白菜中農(nóng)藥殘留量測(cè)定能力驗(yàn)證探討

鄒華嬌，黃承遠(yuǎn)，李 瀅，王家琪，鄭 鵬，黃 波，嚴(yán)為亮

(福建省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心，福建 福州 350003)

能力驗(yàn)證是指利用實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)，按照預(yù)先制定的準(zhǔn)則評(píng)價(jià)參加者的能力。其作為評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力、促進(jìn)檢測(cè)結(jié)果互認(rèn)共享的技術(shù)措施和有效途徑，受到世界各國(guó)政府以及國(guó)際組織的廣泛認(rèn)可，也是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的重要手段之一[1-2]。為評(píng)價(jià)我省獲得福建省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)機(jī)構(gòu)考核合格證書(shū)(CATL)的農(nóng)業(yè)農(nóng)村系統(tǒng)檢測(cè)機(jī)構(gòu)及第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)的農(nóng)藥殘留檢測(cè)能力，持續(xù)強(qiáng)化農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)機(jī)構(gòu)能力建設(shè)，不斷提升檢檢驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)水平，充分發(fā)揮能力驗(yàn)證對(duì)省級(jí)質(zhì)檢機(jī)構(gòu)質(zhì)量體系運(yùn)行和檢驗(yàn)檢測(cè)工作質(zhì)量控制的重要參考作用，根據(jù)《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測(cè)管理辦法》和《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)機(jī)構(gòu)考核辦法》和《農(nóng)業(yè)部產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試機(jī)構(gòu)管理辦法》等規(guī)定，2022年我廳對(duì)84家檢測(cè)機(jī)構(gòu)開(kāi)展白菜中毒死蜱等6種農(nóng)藥殘留檢測(cè)能力測(cè)試，并對(duì)測(cè)試結(jié)果進(jìn)行討論分析。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 毒死蜱、水胺硫磷、氯氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯等6種國(guó)家農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1 000mg/L；環(huán)氧七氯B內(nèi)標(biāo)：100μg/mL ；乙腈、乙酸乙酯、甲醇：色譜純；甲酸、甲酸銨：分析純；無(wú)水硫酸鎂、氯化鈉、檸檬酸鈉、檸檬酸氫二鈉、檸檬酸鈉二水合物、檸檬酸二鈉鹽倍半水合物：分析純；乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠(PSA)、石墨化炭黑(GCB)；陶瓷均質(zhì)子：2cm(長(zhǎng))×1cm(外徑)；微孔濾膜(有機(jī)相)：13mm×0.22μm。

1.2 儀器與設(shè)備 Waters Acquity Uplc Xevo TQ-XS液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀；TRACE1300-ISQ9000氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀；EX125ZH電子天平；TD5M離心機(jī)；HSC-B氮吹；R30直立剁碎機(jī)；MS 3 basis渦旋混合器。

1.3 樣品制備 能力驗(yàn)證樣品采用添加方式進(jìn)行制備。根據(jù)6種農(nóng)藥擬考核濃度水平、參加者數(shù)量和考核樣品量等進(jìn)行樣品制備。采摘田間不施藥的樣品，在實(shí)驗(yàn)室將樣品粉碎均勻，在粉碎均勻的樣品中添加6種農(nóng)藥考核濃度，然后進(jìn)行二次粉碎攪拌均勻，制備成能力驗(yàn)證樣品，置于-40℃條件下保存。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 能力驗(yàn)證樣品中4種農(nóng)藥殘留量的測(cè)定 樣品前處理：采用GB 23200.113-2018方法中QuEChERS 方法對(duì)白菜樣品中毒死蜱、水胺硫磷、氯氰菊酯、聯(lián)苯菊酯4種農(nóng)藥殘留量進(jìn)行提取和凈化[2]。稱取10g試樣(精確至0.01g)于50mL塑料離心管中，加入10mL乙腈放入勻漿機(jī)中，在勻漿機(jī)中高速勻漿2min，加入4g無(wú)水硫酸鎂、4g氯化鈉、1g檸檬酸鈉、0.5g檸檬酸氫二鈉，蓋上離心管，放入離心機(jī)4 200r/min離心5min。吸取6mL上清液加到15mL離心管中(內(nèi)含885mg無(wú)水硫酸鎂、150mgPSA及15mgGCB)，渦旋混勻1min，4 200r/min離心5min，精確吸取2mL上清液于10mL試管中，40℃水浴中氮?dú)獯抵两?。加?0μL的內(nèi)標(biāo)溶液，加入1mL乙酸乙酯復(fù)溶，渦漩均勻過(guò)0.22um微孔濾膜，濾液供氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。

氣相色譜條件：色譜柱為HP-5MS(30m×0.25mm×0.25um)，彈性石英毛細(xì)管柱；載氣為氦氣(純度≥99.999%)；載氣流速為1.0mL/min ；碰撞氣為氬氣(純度≥99.999%)；總壓>2MPa，氦氣壓力為0.4～0.6MPa，氬氣氣壓應(yīng)為0.4MPa；進(jìn)樣口溫度為280℃；樣方式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：1μL。柱溫箱升溫程序(表1)。

表1 柱溫箱升溫程序

1.4.2 能力驗(yàn)證樣品中2種農(nóng)藥殘留量的測(cè)定 樣品前處理：采用GB 23200.121-2021方法中QuEChERS 方法對(duì)白菜樣品中苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯2種農(nóng)藥殘留量進(jìn)行提取和凈化[3]。稱取10g試樣(精確至0.01g)于50mL塑料離心管中，加入10mL乙腈放入勻漿機(jī)中，在勻漿機(jī)中高速勻漿2min，加入4g無(wú)水硫酸鎂、4g氯化鈉、1g檸檬酸鈉二水合物、0.5g檸檬酸二鈉鹽倍半水合物，蓋上離心管蓋，放入離心機(jī)4 200r/min離心5min。定量吸取5mL上清液至內(nèi)含除水劑和凈化材料的塑料離心管中(750mg無(wú)水硫酸鎂、125mgPSA、12.5mgGCB)，渦旋混勻1min。4 200r/min離5min，吸取1mL上清液過(guò)0.22um微孔濾膜，濾液供液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。

液相色譜條件：色譜柱：C18(2.1×酸銨-甲酸水 100mm,1.8μm,100?)；流速：0.3mL/min;柱溫：40℃;進(jìn)樣量：2μL；流動(dòng)相A 相為2mmol/L甲溶液，流動(dòng)相B 相為2mmol/L甲酸銨-甲酸甲醇溶液;流動(dòng)相梯度洗脫程序(表2)。

表2 梯度洗脫條件

質(zhì)譜條件：電子噴霧離子源ESI+；掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；電噴霧電壓：正源5500V；離子源溫度：350℃；霧化氣：50psi；輔助加熱氣：50psi；氣簾氣：35psi；2種農(nóng)藥的質(zhì)譜參數(shù)(表3)。

表3 2種農(nóng)藥的質(zhì)譜參數(shù)

1.4.3 能力驗(yàn)證樣品的均勻性和穩(wěn)定性檢驗(yàn) 按照CNAS-GL003：2018《能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南》中規(guī)定的方法對(duì)能力驗(yàn)證樣品進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)[4]。從制備的能力驗(yàn)證樣品中隨機(jī)抽取15個(gè)樣品按照上文中確定的檢測(cè)方法，每個(gè)樣品在重復(fù)性條件下測(cè)定3次，采用CNAS-GL003：2018中“4.2單因子方差分析”對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，判斷能力驗(yàn)證樣品的均勻性。

按照CNAS-GL003：2018《能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南》中規(guī)定的方法對(duì)能力驗(yàn)證樣品進(jìn)行穩(wěn)定性檢驗(yàn)[4]。能力驗(yàn)證樣品的穩(wěn)定性檢驗(yàn)需要考慮兩方面情況： 一是在實(shí)驗(yàn)室適當(dāng)保存條件下的長(zhǎng)期穩(wěn)定性檢驗(yàn)， 二是樣品寄送運(yùn)輸條件下的短期穩(wěn)定性檢驗(yàn)。為減少穩(wěn)定性評(píng)估各時(shí)間點(diǎn)測(cè)量結(jié)果的離散性，引入更小的不確定度，采用同步穩(wěn)定性評(píng)估方法，將制備的能力驗(yàn)證樣品統(tǒng)一保存在-40℃低溫條件下，按照穩(wěn)定性評(píng)估先疏后密原則確定時(shí)間間隔，定期取樣，在重復(fù)性條件下一次性測(cè)定。采用CNAS-GL003：2018中“5.2t檢驗(yàn)法”對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，判斷能力驗(yàn)證樣品的穩(wěn)定性。 準(zhǔn)備5份-40℃ 條件下保存的能力驗(yàn)證樣品，分別于第 0、3、5、7和 9d 各取出1份放置于-18℃條件下，每份樣品按照文中相應(yīng)參數(shù)檢測(cè)方法，每個(gè)樣品在重復(fù)條件下測(cè)定6次，用于評(píng)估長(zhǎng)期穩(wěn)定性。準(zhǔn)備5份能力驗(yàn)證樣品，按照寄樣要求(樣品加冰袋放置于外套塑料袋的泡沫箱中)包裝，放置于-40℃條件下保存。分別于第0、1、2、3d各取出1份放置于25℃恒溫箱中，模擬樣品寄送過(guò)程環(huán)境條件，并于第7d取出全部5份樣品，每份樣品按照文中相應(yīng)參數(shù)檢測(cè)方法，每個(gè)樣品在重復(fù)條件下測(cè)定6次，用于評(píng)估短期穩(wěn)定性。對(duì)測(cè)定結(jié)果按照公式(1)進(jìn)t檢驗(yàn)。

(1)

公式(1)中：x1和x2為不同時(shí)間檢驗(yàn)測(cè)量數(shù)據(jù)的平均值；S1和S2為對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)檢驗(yàn)測(cè)量數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)偏差；n1和n2為對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)檢驗(yàn)測(cè)量的測(cè)量次數(shù)。

1.5 能力驗(yàn)證結(jié)果評(píng)定方法 根據(jù) CNAS-GL002：2018《能力驗(yàn)證結(jié)果的統(tǒng)計(jì)處理和能力評(píng)價(jià)指南》要求，本次能力驗(yàn)證采用穩(wěn)健統(tǒng)計(jì)方法計(jì)算各參加檢測(cè)機(jī)構(gòu)的Z比分?jǐn)?shù),以穩(wěn)健統(tǒng)計(jì)的檢測(cè)機(jī)構(gòu)檢測(cè)結(jié)果中位值作為指定值(X)，標(biāo)準(zhǔn)化四分位距(NIQR)為能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)差[5]。計(jì)算方法見(jiàn)公式(2)和公式(3)。

NIQR=0.7413×(Q3-Q1)

(2)

Z=|Xi-X|NIQR

(3)

公式(2)和(3)中，xi為第i個(gè)檢測(cè)機(jī)構(gòu)的檢測(cè)結(jié)果；Q1為下四分位數(shù)；Q3為上四分位數(shù)。

若檢測(cè)結(jié)果的Z比分?jǐn)?shù)均滿足|Z|≤2，則判定該檢測(cè)結(jié)果為滿意；若2<|Z|<3，則判定該檢測(cè)結(jié)果存在問(wèn)題；若|Z|>3,則判定該檢測(cè)結(jié)果不滿意。

2 結(jié)果與分析

2.1 能力驗(yàn)證樣品的均勻性檢驗(yàn)結(jié)果 均勻性檢驗(yàn)結(jié)果(表4)。其中，均勻性樣品間自由度為14，樣品內(nèi)自由度為30，F(xiàn)0.05(14,30)=2.31，由表4中數(shù)據(jù)可知，統(tǒng)計(jì)量F值均

表4 均勻性性檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果

2.2 能力驗(yàn)證樣品的穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 長(zhǎng)期穩(wěn)定性 長(zhǎng)期穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果(表5)。長(zhǎng)期穩(wěn)定性樣品的自由度為5，置信水平為0.95，t(0.05,10)=2.23。由表5中數(shù)據(jù)可知，統(tǒng)計(jì)量tmax值均

表5 長(zhǎng)期穩(wěn)定性檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果

2.2.2 短期穩(wěn)定性 短期穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果(表6)。短期穩(wěn)定性樣品的自由度為5，置信水平為0.95，t(0.05,10)=2.23。由表6中數(shù)據(jù)可知，統(tǒng)計(jì)量tmax值均

表6 短期穩(wěn)定性檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果

2.3 能力驗(yàn)證結(jié)果

2.3.1 參加檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)情況 本次能力驗(yàn)證共有84家通過(guò)省級(jí)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)報(bào)名參加，分布在全省9個(gè)地市。其中農(nóng)業(yè)農(nóng)村系統(tǒng)檢測(cè)機(jī)構(gòu)53家，占比63.1%；檢測(cè)公司和科研單位檢測(cè)機(jī)構(gòu)31家，占比36.9%。參加能力驗(yàn)證的機(jī)測(cè)機(jī)構(gòu)類型較多、層次分散，能夠在一定程度上反映本次能力驗(yàn)證項(xiàng)目的真實(shí)執(zhí)行水平，有助于檢測(cè)機(jī)構(gòu)提升檢測(cè)技術(shù)水平。

2.3.2 能力驗(yàn)證結(jié)果 84家檢測(cè)機(jī)構(gòu)參加白菜中農(nóng)藥殘留能力驗(yàn)證，經(jīng)過(guò)初檢和補(bǔ)檢，驗(yàn)證結(jié)果合格的檢測(cè)機(jī)構(gòu)79家，合格率94.05%；不合格5家，不合格率5.95%。對(duì)84家參加能力驗(yàn)證樣品考核的檢測(cè)機(jī)構(gòu)的267項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)(表7)，以檢測(cè)機(jī)構(gòu)Z比分?jǐn)?shù)柱狀圖表示各參加檢測(cè)機(jī)構(gòu)Z比分?jǐn)?shù)(圖1)。結(jié)果顯示，能力驗(yàn)證結(jié)果統(tǒng)計(jì)的中位值與方案中的擬考核濃度間相對(duì)相差為1.5%～8.1%，表明能力驗(yàn)證樣品制備過(guò)程的方案設(shè)計(jì)較為合理，樣品能夠滿足能力驗(yàn)證考核需要。能力驗(yàn)證結(jié)果統(tǒng)計(jì)的標(biāo)準(zhǔn)化四分位距占相對(duì)應(yīng)參數(shù)的統(tǒng)計(jì)中位值比例為2.5%～11.1%,表明能力驗(yàn)證結(jié)果評(píng)定原則合理,能力驗(yàn)證結(jié)果科學(xué)、可靠。在Z比分?jǐn)?shù)的統(tǒng)計(jì)中,共有230項(xiàng)滿意結(jié)果，18項(xiàng)存在問(wèn)題結(jié)果和19項(xiàng)不滿意結(jié)果。

表7 檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)匯總

圖1 Z比分?jǐn)?shù)分布情況

2.4 存在問(wèn)題 本次能力驗(yàn)證的檢測(cè)方法按照各檢測(cè)機(jī)構(gòu)通過(guò)計(jì)量認(rèn)證參數(shù)的檢測(cè)方法，從各檢測(cè)機(jī)構(gòu)提供的原始記錄和譜圖看，采用的檢測(cè)方法多為NY/T761-2008、GB23200.113-2018、GB23200.121-2021、GB 23200.8-2016等。通過(guò)與參加檢測(cè)機(jī)構(gòu)溝通及檢測(cè)原始記錄和圖譜審核，發(fā)現(xiàn)部分檢測(cè)機(jī)構(gòu)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中存在如下問(wèn)題：

2.4.1 檢測(cè)結(jié)果校準(zhǔn)方法應(yīng)用不當(dāng) 檢測(cè)結(jié)果校準(zhǔn)時(shí)，樣品實(shí)際含量與標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度差異過(guò)大，或超出校準(zhǔn)曲線濃度線性范圍；校準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)偏低，曲線線性存在系統(tǒng)偏差等。

2.4.2 檢測(cè)質(zhì)量控制措施不合理 質(zhì)控樣品與檢測(cè)樣品狀態(tài)差異較大，未按檢測(cè)方法要求(如用重復(fù)性限、對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)相差等指標(biāo))科學(xué)評(píng)價(jià)質(zhì)控結(jié)果，質(zhì)控結(jié)果直接用于檢測(cè)結(jié)果校準(zhǔn)。

2.4.3 檢測(cè)方法隨意變更，儀器設(shè)備操作使用不熟練 檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)超范圍使用；隨意變更稱樣量、定容體積、前處理方法等檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)中的關(guān)鍵技術(shù)內(nèi)容；儀器設(shè)備狀態(tài)不佳，存在干擾或出現(xiàn)異常情況未處理仍進(jìn)行測(cè)定分析。

2.4.4 信息不完善，檢測(cè)結(jié)果無(wú)法溯源 原始記錄中缺少檢測(cè)結(jié)果計(jì)算公式，或缺失計(jì)算公式中的部分關(guān)鍵信息，如稱樣量、提取液體積、標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度等，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果溯源鏈條不完整，無(wú)法復(fù)現(xiàn)檢測(cè)過(guò)程；檢測(cè)原始記錄存在干擾項(xiàng)未積分直接刪去結(jié)果，未按規(guī)范準(zhǔn)確記錄過(guò)程量值、有效數(shù)位和數(shù)字修約有誤。

3 結(jié)論

為了科學(xué)、真實(shí)反映各參加檢測(cè)機(jī)構(gòu)的實(shí)際檢測(cè)能力，采用添加農(nóng)藥的制備能力驗(yàn)證樣品，并按照CNAS-GL003：2018的要求對(duì)樣品均勻性和穩(wěn)定性進(jìn)行測(cè)試，確認(rèn)樣品測(cè)試合格。采用穩(wěn)健統(tǒng)計(jì)方法和回收率方法計(jì)算各參加檢測(cè)機(jī)構(gòu)的Z比分?jǐn)?shù)和添加回收率，結(jié)果顯示測(cè)試結(jié)果的通過(guò)率為94.05%。通過(guò)歸納、分析各參加檢測(cè)機(jī)構(gòu)的結(jié)果記錄，發(fā)現(xiàn)部分檢測(cè)機(jī)構(gòu)在檢測(cè)結(jié)果校準(zhǔn)、檢測(cè)質(zhì)量控制、檢測(cè)方法應(yīng)用和檢測(cè)數(shù)據(jù)溯源等方面存在一定的問(wèn)題。

4 建議

4.1 本次能力驗(yàn)證結(jié)果不合格的5家檢測(cè)機(jī)構(gòu)要認(rèn)真查找問(wèn)題，加強(qiáng)內(nèi)部控制，切實(shí)做好整改。省廳將適時(shí)組織專家開(kāi)展飛行檢查工作。

4.2 各級(jí)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部門(mén)在組織安排2023年農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)任務(wù)外包服務(wù)中，應(yīng)優(yōu)先選擇本年度能力驗(yàn)證考核合格的檢測(cè)機(jī)構(gòu)。

4.3 能力驗(yàn)證合格的檢測(cè)機(jī)構(gòu)，在下一年度的機(jī)構(gòu)考核、擴(kuò)項(xiàng)評(píng)審和監(jiān)督檢查中，可免于相關(guān)項(xiàng)目的現(xiàn)場(chǎng)考核。

4.4 各檢測(cè)機(jī)構(gòu)要加強(qiáng)檢測(cè)人員的業(yè)務(wù)培訓(xùn)，建立健全實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部工作過(guò)程的質(zhì)量控制體系。