抗性糊精對(duì)急性潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的保護(hù)作用

秦妮娜，馬志花，張晨一，陸陽(yáng)，陳立勇,3，朱志勇，李朝蘋

1(山東大學(xué)齊魯醫(yī)學(xué)院，公共衛(wèi)生學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與毒理學(xué)系，山東 濟(jì)南，250012)2(山東第一醫(yī)科大學(xué) 公共衛(wèi)生學(xué)院， 山東 濟(jì)南，250117)3(山東大學(xué)齊魯醫(yī)院，臨床營(yíng)養(yǎng)科，山東 濟(jì)南，250063)4(山東省康復(fù)醫(yī)院，外科，山東 濟(jì)南，250109) 5(山東第一醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院，臨床營(yíng)養(yǎng)科，山東 濟(jì)南，250021)

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis, UC)是一種病因未明的非特異性、反復(fù)發(fā)作的腸道疾病，是炎癥性腸病(inflammatory bowel disease, IBD)的一種，臨床以腹痛、腹瀉、血便和黏液膿血便為主要癥狀[1]。UC最初見于西歐和北美，在亞洲等國(guó)家鮮有報(bào)道；但由于飲食習(xí)慣、生活節(jié)奏等改變，中國(guó)UC的發(fā)病率快速增長(zhǎng)，現(xiàn)已成為我國(guó)消化系統(tǒng)常見疾病之一[2]。UC的發(fā)病機(jī)制尚未明確，但最新的研究表明，遺傳易感性、環(huán)境因素、免疫應(yīng)答異常、腸道微生態(tài)紊亂等與其發(fā)生和發(fā)展有關(guān)[3]。飲食既是一種重要的環(huán)境因素，又是影響腸道微生物組成的重要因素，在UC發(fā)生、發(fā)展及綜合管理過程中起著重要作用。飲食因素，特別是膳食纖維攝入量，與已確診UC患者的臨床發(fā)作風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)[4]。

抗性糊精(resistant dextrin，RD)是一種以淀粉為原料、經(jīng)過一系列加工純化而成的低分子水溶性膳食纖維。因其具有較低黏度、良好的水溶性和抗消化酶解等特性，被廣泛應(yīng)用于食品加工及功能食品的研發(fā)等領(lǐng)域[5]。近年來，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，抗性糊精具有控制體重、調(diào)節(jié)血糖、降低血脂、促進(jìn)微量元素吸收和調(diào)節(jié)腸道菌群等功能[6-8]，這與其不易被胃和小腸消化吸收，能夠進(jìn)入結(jié)腸被結(jié)腸微生物發(fā)酵利用有關(guān)。WANG等[9]使用抗性麥芽糊精干預(yù)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠，發(fā)現(xiàn)抗性麥芽糊精可降低腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、干擾素-γ(interferon-γ，IFN-γ)、白介素-1β(interleukin -1β，IL-1β)和IL-17的水平并減輕腸道炎癥。然而關(guān)于抗性糊精對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠腸黏膜屏障及腸道菌群影響的研究較少。

本研究以雄性C57BL/6 J小鼠為對(duì)象，采用葡聚糖硫酸鈉(dextran sulfate sodium，DSS)誘導(dǎo)建立急性潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型，探討抗性糊精對(duì)小鼠腸道損傷的保護(hù)作用，并從腸道菌群的角度分析可能的機(jī)制。旨在為IBD的防治提供營(yíng)養(yǎng)學(xué)思路，為進(jìn)一步拓寬抗性糊精應(yīng)用范圍提供一定的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要材料與試劑

抗性糊精，由山東百龍創(chuàng)園生物科技股份有限公司提供，其主要組分如下：膳食纖維92.8%，蛋白質(zhì)0.8%，脂肪1.8%，水分4.6%；DSS(分子質(zhì)量36～50 kDa)，美國(guó)MP；糞便隱血檢測(cè)試劑盒(聯(lián)苯胺法)，北京雷根生物；小鼠血清TNF-α、IL-6、IL -1β檢測(cè)試劑盒，北京索萊寶；多聚甲醛組織固定液、蘇木素-伊紅(hematoxylin and eosin，H&E)染色試劑盒和免疫組化檢測(cè)試劑盒，武漢賽維爾生物；兔抗黏蛋白2(mucin 2，MUC2)、閉鎖蛋白(Occludin)、閉合蛋白-1(Claudin-1)和閉鎖小帶-1(zonula occludens-1，ZO-1)，武漢三鷹；山羊抗兔IgG辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗，北京中杉金橋。

1.2 主要儀器與設(shè)備

BSA224S-CW 電子天平，北京賽多利斯；5430R 離心機(jī)，德國(guó)Eppendorf；AS全自動(dòng)組織脫水機(jī)、AS自動(dòng)切片染色機(jī)，美國(guó)Thermo Fisher Scientific；EC350-1包埋機(jī)、HM325切片機(jī)，德國(guó)Microm；光學(xué)顯微鏡，日本Olympus；Infinite M200Pro多功能酶標(biāo)儀，瑞士TECAN。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

30只7周齡的無特定病原體(specific pathogen free, SPF)級(jí)C57BL/6 J雄性小鼠，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(京)2021-0006。所有小鼠飼養(yǎng)在溫度20～25 ℃、相對(duì)濕度55%～65%、12 h光照/12 h黑暗循環(huán)的環(huán)境中。本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過程均嚴(yán)格遵守山東大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院倫理委員會(huì)相關(guān)規(guī)定。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 動(dòng)物模型的建立與處理

適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，將小鼠隨機(jī)分為3組(n=10)：對(duì)照組，模型組(DSS)和抗性糊精組(DSS_RD)。對(duì)照組小鼠自由飲無菌水，模型組和抗性糊精組小鼠自由飲3% DSS水；同時(shí)，對(duì)照組和模型組每天灌胃生理鹽水(10 mL/kg體重)，抗性糊精組灌胃RD水溶液(根據(jù)人適宜攝入量，按小鼠與人體表面積比等效劑量換算比率計(jì)算得到，即3.25 g/kg體重)，持續(xù)7 d。實(shí)驗(yàn)期間觀察小鼠活動(dòng)情況、毛色變化、大便性狀、顏色及有無出血等情況，于第8 天麻醉處死小鼠，內(nèi)眥取血后，取出結(jié)腸，拍照并測(cè)量長(zhǎng)度，收集結(jié)腸內(nèi)容物，取脾臟并稱重。

1.4.2 疾病活動(dòng)指數(shù)(disease activity index，DAI)

每日記錄小鼠的體重，根據(jù)小鼠糞便隱血試劑盒說明書的操作步驟檢測(cè)小鼠糞便隱血情況和觀察小鼠的糞便性狀，給每只小鼠計(jì)分。參考STEVCEVA等[10]報(bào)道的計(jì)分規(guī)則，DAI評(píng)分為3項(xiàng)分?jǐn)?shù)的加和。

1.4.3 H&E染色及病理?yè)p傷評(píng)價(jià)

取小段固定于多聚甲醛固定液中的結(jié)腸組織，經(jīng)脫水、包埋、切片和烘片等步驟制成4 μm厚的石蠟切片，經(jīng)H&E染色后于光學(xué)顯微鏡下觀察。每組選擇3 張切片拍照，采用盲法，參考CHASSAING等[11]方法，對(duì)小鼠結(jié)腸病理組織損傷進(jìn)行評(píng)分。

1.4.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)

內(nèi)眥取血于1.5 mL EP管中靜置2 h，后于4 ℃下，3 000 r/min離心15 min，收集上清液。按照ELISA檢測(cè)試劑盒說明書的實(shí)驗(yàn)步驟，分別檢測(cè)各組小鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平。

1.4.5 免疫組織化學(xué)

將小鼠結(jié)腸組織石蠟切片脫蠟至水后，使用檸檬酸緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)。隨后將切片放入3% 過氧化氫溶液阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。封閉后，孵育MUC2、Occludin、Claudin-1和ZO-1一抗，4 ℃過夜，滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗；滴加顯色液，在顯微鏡下控制顯色時(shí)間。終止顯色后，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核，脫水封片，顯微鏡下觀察切片。

1.4.6 16S rRNA高通量分析

小鼠結(jié)腸內(nèi)容物16S rRNA基因測(cè)序分析由上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司進(jìn)行。使用FastDNA Spin試劑盒提取結(jié)腸內(nèi)容物細(xì)菌DNA，對(duì)V3～V4區(qū)域基因序列的主要PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳、染色、純化和定量，在Illumina MiSeq平臺(tái)上進(jìn)行測(cè)序。使用QIIME2 dada2或Vsearch軟件的分析流程進(jìn)行序列去噪，將相似度在97%以上的基因測(cè)序數(shù)據(jù)歸為操作分類單元(operational taxonomic unit, OTU)。采用未加權(quán)UniFrac主成分分析、未加權(quán) UniFrac組間差異比較分析，在QIIME和R軟件中進(jìn)行分析和作圖。

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。組間比較采用單因素方差分析，LSD或Dunnett’s法作多重比較檢驗(yàn)。P<0.05時(shí)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。GraphPad Prism 9.0作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗性糊精對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠疾病癥狀的影響

體重下降，精神萎靡，DAI評(píng)分升高，結(jié)腸縮短，脾臟腫大是潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的典型癥狀。實(shí)驗(yàn)期間，對(duì)照組小鼠毛色光亮，精神狀態(tài)良好，糞便顆粒分明；模型組小鼠精神不振，食欲下降、腹瀉，隱血試驗(yàn)陽(yáng)性；抗性糊精組小鼠糞便變軟，活動(dòng)范圍變小，食欲略下降。體重變化如圖1-a所示，對(duì)照組小鼠體重平穩(wěn)增加，模型組和抗性糊精組小鼠在3% DSS誘導(dǎo)的前4 d，并未觀察到體重下降。但第4天后，模型組小鼠體重急劇下降，而抗性糊精組小鼠體重下降較緩慢；第7 天，抗性糊精組小鼠體重[(20.35±0.738) g]明顯高于模型組[(18.78±0.601) g]。如圖1-b所示，DSS造模后，小鼠的DAI呈上升趨勢(shì)。模型組小鼠的DAI評(píng)分較高，第4～5天快速增高，但給予抗性糊精干預(yù)的小鼠實(shí)驗(yàn)期間的DAI評(píng)分緩慢上升，第7 天DAI評(píng)分顯著低于模型組(P<0.05)。如圖1-c和1-d所示，與模型組相比，給予抗性糊精干預(yù)可顯著恢復(fù)小鼠的結(jié)腸長(zhǎng)度(P<0.05)?？剐院M小鼠脾臟質(zhì)量[(0.094±0.016)g]顯著低于模型組[(0.114±0.011)g](圖1-e)。綜上所述，抗性糊精可緩解急性UC小鼠體重下降、DAI評(píng)分升高、結(jié)腸縮短和脾臟腫大等疾病癥狀。

a-體重；b-DAI；c-結(jié)腸大體圖；c-結(jié)腸長(zhǎng)度；e-脾臟質(zhì)量圖1 抗性糊精對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠疾病癥狀的影響Fig.1 Effects of resistant dextrin on symptoms of ulcerative colitis mice注：*, P<0.05；**, P<0.01;***, P<0.001(下同)

2.2 抗性糊精對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸病理的影響

小鼠結(jié)腸組織切片H&E染色結(jié)果如圖2-a所示，相應(yīng)的病理組織學(xué)評(píng)分如圖2-b所示。對(duì)照組結(jié)腸黏膜完整，隱窩正常，無炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；模型組結(jié)腸結(jié)構(gòu)模糊，隱窩變形或消失，杯狀細(xì)胞遭破壞、數(shù)量減少，黏膜固有層有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；抗性糊精組與模型組相比，可見清晰的結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)，隱窩結(jié)構(gòu)可見，杯狀細(xì)胞破壞程度較輕，黏膜固有層炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較少。與模型組比，抗性糊精組的病理組織學(xué)評(píng)分顯著下降(P<0.05)，即抗性糊精可減輕潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的結(jié)腸組織炎性損傷。

2.3 抗性糊精對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠血清炎癥因子的影響

采用ELISA試劑盒檢測(cè)小鼠血清炎癥因子的水平，結(jié)果如圖3所示。經(jīng)DSS誘導(dǎo)后，小鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平顯著升高(P<0.05)。而給予抗性糊精干預(yù)的小鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平較模型組相比，均有一定程度的下降且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，抗性糊精對(duì)小鼠血清促炎因子TNF-α、IL-1β和IL-6的水平有顯著的下調(diào)作用。

a-H&E染色(400×)；b-病理組織學(xué)評(píng)分圖2 抗性糊精對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸病理?yè)p傷的影響Fig.2 Effects of resistant dextrin on colonic histological of ulcerative colitis mice

a-TNF-α;b-IL-1β;c-IL-6圖3 抗性糊精對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠血清炎癥因子的影響Fig.3 Effects of resistant dextrin on serum inflammatory cytokines levels of ulcerative colitis mice

2.4 抗性糊精對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸黏膜屏障的影響

腸道黏膜屏障的完整性和通透性的改變是UC發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。利用免疫組織化學(xué)法分析了各組小鼠結(jié)腸組織MUC2和緊密連接蛋白(ZO-1、Occludin和Claudin-1)的表達(dá)情況(圖4)。經(jīng)DSS誘導(dǎo)后，小鼠結(jié)腸組織的MUC2、Occludin、Claudin-1和ZO-1的表達(dá)均下降，即UC小鼠的化學(xué)屏障、物理屏障被破壞；給予抗性糊精干預(yù)后表達(dá)顯著增加，在一定程度上保護(hù)了小鼠腸道化學(xué)和物理屏障。

圖4 抗性糊精對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠腸道屏障的 影響(400×)Fig.4 Effects of resistant dextrin on intestinal barrier of ulcerative colitis mice

2.5 抗性糊精對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠腸道菌群的影響

RD是一種低分子水溶性膳食纖維，腸道微生物在降解膳食纖維和維持腸道穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，因此分析了3組小鼠腸道菌群的組成及改變來探索抗性糊精發(fā)揮保護(hù)UC作用的可能機(jī)制。分別在3組隨機(jī)選擇5個(gè)小鼠結(jié)腸內(nèi)容物樣本做16S rRNA高通量測(cè)序分析。物種豐度等級(jí)曲線(圖5-a)長(zhǎng)且平滑，證實(shí)本研究中的樣本物種豐富度高，且分布均勻。菌群多樣性方面，α多樣性指標(biāo)、Chao1指數(shù)、Simpson指數(shù)、Shannon指數(shù)和Observed species指數(shù)，在3組間均無顯著差異(P>0.05)(圖5-b)，即經(jīng)DSS誘導(dǎo)和抗性糊精干預(yù)后，并未影響小鼠整體細(xì)菌豐富度和群落多樣性。本實(shí)驗(yàn)評(píng)估了抗性糊精對(duì)腸道微生物群落組成的影響，主成分分析(principal component analysis，PCA)如圖5-c所示，對(duì)照組與模型組和抗性糊精組的微生物群落明顯分離，表明潰瘍性結(jié)腸炎小鼠腸道菌群群落明顯改變；模型組與抗性糊精組的腸道微生物群落有分離但不明顯，提示抗性糊精在一定程度上調(diào)節(jié)了小鼠腸道菌群的群落組成。韋恩圖(圖5-d)顯示3組共有的OTU數(shù)目為700，對(duì)照組與模型組共有的OTU數(shù)目為501，對(duì)照組與抗性糊精組共有的OTU數(shù)目為403。

為了直觀表現(xiàn)各組小鼠腸道微生物的組成和差異，分析了各組腸道微生物在門和屬水平上的相對(duì)豐度。如圖6-a所示，小鼠腸道菌群主要由Firmicutes、Bacteroidetes、Proteobacteria、TM7和Actinobacteria組成，其中Firmicutes和Bacteroidetes是各組小鼠的優(yōu)勢(shì)菌門。模型組小鼠的Verrucomicrobia的相對(duì)豐富度增高，抗性糊精組未見該現(xiàn)象。在菌屬水平上，與對(duì)照組相比，模型組小鼠腸道微生物的豐富度顯著下降，抗性糊精干預(yù)可部分恢復(fù)小鼠腸道微生物豐富度(圖6-b)。模型組和抗性糊精組小鼠腸道Ruminococcus水平均下調(diào)，模型組小鼠的Turicibacter、Oscillospira、Odoribacter和Akkermansia豐度增加，Allobaculum和Coprococcus豐度降低?？剐院M小鼠的Turicibacter、Oscillospira和Akkermansia豐度下降，Lactobacillus豐度明顯增多且高于對(duì)照組。腸道微生物在菌屬水平的相對(duì)豐度用聚類熱圖表示(圖6-c)。為了尋找各組小鼠的特征腸道微生物，對(duì)結(jié)腸內(nèi)容物微生物進(jìn)行LEfSe(linear discriminant analysis effect size)聚類和評(píng)分。各組小鼠腸道菌群進(jìn)化分支圖(圖6-d)顯示各組具有不同的微生物標(biāo)記物；在菌屬水平上，LEfSe分析(圖6-e)顯示對(duì)照組、模型組和抗性糊精組的顯著差異物種分別是Ruminococcus、Turicibacter和Lactobacillus。上述結(jié)果表明，抗性糊精改變了DSS誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎小鼠腸道微生物組成和結(jié)構(gòu)。

a-物種豐度等級(jí)曲線；b-α-多樣性；c-主成分分析；d-韋恩圖圖5 抗性糊精對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠腸道微生物的影響Fig.5 Effects of resistant dextrin on gut microbiota of ulcerative colitis mice

a-門水平；b-屬水平；c-聚類熱圖；d-進(jìn)化分支圖；e-線性判別效應(yīng)分析評(píng)分柱狀圖圖6 抗性糊精對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠腸道微生物組成的影響Fig.6 Effects of resistant dextrin on gut microbiota composition of ulcerative colitis mice

3 討論與結(jié)論

飲食因素在UC的發(fā)生、發(fā)展和管理過程中非常重要。隨著UC的發(fā)病率逐年增加，且發(fā)病年齡多為青中年、病死率低、病程反復(fù)，藥物治療副作用大，疾病負(fù)擔(dān)增加，已成為發(fā)達(dá)國(guó)家和發(fā)展中國(guó)家的重要公共衛(wèi)生問題[12]。抗性糊精具有良好的理化特性和功能特性，且2012年我國(guó)衛(wèi)生部的第16號(hào)公告將其列為普通食品，可按需要量添加使用[13]。因此，研究抗性糊精對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎的影響，評(píng)價(jià)其保護(hù)腸道健康功能特性，對(duì)于UC的防治和飲食管理有重要意義。

本研究利用DSS誘導(dǎo)建立急性UC模型，小鼠體重減輕，DAI評(píng)分顯著升高，結(jié)腸明顯縮短，脾臟腫大，結(jié)腸組織病理顯示杯狀細(xì)胞數(shù)量減少、腺體破壞、有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，表明結(jié)腸炎造模成功。而同時(shí)給予抗性糊精灌胃組小鼠的疾病癥狀有明顯的緩解，提示抗性糊精可保護(hù)腸道健康。

在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病過程中，腸腔內(nèi)容物進(jìn)入機(jī)體激活大量免疫細(xì)胞，產(chǎn)生的炎性細(xì)胞因子協(xié)同參與免疫細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，進(jìn)一步加重炎癥的發(fā)展[3,14]。為了觀察抗性糊精對(duì)機(jī)體炎癥反應(yīng)的影響，本研究檢測(cè)了各組小鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-6的水平。TNF-α是主要由巨噬細(xì)胞釋放的內(nèi)源性炎癥介質(zhì)，生理水平下可發(fā)揮有益作用(如免疫細(xì)胞活化)，但過度表達(dá)和分泌會(huì)破壞免疫平衡，促進(jìn)機(jī)體炎癥的發(fā)生發(fā)展[15]。IL-6和IL-1β在結(jié)腸炎癥的進(jìn)展中起重要作用，IL-6主要作用于黏膜病變，而IL-1β在初始階段介導(dǎo)炎癥反應(yīng)[16]。本研究發(fā)現(xiàn)，抗性糊精可降低促炎因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平，改善機(jī)體的炎癥狀態(tài)。

腸道黏膜屏障破壞是UC發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。腸上皮細(xì)胞通過緊密連接蛋白整合形成物理屏障，限制腸道內(nèi)容物和微生物自由進(jìn)出[17]。杯狀細(xì)胞分泌的MUC2是腸道化學(xué)屏障的重要組成部分，MUC2 缺乏可導(dǎo)致腸道炎癥并加重結(jié)腸炎[18]。與之前的報(bào)道[19]一致，本研究免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn)DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠腸道MUC2和緊密連接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-1表達(dá)下降，而抗性糊精對(duì)它們的表達(dá)有恢復(fù)作用，即抗性糊精有利于保護(hù)腸道黏膜屏障的完整性。

既往研究認(rèn)為UC患者腸道菌群改變，表現(xiàn)為腸道共生菌和有益菌減少，致病菌和條件致病菌增加[20]?？剐院鳛橐环N新型膳食纖維，有著益生元特性，可調(diào)節(jié)菌群及其代謝產(chǎn)物的組成。本研究結(jié)果表明，DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠腸道微生物群落組成改變，Proteobacteria和Verrucomicrobia菌門豐度增加。Proteobacteria包含多種致病微生物群，如Helicobacter，Salmonella和E.coli，它們被認(rèn)為是腸道微生物群紊亂的生物標(biāo)志物[21]；Verrucomicrobia與腸道炎癥呈正相關(guān)[20]?？剐院种屏薞errucomicrobia的增加，但沒有逆轉(zhuǎn)Proteobacteria的變化。

從菌屬水平的結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠腸道Turicibacter，Oscillospira，Odoribacter和Akkermansia豐度增加，Ruminococcus和Lactobacillus豐度顯著下降；抗性糊精組較模型組的Turicibacter，Odoribacter和Akkermansia豐度降低，Lactobacillus和Flexispira豐度明顯增加。值得注意的是，先前的研究表明在UC患者和結(jié)腸炎動(dòng)物模型中，Akkermansia的相對(duì)豐度顯著降低[22-23]。Akkermansia是一種有效的抗炎腸道細(xì)菌，可通過促進(jìn)MUC2產(chǎn)生增加黏液層厚度來降低腸道通透性[24]。然而，TIAN等[25]發(fā)現(xiàn)結(jié)腸炎小鼠中Akkermansia的豐度增加，且與DAI評(píng)分、病理組織損傷程度和促炎因子水平呈高度正相關(guān)。其他研究也發(fā)現(xiàn)Akkermansia在結(jié)腸炎動(dòng)物模型和結(jié)腸直腸癌患者中升高，且與UC的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[26-27]?？赡蹵kkermansia在正常豐度條件下對(duì)腸道穩(wěn)態(tài)有益，但過度增殖的Akkermansia可從有益菌轉(zhuǎn)變成致病菌，進(jìn)而破壞腸黏膜屏障[28]。Akkermansia在DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎中增加，抗性糊精可以抑制其過度增殖。此外，抗性糊精組Lactobacillus水平顯著增加，Lactobacillus已被廣泛認(rèn)為是腸道內(nèi)重要的益生菌。上述結(jié)果均表明，抗性糊精可調(diào)節(jié)腸道微生物的組成，這可能與其發(fā)揮保護(hù)潰瘍性結(jié)腸炎作用有關(guān)。

綜上，本研究結(jié)果表明，補(bǔ)充抗性糊精可顯著緩解DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎?？剐院@著改善急性UC小鼠的體重減輕、脾臟腫大、結(jié)腸縮短、血清促炎因子水平升高和腸道黏膜屏障損傷，其潛在的機(jī)制可能與調(diào)節(jié)腸道微生物，促進(jìn)腸道有益菌增殖、抑制條件致病菌和有害菌的過度生長(zhǎng)有關(guān)。