傳染性胰臟壞死病疫苗的研究進(jìn)展

劉為倫，趙景壯，盧彤巖，邵軼智，任廣明，徐黎明

（1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所，黑龍江 哈爾濱 150070；2.大連海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，遼寧 大連 116023）

傳染性胰臟壞死?。╥nfectious pancreatic necrosis，IPN）是一種高度傳染性疾病，主要危害鮭鱒幼魚。加拿大和美國(guó)是最早報(bào)導(dǎo)該疾病的國(guó)家，后來該疾病在歐洲和亞洲的十多個(gè)國(guó)家相繼暴發(fā)[1]。20世紀(jì)80 年代末IPN 又傳到日本，隨后中國(guó)和韓國(guó)報(bào)導(dǎo)了該疾病[1]。該疾病在我國(guó)的遼寧、山西、山東、甘肅等地迅速擴(kuò)散，給我國(guó)鮭鱒魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。該病由傳染性胰臟壞死病毒（infectious pancreatic necrosis virus，IPNV）引起。該病毒顆粒是一個(gè)無囊膜的正二十面體結(jié)構(gòu)，直徑約60 nm[2]。該病毒為雙鏈RNA 病毒，擁有A、B 兩段雙鏈RNA 基因組，A 段基因含有兩個(gè)開放閱讀框（ORFs），分別編碼約106 kDa 的pVP2-VP4-VP3 多聚蛋白前體和約15 kDa 的非結(jié)構(gòu)蛋白VP5；B 段基因編碼約94 kDa 的聚合酶蛋白VP1[3]。VP2 蛋白是IPNV 的主要抗原蛋白，其基因組包含了病毒的大部分抗原表位，是研究最多的蛋白，廣泛用于IPNV的檢測(cè)、血清型分類、基因分型以及疫苗的研發(fā)[4]。

我國(guó)主要通過藥物治療來防控該疾病[5]，而接種疫苗是預(yù)防病毒性疾病最有效的方法。目前已經(jīng)商業(yè)化的IPN 疫苗為挪威Pharmaq 公司生產(chǎn)的IPN滅活疫苗（https://pharmaq.com/），國(guó)內(nèi)尚無商業(yè)化的IPN 疫苗。本文綜述了國(guó)內(nèi)外IPN 疫苗的研究進(jìn)展。已經(jīng)報(bào)導(dǎo)的IPN 疫苗可分為滅活疫苗、減毒活疫苗、基因工程疫苗（DNA 疫苗、重組亞單位疫苗、活載體疫苗），可通過浸泡、口服和注射等方式接種，其中注射是最有效的接種方式[6]。

1 滅活疫苗

滅活疫苗是通過加熱、紫外線照射等物理方法或通過滅活劑處理等化學(xué)方法使病毒失去活性制備而成[7]。目前，IPN 滅活疫苗的制備主要是通過滅活劑使IPNV 完全喪失活性。滅活劑具有特異性，不同類型的病原體的滅活效果有差別。不同病原使用的滅活劑及滅活條件不同，因此，確定病毒的最佳滅活劑和滅活條件（包括溫度和時(shí)間）對(duì)制備高效的疫苗非常重要。已有的報(bào)導(dǎo)中，IPN 滅活疫苗的研制通常使用甲醛（formaldehyde）和β-丙內(nèi)酯（beta-propiolactone，BPL）兩種滅活劑滅活I(lǐng)PNV。

Hill 等[8]用1∶200 的甲醛溶液4 ℃滅活I(lǐng)PNV 24 h，用1∶250 的BPL 溶液37 ℃滅活I(lǐng)PNV 3 h，將滅活液腹腔注射虹鱒（Oncorhynchus mykiss），產(chǎn)生了較好的免疫保護(hù)效果。Dixon 和Hill[9]確定：在20 ℃用1∶200 的甲醛溶液滅活4 d 可完全滅活I(lǐng)PNV；在4 ℃下用1∶200 的BPL 溶液滅活6 d 可完全滅活I(lǐng)PNV。但是，在4 ℃下，用BPL 滅活的病毒抗原損失超過50%，而在20 ℃下用甲醛滅活的抗原損失只有10%～15%，用甲醛滅活的病毒腹腔注射免疫虹鱒后，空斑中和實(shí)驗(yàn)表明該疫苗對(duì)虹鱒有保護(hù)作用。該研究認(rèn)為甲醛是滅活I(lǐng)PNV 的首選方法。Bootland 等[10]用1∶200 的甲醛溶液滅活I(lǐng)PNV，并用三種不同濃度的疫苗（3.6×107pfu·mL-1、3.6×108pfu·mL-1和3.6×109pfu·mL-1）浸泡接種8.5 周齡溪鱒（Salvellnus fontinalls），但死亡率卻比未接種疫苗的死亡率高，說明浸泡免疫并沒有保護(hù)效果。因此，滅活疫苗一般采用注射的方式免疫，與佐劑混合使用后效果會(huì)更好。2012 年Munang’andu 等[11]比較了油佐劑-滅活疫苗、聚乳酸-羥基乙酸（polylactic acidglycolic acid，PLGA）-滅活疫苗、DNA 疫苗以及大腸桿菌（Escherichia coli）-重組亞單位疫苗的保護(hù)效果，其中油佐劑-滅活疫苗的保護(hù)效果最好，相對(duì)保護(hù)率可達(dá)53.3%。為了確定最佳接種劑量，Munang’andu 等[12]將兩種抗原劑量（2×1010TCID50、2×109TCID50·mL-1）的滅活疫苗均以0.1 mL 腹腔注射接種大西洋鮭（Salmo salar）。結(jié)果顯示，當(dāng)抗原劑量為2×1010TCID50·mL-1時(shí)，滅活疫苗免疫效果更佳。Tamer 等[13]用1∶200 甲醛室溫滅活96 h，與763A 油佐劑1∶1 混合后將抗原劑量調(diào)整為2×1010TCID50·mL-1，滅活疫苗對(duì)虹鱒的相對(duì)保護(hù)率為79%。

2 減毒疫苗

減毒疫苗是指毒力降低的活病毒。該類病毒仍具有良好的抗原性和體內(nèi)復(fù)制能力，在進(jìn)入宿主后能夠誘導(dǎo)宿主發(fā)生免疫反應(yīng)產(chǎn)生特異性抗體，以預(yù)防強(qiáng)毒株的感染[14]。減毒疫苗的IPNV 毒性弱，不會(huì)引發(fā)疾病，但是仍具有活性，進(jìn)入宿主體內(nèi)可自主復(fù)制，誘導(dǎo)機(jī)體長(zhǎng)時(shí)間的免疫反應(yīng)。前病毒（provirus）是IPNV 毒性最弱的狀態(tài)，是IPNV 在宿主細(xì)胞復(fù)制過程中產(chǎn)生的一個(gè)低密度的顆粒，里面包裹著病毒基因組RNA。這是IPNV 未成熟的狀態(tài)，該顆粒可以通過碘乙酰胺（iodoacetamide，IAA）抑制多蛋白成熟獲得[15]。Rivas-Aravena 等[15]用前病毒免疫虹鱒，產(chǎn)生了與IPNV 感染相似的細(xì)胞免疫反應(yīng)和體液免疫反應(yīng)，前病毒組中和抗體水平更高，病毒載量降低顯著。這表明用前病毒制作減毒疫苗是一個(gè)很好的策略。

有研究發(fā)現(xiàn)，IPNV 毒株在大西洋鮭中的毒力決定基因位于VP2 氨基酸序列上第217、221 和247 位上的氨基酸殘基，當(dāng)221 位上的氨基酸是蘇氨酸時(shí)，病毒不具有毒性[16,17]。可以根據(jù)這一特點(diǎn)，改造IPNV VP2 上的毒力基因來減弱病毒的毒性，以制備減毒疫苗。Munang’andu 等[17]將IPNV VP2上的第217 位氨基酸突變?yōu)楦彼幔≒）、221 位氨基酸突變?yōu)樘K氨酸（T）、247 位氨基酸突變?yōu)楸彼幔ˋ）獲得無毒的毒株，可以誘導(dǎo)大西洋鮭產(chǎn)生較高的抗體水平。

減毒疫苗在接種后會(huì)殘留一些毒力，這些毒力雖然不致病，但是在進(jìn)入魚體后可能會(huì)存在毒力返強(qiáng)的風(fēng)險(xiǎn)，一定程度上導(dǎo)致其應(yīng)用受限[18]。

3 基因工程疫苗

隨著基因工程技術(shù)的快速發(fā)展，可以人工構(gòu)建含有抗原基因的重組體，利用構(gòu)建的重組體自身或者其表達(dá)產(chǎn)物制備出成本低、無致病性、安全性高的新型疫苗[19]?；蚬こ桃呙缈蓪⒍鄠€(gè)病原的抗原基因連接在一起，制備可同時(shí)預(yù)防多種疾病的多價(jià)疫苗，這比傳統(tǒng)的滅活疫苗和減毒疫苗更有優(yōu)勢(shì)[20]。研發(fā)基因工程疫苗首先要確定IPNV 的抗原表位。Frost 等[21]對(duì)IPNV 抗原表位的定位發(fā)現(xiàn)，IPNV 的抗原表位位于基因VP2 和VP3 上，而VP2 基因含有主要的抗原表位，因此常用VP2 研發(fā)疫苗。Park等[22]比較了IPNV VP2 和VP3 的免疫原性，發(fā)現(xiàn)VP3 更具有免疫原性。因此，IPN 基因工程疫苗的研制有兩種方法：一是構(gòu)建VP2 或者VP3 的重組蛋白制備疫苗，二是構(gòu)建VP2-VP3 融合蛋白制備疫苗。IPN 的基因工程疫苗包括：DNA 疫苗、重組亞單位疫苗以及活載體疫苗。

3.1 DNA 疫苗

DNA 疫苗是指利用基因工程技術(shù)構(gòu)建的重組質(zhì)粒，通過不同遞送系統(tǒng)使其在動(dòng)物體內(nèi)表達(dá)，使機(jī)體發(fā)生免疫反應(yīng)而起到保護(hù)效果[23]。DNA 疫苗比重組亞單位疫苗制備更簡(jiǎn)單，不需要在體外表達(dá)，構(gòu)建重組質(zhì)粒后，可以利用感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)繁，然后大量提取重組質(zhì)粒，制備成本低、周期短，成為研究最多的疫苗。本文從DNA 疫苗的免疫方式即注射疫苗和口服疫苗兩個(gè)方面總結(jié)了已經(jīng)報(bào)導(dǎo)的DNA 疫苗。

3.1.1 注射疫苗

Mikalsen 等[24]基于IPNV 的多聚蛋白基因（含VP2 和VP3）、VP2 的前端、VP2 的中心部分、VP2 的后端、VP2 以及VP3 構(gòu)建了6 種質(zhì)粒。將6 種質(zhì)粒通過肌肉注射分別接種大西洋鮭。結(jié)果僅有含IPNV 多聚蛋白基因組的質(zhì)粒獲得了較好的保護(hù)效果，相對(duì)保護(hù)率達(dá)到84%，而VP2 作為主要的抗原基因并沒有良好的保護(hù)效果，可能是因?yàn)橥ㄟ^截短的方式獲取VP2 時(shí)造成了連續(xù)表位的丟失。De Las Heras 等[25]將VP2 插入到pcDNA3.1 表達(dá)載體中，該重組質(zhì)粒可以減少IPNV 感染后的細(xì)胞病變效應(yīng)以及病毒載量。免疫褐鱒（Salmo trutta）后，相關(guān)免疫基因的表達(dá)量急劇增加，還能檢測(cè)到IPNV 特異性抗體。Cuesta 等[26]將IPNV A 片段多聚蛋白開放閱讀框（ORF）插入到pcDNA3.1 表達(dá)載體中，構(gòu)建了針對(duì)IPNV 的DNA 疫苗（pIPNV-PP）。該疫苗可明顯減少虹鱒體內(nèi)IPNV 病毒載量。Xu 等[27]將IHNV的糖蛋白基因和IPNV 的VP2-VP3 克隆到pcDNA3.1 表達(dá)載體中，對(duì)IHNV 和IPNV 混合感染有明顯的保護(hù)作用。該疫苗接種劑量小，只需要1 μg質(zhì)粒DNA 就可為虹鱒提供良好的保護(hù)效果。Ahmadivand 等[28]用帶有PTA 基序的VP2 的DNA 疫苗免疫4～5 g 的虹鱒，結(jié)果顯示出88%的相對(duì)保護(hù)率。帶有PTA 基序的IPNV 無毒，雖然不具毒性，但病毒仍具有抗原性，可以用于研制高效的DNA 疫苗。

3.1.2 口服疫苗

口服疫苗比注射疫苗接種更方便，對(duì)幼魚無損傷，更合適小魚的大規(guī)模接種。口服給藥后，疫苗中的抗原基因首先要經(jīng)過消化道，為了保證疫苗不被完全消化而順利通過消化道，需要采取一定的保護(hù)方法[29]。在IPN 口服疫苗的研發(fā)中，通常采用藻酸鹽、脂質(zhì)體以及殼聚糖等疫苗遞送載體保護(hù)抗原基因，保證抗原基因不被降解而被魚苗充分吸收，達(dá)到免疫效果。

用藻酸鹽微球?qū)①|(zhì)粒DNA 包裹，可以避免疫苗在消化道被消化，順利進(jìn)入魚體前腸和后腸，保證疫苗被充分吸收。De Las Heras 等[30]用藻酸鹽微球膠囊封裝帶有VP2 的DNA 疫苗，保護(hù)效果可達(dá)80%。Ballesteros 等[31]發(fā)現(xiàn)，藻酸鹽口服DNA 疫苗誘導(dǎo)的保護(hù)機(jī)制與IPNV 感染誘導(dǎo)的防御機(jī)制相似，而口服疫苗誘導(dǎo)的相關(guān)免疫因子上調(diào)量更高。將該疫苗和飼料混合后連續(xù)喂養(yǎng)虹鱒3 d，對(duì)虹鱒的相對(duì)保護(hù)率可達(dá)85.9%[32]。該研究表明將疫苗與飼料混合投喂是一種很有效的接種方式。

脂質(zhì)體是由雙層磷脂組成的球形封閉結(jié)構(gòu)，能包裹質(zhì)粒DNA 而起到保護(hù)抗原的作用，廣泛應(yīng)用于疫苗的研究中[33]。Reyes 等[34]用陽離子脂質(zhì)體將DNA 疫苗制成丸劑連續(xù)喂養(yǎng)虹鱒5 d，相對(duì)保護(hù)率可達(dá)66%，明顯好于肌肉注射（47.8%）。殼聚糖也是口服疫苗的載體之一[33]。Ahmadivand 等[35]用殼聚糖/ 三聚磷酸（chitosan/tripolyphosphate，CS-TPP）納米顆粒包裹質(zhì)粒DNA，以每尾魚10 μg DNA 和25 μg DNA 的劑量口服免疫虹鱒魚苗，相對(duì)保護(hù)率為47%和70%。在口服相同劑量的CS-TPP 納米顆粒和藻酸鹽微球配制的DNA 疫苗后，相對(duì)保護(hù)率上升為59%和82%。這些結(jié)果表明了CS-TPP 納米顆粒作為口服疫苗遞送載體的潛力，與藻酸鹽微球膠囊配合使用效果更佳。

3.2 重組亞單位疫苗

重組亞單位疫苗是指利用相應(yīng)的表達(dá)載體，使抗原基因在對(duì)應(yīng)的表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)，獲得使機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫或非特異性免疫的抗原蛋白[19]。目前用于IPNV 亞單位疫苗的原核表達(dá)系統(tǒng)包括大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)和乳酸桿菌表達(dá)系統(tǒng)；真核表達(dá)系統(tǒng)包括昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)和釀酒酵母表達(dá)系統(tǒng)。

大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)是研制重組亞單位疫苗最常用的表達(dá)系統(tǒng)，具有制備周期短、成本低、蛋白產(chǎn)量高、技術(shù)成熟等優(yōu)點(diǎn)。乳酸桿菌是腸道里的有益菌，是一種安全的微生物，代表菌株有干酪乳桿菌（Lactobacillus casei）、植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）等，以乳酸桿菌為表達(dá)系統(tǒng)的口服疫苗安全性會(huì)更好。利用酵母和昆蟲細(xì)胞表達(dá)的VP2 和VP3蛋白，可以形成一種病毒樣顆粒（virus-like particles，VLP）。VLP 具有與天然病毒相似的三級(jí)結(jié)構(gòu)，能夠更有效地誘導(dǎo)抗IPNV 反應(yīng)[36]。與VLP 相似的還有亞病毒顆粒（subviral particles，SVP）。它們具有病毒的自身免疫原性和生物活性，但是不帶有病毒的遺傳物質(zhì)，不具有傳染性，是一種安全有效的疫苗形式。

3.2.1 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)

Manning 和Leong[37]用質(zhì)粒pTA1 在大腸桿菌中表達(dá)了IPNV A 段編碼的完整cDNA，獲得了大量IPNV 蛋白。用細(xì)菌裂解物浸泡免疫虹鱒，攻毒后虹鱒的死亡率為4%，而對(duì)照組死亡率達(dá)到44%。該研究說明亞單位疫苗可以為魚苗提供實(shí)質(zhì)性的保護(hù)。Frost 等[38]在大腸桿菌中表達(dá)了重組VP2 蛋白，可在大西洋鮭體內(nèi)產(chǎn)生IPNV 特異性抗體。Dadar 等[39]構(gòu)建了IPNV VP2-VP3 融合基因的重組質(zhì)粒，利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)在體外表達(dá)，獲得了高產(chǎn)量的VP2-VP3 重組蛋白。用該重組蛋白注射方式虹鱒，相對(duì)保護(hù)率可達(dá)83%。Tamer 等[13]利用大腸桿菌表達(dá)IPNV VP2 蛋白，結(jié)合ISA 763A 佐劑制備重組亞單位疫苗，對(duì)虹鱒的相對(duì)保護(hù)率為70%。

3.2.2 乳酸桿菌表達(dá)系統(tǒng)

劉敏等[40]利用pPG1 表達(dá)載體在干酪乳桿菌中表達(dá)了IPNV VP3 基因，為之后研制乳酸桿菌口服疫苗奠定了基礎(chǔ)。Zhao 等[41]構(gòu)建了pPG1-VP2-VP3 重組質(zhì)粒，在干酪乳桿菌表達(dá)，獲得了pPG1-VP2-VP3 重組蛋白。該疫苗可誘導(dǎo)虹鱒體內(nèi)產(chǎn)生特異性抗血清IgM，并降低IPNV 在虹鱒體內(nèi)的載量。這些研究表明，乳酸桿菌表達(dá)系統(tǒng)可用作疫苗設(shè)計(jì)。劉佳琪等[42]從虹鱒腸道中分離出了一種植物乳桿菌，并利用分離出的植物乳桿菌表達(dá)了IPNV VP2-VP3重組蛋白，經(jīng)過初次免疫和加強(qiáng)免疫后，對(duì)虹鱒的保護(hù)率可達(dá)100%，表明利用虹鱒體內(nèi)分離出來的宿主菌研制疫苗的保護(hù)效果更好，為口服疫苗的開發(fā)提供了新的思路。Duan 等[43]在干酪乳桿菌的疫苗基礎(chǔ)上加入虹鱒趨化因子CK6，誘導(dǎo)了虹鱒體內(nèi)更強(qiáng)烈的特異性免疫反應(yīng)，保護(hù)效果更好。Chen 等[29]在加入了CK6 疫苗的基礎(chǔ)上添加嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）黏附基因（AHA1）。將AHA1 作為腸上皮細(xì)胞的靶向分子，能黏附在上皮細(xì)胞并延長(zhǎng)抗原在腸道內(nèi)的保留時(shí)間，增強(qiáng)乳酸菌疫苗的免疫原性。在加入AHA1 后，口服免疫能更迅速、更精確地將IPNV VP2 蛋白送到腸上皮細(xì)胞，使機(jī)體產(chǎn)生顯著水平的抗IPNV 血清IgM 和黏膜IgT 抗體應(yīng)答。干酪乳桿菌在和靶向分子、趨化因子聯(lián)合使用后，保護(hù)效果良好。但是構(gòu)建乳酸桿菌疫苗通常使用抗生素耐藥性作為選擇性標(biāo)志物，會(huì)對(duì)生物安全構(gòu)成威脅。Hua 等[44]去掉了pPGF-612 中的氯霉素基因，將其作為載體在干酪乳桿菌中表達(dá)了以EGFP 綠色熒光蛋白為標(biāo)記的CK6-VP2 融合蛋白，該疫苗可有效抑制IPNV 在虹鱒體內(nèi)的復(fù)制。在未來的一段時(shí)間，乳酸桿菌疫苗的研制主要以無抗生素疫苗為主。

3.2.3 酵母表達(dá)系統(tǒng)

Allnutt 等[45]在釀酒酵母中表達(dá)了IPNV VP2 基因，VP2 基因在酵母中形成了一種20 nm 的SVP。將rVP2-SVP 通過注射和口服兩種途徑接種虹鱒，檢測(cè)到了IPNV 特異性抗體，用IPNV Buh 毒株對(duì)虹鱒攻毒，接種疫苗組病毒載量比對(duì)照組更低。該研究證明了SVP 作為疫苗開發(fā)的潛力。Dhar 等[46]將人類致癌基因c-myc 插入到IPNV VP2 蛋白自組裝的SVP 中，在釀酒酵母中成功表達(dá)，并在虹鱒體內(nèi)誘導(dǎo)了抗IPNV 免疫反應(yīng)。賀文斌[47]建立了IPNV酵母表面展示系統(tǒng)，將IPNV VP2 蛋白在酵母表面成功表達(dá)，用該疫苗免疫虹鱒發(fā)現(xiàn)，免疫虹鱒IgM、IgT、CD4、CD8 等免疫基因均顯著上調(diào)；虹鱒體內(nèi)IPNV 載量顯著降低。這些結(jié)果表明，釀酒酵母是一種非常好的疫苗表達(dá)系統(tǒng)，以釀酒酵母研發(fā)的IPNV 口服疫苗具有較好的免疫效果。

3.2.4 昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)

昆蟲表達(dá)系統(tǒng)是將抗原基因整合到桿狀病毒中，隨桿狀病毒在昆蟲細(xì)胞中大量繁殖獲得高產(chǎn)量的蛋白。桿狀病毒的宿主專一性強(qiáng)，通常不會(huì)造成實(shí)驗(yàn)室的污染，安全性較高[35]。Shivappa 等[48]利用桿狀病毒在昆蟲細(xì)胞和幼蟲中表達(dá)了IPNV 的A 片段，獲得了高產(chǎn)量的IPNV 蛋白，結(jié)構(gòu)蛋白自組裝形成VLP。用獲得的VLP 抗原加上油佐劑制成疫苗免疫大西洋鮭，相對(duì)保護(hù)率為27%。該研究結(jié)果表明，昆蟲表達(dá)系統(tǒng)可用于IPNV 疫苗的研制。

3.3 活載體疫苗

活載體疫苗是將抗原基因通過基因工程技術(shù)插入到弱毒或者無毒的毒株中構(gòu)建重組病毒。重組病毒可通過浸泡或者自然感染的方式將目的基因運(yùn)送到宿主體內(nèi)，隨著重組病毒在宿主體內(nèi)不斷繁殖，目的基因也隨之不斷表達(dá)，誘發(fā)相應(yīng)的免疫反應(yīng)[49]。Guo 等[50]用IPNV VP2 基因和VP2 CEO 基因替代IHNV 的NV 基因，構(gòu)建了兩種重組病毒（rIHNV-IPNV VP2 和rIHNV-IPNV VP2 COE），兩種重組病毒對(duì)虹鱒魚苗的保護(hù)效果可達(dá)50%～65%。Chen 等[51]用IPNV 的VP2 基因取代了rIHNV 主鏈的NV 基因，構(gòu)建rIHNV-N438A-ΔNV-VP2 重組病毒。該重組病毒對(duì)IPNV Sp 血清型感染的相對(duì)存活率可達(dá)88.9%。Zhao 等[52]將IPNV 的VP2 基因插入到IHNV U 型基因組的Blk94 毒株的P 和M 基因之間，構(gòu)建了rBlk94-VP2 重組病毒。該重組病毒可顯著降低IPNV 在脾臟、肝臟和前腎中的載量。以上研究都表明，IHNV 的弱毒毒株可作為活疫苗開發(fā)的載體，保護(hù)虹鱒免受兩種或多種疾病的感染，廣泛應(yīng)用在IPN 疫苗研制中。Li 等[53]將VP2 基因整合到腺病毒中，該重組病毒在人胚腎細(xì)胞（human embryonic kidney cells，HEK-293）中成功表達(dá)VP2基因。用重組病毒浸泡免疫虹鱒，相對(duì)保護(hù)率可達(dá)88.24%。以腺病毒為載體開發(fā)出的IHNV 和IPNV的二聯(lián)活載體疫苗，浸泡免疫虹鱒，IPNV 攻毒后的相對(duì)存活率可達(dá)86.84%[54]。

活載體疫苗接種方便，可通過自然感染的方式接種魚苗，容易引起群體免疫。在進(jìn)入宿主體內(nèi)后，抗原基因會(huì)隨著載體在體內(nèi)復(fù)制，可以引起長(zhǎng)時(shí)間的免疫反應(yīng)，且免疫效果好，這些優(yōu)勢(shì)讓活載體疫苗成為一類新型疫苗。

4 展望

近年來，IPN 的暴發(fā)使我國(guó)鮭鱒魚養(yǎng)殖業(yè)遭受到了嚴(yán)重的阻礙。大多數(shù)疫苗停留在實(shí)驗(yàn)室水平，沒有商業(yè)化產(chǎn)品投入市場(chǎng)。目前，IPN 滅活疫苗的制備技術(shù)已經(jīng)成熟，最佳滅活方式、最佳接種劑量以及最佳免疫方式已經(jīng)確定，最有可能成為首批商業(yè)化疫苗。與此同時(shí)，基因工程疫苗已取得突破性進(jìn)展?；蚬こ淌切聲r(shí)代的產(chǎn)物，各地區(qū)對(duì)基因工程疫苗的態(tài)度以及政策各不相同，其應(yīng)用受到一定得限制。隨著人們對(duì)漁用疫苗的認(rèn)識(shí)加深及基因工程的飛速發(fā)展，將有希望獲得更加便捷、安全、高效的IPN 疫苗，促進(jìn)鮭鱒魚養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。