香椿離體再生技術(shù)研究進(jìn)展

李玲， 黃榕， 艾薇， 王友如

(湖北師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 特色野菜良種繁育與綜合利用技術(shù)湖北省工程研究中心 食用野生植物保育與利用湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 黃石 435002)

香椿是楝科香椿屬落葉喬木[1]，是我國傳統(tǒng)藥食同源木本植物。其樹干通直，樹體龐大，色澤花紋清晰，芳香耐腐，被譽(yù)為“中國桃花心木”[2]。香椿地理位置分布廣泛，北至遼陽錦州一線，西至陜西延安市，南至廣西廣東一帶，東至我國臺(tái)灣省[3]，喜溫帶和亞熱帶氣候[4]。香椿也是唯一一個(gè)被我國命名“樹上蔬菜”的植物，它富含豐富的維生素、胡蘿卜素、香椿素和鈣鎂等營養(yǎng)元素，具有超高的營養(yǎng)價(jià)值，深受消費(fèi)者的喜愛[5]。香椿藥用歷史悠久，早在古代就已知其具有清熱利濕、利尿解毒等功效?！侗静菥V目》中記載：香椿葉、芽、根、皮和果實(shí)均可入藥[6]。

基于以上香椿的材用、食用和藥用價(jià)值特點(diǎn)，我國部分地區(qū)將香椿產(chǎn)業(yè)作為脫貧攻堅(jiān)和鄉(xiāng)村振興的農(nóng)業(yè)現(xiàn)代化產(chǎn)業(yè)項(xiàng)目。四川大竹縣被譽(yù)為“中國香椿第一縣”，據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)記載，2020年該縣的香椿芽銷售1.1萬t，產(chǎn)值達(dá)3億元；四川簡陽市香椿的種植面積近3 500 hm2；太和香椿近些年種植面積近235 hm2，香椿芽年產(chǎn)量達(dá)500 t[7]。香椿產(chǎn)業(yè)在貧困地區(qū)脫貧攻堅(jiān)和鄉(xiāng)村振興中發(fā)揮著越來越重要的作用。香椿產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，但種苗參差不齊、品系良莠不分和優(yōu)質(zhì)苗木供不應(yīng)求等問題嚴(yán)重制約著產(chǎn)業(yè)的健康快速發(fā)展。植物組織培養(yǎng)技術(shù)的最大優(yōu)點(diǎn)是能夠快速大量地獲得保持優(yōu)良母本性狀的再生個(gè)體，不受環(huán)境季節(jié)等因素影響，快速繁殖優(yōu)良香椿種苗[8]。

本綜述從微繁途徑再生技術(shù)和組織培養(yǎng)再生技術(shù)2個(gè)方面總結(jié)香椿離體再生技術(shù)的最新研究進(jìn)展及存在的問題，為構(gòu)建高效香椿再生技術(shù)體系提供借鑒。

1 基于微繁途徑的再生技術(shù)研究進(jìn)展

微繁技術(shù)是指以植物莖段、腋芽和頂芽等為外植體，通過消毒和無菌操作等一系列方式快速獲得大量的能穩(wěn)定遺傳的叢生芽的一項(xiàng)技術(shù)。目前國內(nèi)的香椿離體再生技術(shù)研究，大多采用的是芽微繁途徑獲得再生苗。

1.1 外植體選擇

大部分學(xué)者在進(jìn)行香椿芽微繁研究時(shí)，均是選取香椿(含腋芽的)的莖段、腋芽、頂芽或叢生芽作為外植體，這主要是由于香椿含芽處增殖系數(shù)相較于其他外植體較高。

覃蘭英等[9]最早開展香椿微繁研究，以莖段為外植體發(fā)現(xiàn)，在基本培養(yǎng)基(MS)+0.1 mg·L-1吲哚乙酸(IAA)+0.1/0.5 mg·L-16-芐基腺嘌呤(6-BA)叢生芽誘導(dǎo)可達(dá)4～5個(gè)，從此開啟了離體再生技術(shù)研究的序幕；康明等[10]以遷西香椿45 d無菌苗莖段(帶側(cè)芽)為外植體，在MS+1.0 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1吲哚丁酸(IBA)中發(fā)現(xiàn)有叢芽形成；謝文申等[11]發(fā)現(xiàn)，以香椿莖段為外植體時(shí)，在培養(yǎng)基MS+0.1 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1激動(dòng)素(KT)+0.1 mg·L-1萘乙酸(NAA)中發(fā)現(xiàn)大約30 d后可形成叢芽；吳麗君[12]發(fā)現(xiàn)，選取福建香椿0.5～0.8 cm莖段時(shí)，在MS+0.5 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA培養(yǎng)基中，20 d后小芽能長至1.5～2.0 cm；馬勤[13]研究發(fā)現(xiàn)，香椿品系T4的莖段在MS+0.2 mg·L-16-BA+2.0 mg·L-1赤霉素(GA3)中芽的增殖系數(shù)可達(dá)3.38；許麗瓊等[14]研究發(fā)現(xiàn)，3月采取孝感紅香椿莖段(帶1個(gè)芽)接種至增殖培養(yǎng)基MS+1.0 mg·L-16-BA+1.5 mg·L-1GA3+0.5 mg·L-1KT中，增殖倍數(shù)可高達(dá)4.7；周玉玲[15]研究紅香椿一號(hào)的莖段發(fā)現(xiàn)，在MS+1.0 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1NAA+0.1 mg·L-1IBA+0.1 mg·L-1玉米素(ZT)培養(yǎng)基中芽的增殖倍數(shù)在6.0以上；張曉申等[16]發(fā)現(xiàn)，以鄭州香椿3 cm長莖段為外植體時(shí)，在培養(yǎng)基MS+0.6 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1NAA，莖段的芽誘導(dǎo)率為66.7%；高鷃銘[17]以帶小芽的莖段為外植體時(shí)發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基MS+1.0 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1NAA+0.1 mg·L-1GA3中，芽的增殖倍數(shù)為3.63；楊超臣等[18]發(fā)現(xiàn)，香椿莖段在MS+1.0 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1NAA+1.0 mg·L-1GA3培養(yǎng)基中，芽增殖倍數(shù)為4.82。由上可知，香椿莖段芽微繁效果較好，能在短時(shí)間內(nèi)獲得大量叢生芽。

王春林等[19]最早以太和香椿腋芽為外植體進(jìn)行芽增殖試驗(yàn)，在培養(yǎng)基B5+1.0 mg·L-16-BA+1.0 mg·L-1GA3中發(fā)現(xiàn)，1個(gè)月后繁殖系數(shù)可達(dá)6～7倍；陳彥生等[20]以腋芽莖段為外植體時(shí)發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基MS+0.2 mg·L-16-BA中3～5 d后腋芽就開始萌發(fā)，15 d后成苗率達(dá)73%；曹娟等[21]在研究紅香椿腋芽時(shí)發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基MS+0.2 mg·L-1GA3+0.02 mg·L-1NAA中，增殖系數(shù)達(dá)3.8。

陳實(shí)[22]在研究南京香椿子葉、下胚軸(含頂芽)時(shí)，發(fā)現(xiàn)在B5+1.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA培養(yǎng)基中生芽率達(dá)61.5%；袁應(yīng)菊[23]采用太和香椿頂芽為外植體研究發(fā)現(xiàn)，接種在增殖培養(yǎng)基MS+0.3～0.8 mg·L-16-BA+0.1～0.2 NAA mg·L-1中，叢生芽平均每個(gè)可再生3個(gè)左右。

張曉申等[16]發(fā)現(xiàn)，以鄭州香椿莖段誘導(dǎo)的叢芽為外植體時(shí)，在培養(yǎng)基MS+1.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA中，叢芽的增殖系數(shù)3.7。馬宗新等[24]以太和香椿的叢芽為外植體時(shí)發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基MS+1.5 mg·L-16-BA+0.08 mg·L-1NAA+0.01 mg·L-1GA3中，芽的增殖系數(shù)為2～3倍；梁明勤等[25]以菜用香椿的叢芽為外植體，在1/2 MS+0.5 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1GA3培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)增殖倍數(shù)可達(dá)6.95；馮姍姍[26]在研究太和香椿的叢芽時(shí)發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基MS+1.0 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1GA3中，芽的增殖倍數(shù)達(dá)5.9。

經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，腋芽莖段的萌發(fā)時(shí)間較短于莖段，且叢芽的誘導(dǎo)率也高于莖段，有可能是莖段木質(zhì)化程度高于腋芽，在消毒過程中莖段較容易褐化死亡；或者又由于腋芽的幼嫩程度高于莖段，所以較易誘導(dǎo)萌發(fā)。

1.2 基本培養(yǎng)基

基本培養(yǎng)基是香椿微繁再生中的主要能量來源。目前微繁中常用到的培養(yǎng)基有MS、1/2MS、WPM、B5、1/2DCR、無離子水或是改良的培養(yǎng)基等。

香椿芽微繁途徑研究進(jìn)展表明，大多數(shù)采用的是MS基本培養(yǎng)基。王春林等[19]首次采用B5培養(yǎng)基對(duì)太和香椿莖尖和幼苗莖部進(jìn)行誘導(dǎo)，發(fā)現(xiàn)均有成苗和生根出現(xiàn)；許麗瓊等[14]發(fā)現(xiàn)，B5與1/2MS培養(yǎng)基對(duì)莖段培養(yǎng)的效果差異不大，分析可能與培養(yǎng)基本身的營養(yǎng)物質(zhì)有關(guān)，但二者都不如MS培養(yǎng)基的營養(yǎng)全面；陳實(shí)等[22]經(jīng)成分對(duì)比發(fā)現(xiàn)，MS比B5培養(yǎng)基的硝酸鹽含量更高，表明MS的銨含量高于B5，銨對(duì)香椿外植體的生長發(fā)育有一定影響，認(rèn)為B5培養(yǎng)基的效果較好于MS[14]。1/2MS培養(yǎng)基適用于香椿芽苗的生根試驗(yàn)，能在短時(shí)間內(nèi)有效促進(jìn)芽苗底部形成發(fā)達(dá)根系，便于后續(xù)移栽。

1.3 植物生長調(diào)節(jié)劑

植物生長調(diào)節(jié)劑是微繁技術(shù)中的關(guān)鍵因素。一般認(rèn)為，當(dāng)細(xì)胞分裂素濃度相對(duì)高于生長素濃度時(shí)，有助于促進(jìn)芽的生長；當(dāng)細(xì)胞分裂素濃度相對(duì)低于生長素濃度時(shí)，有助于促進(jìn)根的生長和愈傷組織的形成[27]。

香椿在芽微繁中主要使用的細(xì)胞分裂素是6-BA，其次便是ZT和KT；最常用的生長素是NAA。6-BA是最常用的一種細(xì)胞分裂素。梁明勤等[25,28]認(rèn)為，6-BA對(duì)香椿芽的增殖有顯著影響，在誘導(dǎo)香椿芽快繁過程中6-BA濃度?？刂圃?.2～1.5 mg·L-1，尤其是低濃度的6-BA增殖效果最佳[29]，當(dāng)濃度越接近0.5～1.0 mg·L-1的時(shí)候，增殖系數(shù)較高，最高可達(dá)6.95[25]。6-BA還可以抑制植物的頂端優(yōu)勢，但濃度過高會(huì)導(dǎo)致外植體出現(xiàn)玻璃化和輕微白化狀態(tài)[30]。陳彥生等[20]研究發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基中加入GA3，不僅可以促進(jìn)腋芽增殖還可以有效降低玻璃化苗產(chǎn)生，也能降低試管苗木質(zhì)化程度[24]。GA3的含量會(huì)在香椿休眠芽到萌發(fā)這一階段內(nèi)急劇升高[31]，是影響香椿芽萌發(fā)的重要影響因素。周玉玲等[15]在研究紅香椿芽增殖中發(fā)現(xiàn)，激素的影響效果由大到小依次為ZT、6-BA、NAA、IBA。

從近30 a的研究中可以看出，在香椿芽微繁的過程中，單一的植物生長調(diào)節(jié)劑是無法獲得較高增殖系數(shù)的叢芽，一般情況下，細(xì)胞分裂素、生長素或者赤霉素等按照合適比例添加，才能獲得較好的微繁效果。以香椿莖段、腋芽或頂芽為外植體的芽微繁技術(shù)相對(duì)成熟，可獲得較高增殖系數(shù)的香椿無菌苗，為工廠化生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)香椿苗木提供了技術(shù)支撐。一般使用的基本培養(yǎng)基是MS，細(xì)胞分裂素是6-BA，生長素是NAA，濃度在0.1～1.0 mg·L-1，1個(gè)帶腋芽的莖段誘導(dǎo)的叢芽一般可達(dá)3～6個(gè)。目前關(guān)于香椿離體再生技術(shù)的報(bào)道大多還是以芽微繁的方式進(jìn)行，僅有極少數(shù)是基于愈傷組織的再生技術(shù)，大多停留在愈傷誘導(dǎo)階段，愈傷分化仍未有實(shí)質(zhì)性的技術(shù)突破。

2 基于組織培養(yǎng)的離體再生技術(shù)研究進(jìn)展

傳統(tǒng)意義上的植物組織培養(yǎng)技術(shù)是指先誘導(dǎo)外植體脫分化形成愈傷組織，然后再使愈傷組織再分化形成不定芽，最后誘導(dǎo)再生植株生根成為完整植株的過程。

2.1 外植體選擇

目前香椿植物組織培養(yǎng)主要在以無菌苗葉片、幼葉或是在室外取幼嫩香椿葉片為外植體。最早進(jìn)行香椿組織培養(yǎng)的是王春林等[19]，以太和香椿的幼葉為外植體，在液體培養(yǎng)基B5+2.5 mg·L-16-BA+2.5 mg·L-1NAA 中發(fā)現(xiàn)在黑暗條件下培養(yǎng)可以10 d快速誘導(dǎo)愈傷形成，40 d分化成葉芽，且愈傷誘導(dǎo)率及不定芽再生率均不高。隨后，許麗瓊等[32]選取以孝感紅香椿葉片為外植體，發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基MS+1.0 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1KT+0.5 mg·L-1NAA中，6 d愈傷誘導(dǎo)率為100%，也有不定芽出現(xiàn)(培養(yǎng)基未記錄)。之后，曹娟等[21]采用紅香椿葉片為外植體，在培養(yǎng)基MS+0.15 mg·L-1噻二唑苯基脲(TDZ)+0.3 mg·L-1NAA+1.0 mg·L-1KT中發(fā)現(xiàn)愈傷誘導(dǎo)率為92.8%，且葉片愈傷組織在培養(yǎng)基MS+0.1 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1KT+0.1 mg·L-1NAA有不定芽產(chǎn)生；梁明勤等[25]以太和香椿嫩葉為外植體時(shí)，在培養(yǎng)基MS+0.3～0.8 mg·L-16-BA+0.1～0.3 mg·L-1NAA中有愈傷形成，但無不定芽形成；馮姍姍[26]以太和香椿葉片為外植體時(shí)，在培養(yǎng)基MS+1.5 mg·L-12, 4-二氯苯氧乙酸(2, 4-D)中愈傷組織誘導(dǎo)率為100%，葉片細(xì)胞團(tuán)在MS+1.0 mg·L-1KT+0.1 mg·L-1NAA中有側(cè)根出現(xiàn)。

在組織培養(yǎng)過程中，外植體的選取能夠很大程度影響植物再生，不同植物的不同外植體建立起再生技術(shù)體系的難易不同[33]。目前，以無菌苗葉片、幼葉和室外取材葉片為外植體時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)相對(duì)容易，但仍存在愈傷組織分化的難題未取得實(shí)質(zhì)性突破，其原因有待于進(jìn)一步研究。

2.2 基本培養(yǎng)基

目前香椿組織培養(yǎng)中所用培養(yǎng)基來看，主要培養(yǎng)基是以MS為主，也用到了B5培養(yǎng)基。

2.3 植物生長調(diào)節(jié)劑

葉片愈傷組織的誘導(dǎo)和分化，主要采用的細(xì)胞分裂素是6-BA，生長素是NAA，其次搭配KT、2, 4-D和TDZ。添加不同種類的植物生長調(diào)節(jié)劑至基本培養(yǎng)基中能夠較大程度影響外植體誘導(dǎo)分化。適當(dāng)濃度的NAA能有效促進(jìn)芽的萌發(fā)，也能夠誘導(dǎo)較多愈傷組織的形成[25]。2, 4-D對(duì)外植體愈傷組織誘導(dǎo)效率高[26]，但是濃度過高會(huì)對(duì)外植體材料有一定的毒害作用[34]。在葉片愈傷誘導(dǎo)過程中，TDZ、NAA和KT或是6-BA、KT、NAA組合中，愈傷組織的誘導(dǎo)率均能夠達(dá)到90%以上，因此KT和NAA對(duì)香椿葉片愈傷誘導(dǎo)有較大的促進(jìn)作用。目前出現(xiàn)不定芽的培養(yǎng)基中均用NAA和6-BA處理，因此一定比例的NAA和6-BA可以誘導(dǎo)不定芽生成，但是兩者濃度的比例還需進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié)。

總之，目前香椿組織培養(yǎng)的再生技術(shù)研究主要以香椿幼葉和葉片為外植體，在細(xì)胞分裂素BA、KT、TDZ和生長素NAA、2, 4-D組合下進(jìn)行的愈傷誘導(dǎo)分化，一般細(xì)胞分裂素同生長素濃度比例在2～5 mg·L-1?？傮w效果呈愈傷組織誘導(dǎo)相對(duì)容易，效率較高，但愈傷組織分化十分困難。

3 離體再生技術(shù)中存在的問題

目前香椿離體再生技術(shù)大部分是以頂芽或腋芽為基礎(chǔ)的微繁技術(shù)，基于愈傷組織誘導(dǎo)分化的香椿組織培養(yǎng)研究中，愈傷組織成功誘導(dǎo)案例比較普遍，但愈傷組織的分化幾乎沒有成功。

3.1 微繁效率問題

目前香椿微繁技術(shù)存在的最大問題是繁殖效率不夠高。影響微繁效率的因素主要有以下幾點(diǎn)：第一，外植體的年齡。在選取含腋芽或頂芽的外植體的過程中，未能選取最佳年齡階段的莖段。年齡階段的選取十分重要，如果選取外植體較為幼嫩，則會(huì)在消毒的過程中容易消毒過度，導(dǎo)致材料褐化死亡；如果選取外植體莖段較成熟，則會(huì)導(dǎo)致消毒不徹底，莖段染菌或是莖段不易誘導(dǎo)芽的萌發(fā)[35]。第二，最佳植物生長調(diào)節(jié)劑類型及其濃度配比。未篩選出最佳的細(xì)胞分裂素和生長素組合及其濃度配比。植物生長調(diào)節(jié)劑濃度及其比例對(duì)芽微繁再生技術(shù)產(chǎn)生較大影響。細(xì)胞分裂素使用比較多的是6-BA和KT；生長素使用比較多的是IBA、NAA和IAA,赤霉素GA3有一定的使用。6-BA使用濃度一般是0.1～1.5 mg·L-1，KT使用濃度是0.5 mg·L-1，IBA、NAA和IAA的使用濃度分別是0.1、0.02～0.5和0.1 mg·L-1，GA3的使用濃度是0.01～1.00 mg·L-1。細(xì)胞分裂素和生長素濃度一般控制在1～10 mg·L-1，增殖系數(shù)為3～6。目前香椿微繁途徑中細(xì)胞分裂素TDZ和生長素2, 4-D的使用極少，TDZ具有很強(qiáng)的細(xì)胞分裂素的效果，活性是普通細(xì)胞分裂素的幾十倍[36]，2, 4-D可以誘導(dǎo)外植體表現(xiàn)出胚胎發(fā)生能力[37]。

3.2 組織培養(yǎng)再生技術(shù)中存在的問題

在香椿組織培養(yǎng)過程中，外植體類型及其年齡選擇上，多局限于消毒葉片、莖段，而且這些葉片和莖段的年齡階段并未明確說明。

在香椿愈傷組織誘導(dǎo)與分化的研究中，細(xì)胞分裂素使用較多的是6-BA和NAA，細(xì)胞分裂素與生長素的質(zhì)量百分比在愈傷誘導(dǎo)過程中的比例為1～3；在愈傷組織分化中，細(xì)胞分裂素與生長素的質(zhì)量百分比的比例更高達(dá)6～10。TDZ和2, 4-D在愈傷組織誘導(dǎo)分化中有初步應(yīng)用，但目前這2種植物生長調(diào)節(jié)劑并未組合應(yīng)用。另外香椿體細(xì)胞胚胎途徑的誘導(dǎo)與分化研究幾乎是空白[38]。

4 香椿離體再生技術(shù)研究的建議

4.1 微繁途徑的再生技術(shù)

可選擇不同基因型或不同種源地的香椿頂芽或腋芽為材料，探索微繁中的外植體恰當(dāng)年齡段以及合適的植物生長調(diào)節(jié)劑的類型及其濃度配比，建立高效微繁再生技術(shù)體系。

4.2 組織培養(yǎng)再生技術(shù)

外植體的選擇上，可選用合適年齡階段幼嫩種子苗的子葉、下胚軸或無菌苗的幼嫩組織或器官，如將葉柄、葉柄節(jié)或頂芽、腋芽作為外植體；也可選擇發(fā)育未成熟的胚或者幼嫩生長活躍的具有能力細(xì)胞的組織或器官(如頂芽或腋芽或者器官間交接處的組織)作為外植體研究體細(xì)胞胚胎發(fā)生途徑再生技術(shù)體系。在繼代方式上也可考慮葉片近軸端或是遠(yuǎn)軸端接觸培養(yǎng)基等[39]，優(yōu)化各種條件培養(yǎng)。對(duì)于基于組織培養(yǎng)的再生技術(shù)體系，選擇恰當(dāng)幼嫩年齡階段的外植體尤為重要。無論是基于愈傷組織誘導(dǎo)分化的再生技術(shù)還是基于體細(xì)胞胚胎誘導(dǎo)分化的再生技術(shù)，筆者建議重點(diǎn)考慮細(xì)胞分裂素TDZ和生長素2, 4-D與其他細(xì)胞分裂素和生長素的聯(lián)合使用，以期望達(dá)到較好的再生效果。

目前TDZ已經(jīng)在很多植物組織培養(yǎng)中添加應(yīng)用，如油菜、蘋果、樸樹、紅花槭等，均發(fā)現(xiàn)它具有很高的細(xì)胞分裂素活性，可以有效促進(jìn)芽增殖，對(duì)再生較困難的木本植物的離體芽增殖也具有顯著的促進(jìn)作用[40]。張小紅等[41]曾在香椿愈傷組織誘導(dǎo)和芽增殖中添加了TDZ，發(fā)現(xiàn)當(dāng)濃度高于0.02 mg·L-1時(shí)會(huì)抑制香椿生長，且容易出現(xiàn)較多變態(tài)苗；當(dāng)濃度在小于0.02 mg·L-1時(shí)，能夠有效地促進(jìn)香椿芽的生長。該研究中只開展了TDZ和NAA組合的研究，未和其他植物生長調(diào)節(jié)劑組合。因此，在后續(xù)香椿組織培養(yǎng)研究過程中，可以用其他植物生長調(diào)節(jié)劑與TDZ組合，研究出最佳香椿愈傷誘導(dǎo)及愈傷分化的試驗(yàn)組合，早日建立起高效再生的香椿再生體系。為后續(xù)香椿分子育種與功能基因的研究提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支撐。

有學(xué)者在研究灰堇菜時(shí)發(fā)現(xiàn)，在添加2, 4-D的MS培養(yǎng)基上，利用葉片愈傷組織開展的體細(xì)胞胚胎發(fā)生途徑成功地獲得再生植株[42]。李文靜等[43]在研究野生薺菜中發(fā)現(xiàn)，2, 4-D濃度過高會(huì)抑制愈傷組織再生植株。2, 4-D目前在很多植物體細(xì)胞胚胎途徑中發(fā)揮了重要作用，因此建議在香椿體細(xì)胞胚胎誘導(dǎo)研究中添加適量2, 4-D。

綜上所述，香椿再生技術(shù)研究大多以微繁技術(shù)為主，基于組織培養(yǎng)的再生技術(shù)未見實(shí)質(zhì)性突破，研究結(jié)果大多局限于外植體愈傷組織的成功誘導(dǎo)，愈傷組織分化鮮見報(bào)道。香椿的組織培養(yǎng)體系還需在前人研究的基礎(chǔ)上進(jìn)一步完善與探討,需要在恰當(dāng)?shù)幕九囵B(yǎng)基、合適外植體選擇、合適植物生長調(diào)節(jié)劑類型及其配比上做出恰當(dāng)選擇。