劉為倫,趙景壯,盧彤巖,邵軼智,任廣明,徐黎明
(1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所,黑龍江 哈爾濱 150070;2.大連海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院,遼寧 大連 116023)
傳染性胰臟壞死?。╥nfectious pancreatic necrosis,IPN)是一種高度傳染性疾病,主要危害鮭鱒幼魚。加拿大和美國(guó)是最早報(bào)導(dǎo)該疾病的國(guó)家,后來該疾病在歐洲和亞洲的十多個(gè)國(guó)家相繼暴發(fā)[1]。20世紀(jì)80 年代末IPN 又傳到日本,隨后中國(guó)和韓國(guó)報(bào)導(dǎo)了該疾病[1]。該疾病在我國(guó)的遼寧、山西、山東、甘肅等地迅速擴(kuò)散,給我國(guó)鮭鱒魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。該病由傳染性胰臟壞死病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)引起。該病毒顆粒是一個(gè)無囊膜的正二十面體結(jié)構(gòu),直徑約60 nm[2]。該病毒為雙鏈RNA 病毒,擁有A、B 兩段雙鏈RNA 基因組,A 段基因含有兩個(gè)開放閱讀框(ORFs),分別編碼約106 kDa 的pVP2-VP4-VP3 多聚蛋白前體和約15 kDa 的非結(jié)構(gòu)蛋白VP5;B 段基因編碼約94 kDa 的聚合酶蛋白VP1[3]。VP2 蛋白是IPNV 的主要抗原蛋白,其基因組包含了病毒的大部分抗原表位,是研究最多的蛋白,廣泛用于IPNV的檢測(cè)、血清型分類、基因分型以及疫苗的研發(fā)[4]。
我國(guó)主要通過藥物治療來防控該疾病[5],而接種疫苗是預(yù)防病毒性疾病最有效的方法。目前已經(jīng)商業(yè)化的IPN 疫苗為挪威Pharmaq 公司生產(chǎn)的IPN滅活疫苗(https://pharmaq.com/),國(guó)內(nèi)尚無商業(yè)化的IPN 疫苗。本文綜述了國(guó)內(nèi)外IPN 疫苗的研究進(jìn)展。已經(jīng)報(bào)導(dǎo)的IPN 疫苗可分為滅活疫苗、減毒活疫苗、基因工程疫苗(DNA 疫苗、重組亞單位疫苗、活載體疫苗),可通過浸泡、口服和注射等方式接種,其中注射是最有效的接種方式[6]。
滅活疫苗是通過加熱、紫外線照射等物理方法或通過滅活劑處理等化學(xué)方法使病毒失去活性制備而成[7]。目前,IPN 滅活疫苗的制備主要是通過滅活劑使IPNV 完全喪失活性。滅活劑具有特異性,不同類型的病原體的滅活效果有差別。不同病原使用的滅活劑及滅活條件不同,因此,確定病毒的最佳滅活劑和滅活條件(包括溫度和時(shí)間)對(duì)制備高效的疫苗非常重要。已有的報(bào)導(dǎo)中,IPN 滅活疫苗的研制通常使用甲醛(formaldehyde)和β-丙內(nèi)酯(beta-propiolactone,BPL)兩種滅活劑滅活I(lǐng)PNV。
Hill 等[8]用1∶200 的甲醛溶液4 ℃滅活I(lǐng)PNV 24 h,用1∶250 的BPL 溶液37 ℃滅活I(lǐng)PNV 3 h,將滅活液腹腔注射虹鱒(Oncorhynchus mykiss),產(chǎn)生了較好的免疫保護(hù)效果。Dixon 和Hill[9]確定:在20 ℃用1∶200 的甲醛溶液滅活4 d 可完全滅活I(lǐng)PNV;在4 ℃下用1∶200 的BPL 溶液滅活6 d 可完全滅活I(lǐng)PNV。但是,在4 ℃下,用BPL 滅活的病毒抗原損失超過50%,而在20 ℃下用甲醛滅活的抗原損失只有10%~15%,用甲醛滅活的病毒腹腔注射免疫虹鱒后,空斑中和實(shí)驗(yàn)表明該疫苗對(duì)虹鱒有保護(hù)作用。該研究認(rèn)為甲醛是滅活I(lǐng)PNV 的首選方法。Bootland 等[10]用1∶200 的甲醛溶液滅活I(lǐng)PNV,并用三種不同濃度的疫苗(3.6×107pfu·mL-1、3.6×108pfu·mL-1和3.6×109pfu·mL-1)浸泡接種8.5 周齡溪鱒(Salvellnus fontinalls),但死亡率卻比未接種疫苗的死亡率高,說明浸泡免疫并沒有保護(hù)效果。因此,滅活疫苗一般采用注射的方式免疫,與佐劑混合使用后效果會(huì)更好。2012 年Munang’andu 等[11]比較了油佐劑-滅活疫苗、聚乳酸-羥基乙酸(polylactic acidglycolic acid,PLGA)-滅活疫苗、DNA 疫苗以及大腸桿菌(Escherichia coli)-重組亞單位疫苗的保護(hù)效果,其中油佐劑-滅活疫苗的保護(hù)效果最好,相對(duì)保護(hù)率可達(dá)53.3%。為了確定最佳接種劑量,Munang’andu 等[12]將兩種抗原劑量(2×1010TCID50、2×109TCID50·mL-1)的滅活疫苗均以0.1 mL 腹腔注射接種大西洋鮭(Salmo salar)。結(jié)果顯示,當(dāng)抗原劑量為2×1010TCID50·mL-1時(shí),滅活疫苗免疫效果更佳。Tamer 等[13]用1∶200 甲醛室溫滅活96 h,與763A 油佐劑1∶1 混合后將抗原劑量調(diào)整為2×1010TCID50·mL-1,滅活疫苗對(duì)虹鱒的相對(duì)保護(hù)率為79%。
減毒疫苗是指毒力降低的活病毒。該類病毒仍具有良好的抗原性和體內(nèi)復(fù)制能力,在進(jìn)入宿主后能夠誘導(dǎo)宿主發(fā)生免疫反應(yīng)產(chǎn)生特異性抗體,以預(yù)防強(qiáng)毒株的感染[14]。減毒疫苗的IPNV 毒性弱,不會(huì)引發(fā)疾病,但是仍具有活性,進(jìn)入宿主體內(nèi)可自主復(fù)制,誘導(dǎo)機(jī)體長(zhǎng)時(shí)間的免疫反應(yīng)。前病毒(provirus)是IPNV 毒性最弱的狀態(tài),是IPNV 在宿主細(xì)胞復(fù)制過程中產(chǎn)生的一個(gè)低密度的顆粒,里面包裹著病毒基因組RNA。這是IPNV 未成熟的狀態(tài),該顆粒可以通過碘乙酰胺(iodoacetamide,IAA)抑制多蛋白成熟獲得[15]。Rivas-Aravena 等[15]用前病毒免疫虹鱒,產(chǎn)生了與IPNV 感染相似的細(xì)胞免疫反應(yīng)和體液免疫反應(yīng),前病毒組中和抗體水平更高,病毒載量降低顯著。這表明用前病毒制作減毒疫苗是一個(gè)很好的策略。
有研究發(fā)現(xiàn),IPNV 毒株在大西洋鮭中的毒力決定基因位于VP2 氨基酸序列上第217、221 和247 位上的氨基酸殘基,當(dāng)221 位上的氨基酸是蘇氨酸時(shí),病毒不具有毒性[16,17]。可以根據(jù)這一特點(diǎn),改造IPNV VP2 上的毒力基因來減弱病毒的毒性,以制備減毒疫苗。Munang’andu 等[17]將IPNV VP2上的第217 位氨基酸突變?yōu)楦彼幔≒)、221 位氨基酸突變?yōu)樘K氨酸(T)、247 位氨基酸突變?yōu)楸彼幔ˋ)獲得無毒的毒株,可以誘導(dǎo)大西洋鮭產(chǎn)生較高的抗體水平。
減毒疫苗在接種后會(huì)殘留一些毒力,這些毒力雖然不致病,但是在進(jìn)入魚體后可能會(huì)存在毒力返強(qiáng)的風(fēng)險(xiǎn),一定程度上導(dǎo)致其應(yīng)用受限[18]。
隨著基因工程技術(shù)的快速發(fā)展,可以人工構(gòu)建含有抗原基因的重組體,利用構(gòu)建的重組體自身或者其表達(dá)產(chǎn)物制備出成本低、無致病性、安全性高的新型疫苗[19]?;蚬こ桃呙缈蓪⒍鄠€(gè)病原的抗原基因連接在一起,制備可同時(shí)預(yù)防多種疾病的多價(jià)疫苗,這比傳統(tǒng)的滅活疫苗和減毒疫苗更有優(yōu)勢(shì)[20]。研發(fā)基因工程疫苗首先要確定IPNV 的抗原表位。Frost 等[21]對(duì)IPNV 抗原表位的定位發(fā)現(xiàn),IPNV 的抗原表位位于基因VP2 和VP3 上,而VP2 基因含有主要的抗原表位,因此常用VP2 研發(fā)疫苗。Park等[22]比較了IPNV VP2 和VP3 的免疫原性,發(fā)現(xiàn)VP3 更具有免疫原性。因此,IPN 基因工程疫苗的研制有兩種方法:一是構(gòu)建VP2 或者VP3 的重組蛋白制備疫苗,二是構(gòu)建VP2-VP3 融合蛋白制備疫苗。IPN 的基因工程疫苗包括:DNA 疫苗、重組亞單位疫苗以及活載體疫苗。
DNA 疫苗是指利用基因工程技術(shù)構(gòu)建的重組質(zhì)粒,通過不同遞送系統(tǒng)使其在動(dòng)物體內(nèi)表達(dá),使機(jī)體發(fā)生免疫反應(yīng)而起到保護(hù)效果[23]。DNA 疫苗比重組亞單位疫苗制備更簡(jiǎn)單,不需要在體外表達(dá),構(gòu)建重組質(zhì)粒后,可以利用感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)繁,然后大量提取重組質(zhì)粒,制備成本低、周期短,成為研究最多的疫苗。本文從DNA 疫苗的免疫方式即注射疫苗和口服疫苗兩個(gè)方面總結(jié)了已經(jīng)報(bào)導(dǎo)的DNA 疫苗。
3.1.1 注射疫苗
Mikalsen 等[24]基于IPNV 的多聚蛋白基因(含VP2 和VP3)、VP2 的前端、VP2 的中心部分、VP2 的后端、VP2 以及VP3 構(gòu)建了6 種質(zhì)粒。將6 種質(zhì)粒通過肌肉注射分別接種大西洋鮭。結(jié)果僅有含IPNV 多聚蛋白基因組的質(zhì)粒獲得了較好的保護(hù)效果,相對(duì)保護(hù)率達(dá)到84%,而VP2 作為主要的抗原基因并沒有良好的保護(hù)效果,可能是因?yàn)橥ㄟ^截短的方式獲取VP2 時(shí)造成了連續(xù)表位的丟失。De Las Heras 等[25]將VP2 插入到pcDNA3.1 表達(dá)載體中,該重組質(zhì)粒可以減少IPNV 感染后的細(xì)胞病變效應(yīng)以及病毒載量。免疫褐鱒(Salmo trutta)后,相關(guān)免疫基因的表達(dá)量急劇增加,還能檢測(cè)到IPNV 特異性抗體。Cuesta 等[26]將IPNV A 片段多聚蛋白開放閱讀框(ORF)插入到pcDNA3.1 表達(dá)載體中,構(gòu)建了針對(duì)IPNV 的DNA 疫苗(pIPNV-PP)。該疫苗可明顯減少虹鱒體內(nèi)IPNV 病毒載量。Xu 等[27]將IHNV的糖蛋白基因和IPNV 的VP2-VP3 克隆到pcDNA3.1 表達(dá)載體中,對(duì)IHNV 和IPNV 混合感染有明顯的保護(hù)作用。該疫苗接種劑量小,只需要1 μg質(zhì)粒DNA 就可為虹鱒提供良好的保護(hù)效果。Ahmadivand 等[28]用帶有PTA 基序的VP2 的DNA 疫苗免疫4~5 g 的虹鱒,結(jié)果顯示出88%的相對(duì)保護(hù)率。帶有PTA 基序的IPNV 無毒,雖然不具毒性,但病毒仍具有抗原性,可以用于研制高效的DNA 疫苗。
3.1.2 口服疫苗
口服疫苗比注射疫苗接種更方便,對(duì)幼魚無損傷,更合適小魚的大規(guī)模接種。口服給藥后,疫苗中的抗原基因首先要經(jīng)過消化道,為了保證疫苗不被完全消化而順利通過消化道,需要采取一定的保護(hù)方法[29]。在IPN 口服疫苗的研發(fā)中,通常采用藻酸鹽、脂質(zhì)體以及殼聚糖等疫苗遞送載體保護(hù)抗原基因,保證抗原基因不被降解而被魚苗充分吸收,達(dá)到免疫效果。
用藻酸鹽微球?qū)①|(zhì)粒DNA 包裹,可以避免疫苗在消化道被消化,順利進(jìn)入魚體前腸和后腸,保證疫苗被充分吸收。De Las Heras 等[30]用藻酸鹽微球膠囊封裝帶有VP2 的DNA 疫苗,保護(hù)效果可達(dá)80%。Ballesteros 等[31]發(fā)現(xiàn),藻酸鹽口服DNA 疫苗誘導(dǎo)的保護(hù)機(jī)制與IPNV 感染誘導(dǎo)的防御機(jī)制相似,而口服疫苗誘導(dǎo)的相關(guān)免疫因子上調(diào)量更高。將該疫苗和飼料混合后連續(xù)喂養(yǎng)虹鱒3 d,對(duì)虹鱒的相對(duì)保護(hù)率可達(dá)85.9%[32]。該研究表明將疫苗與飼料混合投喂是一種很有效的接種方式。
脂質(zhì)體是由雙層磷脂組成的球形封閉結(jié)構(gòu),能包裹質(zhì)粒DNA 而起到保護(hù)抗原的作用,廣泛應(yīng)用于疫苗的研究中[33]。Reyes 等[34]用陽離子脂質(zhì)體將DNA 疫苗制成丸劑連續(xù)喂養(yǎng)虹鱒5 d,相對(duì)保護(hù)率可達(dá)66%,明顯好于肌肉注射(47.8%)。殼聚糖也是口服疫苗的載體之一[33]。Ahmadivand 等[35]用殼聚糖/ 三聚磷酸(chitosan/tripolyphosphate,CS-TPP)納米顆粒包裹質(zhì)粒DNA,以每尾魚10 μg DNA 和25 μg DNA 的劑量口服免疫虹鱒魚苗,相對(duì)保護(hù)率為47%和70%。在口服相同劑量的CS-TPP 納米顆粒和藻酸鹽微球配制的DNA 疫苗后,相對(duì)保護(hù)率上升為59%和82%。這些結(jié)果表明了CS-TPP 納米顆粒作為口服疫苗遞送載體的潛力,與藻酸鹽微球膠囊配合使用效果更佳。
重組亞單位疫苗是指利用相應(yīng)的表達(dá)載體,使抗原基因在對(duì)應(yīng)的表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá),獲得使機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫或非特異性免疫的抗原蛋白[19]。目前用于IPNV 亞單位疫苗的原核表達(dá)系統(tǒng)包括大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)和乳酸桿菌表達(dá)系統(tǒng);真核表達(dá)系統(tǒng)包括昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)和釀酒酵母表達(dá)系統(tǒng)。
大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)是研制重組亞單位疫苗最常用的表達(dá)系統(tǒng),具有制備周期短、成本低、蛋白產(chǎn)量高、技術(shù)成熟等優(yōu)點(diǎn)。乳酸桿菌是腸道里的有益菌,是一種安全的微生物,代表菌株有干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)等,以乳酸桿菌為表達(dá)系統(tǒng)的口服疫苗安全性會(huì)更好。利用酵母和昆蟲細(xì)胞表達(dá)的VP2 和VP3蛋白,可以形成一種病毒樣顆粒(virus-like particles,VLP)。VLP 具有與天然病毒相似的三級(jí)結(jié)構(gòu),能夠更有效地誘導(dǎo)抗IPNV 反應(yīng)[36]。與VLP 相似的還有亞病毒顆粒(subviral particles,SVP)。它們具有病毒的自身免疫原性和生物活性,但是不帶有病毒的遺傳物質(zhì),不具有傳染性,是一種安全有效的疫苗形式。
3.2.1 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)
Manning 和Leong[37]用質(zhì)粒pTA1 在大腸桿菌中表達(dá)了IPNV A 段編碼的完整cDNA,獲得了大量IPNV 蛋白。用細(xì)菌裂解物浸泡免疫虹鱒,攻毒后虹鱒的死亡率為4%,而對(duì)照組死亡率達(dá)到44%。該研究說明亞單位疫苗可以為魚苗提供實(shí)質(zhì)性的保護(hù)。Frost 等[38]在大腸桿菌中表達(dá)了重組VP2 蛋白,可在大西洋鮭體內(nèi)產(chǎn)生IPNV 特異性抗體。Dadar 等[39]構(gòu)建了IPNV VP2-VP3 融合基因的重組質(zhì)粒,利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)在體外表達(dá),獲得了高產(chǎn)量的VP2-VP3 重組蛋白。用該重組蛋白注射方式虹鱒,相對(duì)保護(hù)率可達(dá)83%。Tamer 等[13]利用大腸桿菌表達(dá)IPNV VP2 蛋白,結(jié)合ISA 763A 佐劑制備重組亞單位疫苗,對(duì)虹鱒的相對(duì)保護(hù)率為70%。
3.2.2 乳酸桿菌表達(dá)系統(tǒng)
劉敏等[40]利用pPG1 表達(dá)載體在干酪乳桿菌中表達(dá)了IPNV VP3 基因,為之后研制乳酸桿菌口服疫苗奠定了基礎(chǔ)。Zhao 等[41]構(gòu)建了pPG1-VP2-VP3 重組質(zhì)粒,在干酪乳桿菌表達(dá),獲得了pPG1-VP2-VP3 重組蛋白。該疫苗可誘導(dǎo)虹鱒體內(nèi)產(chǎn)生特異性抗血清IgM,并降低IPNV 在虹鱒體內(nèi)的載量。這些研究表明,乳酸桿菌表達(dá)系統(tǒng)可用作疫苗設(shè)計(jì)。劉佳琪等[42]從虹鱒腸道中分離出了一種植物乳桿菌,并利用分離出的植物乳桿菌表達(dá)了IPNV VP2-VP3重組蛋白,經(jīng)過初次免疫和加強(qiáng)免疫后,對(duì)虹鱒的保護(hù)率可達(dá)100%,表明利用虹鱒體內(nèi)分離出來的宿主菌研制疫苗的保護(hù)效果更好,為口服疫苗的開發(fā)提供了新的思路。Duan 等[43]在干酪乳桿菌的疫苗基礎(chǔ)上加入虹鱒趨化因子CK6,誘導(dǎo)了虹鱒體內(nèi)更強(qiáng)烈的特異性免疫反應(yīng),保護(hù)效果更好。Chen 等[29]在加入了CK6 疫苗的基礎(chǔ)上添加嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)黏附基因(AHA1)。將AHA1 作為腸上皮細(xì)胞的靶向分子,能黏附在上皮細(xì)胞并延長(zhǎng)抗原在腸道內(nèi)的保留時(shí)間,增強(qiáng)乳酸菌疫苗的免疫原性。在加入AHA1 后,口服免疫能更迅速、更精確地將IPNV VP2 蛋白送到腸上皮細(xì)胞,使機(jī)體產(chǎn)生顯著水平的抗IPNV 血清IgM 和黏膜IgT 抗體應(yīng)答。干酪乳桿菌在和靶向分子、趨化因子聯(lián)合使用后,保護(hù)效果良好。但是構(gòu)建乳酸桿菌疫苗通常使用抗生素耐藥性作為選擇性標(biāo)志物,會(huì)對(duì)生物安全構(gòu)成威脅。Hua 等[44]去掉了pPGF-612 中的氯霉素基因,將其作為載體在干酪乳桿菌中表達(dá)了以EGFP 綠色熒光蛋白為標(biāo)記的CK6-VP2 融合蛋白,該疫苗可有效抑制IPNV 在虹鱒體內(nèi)的復(fù)制。在未來的一段時(shí)間,乳酸桿菌疫苗的研制主要以無抗生素疫苗為主。
3.2.3 酵母表達(dá)系統(tǒng)
Allnutt 等[45]在釀酒酵母中表達(dá)了IPNV VP2 基因,VP2 基因在酵母中形成了一種20 nm 的SVP。將rVP2-SVP 通過注射和口服兩種途徑接種虹鱒,檢測(cè)到了IPNV 特異性抗體,用IPNV Buh 毒株對(duì)虹鱒攻毒,接種疫苗組病毒載量比對(duì)照組更低。該研究證明了SVP 作為疫苗開發(fā)的潛力。Dhar 等[46]將人類致癌基因c-myc 插入到IPNV VP2 蛋白自組裝的SVP 中,在釀酒酵母中成功表達(dá),并在虹鱒體內(nèi)誘導(dǎo)了抗IPNV 免疫反應(yīng)。賀文斌[47]建立了IPNV酵母表面展示系統(tǒng),將IPNV VP2 蛋白在酵母表面成功表達(dá),用該疫苗免疫虹鱒發(fā)現(xiàn),免疫虹鱒IgM、IgT、CD4、CD8 等免疫基因均顯著上調(diào);虹鱒體內(nèi)IPNV 載量顯著降低。這些結(jié)果表明,釀酒酵母是一種非常好的疫苗表達(dá)系統(tǒng),以釀酒酵母研發(fā)的IPNV 口服疫苗具有較好的免疫效果。
3.2.4 昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)
昆蟲表達(dá)系統(tǒng)是將抗原基因整合到桿狀病毒中,隨桿狀病毒在昆蟲細(xì)胞中大量繁殖獲得高產(chǎn)量的蛋白。桿狀病毒的宿主專一性強(qiáng),通常不會(huì)造成實(shí)驗(yàn)室的污染,安全性較高[35]。Shivappa 等[48]利用桿狀病毒在昆蟲細(xì)胞和幼蟲中表達(dá)了IPNV 的A 片段,獲得了高產(chǎn)量的IPNV 蛋白,結(jié)構(gòu)蛋白自組裝形成VLP。用獲得的VLP 抗原加上油佐劑制成疫苗免疫大西洋鮭,相對(duì)保護(hù)率為27%。該研究結(jié)果表明,昆蟲表達(dá)系統(tǒng)可用于IPNV 疫苗的研制。
活載體疫苗是將抗原基因通過基因工程技術(shù)插入到弱毒或者無毒的毒株中構(gòu)建重組病毒。重組病毒可通過浸泡或者自然感染的方式將目的基因運(yùn)送到宿主體內(nèi),隨著重組病毒在宿主體內(nèi)不斷繁殖,目的基因也隨之不斷表達(dá),誘發(fā)相應(yīng)的免疫反應(yīng)[49]。Guo 等[50]用IPNV VP2 基因和VP2 CEO 基因替代IHNV 的NV 基因,構(gòu)建了兩種重組病毒(rIHNV-IPNV VP2 和rIHNV-IPNV VP2 COE),兩種重組病毒對(duì)虹鱒魚苗的保護(hù)效果可達(dá)50%~65%。Chen 等[51]用IPNV 的VP2 基因取代了rIHNV 主鏈的NV 基因,構(gòu)建rIHNV-N438A-ΔNV-VP2 重組病毒。該重組病毒對(duì)IPNV Sp 血清型感染的相對(duì)存活率可達(dá)88.9%。Zhao 等[52]將IPNV 的VP2 基因插入到IHNV U 型基因組的Blk94 毒株的P 和M 基因之間,構(gòu)建了rBlk94-VP2 重組病毒。該重組病毒可顯著降低IPNV 在脾臟、肝臟和前腎中的載量。以上研究都表明,IHNV 的弱毒毒株可作為活疫苗開發(fā)的載體,保護(hù)虹鱒免受兩種或多種疾病的感染,廣泛應(yīng)用在IPN 疫苗研制中。Li 等[53]將VP2 基因整合到腺病毒中,該重組病毒在人胚腎細(xì)胞(human embryonic kidney cells,HEK-293)中成功表達(dá)VP2基因。用重組病毒浸泡免疫虹鱒,相對(duì)保護(hù)率可達(dá)88.24%。以腺病毒為載體開發(fā)出的IHNV 和IPNV的二聯(lián)活載體疫苗,浸泡免疫虹鱒,IPNV 攻毒后的相對(duì)存活率可達(dá)86.84%[54]。
活載體疫苗接種方便,可通過自然感染的方式接種魚苗,容易引起群體免疫。在進(jìn)入宿主體內(nèi)后,抗原基因會(huì)隨著載體在體內(nèi)復(fù)制,可以引起長(zhǎng)時(shí)間的免疫反應(yīng),且免疫效果好,這些優(yōu)勢(shì)讓活載體疫苗成為一類新型疫苗。
近年來,IPN 的暴發(fā)使我國(guó)鮭鱒魚養(yǎng)殖業(yè)遭受到了嚴(yán)重的阻礙。大多數(shù)疫苗停留在實(shí)驗(yàn)室水平,沒有商業(yè)化產(chǎn)品投入市場(chǎng)。目前,IPN 滅活疫苗的制備技術(shù)已經(jīng)成熟,最佳滅活方式、最佳接種劑量以及最佳免疫方式已經(jīng)確定,最有可能成為首批商業(yè)化疫苗。與此同時(shí),基因工程疫苗已取得突破性進(jìn)展?;蚬こ淌切聲r(shí)代的產(chǎn)物,各地區(qū)對(duì)基因工程疫苗的態(tài)度以及政策各不相同,其應(yīng)用受到一定得限制。隨著人們對(duì)漁用疫苗的認(rèn)識(shí)加深及基因工程的飛速發(fā)展,將有希望獲得更加便捷、安全、高效的IPN 疫苗,促進(jìn)鮭鱒魚養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。