宜賓市成人甲狀旁腺激素參考區(qū)間的建立

張立營 陳樸 譚揚(yáng) 肖維雷

摘 要：目的：研究宜賓市健康成人甲狀旁腺激素水平，建立成人甲狀旁腺激素的參考區(qū)間，評價其與鈣、鎂、磷、尿素和肌酐的相關(guān)性。方法：采用雅培i2000化學(xué)發(fā)光分析儀測定EDTA抗凝血漿中宜賓市274名健康成人甲狀旁腺激素水平，按性別為兩組：男性組144人、女性組130人，采用兩獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)比較兩組的iPTH水平，以x±1.96 s建立血清iPTH的參考區(qū)間。結(jié)果：男性組與女性組成人甲狀旁腺激素水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P >0.05），成人甲狀旁腺激素的iPTH參考值區(qū)間為28.28～114.80 pg／mL。iPTH與磷明顯相關(guān)（P <0.05）。結(jié)論：初步建立了宜賓市成人EDTA抗凝血漿iPTH的參考區(qū)間，為評估其患者狀態(tài)提供了依據(jù)。

關(guān)鍵詞：成人，甲狀旁腺激素，EDTA抗凝血漿，參考區(qū)間

DOI編碼：10.3969/j.issn.1002-5944.2023.12.054

甲狀旁腺激素（PTH）是由甲狀旁腺主細(xì)胞分泌的一種半衰期短、影響鈣磷代謝的單鏈多肽激素，其主要作用是促進(jìn)骨轉(zhuǎn)移及骨鈣釋放，加快腎臟排除磷酸鹽。PTH在血液中以全段甲狀旁腺激素（iPTH）、中間片段和C末端片段幾種形式共同存在，其中，iPTH在甲狀旁腺功能亢進(jìn)/減退、高鈣血癥、腎臟疾病等患者的臨床診斷、治療及預(yù)后中起著重要作用。

血液是流行病學(xué)和實(shí)驗(yàn)室研究的常用樣本，某些檢測項目的結(jié)果會受到不同采血管類型及樣本保存條件（溫度或時間）的影響（結(jié)果增高或偏低），使用某種抗凝劑（EDTA、如枸櫞酸鈉或肝素）或促凝劑對有些項目的結(jié)果影響還比較大[1]，抗凝劑的使用會引起蛋白之間的交叉反應(yīng)[2]。國內(nèi)外已有研究表明iPTH體外檢測結(jié)果受上述因素影響很大，且iPTH在乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝血漿中可以穩(wěn)定保存24小時以上，能準(zhǔn)確反映 iPTH 在體內(nèi)真實(shí)濃度水平[3-7]。WHO推薦使用EDTA抗凝血漿測定iPTH，也只是在某些機(jī)型上將肝素抗凝血漿列為可以采用的標(biāo)本類型[8]。

目前，國內(nèi)臨床主要檢測的是全段PTH（intactP T H，i P T H ），我院雅培i P T H試劑說明書上注明EDTA抗凝血漿、肝素抗凝血漿或者血清都可以使用，同樣也沒有說明不同采血管和抗凝劑對檢測結(jié)果是否有影響，檢測系統(tǒng)還未見EDTA抗凝血漿中iPTH參考范圍方面的研究。參考區(qū)間是解釋檢驗(yàn)結(jié)果的依據(jù)和標(biāo)尺，其準(zhǔn)確性、適用性直接影響疾病診療的正確與否。因此，本研究目的是通過雅培i2000分析儀對宜賓市健康成人EDTA 抗凝血漿中iPTH水平進(jìn)行檢測，擬建立宜賓地區(qū)成人血漿iPTH的參考區(qū)間，為臨床提供理論參考。

1 材料和方法

1.1 研究對象

采用隨機(jī)選取2021年6月至2022年7月健康體檢人群274例為研究對象，年齡大于18歲，其中男144人（18～87歲，平均年齡 44.17歲）占52.55%，女性130人（21～88歲，平均年齡46.26歲）占47.45%，每位研究對象都簽署知情同意書。

納入標(biāo)準(zhǔn)：

年齡大于18周歲，健康狀況良好，即常規(guī)體檢各項身體指標(biāo)和體重指數(shù)在正常范圍內(nèi)，腎功能、鈣、鎂和磷處于正常參考范圍。

排除標(biāo)準(zhǔn)：

a.應(yīng)用藥物影響骨和鈣和磷代謝的人群。

b.存在任何有肝、腎、心、肺等臟器疾病、糖尿病及血脂異常等。

1.2 儀器與試劑

雅培i2000化學(xué)發(fā)光分析儀及配套試劑，日立008AS全自動生化分析儀及配套試劑；每年定期由廠家授權(quán)的工程師對加樣系統(tǒng)、溫控系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)。室間質(zhì)評成績優(yōu)良，每日室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果均在控。

1.3 方法

所有研究對象禁食8到12小時后于次日上午8-9點(diǎn)空腹抽取肘靜脈血 2～3 mL于EDTA-K2采血管用于測定iPTH；另抽取靜脈血3～4 mL于血清管用于檢測腎功、鈣、磷和鎂。采血后3000 rpm/min，離心10min，及時檢測或吸出血漿放入-20℃冰箱保存24小時內(nèi)檢測。排除有溶血、黃疸和乳糜的標(biāo)本。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

a）離群值 在參考區(qū)間評估中，Dixon提出了一種離群值測試方法，即D/R比值[9]，當(dāng)某個觀測值的D值≥1/ 3R值時，該值應(yīng)當(dāng)作為離群值被剔除。

b）采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。由于男、女總體分布狀況不明確，采用Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)評估男女各組的數(shù)據(jù)是否服從正態(tài)分布。呈正態(tài)分布的參數(shù)的參考區(qū)間用x±1.96 s的形式進(jìn)行描述，不同性別的PTH水平比較均采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，以P <0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。呈偏態(tài)分布的參數(shù)（LY30、DD）的參考區(qū)間以M[95%百分位數(shù)（P95）]表示。

2 結(jié) 果

2.1 男性與女性組血漿iPTH的水平比較

經(jīng)Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)，男、女各組數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布。男性與女性組參考區(qū)間用x±1.96 s的形式進(jìn)行描述。經(jīng)男性與女性組iPTH水平比較，二者差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P >0. 05），詳細(xì)數(shù)據(jù)如表1所示。

2.2 健康成人iPTH參考的區(qū)間

男性與女性組i P T H水平經(jīng)兩者比較后，二者差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.0 5）。經(jīng)合并后健康成人i P TH平均水平為71.5 4±22 .07，參考區(qū)間為28.28～114.80 pg/mL，詳細(xì)數(shù)據(jù)如表2所示。

2.3 健康成人iPTH與鈣、鎂、磷、尿素和肌酐的相關(guān)性分析分別對iPTH與鈣、鎂、磷、尿素和的肌酐進(jìn)行相關(guān)性分析。iPTH與磷明顯相關(guān)（P <0.05），iPTH與鈣、鎂、尿素和的肌酐相關(guān)不明顯（P >0. 05），詳細(xì)數(shù)據(jù)如表3所示。

3 討 論

甲狀旁腺激素（PTH）是一種半衰期短、反映甲狀旁腺功能最可靠的標(biāo)志物。PTH主要是通過對骨骼、腎臟和腸道中鈣、磷水平的調(diào)節(jié)發(fā)揮作用，具體主要表現(xiàn)如下：1）PTH能夠激活腎１α－羥基化酶活性，以此促進(jìn)形成活化的維生素Ｄ，促進(jìn)胃腸道對鈣離子吸收作用；2）PTH也具有促進(jìn)破骨細(xì)胞的形成，從而使得溶骨加快，促使血鈣升高[10]。

大家都熟知人體內(nèi)并不存在血清，血清是體外分離全血后獲得的，抗凝劑能夠阻止體外血液凝固。體外血液加入抗凝劑后血漿中的各種成分更接近體內(nèi)真實(shí)情況。EDTA抗凝血漿中的iPTH水平也是如此。已有研究表明，iPTH在體外相對不穩(wěn)定，WHO 在檢測 iPTH 時推薦的最佳抗凝劑是EDTA。參考區(qū)間與人群的種族、區(qū)域、生活飲食習(xí)慣、性別、年齡及身體狀況等因素有關(guān)。參考區(qū)間是解釋檢測結(jié)果、分析患者情況的一個基本依據(jù)。在不同的地區(qū)、不同的檢測系統(tǒng)、不同的檢驗(yàn)環(huán)境都應(yīng)建立或驗(yàn)證本實(shí)驗(yàn)室檢測項目的參考區(qū)間。參考區(qū)間的準(zhǔn)確性對臨床診斷有重要的價值。

本研究以健康成人為研究對象，研究對象按性別為兩組，男性組144人，（18～87歲，平均年齡 44.17歲）、女性組130人，（21～88歲，平均年齡46.26歲）。采用雅培i 2000化學(xué)發(fā)光分析儀測定EDTA抗凝血漿中iPTH的水平。通過Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)，男性與女性組數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較兩組的PTH水平。結(jié)果為男性組與女性組健康成人iPTH水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P >0.05），男女合組后初步建立了宜賓市成人iPTH參考值區(qū)間為28.28～114.80 pg／mL，成人iPTH參考值區(qū)間的建立為臨床評估患者狀態(tài)提供了依據(jù)。然而我們發(fā)現(xiàn)這一參考區(qū)間與試劑說明書提供的有一定的差別，這可能與本研究入選的人群種族不同、采用的抗凝劑的種類不同、檢測儀器和試劑不同有關(guān)。

本研究同時對健康成人iPTH水平與鈣、鎂、磷、尿素和的肌酐進(jìn)行了相關(guān)性分析，研究結(jié)果顯示iPTH與磷明顯相關(guān)（P <0.05），這些結(jié)果證實(shí)了iP TH起到降低血磷的作用。iP TH與鈣、鎂、尿素和的肌酐相關(guān)不明顯（P >0.05），此結(jié)果反應(yīng)了鈣、鎂、尿素和的肌酐體內(nèi)水平可能還與飲食和營養(yǎng)、身體素質(zhì)等其他因素有關(guān)。本研究的局限性主要在于，不同性別各年齡組樣本量偏少、未對宜賓市不同區(qū)域，不同人群進(jìn)行分類，因此可能對宜賓市iPTH的參考區(qū)間產(chǎn)生一定的影響。

參考文獻(xiàn)

HAAB B B ，GEIERSTANGER B H ，MICHAILIDIS G ，et a l.Imnunoassay and antibody microarray analysis of the HUPOplasma proteome project reference specimens：Systematic variationbetween sample types and calibra -tion of mass spectrometrydata[J]. Proteomics， 2005， 5（13）： 3278-3291.

LOPEZ J B， PENG C L.Can fluoride-oxalate and sodium citratestabilise homocysteine levels after blood collection[J]. Clin ChemLab Med， 2003， 41（3）： 1369‐1372.

GLENDENNING P， LAFFER L L， WEBER H K， et al. Parathyroidhormone is more stable in EDTA plasma than in serum[J]. ClinChem 2002（48）： 766–767.

GLENDENNING P， LAFFER L L A， HAYLEY K， er al.Parathyroidhormone is more stable in EDTA plasma than in serum[J]. ClinicalChemistry 2002， 48（5）： 766-767.

OMAR H， CHAMBERLIN A， WALKER V， et al. Immulite 2000parathyroid hormone assay： stability of parathyroid hormonein EDTA blood kept at room temperature for 48 h[J]. Ann ClinBiochem 2001（38）： 561–563.

CAVALIERL E， DELANAYE P， CARLISIL A，et al. Stability ofintact parathyroid hormone in samples from hemodialysis patients[J]. Kidney International， 2007（72）： 370–372.

荀春華.樣本收集和保存對血液透析患者iPTH檢測的影響[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，36（1）：98-99.

World Health Organization．Use of anticoagulants in diagnosticlaboratory investigations [S]. Geneva： WHO，2002.

HOROWITZ G L ， ALTAIE S， BOYD J C， et al. Defining，establishing， and verifying reference intervals in the clinical laboratory;approved guideline-third edition： C28-A3[S]. Clinical and LaboratoryStandards Institute Document， 2008.

陳浩，馮飛，朱富強(qiáng)，等.老年骨折患者25－羥基維生素Ｄ和甲狀旁腺素與骨質(zhì)疏松程度的相關(guān)性[J].中華骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病雜志，2013，6（1）：20-27.

作者簡介

張立營，碩士，副主任技師，研究方向?yàn)榕R床檢驗(yàn)診斷學(xué)。

（責(zé)任編輯：劉憲銀）