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    基于轉(zhuǎn)錄組測序方斑東風(fēng)螺LPS刺激的免疫機(jī)制研究

    2023-03-20 08:36:46陳宗發(fā)洪雨潔趙明明王忠良
    安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2023年4期
    關(guān)鍵詞:東風(fēng)測序受體

    陳宗發(fā),洪雨潔,趙明明,王 菁,王忠良

    (廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院,廣東湛江 524088)

    方斑東風(fēng)螺(Babyloniaareolata)俗稱花螺,屬軟體動物門腹足綱前鰓亞綱新腹足目蛾螺科東風(fēng)螺屬[1],主要分布于環(huán)西太平洋。其生產(chǎn)周期短,具有肉質(zhì)勁道、味道鮮美、營養(yǎng)價值豐富等優(yōu)點(diǎn)[2]。但是隨著方斑東風(fēng)螺養(yǎng)殖的快速發(fā)展,育苗與養(yǎng)殖過程中病害暴發(fā)日趨嚴(yán)重[3],其病害主要以革蘭陰性菌感染為主[4-6]。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是革蘭陰性菌細(xì)胞壁外膜結(jié)構(gòu)的重要組分,可作用于不同生物細(xì)胞而表現(xiàn)出多種生物活性[7]。朱璐璐[8]研究發(fā)現(xiàn),飼料中添加LPS能提高凡納濱對蝦對WSSV和副溶血弧菌的抵抗力,周妍英等[9]研究發(fā)現(xiàn),脂多糖可以誘導(dǎo)河南華溪蟹提高血淋巴細(xì)胞酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、溶菌酶活性和酚氧化酶活性,從而增強(qiáng)其免疫能力,被廣泛應(yīng)用于水生動物的免疫學(xué)研究,揭示LPS刺激對方斑東風(fēng)螺轉(zhuǎn)錄組的影響,有助于培育抗病品種。

    轉(zhuǎn)錄組測序(RNA-seq)是一種利用深度測序技術(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析的方法[10]。轉(zhuǎn)錄組是隨著生物生長發(fā)育階段、生理狀態(tài)和外界環(huán)境的改變而變化的[11],因此轉(zhuǎn)錄組測序在水生生物的生長[12]、免疫[13]、適應(yīng)[14]等方面的研究中得到了廣泛應(yīng)用。吳勇等[15]通過RNA-seq測序研究馬氏珠母貝(Pinctadafucata)血細(xì)胞中存在的補(bǔ)體系統(tǒng)組分,結(jié)果表明其補(bǔ)體系統(tǒng)可能通過凝集素途徑或替代途徑發(fā)揮生物學(xué)功能;張中日[16]通過轉(zhuǎn)錄組測序分析得出,氰氟草酯使斑馬魚(Brachydanioreriovar)的差異表達(dá)基因在藥物等代謝途徑、代謝-細(xì)胞色素P450、抗生素的生物合成和外來物質(zhì)的代謝等途徑明顯富集;張恒澤等[17]通過轉(zhuǎn)錄組測序,揭示了大黃魚(Larimichthyscrocea)對致病性假單胞菌(LAV)的免疫應(yīng)答機(jī)制,LAV免疫有效激發(fā)魚體的細(xì)胞免疫應(yīng)答,有助于快速清除胞內(nèi)病原。筆者以方斑東風(fēng)螺為試驗(yàn)對象,經(jīng)LPS注射后,利用 RNA-seq 技術(shù)獲得轉(zhuǎn)錄本后,通過DEGs的表達(dá)分析和功能富集分析,揭示LPS調(diào)控方斑東風(fēng)螺DEGs的功能和通路。該研究有助于全面深入了解細(xì)菌對方斑東風(fēng)螺發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制,為方斑東風(fēng)螺的遺傳改良提供理論基礎(chǔ),對其養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)健康持續(xù)發(fā)展有現(xiàn)實(shí)意義。

    1 材料與方法

    1.1 材料方斑東風(fēng)螺購自廣東省湛江市某東風(fēng)螺養(yǎng)殖場,平均體質(zhì)量為25 g,于實(shí)驗(yàn)室海水桶中暫養(yǎng)7 d(80 L,25 ℃)。將方斑東風(fēng)螺隨機(jī)分為試驗(yàn)組和對照組,試驗(yàn)組對方斑東風(fēng)螺注射100 μL 0.5 mg/mL LPS懸浮液,對照組注射同體積的pH 7.0的磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer solution,PBS),分別于刺激后4、8 h(分別記為LPS-4 h、LPS-8 h組)采集各組足組織樣品,于液氮中速凍,置-80 ℃下保存,用于轉(zhuǎn)錄組分析。

    1.2 轉(zhuǎn)錄組測序轉(zhuǎn)錄組文庫的制備及測序由廣州基迪奧生物科技有限公司完成。使用TRIzol法提取總RNA,利用NanoDrop 2000檢測所提RNA的純度,利用Agilent 2100檢測所提RNA的濃度,同處理組10個個體樣本合并后進(jìn)行建庫測序,用帶有Oligo(dT)的磁珠富集mRNA。加入fragmentation buffer將mRNA打斷成短片段,以mRNA為模板,用六堿基隨機(jī)引物(random hexamers)合成第1條cDNA鏈,然后加入緩沖液、dNTPs、RNase H和DNA polymerase I合成第2條cDNA鏈,經(jīng)過QiaQuick PCR試劑盒純化并加EB緩沖液洗脫后進(jìn)行末端修復(fù)、加poly(A)并連接測序接頭,然后用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行片段大小選擇,最后進(jìn)行PCR擴(kuò)增,建好的測序文庫用Illumina HiSeqTM2000進(jìn)行測序,測序讀長為雙端150 bp。

    1.3 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析測序儀產(chǎn)生的原始圖像數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為序列數(shù)據(jù)(raw reads),經(jīng)過初步的過濾后得到質(zhì)控數(shù)據(jù)(clean date或clean reads),再對下機(jī)的clean reads去除含有帶接頭、重復(fù)、測序質(zhì)量很低的reads,最后得到高質(zhì)量的質(zhì)控數(shù)據(jù)(clean reads)。通過Trinity[18]軟件進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組從頭組裝。通過BLAST[19]將Unigene序列比對到蛋白數(shù)據(jù)庫nr、SwissProt、KEGG和COG/KOG(evalue<1×10-5),得到與給定Unigene具有最高序列相似性的蛋白,從而得到該Unigene的蛋白功能注釋信息。

    1.4 差異表達(dá)基因(DEGs)分析采用短reads比對軟件Bowtie2[20]將高質(zhì)量質(zhì)控數(shù)據(jù)與參考基因序列進(jìn)行對比,根據(jù)對比結(jié)果,使用RPKM法(Reads Per kb per Million reads)計算Unigene的表達(dá)量。利用edgeR[21]進(jìn)行RNA-seq數(shù)據(jù)成對樣本之間或組間的差異表達(dá)分析,獲得不同時間梯度的DEGs。在篩選過程中,利用FDR與log2FC篩選DEGs,篩選條件為FDR<0.05且|log2FC|>1。得到DEGs后,對DEGs進(jìn)行GO功能注釋分析及KEGG Pathway富集分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 測序結(jié)果統(tǒng)計及質(zhì)量評估用Illumina HiSeqTM2000分別對方斑東風(fēng)螺LPS空白對照組(BLANK)、LPS刺激4 h后取樣組(LPS-4 h)和LPS刺激8 h后取樣組(LPS-8 h)測序,共構(gòu)建了3個轉(zhuǎn)錄組文庫,共獲得81 773條unigenes,序列平均長度681 bp,序列長度中位數(shù)(N50)為1 035 bp,每組GC含量為46.15%~47.81%,過濾后的clean reads在97.58%~97.74%, Q20均不小于98.49%, Q30均不小于95.40%(表1),說明測序質(zhì)量良好,能進(jìn)行后續(xù)的數(shù)據(jù)分析[22]。從長度分布(圖1)與GC含量等方面對unigenes進(jìn)行評估,數(shù)據(jù)顯示測序質(zhì)量好,可信度高。

    表1 轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)評估統(tǒng)計

    圖1 方斑東風(fēng)螺unigenes的長度分布Fig.1 Length distribution of unigene sequence in B.areolata

    2.2 Unigene功能注釋使用4大數(shù)據(jù)庫(KOG、Nr、Swiss-Prot和KEGG)注釋方斑東風(fēng)螺轉(zhuǎn)錄組unigenes,分別對應(yīng)有13 256、21 702、15 335和11 417條unigenes獲得注釋。其中,9 280條unigenes在以上所有數(shù)據(jù)庫中同時注釋成功,21 938條unigenes至少被1個數(shù)據(jù)庫注釋。

    通過轉(zhuǎn)錄組測序中的unigenes與GO數(shù)據(jù)庫的比對,得知在被unigenes注釋的47個功能條目中,包括生物功能(生長、定位等)、細(xì)胞組分(細(xì)胞器、高分子配合物等)、分子功能(裝訂、運(yùn)輸?shù)?3個亞類。分析顯示,生物功能含19個功能條目,細(xì)胞組分含17個功能條目,分子功能含11個條目(圖2)。

    圖2 方斑東風(fēng)螺GO功能注釋圖Fig.2 GO function annotation of B.areolata

    2.3 DEGs分析KEGG數(shù)據(jù)庫結(jié)果顯示,DEGs富集在5個A級KEGG通路,33個B級KEGG通路,232個C級KEGG通路中。其中,5個A級KEGG通路分別為新陳代謝、遺傳信息處理、環(huán)境信息處理、細(xì)胞進(jìn)程和有機(jī)系統(tǒng)。在232個C級KEGG通路(表2)中,共富集到5 141個基因,其中參與代謝通路的基因數(shù)量最多,共有1 455個(28.30%),參與次生代謝物的生物合成的基因有447個(8.69%),參與核糖體的基因有384個(7.47%),參與內(nèi)吞作用的基因有300個(5.84%),參與抗生素生物合成的基因有276(5.37%),參與泛素介導(dǎo)的蛋白水解的基因有261個(5.08%)。

    表2 方斑東風(fēng)螺轉(zhuǎn)錄組Unigene的KEGG功能分類統(tǒng)計(前10個)

    利用edgeR[21]進(jìn)行RNA-seq數(shù)據(jù)成對樣本之間或組間的差異表達(dá)分析,利用FDR與log2FC篩選DEGs,篩選條件為FDR<0.05且|log2FC|>1。在BLANK vs.LPS-4 h時,顯著DEGs的表達(dá)情況為:9 096個顯著DEGs中4 754個上調(diào),4 342個下調(diào);在BLANK vs.LPS-8 h時,顯著DEGs的表達(dá)情況為:10 335個顯著DEGs中4 631個上調(diào),5 704個下調(diào);在LPS-4 h vs.LPS-8 h時,表達(dá)情況為:8 756個顯著DEGs中3 475個上調(diào),5 281個下調(diào)(圖3)。

    圖3 樣品間DEGs統(tǒng)計Fig.3 Statistics of DEGs between samples

    2.4 DEGs的GO和KEGG注釋在DEGs的GO分類圖(圖4)中,橫坐標(biāo)為二級GO term,縱坐標(biāo)為該term的基因數(shù)量,紅色代表基因上調(diào),綠色代表基因下調(diào)。結(jié)果顯示,在BLANK vs.LPS-4 h組中,在生物功能中,細(xì)胞過程(cellular process)、代謝過程(metabolic process)和單組織過程(Single organism process)基因的上調(diào)與下調(diào)較多;在細(xì)胞組分中,細(xì)胞(Cell)、細(xì)胞部分(cell part)和細(xì)胞器(organelle)基因的上調(diào)與下調(diào)較多;而在分子功能中,基因的上調(diào)與下調(diào)主要集中在綁定(binding)、催化活性(catalytic activity)方面(圖4a)。在BLANK vs.LPS-8 h組中,在生物功能中,細(xì)胞過程(cellular process)、代謝過程(metabolic process)和單組織過程(single organism process)基因的上調(diào)與下調(diào)較多;在細(xì)胞組分中,細(xì)胞(cell)、細(xì)胞部分(cell part)、大分子配合物(macromolecular complex)和細(xì)胞器(organelle)的上調(diào)與下調(diào)較多;而在分子功能中,基因的上調(diào)與下調(diào)主要集中在綁定(binding)、催化活性(catalytic activity)方面(圖4b)。在LPS-4 h vs.LPS-8 h組中,在生物功能中,細(xì)胞過程(cellular process)、代謝過程(metabolic process)和單組織過程(single organism process)基因的上調(diào)與下調(diào)較多;在細(xì)胞組分中,細(xì)胞(cell)、細(xì)胞部分(cell part)、大分子配合物(macromolecular complex)和細(xì)胞器(organelle)的上調(diào)與下調(diào)較多;而在分子功能中,基因的上調(diào)與下調(diào)主要集中在綁定(binding)、催化活性(catalytic activity)方面(圖4c)。

    圖4 BLANK vs.LPS-4 h(a)、BLANK vs.LPS-8 h(b)和LPS-4 h vs.LPS-8 h(c)的差異基因GO分類圖Fig.4 GO classification maps of differential genes BLANK vs.LPS-4 h (a),BLANK vs.LPS-8 h (b) and LPS-4 h vs.LPS-8 h(c)

    對BLANK、LPS刺激4 h和8 h的DEGs進(jìn)行KEGG通路富集分析,結(jié)果顯示,在BLANK vs.LPS-4 h組中,在心肌收縮、神經(jīng)活性配體受體相互作用和代謝途徑等201個通路中,共富集到506個DEGs(圖5a);在BLANK vs.LPS-8 h組中,在谷胱甘肽代謝、核糖體和神經(jīng)活性配體受體相互作用等191個通路中,共富集到551個DEGs(圖5b);在LPS-4 h vs.LPS-8 h組中,在DNA復(fù)制、神經(jīng)活性配體受體相互作用和鞘糖脂生物合成等173個代謝通路中,共富集到414個DEGs(圖5c)。

    圖5 BLANK vs.LPS-4 h(a)、BLANK vs.LPS-8 h(b)和LPS-4 h vs.LPS-8 h(c)的KEGG富集氣泡圖Fig.5 KEGG classification maps of differential genes BLANK vs.LPS-4 h (a),BLANK vs.LPS-8 h (b) and LPS-4 h vs.LPS-8 h(c)

    根據(jù)DEGs的GO功能分類和KEGG富集分析,篩選到NOD樣受體信號通路、趨化因子信號通路、B細(xì)胞受體信號通路、補(bǔ)體和凝血級聯(lián)反應(yīng)、Fc蛋白RI信號通路、自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性、T細(xì)胞受體信號通路、toll樣受體信號通路、rig-i樣受體信號通路、血小板激活、造血細(xì)胞系通路和抗原的處理和呈遞等免疫信號通路。

    3 討論

    轉(zhuǎn)錄組學(xué)是研究特定細(xì)胞、組織或器官在特定生長發(fā)育階段或某種生理狀況下所有轉(zhuǎn)錄本的學(xué)科[10],基于RNA-seq的轉(zhuǎn)錄組分析在許多水生生物研究中得到應(yīng)用,如李喜蓮等[23]通過RNA-seq研了羅氏沼蝦(Macrobrachiumrosenbergii)不同組織的轉(zhuǎn)錄組差異;王菁等[24]通過轉(zhuǎn)錄組測序挖掘了方斑東風(fēng)螺(Babyloniaareolata)的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)。該研究利用RNA-seq技術(shù),對方斑東風(fēng)螺進(jìn)行了無參轉(zhuǎn)錄組測序,得到81 773個unigenes,其中得到注釋的基因數(shù)總共為21 938個,注釋率為26.83%,注釋率較低的原因可能是與方斑東風(fēng)螺相近的物種在公共數(shù)據(jù)庫中收錄較少,其他無脊椎動物也有注釋率較低的情況,如克氏原螯蝦(Procambarusclarkii)的卵巢、肝胰腺和肌肉組織只有30.1%的基因得到注釋[13]。該研究得到的unigenes與Nr數(shù)據(jù)庫比對結(jié)果顯示,與在公共數(shù)據(jù)庫中已注冊的方斑東風(fēng)螺序列匹配的unigenes僅有0.014%,這說明目前公共數(shù)據(jù)庫中仍缺乏方斑東風(fēng)螺的基因信息,該研究是對方斑東風(fēng)螺基因信息庫的有力補(bǔ)充。免疫調(diào)控機(jī)制一直是貝類研究的熱點(diǎn),已有研究報道,貝類的免疫受到免疫細(xì)胞、體液和化學(xué)遞質(zhì)等的綜合調(diào)控[22]。

    該試驗(yàn)中,BLANK vs.LPS-4 h組的DEGs顯著富集至NOD樣受體信號通路,在NOD樣受體信號通路中篩選到半胱天冬酶8(caspase 8; CASP 8)、半胱天冬酶募集域家族9(caspase recruitment domain-containing protein 9; CARD 9)和含有桿狀病毒IAP重復(fù)序列的蛋白質(zhì)2/3(baculoviral IAP repeat-containing protein 2/3; BIRC2_3)。caspase是一類具有天冬氨酸特異性的半胱氨酸蛋白酶,參與所有凋亡通路的級聯(lián)反應(yīng),是細(xì)胞凋亡的核心[25]。Caspase 8是外源性細(xì)胞凋亡途徑的關(guān)鍵啟動子,caspase 8酶原通過其上的DED與FADD(fasassoclated death domain protein)的DED相結(jié)合形成多聚體,將caspase 8酶原招募到細(xì)胞質(zhì)膜上,形成死亡誘導(dǎo)信號復(fù)合物DISC(death inducing signaling complex),在復(fù)合物中進(jìn)而形成有活性的caspase 8,發(fā)生caspase級聯(lián)反應(yīng),啟動細(xì)胞凋亡[26]。CARD 9可與開放的Apaf-1結(jié)合,進(jìn)而與大小亞基結(jié)合,使caspase 9得到活化,啟動細(xì)胞凋亡[27]。BIRC2_3是凋亡相關(guān)基因,其編碼的蛋白可抑制細(xì)胞凋亡,其中凋亡抑制因子(IAP)是通過抑制半胱天冬酶(caspases)的活性而起到抑制凋亡的作用[28]。有研究者從盤紋羅鮑(Haliotisdiversicolor)中鑒定出了caspase-3-like(saCASP-3lp)基因,并且進(jìn)一步研究表明saCASP-3lp可能是sacaspase-8上游的調(diào)節(jié)分子,并參與細(xì)胞凋亡過程[29]。在BLANK vs.LPS-4 h組的BIRC2_3呈上調(diào),其通過受體相互作用的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶2(receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 2;RIPK2)激活CASP 8和CARD 9,CASP 8和CARD 9同樣參與了細(xì)胞凋亡過程,其中CARD 9激活了p38、JNK,最終激活MAPK通路,促進(jìn)促炎因子的釋放,參與了細(xì)胞的凋亡過程[27]。在BLANK vs.LPS-8 h組,免疫相關(guān)DEGs同樣顯著富集至NOD樣受體信號通路,但在NOD樣受體信號通路中除了篩選到CARD 9和BIRC2_3,還篩選到了熱休克蛋白90α(molecular chaperone 90 A;HSP90α)。HSPs是一類進(jìn)化上高度保守的蛋白,可以增強(qiáng)細(xì)胞對應(yīng)激的反應(yīng)能力[30]。有研究發(fā)現(xiàn),縊蟶(Sinonovaculaconstricta)[30]、菲律賓蛤仔(Ruditapesphilippinarum)[31]在受到脅迫后HSP90發(fā)生顯著變化。在該試驗(yàn)中,HSP90α在方斑東風(fēng)螺受到LPS刺激后亦發(fā)生顯著變化,說明HSP90α在LPS刺激后的免疫反應(yīng)中發(fā)揮了作用。

    在該試驗(yàn)中,BLANK vs.LPS-8 h組的DEGs顯著富集到趨化因子信號通路。趨化因子(chemokine)是機(jī)體重要的免疫調(diào)節(jié)因子,可協(xié)調(diào)免疫細(xì)胞遷移[32]。范婷婷[33]在短蛸(Octopusocellatus)幼體對鰻弧菌(Vibrioanguillarum)感染應(yīng)答中發(fā)現(xiàn)有3個差異表達(dá)基因(Gai、PLCβ、β-arrestin)在趨化因子信號通路富集。該試驗(yàn)中,有PKA、SOS(son of sevenless)、CDC42(cell division control protein 42)差異表達(dá)基因在趨化因子信號通路富集。其中CDC42和Rac1是PAK的主要激活劑,通過調(diào)控PKA的表達(dá)來抑制肌動蛋白細(xì)胞骨架的調(diào)節(jié)[34]。從而達(dá)到清除病原體和促進(jìn)創(chuàng)傷組織愈合,維持組織細(xì)胞的平衡的目的[33],表明該信號通路可能在方斑東風(fēng)螺免疫應(yīng)答過程中發(fā)揮重要作用。

    在BLANK vs.LPS-4 h組的DEGs除了顯著富集至趨化因子信號通路,還富集至B細(xì)胞受體信號通路、補(bǔ)體和凝血級聯(lián)反應(yīng)、Fc蛋白RI信號通路、自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性、T細(xì)胞受體信號通路、toll樣受體信號通路、rig-i樣受體信號通路、血小板激活和抗原的處理和呈遞等免疫相關(guān)KEGG通路,這些通路均與化學(xué)遞質(zhì)的傳遞有關(guān),在這些通路中篩選出了一些免疫相關(guān)的基因,如Ras 相關(guān)C3肉毒桿菌毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1;Rac1)、熱休克蛋白70(heat shock 70kDa protein 1/2/6/8;HSPA1s)、α-1-抗胰蛋白酶(alpha-1-antitrypsin;Serpina1b)和蛋白激酶A(protein kinase A[EC:2.7.11.11];PKA)。其中,Rac1不僅與PAK參與了MARK通路的激活,還通過JNK通路來激活炎癥反應(yīng),從而在由免疫球蛋白受體所介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞吞噬作用中起著關(guān)鍵作用[35]。

    在LPS-4 h vs.LPS-8 h組的DEGs還富集至抗原的處理和呈遞通路、NOD樣受體信號通路、造血細(xì)胞系和Toll樣受體信號通路等免疫信號通路。其中,抗原的處理和呈遞通路篩選到HSP70、HSP90α差異表達(dá)基因。其中,HSP90α基因還被富集至NOD樣受體信號通路、PI3K-Akt信號通路等。與試驗(yàn)組LPS-4 h組相比,HSP90α表達(dá)量下降。在NOD樣受體信號通路中,除了篩選到HSP90α基因,還篩選到BIRC2_3基因。與試驗(yàn)組LPS-4 h組相比,BIRC2_3的表達(dá)量差異不顯著,在4 h時表達(dá)量最大。在Toll樣受體信號通路中篩選到Rac1。與試驗(yàn)組LPS-4 h組相比,Rac1表達(dá)量下降,在4 h 時表達(dá)量最大。在造血細(xì)胞系通路中篩選到低親和力免疫球蛋白εFc受體(low affinity immunoglobulin ε Fc receptor;FCER2)。Ren等[36]在鰻弧菌感染下菲律賓蛤仔肝胰腺轉(zhuǎn)錄組分析中,同樣發(fā)現(xiàn)了8個DEGs在造血細(xì)胞系通路中。

    該試驗(yàn)注釋到了僅存在于脊椎動物中的特定通路和同源基因,如造血細(xì)胞系通路、抗原處理和呈遞通路。這些通路和基因的進(jìn)化關(guān)系和免疫相關(guān)功能將是未來幾年的主要研究領(lǐng)域。

    4 結(jié)論

    根據(jù)GO功能分類和KEGG信號通路分析篩選到NOD樣受體信號通路、趨化因子信號通路、B細(xì)胞受體信號通路、補(bǔ)體和凝血級聯(lián)反應(yīng)、Fc蛋白RI信號通路、自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性、T細(xì)胞受體信號通路、toll樣受體信號通路、rig-i樣受體信號通路、血小板激活、造血細(xì)胞系通路和抗原的處理和呈遞等免疫信號通路以及大量與方斑東風(fēng)螺免疫相關(guān)的候選基因,如Birc3、Rac1、hsps-1、Serpina1b、Casp8、BIRC2、TPK3、TP02_0244、ACT1、Fcer2、Diap2、Cdc42-、CARD11、actc1和HSP70等。該研究結(jié)果豐富了方斑東風(fēng)螺的基因資源,可為方斑東風(fēng)螺的免疫研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

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