（2 510.08±31.26）pg/mL，分別為空白對照組的3.76、8.71、10.67 倍。以上結果表明，質量濃度50、100、200 μg/mL的LP具有促進巨噬細胞TNF-α、IL-1β和IL-6分泌的作用。

圖9 龍眼多糖LP對RAW264.7細胞TNF-α（A）、IL-1β（B）和IL-6（C）分泌的影響Fig.9 Effect of LP on TNF-α (A), IL-1β (B) and IL-6 (C) secretion in RAW264.7 cells

巨噬細胞是非特異性免疫和特異性免疫應答的重要參與者，在多糖的免疫調節(jié)活性中起著重要的作用[43-44]。研究發(fā)現(xiàn)，一些天然來源的植物多糖通過細胞表面受體介導，激活核因子（nuclear factor，NF）-κB和絲裂原活化蛋白激酶（mitogenactivated protein kinase，MAPK）信號通路，誘導巨噬細胞吞噬及其NO、TNF-α、IL-1β和IL-6細胞因子分泌[45]。如荊芥多糖通過MAPK通路介導激活巨噬細胞，誘導其IL-6、IL-10和TNF-α的分泌[46]。白術多糖通過NF-κB信號通路激活巨噬細胞，促進其TNF-α和IL-6分泌[47]。前期研究報道的幾種龍眼多糖也顯示出具有誘導巨噬細胞吞噬[10,19]，促進其IL-6[9]、TNF-α[21]和IL-1β[8]分泌的作用。本研究表明，龍眼多糖LP具有顯著促進巨噬細胞吞噬，誘導其TNF-α、IL-1β和IL-6分泌的作用。不同結構龍眼多糖激活巨噬細胞的作用與機制存在差異[8,19]，關于龍眼多糖LP激活巨噬細胞的作用機制還有待進一步研究。

3 結 論

本實驗采用分級醇沉的方法純化獲得均一性較好的龍眼多糖組分LP。LP由Glc、Gal、Man、甘露糖醛酸、Ara和Rha以相對物質的量分數(shù)比為98.70%∶0.57%∶0.35%∶0.09%∶0.20%∶0.12%組成的重均分子質量為8.42×105Da的雜多糖，其主鏈結構為6)-α-Glcp-(1→6)-α-Glcp-(14)-α-Glcp-(-1。LP具有促進巨噬細胞的吞噬，誘導其TNF-α、IL-1β和IL-6分泌的作用。不同結構龍眼多糖及其生物活性分析，可以為龍眼的開發(fā)利用提供理論基礎。