多糖類免疫增強(qiáng)劑在魚類養(yǎng)殖中的應(yīng)用研究進(jìn)展

李蕾，蔣昕彧，朱雷，孔祥會(huì)

（河南師范大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453007）

近年來，隨著高密度集約化養(yǎng)殖的大規(guī)模推廣應(yīng)用，養(yǎng)殖水環(huán)境持續(xù)惡化，水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物抵御病原入侵的能力下降、疾病頻發(fā)，造成重大經(jīng)濟(jì)損失[1]。目前應(yīng)對病害常用的措施是藥物防控，而頻繁使用抗生素后，細(xì)菌基因突變產(chǎn)生耐藥基因，改變自身的代謝途徑，產(chǎn)生耐藥菌等問題，降低了水產(chǎn)品質(zhì)量，影響人類健康[2]。藥物防控的諸多弊端使免疫防控逐漸成為水產(chǎn)養(yǎng)殖的重要議題。

免疫增強(qiáng)劑（Immunostimulants）是指具有促進(jìn)或誘發(fā)宿主防御反應(yīng)，增強(qiáng)生物機(jī)體抗病能力的一類物質(zhì)[3]。水產(chǎn)養(yǎng)殖中，常用多糖、白細(xì)胞介素（Interleukin，IL）、維生素E、CpG 寡脫氧核苷酸等生物活性物質(zhì)作免疫增強(qiáng)劑[4-6]。

多糖（Polysaccharide）是一類從細(xì)菌、真菌和動(dòng)植物等生物中提取獲得，由10 個(gè)以上單糖組成的聚合糖高分子碳水化合物。生產(chǎn)中，常將具有生物活性，能激活機(jī)體參與抵御病原微生物入侵，增強(qiáng)免疫應(yīng)答能力的多糖稱作免疫增強(qiáng)劑。它能增加抗體效價(jià)，增強(qiáng)白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的吞噬能力，提高淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，發(fā)揮抵御病原入侵和增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答的功能[4,5]。目前，多糖類免疫增強(qiáng)劑的研究受到廣泛關(guān)注，廣泛應(yīng)用在魚類養(yǎng)殖中。根據(jù)來源，免疫增強(qiáng)劑可分為植物來源、微生物來源和動(dòng)物來源3 類（表1）[6]。

表1 各種多糖免疫增強(qiáng)劑對魚類免疫功能的影響Tab.1 Effects of various polysaccharide immunoenhancers on immune function of Fish

1 植物來源的多糖

天然植物多糖屬于植物體內(nèi)一類重要的生物大分子，包含多種活性成分，可作為天然免疫調(diào)節(jié)劑。在飼料中添加植物多糖可以促進(jìn)魚類生長，調(diào)節(jié)免疫力，預(yù)防病原微生物感染[7]，與抗生素相比，具有無耐藥性和無殘留等優(yōu)點(diǎn)[8]。

1.1 黃芪多糖

黃芪多糖（Astragalus polysaccharide，APS）是從黃芪中分離純化得到的多糖。它的單糖為鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖[9]。APS 具有調(diào)節(jié)腸道菌群、提高動(dòng)物抗氧化能力、調(diào)控炎癥反應(yīng)、維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)、增強(qiáng)免疫功能等作用[9,10]。草魚（Ctenopharyngodon idella）飼料中添加APS 可以提高超氧化物歧化酶（SOD）和過氧化氫酶（CAT）的活性進(jìn)，提高抗氧化能力；可以調(diào)節(jié)腸道微生物的多樣性，激活免疫相關(guān)基因表達(dá)，保護(hù)魚體免受病原菌感染。SOD 和CAT 是細(xì)胞抗氧化系統(tǒng)中的兩個(gè)中心酶，多糖能顯著提高二者的活性，具有明顯的抗氧化效果，保護(hù)魚體免受氧化損傷。多糖進(jìn)入腸道后，被腸道微生物利用，產(chǎn)生代謝產(chǎn)物，改變腸道菌群結(jié)構(gòu)，減少病原體的增殖[12]。鯽（Carassius auratus）飼料中添加不同濃度的APS 可調(diào)節(jié)先天免疫能力，提高鯽抗嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）感染的能力和成活率，促進(jìn)生長，但超過100 mg/kg 并不能進(jìn)一步提高魚體生長發(fā)育和先天免疫力[13]。劉金海等[14]發(fā)現(xiàn)，半滑舌鰨（Cynoglossus semilaevis）攝食不同劑量的APS 后，血液中白細(xì)胞吞噬活性、溶菌酶（LZ）活性、過氧化物酶活性、酸/堿性磷酸酶活性和抗體含量顯著增強(qiáng)和增加，較佳添加劑量為600 mg/kg。大菱鲆（Scophthalmus maximus）攝食含150 mg/kg APS 的飼料，可顯著提高魚體生長性能和抗氧化活性，還可以調(diào)控Toll 樣受體（TLRs）如TLR5α、5β、8、21 以及MyD88 和NF-κB p65 的基因表達(dá)。這些基因在TLRs/NF-κB 信號(hào)通路中起著至關(guān)重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用。APS 可激活TLRs/NF-κB 信號(hào)通路中關(guān)鍵細(xì)胞因子來調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答[15]。Zhang 等[16]采用薄膜分散超聲法制備了黃芪多糖脂質(zhì)體（Astragalus polysaccharide liposome，APSL），發(fā)現(xiàn)APS 和APSL 在體內(nèi)外均能提高大黃魚（Larimichthys crocea）非特異性免疫酶活性和抗氧化能力，增強(qiáng)頭腎巨噬細(xì)胞的M1 巨噬細(xì)胞的典型特征——NO 生成和吞噬活性，顯著上調(diào)促炎細(xì)胞因子（IL-1β、IL-6、IL-8 和TNF-α）、IFN-γ 和iNOS 的表達(dá)水平。巨噬細(xì)胞是一種重要的免疫細(xì)胞，添加多糖后巨噬細(xì)胞經(jīng)歷經(jīng)典或替代激活，分化為M1 或M2 巨噬細(xì)胞。M1 巨噬細(xì)胞以誘導(dǎo)呼吸爆發(fā)、產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子和合成誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS），來參與消除病原體和引發(fā)炎癥。APSL 的效果明顯優(yōu)于APS，可作為APS 的潛在藥物載體。孫林浩等[17]研究發(fā)現(xiàn)，APS 可以抑制大黃魚頭腎巨噬細(xì)胞經(jīng)丙二醇甲醚醋酸酯（PMA）誘導(dǎo)后的呼吸爆發(fā)活性，增強(qiáng)經(jīng)脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）刺激的巨噬細(xì)胞的吞噬活性，提高巨噬細(xì)胞TNF-α、IL-1β 和IL-6 基因的表達(dá)量，調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞免疫能力。Yu 等[18]研究發(fā)現(xiàn)，添加0.10%的APS 是促進(jìn)尖吻鱸（Lates calcarifer）生長性能和抗哈維氏弧菌能力的最適水平，但0.20%實(shí)驗(yàn)組的生長性能顯著下降，過量添加APS 對魚體不利。上述研究得出，APS 的適宜劑量范圍為0.005%～0.200%。

1.2 枸杞多糖

從枸杞中提取的水溶性枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharide，LBP）一般由6 種單糖（半乳糖、葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖和木糖）和18種氨基酸組成。它們的結(jié)構(gòu)是β-葡聚糖，（1→6）-β-半乳糖基殘基的骨架與生物功能相關(guān)[19]。LBP可通過增強(qiáng)T 細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)和體液免疫反應(yīng)，提高機(jī)體免疫力[20]。LBP 能提高鯧鲹（Trachinotus ovatus）抗氧化能力和固有免疫能力，適宜添加量為0.10%[21]。在飼料中添加LBP，通過激活巨噬細(xì)胞，促進(jìn)脾組織中IL-1β 基因的表達(dá)，提升了尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）的生長速率，增強(qiáng)了補(bǔ)體C3 活性。補(bǔ)體是血液中一組具有酶活性的蛋白質(zhì)系列，通過調(diào)節(jié)吞噬、呼吸爆發(fā)、趨化和細(xì)胞裂解等在免疫中發(fā)揮關(guān)鍵作用[22]。在飼料中添加0.5～2.0 g/kg LBP 可以顯著提高雜交石斑魚肝臟抗氧化酶活性以及免疫相關(guān)基因表達(dá)，調(diào)控肝臟的炎癥反應(yīng)，抑制細(xì)胞凋亡，改善雜交石斑魚的生長性能和飼料利用率[23]。Mo 等[24]在草魚和尼羅羅非魚飼料中添加2.0 g/kg 和20 g/kg 的LBP，發(fā)現(xiàn)2.0 g/kg 顯著提高了抗蛋白酶活性、血清總免疫球蛋白和血清殺菌活性、生長性能和成活率，是合適選擇。根據(jù)以上研究得出，LBP 的適宜添加劑量范圍為0.05%～2.00%。

1.3 玉屏風(fēng)多糖

玉屏風(fēng)多糖（Yu-Ping-Feng polysaccharides，YPF-P）是由黃芪、白術(shù)和防風(fēng)三味中草藥按2∶2∶1 重量比組成的復(fù)合中草藥多糖。尹福泉等[25]研究發(fā)現(xiàn)，YPF-P 可以通過改善草魚腸道黏膜的形態(tài)來提高草魚腸道的吸收功能，還可通過提高頭腎IL-2 和IFN-γ 基因的表達(dá)增強(qiáng)魚體免疫力，其最適添加量為1.6 g/kg。楊虹等[26]用YPF-P 復(fù)合益生菌飼喂烏鱧（Channa argus），提高了烏鱧的腸絨毛高度、降低了隱窩深度以及增加肌層厚度，保證腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的完整性，還顯著提高了溶菌酶（LZM）和SOD 的活性。YPF-P 可以提高草魚生長性能，促進(jìn)免疫器官發(fā)育，通過提高肝胰臟中SOD 和CAT 活力來提高魚體抗氧化能力，較適添加劑量為1.6 g/kg，而添加量達(dá)到2.0 g/kg 時(shí)，與對照組相比，肝胰臟中SOD、CAT 活力下降，抗氧化能力減弱，即添加量超過一定的范圍就會(huì)對機(jī)體產(chǎn)生不良影響[27]。根據(jù)以上研究得出，YPF-P 的適宜添加劑量范圍為0.08%～0.20%。

1.4 海藻多糖

海藻多糖（Seaweed polysaccharide）具有廣泛的生物活性，包括促進(jìn)魚體生長、調(diào)節(jié)免疫、抑制炎癥細(xì)胞和提高抗氧化能力等[28]。從大團(tuán)扇藻（Padina gymnospora）中提取多糖飼喂鯉，不同劑量均能顯著提高鯉血清溶菌酶、髓過氧化物酶活性，上調(diào)鯉IL-1β 和C 型溶菌酶等免疫相關(guān)基因的表達(dá)，保護(hù)魚體免受嗜水氣單胞菌和遲緩愛德華氏菌的感染[29]。鯽飼料中分別添加4%的4 種海藻（滸苔Enteromorpha prolifera、條斑紫菜Porphyra yezoensis、銅藻Sargassum horneri 和壇紫菜Porphyra haitanensis）多糖，均可刺激機(jī)體免疫器官發(fā)育，滸苔組可顯著提高堿性磷酸酶和血清中球蛋白總含量，提高抵抗病毒能力，滸苔組和銅藻組可顯著提高抗嗜水氣單胞菌感染能力[30]。Zhou 等[31]研究發(fā)現(xiàn)，40 g/kg 的滸苔多糖可促進(jìn)鯽的生長，提高腸道消化酶活性和血清中SOD 和LYZ 等酶的活性，增強(qiáng)對嗜水氣單胞菌的抵能力。從刺松藻（Codium fragile）中提取硫酸化多糖飼喂石斑魚，0.1%的多糖可增強(qiáng)石斑魚的免疫水平，抵御遲緩愛德華氏菌的感染[32]。3 g/kg 的條斑紫菜多糖可以顯著提高草魚生長性能和補(bǔ)體C3/C4 活性，減少細(xì)菌或病毒感染[33]。Marian等[34]從石莼（Ulva ohnoi）中提取硫酸化多糖，腹腔注射塞內(nèi)加爾鰨（Solea senegalensis），能通過替代和經(jīng)典的補(bǔ)體途徑來激活、調(diào)節(jié)補(bǔ)體，顯著上調(diào)趨化因子、蛋白酶體和抗原呈遞相關(guān)的基因表達(dá)，誘導(dǎo)急性期蛋白、抗菌肽和補(bǔ)體系統(tǒng)相關(guān)基因的表達(dá)，以維持機(jī)體的動(dòng)態(tài)平衡，防止感染病原后宿主細(xì)胞的損傷。以上研究表明，海藻多糖能有效提高魚體生長性能和免疫能力，改善水生動(dòng)物的健康狀況，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中具有較大的應(yīng)用前景，適宜添加劑量范圍為0.01%～8.00%。

1.5 其他植物多糖

還有一些其他植物多糖廣泛應(yīng)用在水產(chǎn)養(yǎng)殖中。無花果（Ficus carica）、板藍(lán)根（Radix isatidis）和五味子（Schisandra chinensis）多糖均可以顯著提高鯽溶菌酶活性，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，增強(qiáng)機(jī)體對嗜水氣單胞菌的抵抗力[35]。大鱗鲃（Luciobarbus capito）飼料中添加不同劑量的地黃多糖（Radix rehmanniae Preparata polysaccharides），可以顯著上調(diào)腸道、腎臟和脾中促炎細(xì)胞因子IL-1β、IL-8、TNF-α 和IFN-γ的表達(dá)，下調(diào)抑炎細(xì)胞因子IL-10 和TGF-β 的表達(dá)，提高魚體對嗜水氣單胞菌的抵抗能力，其中以0.2%效果最好。促炎細(xì)胞因子表達(dá)水平是炎癥反應(yīng)是否發(fā)生的指標(biāo)，上調(diào)即參與炎癥反應(yīng)，抗炎細(xì)胞因子是免疫系統(tǒng)中具有多效性作用的調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子，不僅抑制過度的細(xì)胞因子釋放，還控制炎癥過程[36]。當(dāng)歸多糖能提高鯧鲹和點(diǎn)帶石斑魚（Epinephelus malabaricus）肝臟中超氧化物歧化酶的活性和抗氧化能力，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，提高魚體免疫力[37,38]。

2 微生物來源的多糖

微生物多糖是細(xì)菌、真菌或藍(lán)藻等微生物代謝產(chǎn)生的一類代謝中間產(chǎn)物。微生物多糖具有植物多糖不具備的優(yōu)良性質(zhì)，如生產(chǎn)周期短，不受地理環(huán)境、氣候和其他自然條件等因素影響。微生物多糖主要有葡聚糖、脂多糖和真菌多糖等，具有抗菌、抗氧化和調(diào)節(jié)免疫能力等功能[39]。

2.1 葡聚糖

葡聚糖（Glucans）是一種高分子葡萄糖聚合物。其中，β-葡聚糖是目前最受關(guān)注的葡聚糖。β-葡聚糖是由D-吡喃葡糖殘基組成的β-連接的多糖，可從蘑菇、酵母、燕麥、大麥、海藻、藻類、真菌和細(xì)菌細(xì)胞壁中提取[40]。然而，β-葡聚糖的結(jié)構(gòu)多樣，來自微生物的β-葡聚糖主要由β（1,3）連接的葡萄糖和幾個(gè)β（1,6）連接的分支構(gòu)成，而來自植物的β-葡聚糖主要由β（1,3）和β（1,4）組成，沒有分支。來自酵母的β-（1,3/1,6）-葡聚糖常被用作免疫增強(qiáng)劑。β-葡聚糖通過與其特定受體Dectin-1 結(jié)合來激活免疫細(xì)胞，Dectin-1 是一種表達(dá)在巨噬細(xì)胞表面的c 型凝集素受體，β-葡聚糖/Dectin-1 復(fù)合體通過與TLR2 及其信號(hào)通路聯(lián)合而激活巨噬細(xì)胞，通過分泌TNF-α 而引起促炎反應(yīng)[41]。酵母細(xì)胞壁中提取的β（1,3/1,6）-葡聚糖可以通過提高細(xì)鱗肥脂鯉（Piaractus mesopotamicus）白細(xì)胞的呼吸活性和溶菌酶水平來應(yīng)對嗜水氣單胞菌的感染[42]。Wei 等[39]將酵母菌β（1,3/1,6）-葡聚糖作為哈維氏弧菌（Vibrio harveyi）滅活疫苗佐劑免疫石斑魚后，魚體脾臟IgM、MHC-Iα、TNF-α、IL-1β 和IL-16 的表達(dá)水平明顯升高，血液中的抗體效價(jià)、溶菌酶和超氧化物歧化酶活性提高，相對免疫保護(hù)率達(dá)（68.0±5.7）%。IgM是一種通用抗體，是硬骨魚特異性體液免疫反應(yīng)的唯一組成部分，MHC-Iα 負(fù)責(zé)呈遞結(jié)合的外源多肽，并與參與細(xì)胞免疫的T 細(xì)胞受體特異性相互作用。IL-1β、IL-16和TNF-α 在啟動(dòng)促炎細(xì)胞因子級聯(lián)、巨噬細(xì)胞招募和激活以及刺激適應(yīng)性免疫反應(yīng)中起重要作用。Lee 等[43]將β-葡聚糖和土霉素混合飼喂石斑魚，發(fā)現(xiàn)混合使用比單獨(dú)使用一種物質(zhì)可更好地抵抗細(xì)菌感染。葡聚糖的適宜添加劑量范圍為0.05%～0.80%。

2.2 脂多糖

脂多糖（LPS）是一種典型的病原體相關(guān)分子模式（PAMP），位于革蘭氏陰性菌外膜的外層，由三種不同的結(jié)構(gòu)組成：類脂A、核心寡糖和O-抗原。脂A 部分是一種基于氨基葡萄糖的磷脂，具有內(nèi)毒素的性質(zhì)，通過識(shí)別哺乳動(dòng)物的模式識(shí)別受體（PRRs）來激活先天性免疫反應(yīng)[44]。小劑量的LPS 可能通過激活補(bǔ)體替代途徑、巨噬細(xì)胞的吞噬活性以及B 和T 淋巴細(xì)胞的增殖等方式提高魚體先天免疫水平[45]。給巴丁魚（Pangasianodon hypophthalmus）注射3 mg/kg 的LPS，提高了補(bǔ)體活性和抗體效價(jià)，增強(qiáng)了先天免疫應(yīng)答及對遲緩愛德華氏菌的抵抗力[46]。在巴塔野鯪（Labeo bata）飼料中添加100 mg/kg 的LPS，不僅可以提高血液學(xué)參數(shù)（總紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、總白細(xì)胞計(jì)數(shù)、總血清蛋白、白蛋白和球蛋白）、固有免疫參數(shù)（呼吸爆發(fā)、血清溶菌酶、髓過氧化物酶和血清殺菌活性）和免疫基因表達(dá)（C3、β-2 微球蛋白、溶菌酶、轉(zhuǎn)鐵蛋白、IFN-1、IFN-γ），還能提高遲緩愛德華氏菌感染后的存活率[47]。脂多糖的適宜添加劑量范圍為0.005%～0.015%。

2.3 真菌多糖

真菌多糖廣泛存在于真菌的細(xì)胞壁中，是由10個(gè)以上的單糖以糖苷鍵連接而成的高分子聚合物，具有復(fù)雜的生物學(xué)活性和功能，其中最主要的是免疫調(diào)節(jié)活性。目前研究比較多的真菌多糖主要包括香菇多糖（Lentinan，LNT）、靈芝多糖（Ganoderma lucidum polysaccharides，GLP）和雙孢蘑菇多糖（Agaricus bisporus polysaccharides，ABP）等。480 mg/kg 的香菇多糖飼喂歐洲鰻鱺（Anguilla anguilla）可促進(jìn)魚體生長，降低血清轉(zhuǎn)氨酶活性和肝臟丙二醛含量，改善肝臟健康狀況[48]。飼料中添加靈芝多糖，可促進(jìn)羅非魚（Oreochromis sp.）的生長，顯著增強(qiáng)抗氧化酶活性，提高魚體免疫力[49]。Liu 等[50]用靈芝多糖孵育四氯化碳處理過的鯉肝細(xì)胞，可以抑制肝細(xì)胞脂質(zhì)過氧化、提高抗氧化酶活性、抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，減輕肝細(xì)胞炎癥反應(yīng)的損傷。在草魚飼料中添加1 mg/kg 的雙孢蘑菇多糖后，抗嗜水氣單胞菌能力、抗氧化能力和適應(yīng)性免疫應(yīng)答能力更強(qiáng)，炎癥相關(guān)基因的表達(dá)水平受到顯著調(diào)控[51]。真菌多糖的適宜添加劑量范圍為0.000 1%～0.480 0%。

3 動(dòng)物來源的多糖

動(dòng)物多糖常存在于動(dòng)物的組織和器官中，可改善水產(chǎn)動(dòng)物機(jī)體的生長性能，提高免疫能力[52]。目前廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)中的動(dòng)物多糖主要是甲殼素和殼聚糖。

3.1 甲殼素

甲殼素（Chitin）又稱為甲殼質(zhì)、幾丁質(zhì)，化學(xué)名稱是（1,4）-2-乙酰氨基-2-脫氧-β-D-葡聚糖，是自然界中合成量僅次于纖維素的第二大可再生自然資源，是廣泛存在于甲殼類的多糖物質(zhì)，具有無毒、可生物降解和生物相容性等優(yōu)點(diǎn)[53]。將0.2%甲殼素添加到飼料中投喂），顯著增強(qiáng)了卡特拉鲃（Catla catla）頭腎細(xì)胞中超氧陰離子和NO 的產(chǎn)生，提高白細(xì)胞髓過氧化物酶含量和血清溶菌酶活性[54]。南亞黑鯪（Labeo rohita）飼料中添加1%甲殼素，飼喂2 周后抗氧化能力顯著提高，同時(shí)增強(qiáng)抵御單殖吸蟲感染的能力。甲殼素可以通過與其受體之間的相互作用，調(diào)節(jié)魚類的免疫功能，還可在腸道環(huán)境中降解為殼聚糖，調(diào)節(jié)微生物群，保護(hù)魚體[55]。1.0 g/kg 的N-乙酰-D-氨基葡萄糖負(fù)載甲殼素納米粒作為尼羅羅非魚飼料添加劑，提高了羅非魚的生長速率、總成活率，增強(qiáng)了中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)和溶菌酶活性，增強(qiáng)了尼羅羅非魚的抗病能力[56]。甲殼素的適宜添加劑量范圍為0.025%～2.000%。

3.2 殼聚糖

殼聚糖（Chitosan，CS）是甲殼素脫乙?；苌?，化學(xué)結(jié)構(gòu)是β-（1,4）-2-氨基-2-脫氧-D-葡聚糖。殼聚糖在體內(nèi)的免疫刺激作用可能歸因于其氨基部分，促進(jìn)各種炎癥細(xì)胞的功能，如巨噬細(xì)胞和多形核白細(xì)胞，以及不同的細(xì)胞因子，來促進(jìn)魚體生長、抵抗病毒感染和增強(qiáng)免疫應(yīng)答[57]。草魚飼料中添加5 g/kg 的殼聚糖，可以顯著提高血清溶菌酶、SOD 活性、AKP 活性、補(bǔ)體C3 含量和血液白細(xì)胞吞噬活性，從而增強(qiáng)魚體的免疫能力[58]。100 μg殼聚糖作為傳染性脾腎壞死病毒（Infectious spleen and kidney necrosis virus，ISKNV）滅活疫苗的佐劑，可以誘導(dǎo)鱖（Siniperca chuatsi）脾和腎中免疫細(xì)胞因子的表達(dá)，抑制病毒的復(fù)制來提高抗病毒能力[59]。用0.05 g/kg 的殼聚糖和納米殼聚糖負(fù)載斜發(fā)沸石（Clinoptilolite）飼喂，提高了虹鱒（Oncorhynchus myk iss）生長性能、血清生化參數(shù)和消化酶活性，增強(qiáng)了免疫應(yīng)答能力[60]。殼聚糖的適宜添加劑量范圍為0.005%～10%。

4 小結(jié)和展望

我國的多糖資源豐富，活性多糖具有無污染、無藥物殘留以及病原菌不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)，能增強(qiáng)機(jī)體免疫功能而無毒副作用，符合綠色健康養(yǎng)殖模式。多糖不僅可以提高水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物抗病力、存活率和促進(jìn)生長，與疫苗混合使用還能作為佐劑，增強(qiáng)疫苗的抗原效價(jià)和作用時(shí)效，應(yīng)用前景十分廣闊。然而，多糖免疫增強(qiáng)劑在生產(chǎn)中的應(yīng)用仍存在一些問題：（1）多糖的結(jié)構(gòu)特征與生物活性之間密切相關(guān)。多糖分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜、多樣，與生物活性之間的相關(guān)性還有待研究[61]；（2）多糖的作用效果與給藥方式有關(guān)。注射法引起的免疫反應(yīng)快，但持續(xù)時(shí)間短，容易使機(jī)體產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)；口服法魚體受到的應(yīng)激性刺激較小，但病魚不攝食時(shí)，口服法不能實(shí)施；（3）多糖的投喂劑量、頻次以及投喂時(shí)間直接影響多糖的應(yīng)用效果。有些免疫增強(qiáng)劑在高劑量下，不僅不會(huì)增強(qiáng)免疫效果，反而還會(huì)抑制免疫反應(yīng)，合適的多糖添加量才能促進(jìn)魚類的免疫力。多糖的投喂時(shí)間和周期對魚體增強(qiáng)免疫效果非常關(guān)鍵，有的多糖在魚體發(fā)病前使用，而有的則是在魚體感染后使用?？傊?，多糖的理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)特征、使用方法、劑量和期限以及對魚類免疫的影響較為復(fù)雜多樣，如何科學(xué)合理地使用多糖仍需進(jìn)一步深入研究。