• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    雞傳染性支氣管炎·H9亞型禽流感病毒與雞毒支原體混合感染的診治

    2023-03-20 06:14:52江曉陽劉俊鏞高亞東孫景煜尹建華
    安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2023年4期
    關(guān)鍵詞:組織液尿囊血凝

    江曉陽,王 艷,劉俊鏞,劉 旭,高亞東,孫景煜,張 越,尹建華

    (青島匯豐動(dòng)物保健品有限公司,山東青島 266109)

    雞傳染性支氣管炎是由雞傳染性支氣管炎病毒引起雞的一種急性、高度接觸性的呼吸道傳染病,其臨床癥狀為呼吸困難、發(fā)出啰音、張口呼吸、咳嗽,夜間關(guān)燈后癥狀尤為明顯[1-2]。如果病原不是腎病變型毒株或不發(fā)生并發(fā)病,死亡率較低;若是腎病變型毒株,可能在肝臟等器官看到白色尿酸鹽沉積,死亡率在20%左右[3]。

    禽流感是禽流感病毒引起的一種對(duì)養(yǎng)雞業(yè)危害較大的一種疾病,根據(jù)不同致病性分為高致病性毒株、低致病性中弱毒株和非致病性無毒株[4]。高致病性毒株導(dǎo)致的病死率可達(dá)100%;有些低致病性毒株導(dǎo)致的雞死亡率為0~15%,另外飼養(yǎng)管理不當(dāng)、雞群營養(yǎng)狀況不良以及環(huán)境應(yīng)激因素都可能加重病情,當(dāng)發(fā)生并發(fā)感染時(shí)可使雞群死亡率升高[5]。

    雞毒支原體感染是雞的一種慢性呼吸道病,流行于全世界雞場中,在國內(nèi)也普遍發(fā)生。根據(jù)血清學(xué)調(diào)查可知,雞毒支原體平均感染率為70%~80%[6]。感染雞通常表現(xiàn)為氣管啰音、咳嗽、流鼻涕、流眼淚,一側(cè)或兩側(cè)眼瞼腫脹或黏合[7]。一般來說,雞死亡率較低,發(fā)生環(huán)境應(yīng)激或者并發(fā)感染時(shí)雞死亡率升高,雞毒支原體常與呼吸道有關(guān)的疾病伴發(fā)[8]。

    春秋季節(jié)肉雞多發(fā)呼吸道疾病,引起心衰、肺出血、水腫、發(fā)黑,甚至死亡,俗稱“心肺病”或“黑肺病”,引起這種疾病的病因尚不清楚。有人認(rèn)為,這是因?yàn)殡u場暴發(fā)過支原體感染,當(dāng)時(shí)根除不徹底,后期又感染了其他呼吸道疾病或細(xì)菌感染;也有報(bào)道認(rèn)為,引起該病的主要病原為低致病性禽流感病毒,又混合感染了其他細(xì)菌或病毒。大多數(shù)人認(rèn)為,該病為混合感染,增加了該病的診斷難度[9]。筆者通過病理學(xué)解剖、細(xì)菌分離培養(yǎng)、病毒分離鑒定、動(dòng)物回歸試驗(yàn)和分子生物學(xué)檢測(cè)對(duì)山東省日照市某發(fā)病雞場5只病死雞進(jìn)行病因診斷,旨在為該病的防治與診斷提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)對(duì)象山東省日照市某肉雞場病死雞5只、同一種雞場1日齡雛雞20只、10日齡SPF雞胚15枚。

    1.2 試驗(yàn)儀器電熱恒溫培養(yǎng)箱(型號(hào)300,購自龍口市先科儀器公司);PCR擴(kuò)增儀(型號(hào)A300,購自杭州朗基科學(xué)儀器有限公司);電泳儀(型號(hào)DYY-6C型,購自北京六一儀器廠);凝膠成像系統(tǒng)(Bio-Rad GelDoc XR,購自南京貝登醫(yī)療股份有限公司);孵化器(購自山東德州旭升孵化設(shè)備研制中心)。

    1.3 試驗(yàn)試劑營養(yǎng)瓊脂、麥康凱培養(yǎng)基、SS瓊脂,均購自青島海博生物技術(shù)有限公司;病毒組基因DNA/RNA提取試劑盒、 2× AccurateTaq預(yù)混液,均購自湖南艾科瑞生物工程有限公司。

    1.4 試驗(yàn)方法

    1.4.1臨床診斷和剖檢。詢問并記錄雞群狀態(tài),檢查病死雞體表并進(jìn)行剖檢,無菌采集相關(guān)病變組織(留下部分肝臟),將病變組織與生理鹽水按1∶2的質(zhì)量比勻漿,反復(fù)凍融3次后離心取上清,備用(編號(hào)01)。

    1.4.2細(xì)菌分離與培養(yǎng)。將無菌采集的肝臟按照細(xì)菌分離培養(yǎng)的方法接種到營養(yǎng)瓊脂、麥康凱培養(yǎng)基、SS培養(yǎng)基上,置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。

    1.4.3病毒分離鑒定。實(shí)驗(yàn)組取01號(hào)取組織液,經(jīng)0.22 μm濾器過濾后,接種于10枚10日齡SPF雞胚尿囊腔中。連續(xù)觀察72 h,每次間隔8 h,記錄死亡數(shù)。收取尿囊液以及胚體,供血凝試驗(yàn)以及分子生物學(xué)檢測(cè)(編號(hào)02)。

    對(duì)照組取無菌生理鹽水,經(jīng)0.22 μm濾器過濾后,接種于5枚10日齡SPF雞胚尿囊腔中。連續(xù)觀察72 h,每次間隔8 h,記錄死亡數(shù);收取尿囊液以及胚體,供血凝試驗(yàn)以及分子生物學(xué)檢測(cè)(編號(hào)03)。

    1.4.4動(dòng)物回歸試驗(yàn)。將20只雛雞分成3組:一組12只,進(jìn)行攻毒試驗(yàn)(試驗(yàn)組),另一組5只注射生理鹽水(對(duì)照組),剩余3只(空白組)按相關(guān)病變組織無菌采集相應(yīng)的組織,將組織與生理鹽水按1∶2的質(zhì)量比勻漿后,反復(fù)凍融3次、離心,取上清備用(編號(hào)04)。

    取編號(hào)01組織液,對(duì)試驗(yàn)組7日齡肉雞進(jìn)行攻毒,攻毒方式為腿部肌肉注射和口服各0.2 mL。取無菌生理鹽水,對(duì)對(duì)照組7日齡肉雞進(jìn)行攻毒,攻毒方式為腿部肌肉注射和口服各0.2 mL。攻毒后觀察試驗(yàn)組和對(duì)照組雞群的發(fā)育狀態(tài),連續(xù)觀察14 d,每天觀察3~4次,于15日齡分別采集口、鼻以及泄殖腔棉拭子,試驗(yàn)組編號(hào)05,對(duì)照組編號(hào)06。

    在觀察過程中記錄雞群狀態(tài),及時(shí)處理死亡雞只,無菌采集病料,將病料與生理鹽水按1∶2的質(zhì)量比勻漿,反復(fù)凍融3次,離心后取上清,備用。第15天,對(duì)所有雞只進(jìn)行處理,無菌采集相關(guān)病料,試驗(yàn)組死亡雞只編號(hào)07、存活雞只編號(hào)08,對(duì)照組死亡雞只編號(hào)09、存活雞只編號(hào)10。

    1.4.5分子生物學(xué)檢測(cè)。對(duì)上述所有編號(hào)的組織液以及尿囊液,根據(jù)核酸提取試劑盒說明書步驟提取核酸,并對(duì)提取的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,得到cDNA;用家禽?;己粑兰膊〔《镜囊镞M(jìn)行擴(kuò)增后,取6~7 μL PCR產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳,最后通過凝膠成像系統(tǒng)觀察是否存在目的條帶。

    反轉(zhuǎn)錄體系:dNTP Mixture 2.0 μL、5×Buffer 4.0 μL、M-MLV 0.5 μL、Random Primer(nonadeoxyribonucleotide mixture;pd(N)9)1.0 μL、Recombinant RNase Inhibitor 0.5 μL、RNA 12.0 μL,總體積為20.0 μL。 反轉(zhuǎn)錄程序:30 ℃ 10 min,42 ℃ 1 h,4 ℃下保存。

    PCR擴(kuò)增體系:ddH2O 8.5 μL、2× AccurateTaqMix 12.5 μL、上游引物 1.0 μL、下游引物 1.0 μL、DNA/cDNA 2.0 μL,總體積25.0 μL。 PCR擴(kuò)增程序:預(yù)變性95 ℃ 5 min;95 ℃ 42 s,48~60 ℃ 42 s,72 ℃ 1 min,共35個(gè)循環(huán);延伸72 ℃ 10 min,4 ℃下保存。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 臨床診斷和剖檢山東省日照市某雞場突然發(fā)病,以呼吸道癥狀為主,經(jīng)詢問養(yǎng)殖場老板了解到該養(yǎng)殖場曾暴發(fā)過雞毒支原體感染,經(jīng)過一段時(shí)間凈化后雞群比較穩(wěn)定,該批雞苗進(jìn)場前雞場已徹底清洗消毒,雞苗進(jìn)場前免疫新城疫禽流感二聯(lián)苗,7日齡免疫雞傳染性支氣管炎4/91 QX型二聯(lián)減毒疫苗,前期雞群發(fā)育正常,15日齡個(gè)別雞出現(xiàn)氣喘,18日齡雞群出現(xiàn)咳嗽,關(guān)燈后尤為明顯,并出現(xiàn)雞只死亡,嚴(yán)重時(shí)死亡率高達(dá)18%。對(duì)死亡雞只進(jìn)行病理學(xué)剖檢,發(fā)現(xiàn)支氣管栓塞、氣管喉頭出血、肺出血水腫發(fā)黑、氣囊增厚且有干酪物、肝臟腫大、腎臟腫大、輸尿管有尿酸鹽沉淀、法氏囊腫大[10](圖1)。

    注:A.支氣管栓塞;B.氣管喉頭出血;C.肺出血水腫發(fā)黑。Note:A.Bronchial embolism;B.Trachea laryngeal hemorrhage;C.Pulmonary edema,bleeding and blackening.圖1 病死雞剖檢結(jié)果Fig.1 Autopsy results of dead chickens

    2.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)在營養(yǎng)瓊脂、麥康凱培養(yǎng)基、SS培養(yǎng)基上,37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后,經(jīng)觀察未發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌菌落生長(圖2)。

    注:A.營養(yǎng)瓊脂;B.SS培養(yǎng)基;C.麥康凱培養(yǎng)基。Note:A.Nutrient Agar;B.Salmonella Shigella Agar;C.Maconkey Agar.圖2 細(xì)菌分離培養(yǎng)結(jié)果Fig.2 Results of bacteria isolation and culture

    2.3 病毒分離鑒定試驗(yàn)組:接種雞胚后,前48 h雞胚發(fā)育正常,48 h后雞胚血管輕微脫落,64 h雞胚全部死亡。收取尿囊液,經(jīng)血凝試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)有血凝現(xiàn)象發(fā)生,血凝效價(jià)為26。

    對(duì)照組:接種雞胚后,雞胚發(fā)育正常,無死亡;64 h終止孵化,收取尿囊液后經(jīng)血凝試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)有血凝現(xiàn)象發(fā)生。

    2.4 動(dòng)物回歸試驗(yàn)攻毒前對(duì)試驗(yàn)雛雞進(jìn)行病理學(xué)剖檢,未發(fā)現(xiàn)明顯的病理變化。試驗(yàn)組試驗(yàn)前期雛雞生長發(fā)育正常,14日齡出現(xiàn)雞只羽毛蓬松、精神萎靡,有呼吸癥狀;16日齡死亡3只;17日齡死亡4只;18日齡死亡2只,剩余3只雞未死亡,但發(fā)育遲緩,采食量及飲水量下降。

    對(duì)試驗(yàn)組死亡雞只進(jìn)行剖檢,發(fā)現(xiàn)脾臟腫大出血,胰腺出血,腺胃黏膜易脫落,胃壁增厚、法氏囊腫大、有黏液,肺水腫出血,氣管喉頭出血,胸腺出血,腎腫大出血,氣囊增厚、個(gè)別有干酪物。

    對(duì)試驗(yàn)組未死亡雞只進(jìn)行剖檢,其中2只雞法氏囊腫大,另1只雞組織器官正常;1只雞氣囊有干酪物,肺出血,肝臟正常,腎臟出血,法氏囊腫大、有黏液,氣管出血,腸道血管充血。

    對(duì)照組雞只未死亡,發(fā)育正常,病理學(xué)剖檢未發(fā)現(xiàn)明顯的病理變化。

    2.5 分子生物學(xué)檢測(cè)對(duì)試驗(yàn)中所有編號(hào)樣品進(jìn)行PCR檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果如圖3~6所示。

    注:M為 DNA Marker 1 000;1.病死雞組織液;2.試驗(yàn)組雞胚尿囊液;3.對(duì)照組雞胚尿囊液;4.空白組雞只組織液;5.試驗(yàn)組口、鼻以及泄殖腔棉拭子;6.對(duì)照組口、鼻以及泄殖腔棉拭子:7.試驗(yàn)組死亡雞組織液;8.試驗(yàn)組未死亡雞組織液;10.對(duì)照組未死亡雞組織液。Note:M.DNA Marker 100 0;1.Tissue fluid from dead chickens;2.Experimental group chicken embryo allantoic liquid;3.Control group chicken embryo allantoic fluid;4.Blank group chicken tissue fluid;5.Cotton swabs from mouth,nose and cloaca of the experimental group;6.Control group cotton swabs from mouth,nose and cloaca;7.Tissue fluid of dead chickens in the experimental group;8.Undead chicken tissue fluid in the experimental group;10.Undead chicken tissue fluid in the control group.圖3 禽流感病毒PCR檢測(cè)結(jié)果Fig.3 PCR results of avian influenza virus

    注:M為DNA Marker 1 000;1.病死雞組織液;2.試驗(yàn)組雞胚尿囊液;3.對(duì)照組雞胚尿囊液;4.空白組雞組織液;5.試驗(yàn)組口、鼻以及泄殖腔棉拭子;6.對(duì)照組口、鼻以及泄殖腔棉拭子;7.試驗(yàn)組死亡雞組織液;8.試驗(yàn)組未死亡雞組織液;10.對(duì)照組未死亡雞組織液。Note:M.DNA Marker 1 000;1.Tissue fluid from dead chickens;2.Experimental group chicken embryo allantoic liquid;3.Control group chicken embryo allantoic fluid;4.Blank group chicken tissue fluid;5.Cotton swabs from mouth,nose and cloaca of the experimental group;6.Control group cotton swabs from mouth,nose and cloaca;7.Tissue fluid of dead chickens in the experimental group;8.Undead chicken tissue fluid in the experimental group;10.Undead chicken tissue fluid in the control group.圖4 H9亞型禽流感病毒PCR檢測(cè)結(jié)果Fig.4 PCR results of avian influenza H9 subtype virus

    注:M為DNA Marker 1 000;1.病死雞組織液;2.試驗(yàn)組雞胚尿囊液;3.對(duì)照組雞胚尿囊液;4.空白組雞組織液;5.試驗(yàn)組口、鼻以及泄殖腔棉拭子;6.對(duì)照組口、鼻以及泄殖腔棉拭子;7.試驗(yàn)組死亡雞組織液;8.試驗(yàn)組未死亡雞組織液;10.對(duì)照組未死亡雞組織液。Note:M.DNA Marker 1 000;1.Tissue fluid from dead chickens;2.Experimental group chicken embryo allantoic liquid;3.Control group chicken embryo allantoic fluid;4.Blank group chicken tissue fluid;5.Cotton swabs from mouth,nose and cloaca of the experimental group;6.Control group cotton swabs from mouth,nose and cloaca;7.Tissue fluid of dead chickens in the experimental group;8.Undead chicken tissue fluid in the experimental group;10.Undead chicken tissue fluid in the control group.圖5 雞毒支原體PCR檢測(cè)結(jié)果Fig.5 PCR results of Mycoplasma gallisepticum

    注:M為DNA Marker 1 000;1.病死雞組織液;2.試驗(yàn)組雞胚尿囊液;3.對(duì)照組雞胚尿囊液;4.空白組雞組織液;5.試驗(yàn)組口、鼻以及泄殖腔棉拭子;6.對(duì)照組口、鼻以及泄殖腔棉拭子;7.試驗(yàn)組死亡雞組織液;8.試驗(yàn)組未死亡雞組織液;10.對(duì)照組未死亡雞組織液。Note:M.DNA Marker 1 000;1.Tissue fluid from dead chickens;2.Experimental group chicken embryo allantoic liquid;3.Control group chicken embryo allantoic fluid;4.Blank group chicken tissue fluid;5.Cotton swabs from mouth,nose and cloaca of the experimental group;6.Control group cotton swabs from mouth,nose and cloaca;7.Tissue fluid of dead chickens in the experimental group;8.Undead chicken tissue fluid in the experimental group;10.Undead chicken tissue fluid in the control group.圖6 雞傳染性支氣管炎病毒PCR檢測(cè)結(jié)果Fig.6 PCR results of avian infectious bronchitis virus

    3 討論與結(jié)論

    通過將病死雞病料組織液接種在雞胚上,可使雞胚致死,并且有血凝現(xiàn)象發(fā)生,說明病料含有毒力較強(qiáng)的血凝性病原;動(dòng)物回歸試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),雞死亡率達(dá)75%,說明病毒致死性強(qiáng);通過分子生物學(xué)檢測(cè)確定雞群發(fā)生了雞傳染性支氣管炎病毒和H9亞型禽流感病毒混合感染。動(dòng)物回歸試驗(yàn)結(jié)果表明,試驗(yàn)組H9亞型禽流感病毒和雞傳染性支氣管炎病毒檢測(cè)結(jié)果呈陽性,說明試驗(yàn)組前期發(fā)生了雞傳染性支氣管炎和H9亞型禽流感病毒排毒,后期死亡雞未檢出雞傳染性支氣管炎病毒,H9亞型禽流感病毒和雞毒支原體檢測(cè)結(jié)果呈陽性;未死亡雞檢測(cè)出雞毒支原體;對(duì)照組未檢出陽性病原。綜上所述,該雞場前期可能發(fā)生雞毒支原體隱性感染,機(jī)體免疫力低下。使用雞傳染性支氣管炎4/91 QX型二聯(lián)減毒疫苗免疫后,隨著時(shí)間的推移,疫苗毒力累計(jì)量增加,進(jìn)一步損害機(jī)體免疫器官,導(dǎo)致繼發(fā)感染H9亞型禽流感病毒,出現(xiàn)大量雞只死亡。

    猜你喜歡
    組織液尿囊血凝
    胎兒臍尿管未閉合并尿囊囊腫的產(chǎn)前超聲診斷及預(yù)后
    奧美拉唑、血凝酶聯(lián)合生長抑素治療上消化道出血的效果
    穴位注射人胎盤組織液配合針刺治療面神經(jīng)炎的臨床觀察
    組織液動(dòng)脈滲出說
    人體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)復(fù)習(xí)策略研究
    祖國(2017年5期)2017-03-22 12:58:31
    膀胱尿囊囊腫破裂合并臍膨出1例
    全自動(dòng)血凝分析儀采用2種測(cè)定血漿纖維蛋白原方法的評(píng)價(jià)
    雞新城疫病毒抗原制備參數(shù)優(yōu)化相關(guān)性研究
    STA Compact血凝儀在肝素抗凝治療中的臨床作用
    自體痂皮回植后痂下組織液中炎癥介質(zhì)分析
    国产一区二区在线观看日韩 | 亚洲国产色片| 老司机午夜十八禁免费视频| 99精品在免费线老司机午夜| 日本黄大片高清| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 俄罗斯特黄特色一大片| 黄色片一级片一级黄色片| 午夜久久久久精精品| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 精品人妻1区二区| 深夜精品福利| a在线观看视频网站| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国内精品一区二区在线观看| 高清在线国产一区| 看免费av毛片| 亚洲不卡免费看| 日本 欧美在线| 久久久成人免费电影| 在线免费观看的www视频| 亚洲熟妇熟女久久| 中亚洲国语对白在线视频| 女警被强在线播放| 亚洲久久久久久中文字幕| 怎么达到女性高潮| 激情在线观看视频在线高清| 好男人电影高清在线观看| 精华霜和精华液先用哪个| www.999成人在线观看| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲久久久久久中文字幕| 搡老熟女国产l中国老女人| 日本黄色视频三级网站网址| 成人三级黄色视频| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲成av人片在线播放无| 成人国产综合亚洲| 亚洲精品在线观看二区| 国产成年人精品一区二区| 少妇人妻一区二区三区视频| 999久久久精品免费观看国产| 午夜福利在线在线| 国产成人福利小说| 亚洲在线观看片| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 天堂影院成人在线观看| 一a级毛片在线观看| 中出人妻视频一区二区| 午夜福利18| 欧美色欧美亚洲另类二区| 日韩精品青青久久久久久| 精品一区二区三区视频在线 | 久久久久久大精品| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产欧美日韩精品亚洲av| 高清在线国产一区| 欧美午夜高清在线| 亚洲天堂国产精品一区在线| 午夜免费观看网址| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产主播在线观看一区二区| 国产精品久久电影中文字幕| avwww免费| 级片在线观看| 久久久久久久久大av| 精品久久久久久久久久久久久| 亚洲美女视频黄频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 日本 av在线| 亚洲国产精品久久男人天堂| 香蕉av资源在线| 两个人看的免费小视频| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 99久久精品热视频| 久久人妻av系列| 首页视频小说图片口味搜索| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲国产精品成人综合色| 久久久久久九九精品二区国产| 欧美色欧美亚洲另类二区| 有码 亚洲区| 搡老岳熟女国产| 亚洲中文日韩欧美视频| 久久6这里有精品| 国产精品久久久久久久电影 | 国产精品99久久久久久久久| 69av精品久久久久久| 小说图片视频综合网站| 欧美乱妇无乱码| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 成年免费大片在线观看| 18美女黄网站色大片免费观看| 深夜精品福利| 亚洲精品在线美女| 亚洲人成网站在线播| 一二三四社区在线视频社区8| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 全区人妻精品视频| 亚洲精品在线美女| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产淫片久久久久久久久 | 亚洲成人久久爱视频| 亚洲成人精品中文字幕电影| 日本在线视频免费播放| 国产av不卡久久| 中文资源天堂在线| 啪啪无遮挡十八禁网站| 欧美日韩黄片免| 亚洲人成伊人成综合网2020| 五月伊人婷婷丁香| 男女那种视频在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 少妇高潮的动态图| 一本一本综合久久| 2021天堂中文幕一二区在线观| 欧美极品一区二区三区四区| 午夜免费观看网址| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产成人av教育| 热99在线观看视频| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 国产中年淑女户外野战色| 亚洲美女视频黄频| 在线国产一区二区在线| 久久精品91无色码中文字幕| 男人舔奶头视频| 欧美国产日韩亚洲一区| 国产三级黄色录像| 激情在线观看视频在线高清| av女优亚洲男人天堂| av欧美777| 可以在线观看毛片的网站| 国产伦人伦偷精品视频| 老汉色∧v一级毛片| www国产在线视频色| 99精品欧美一区二区三区四区| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲七黄色美女视频| 悠悠久久av| 色av中文字幕| 欧美一区二区国产精品久久精品| 国产黄片美女视频| 女警被强在线播放| 国产91精品成人一区二区三区| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产成人av教育| 90打野战视频偷拍视频| 一进一出抽搐gif免费好疼| 久久久久久久亚洲中文字幕 | svipshipincom国产片| 欧美日韩国产亚洲二区| 午夜久久久久精精品| 嫁个100分男人电影在线观看| www.色视频.com| 麻豆成人av在线观看| 成人18禁在线播放| 最近最新免费中文字幕在线| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 成人亚洲精品av一区二区| 99国产精品一区二区蜜桃av| 美女高潮的动态| 中文在线观看免费www的网站| 国产精品久久视频播放| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 日本黄大片高清| 国产成人a区在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 变态另类丝袜制服| 一区二区三区高清视频在线| 国产精品野战在线观看| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 高清在线国产一区| 岛国在线观看网站| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产视频一区二区在线看| av在线蜜桃| 一本综合久久免费| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 亚洲国产欧美人成| 91久久精品电影网| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 99国产综合亚洲精品| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲第一电影网av| 久久性视频一级片| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 久久精品人妻少妇| 日本黄大片高清| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产精品久久久人人做人人爽| 日韩欧美三级三区| 麻豆国产97在线/欧美| 久久久国产精品麻豆| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲精品在线观看二区| 欧美不卡视频在线免费观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产精华一区二区三区| 床上黄色一级片| 欧美又色又爽又黄视频| 亚洲欧美日韩东京热| 国产av一区在线观看免费| 一本一本综合久久| 偷拍熟女少妇极品色| 一a级毛片在线观看| 日本黄色视频三级网站网址| 久久久久久久久中文| 99久久综合精品五月天人人| 国模一区二区三区四区视频| 一二三四社区在线视频社区8| 国产av在哪里看| 免费av不卡在线播放| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 精品无人区乱码1区二区| 免费搜索国产男女视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 3wmmmm亚洲av在线观看| 婷婷精品国产亚洲av| 丁香六月欧美| 亚洲av不卡在线观看| 午夜老司机福利剧场| 九九热线精品视视频播放| 午夜a级毛片| 精品一区二区三区人妻视频| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 一个人看视频在线观看www免费 | 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 手机成人av网站| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲av电影不卡..在线观看| 久久久久九九精品影院| 舔av片在线| 日韩欧美三级三区| 国产成人系列免费观看| av在线蜜桃| 白带黄色成豆腐渣| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲人成网站在线播| 黄色片一级片一级黄色片| 高清在线国产一区| 51国产日韩欧美| 日韩欧美精品免费久久 | 3wmmmm亚洲av在线观看| 一区二区三区高清视频在线| 亚洲av五月六月丁香网| 看片在线看免费视频| 亚洲国产精品久久男人天堂| 美女 人体艺术 gogo| 日本 欧美在线| 国产精品女同一区二区软件 | 日韩亚洲欧美综合| 两个人视频免费观看高清| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 国产av在哪里看| 日本黄大片高清| 亚洲色图av天堂| 亚洲成av人片在线播放无| 国产高清三级在线| 精品午夜福利视频在线观看一区| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲精华国产精华精| 国产黄色小视频在线观看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| www.色视频.com| 亚洲国产精品999在线| 成人av一区二区三区在线看| 国产乱人伦免费视频| 韩国av一区二区三区四区| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲不卡免费看| www国产在线视频色| 午夜激情福利司机影院| 男人的好看免费观看在线视频| 丝袜美腿在线中文| 我要搜黄色片| 久久久久久大精品| 变态另类丝袜制服| 亚洲av美国av| 亚洲精品成人久久久久久| 日本五十路高清| 精品电影一区二区在线| 又紧又爽又黄一区二区| 成人国产综合亚洲| 内射极品少妇av片p| 国产毛片a区久久久久| 美女黄网站色视频| 国产视频内射| 国产成人啪精品午夜网站| 又黄又爽又免费观看的视频| 国内精品一区二区在线观看| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 91九色精品人成在线观看| 欧美日本视频| 一级毛片高清免费大全| 看免费av毛片| 亚洲在线观看片| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 观看免费一级毛片| 看黄色毛片网站| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 日韩欧美精品v在线| 波多野结衣高清作品| 免费人成视频x8x8入口观看| 欧美色欧美亚洲另类二区| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲欧美日韩东京热| 岛国在线观看网站| 欧美又色又爽又黄视频| 丁香欧美五月| 久久亚洲精品不卡| 18禁国产床啪视频网站| 黄片小视频在线播放| 一二三四社区在线视频社区8| АⅤ资源中文在线天堂| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产三级黄色录像| 亚洲性夜色夜夜综合| 18禁美女被吸乳视频| 两个人视频免费观看高清| 一个人观看的视频www高清免费观看| 久久6这里有精品| 18美女黄网站色大片免费观看| 美女cb高潮喷水在线观看| 麻豆成人午夜福利视频| 在线观看日韩欧美| x7x7x7水蜜桃| 久久久国产成人精品二区| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 免费观看精品视频网站| 国产av一区在线观看免费| 最新美女视频免费是黄的| 免费观看精品视频网站| 人人妻人人看人人澡| 国产探花极品一区二区| h日本视频在线播放| 精品不卡国产一区二区三区| 熟女电影av网| 中文字幕av成人在线电影| 人人妻人人澡欧美一区二区| av国产免费在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 2018国产大陆天天弄谢| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 国产精品不卡视频一区二区| 特级一级黄色大片| 内射极品少妇av片p| 在线观看人妻少妇| 在线免费观看不下载黄p国产| 日日摸夜夜添夜夜爱| 欧美精品国产亚洲| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产精品一区二区在线观看99 | 亚洲精品中文字幕在线视频 | 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲自拍偷在线| av福利片在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 嘟嘟电影网在线观看| 丰满少妇做爰视频| 男女国产视频网站| 少妇丰满av| 中文天堂在线官网| 少妇高潮的动态图| 成人一区二区视频在线观看| 久久久久久久久久久丰满| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 欧美最新免费一区二区三区| av在线蜜桃| 亚洲国产精品sss在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 校园人妻丝袜中文字幕| 插阴视频在线观看视频| 99热全是精品| 高清在线视频一区二区三区| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产一区二区三区综合在线观看 | 免费在线观看成人毛片| 午夜福利成人在线免费观看| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 欧美不卡视频在线免费观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 国产不卡一卡二| 777米奇影视久久| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 性色avwww在线观看| 青春草国产在线视频| 国产在视频线在精品| 日韩在线高清观看一区二区三区| 精品酒店卫生间| 日韩人妻高清精品专区| 国产精品av视频在线免费观看| 夫妻午夜视频| 国产精品久久视频播放| 久久精品国产亚洲网站| 国产 一区 欧美 日韩| 特级一级黄色大片| 午夜福利网站1000一区二区三区| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产av不卡久久| 天天躁日日操中文字幕| 少妇熟女欧美另类| 中文在线观看免费www的网站| 麻豆成人av视频| 日韩欧美 国产精品| 国产精品av视频在线免费观看| 精品一区在线观看国产| 一本久久精品| 国产v大片淫在线免费观看| 一级毛片aaaaaa免费看小| 少妇高潮的动态图| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲精品乱久久久久久| 日本免费a在线| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产在线男女| xxx大片免费视频| 欧美xxxx性猛交bbbb| 一个人看视频在线观看www免费| 精品国产三级普通话版| 欧美日本视频| 天堂√8在线中文| or卡值多少钱| 午夜精品一区二区三区免费看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 直男gayav资源| 午夜激情欧美在线| 欧美三级亚洲精品| 日本欧美国产在线视频| 两个人的视频大全免费| 熟女人妻精品中文字幕| 日日啪夜夜撸| 国产一级毛片在线| 免费无遮挡裸体视频| 一区二区三区免费毛片| 大陆偷拍与自拍| 毛片一级片免费看久久久久| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产精品久久视频播放| 免费观看av网站的网址| 麻豆成人午夜福利视频| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 美女高潮的动态| 精华霜和精华液先用哪个| 欧美高清性xxxxhd video| 国产精品久久久久久精品电影| 久久久a久久爽久久v久久| 天堂√8在线中文| 在线播放无遮挡| 一夜夜www| 亚洲经典国产精华液单| 国内精品宾馆在线| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产精品国产三级国产专区5o| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 99久国产av精品| 国产伦精品一区二区三区视频9| 中文在线观看免费www的网站| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 69人妻影院| 国产男女超爽视频在线观看| 好男人在线观看高清免费视频| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 啦啦啦啦在线视频资源| 热99在线观看视频| 精品久久久噜噜| 一级毛片电影观看| 欧美+日韩+精品| 在线观看免费高清a一片| 人体艺术视频欧美日本| 简卡轻食公司| 国产精品无大码| 国产乱人偷精品视频| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲精品一二三| 久久6这里有精品| 人体艺术视频欧美日本| 97精品久久久久久久久久精品| 美女主播在线视频| 真实男女啪啪啪动态图| 搡老乐熟女国产| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲精品国产av成人精品| 国产爱豆传媒在线观看| 国产一级毛片在线| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 高清午夜精品一区二区三区| 久久久色成人| 国产三级在线视频| 99久久人妻综合| 国产一区亚洲一区在线观看| 97超碰精品成人国产| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国内精品美女久久久久久| 久久人人爽人人片av| 久久精品国产自在天天线| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 日韩国内少妇激情av| videossex国产| 欧美精品一区二区大全| 男人狂女人下面高潮的视频| 久久久久久伊人网av| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲最大成人av| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产精品久久视频播放| 久久热精品热| 欧美极品一区二区三区四区| 精品午夜福利在线看| 国产伦理片在线播放av一区| 一区二区三区免费毛片| 婷婷色麻豆天堂久久| 亚洲人成网站在线播| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 伦精品一区二区三区| 亚洲精品国产av成人精品| 久久99精品国语久久久| 日韩欧美国产在线观看| 日韩强制内射视频| 亚洲成色77777| 亚洲成人久久爱视频| 日韩中字成人| 亚洲三级黄色毛片| 免费观看性生交大片5| 欧美一级a爱片免费观看看| 日韩人妻高清精品专区| 91久久精品国产一区二区三区| 一级av片app| 大陆偷拍与自拍| 国产精品爽爽va在线观看网站| 中文字幕免费在线视频6| 在线天堂最新版资源| 色哟哟·www| 久久精品夜色国产| 成人一区二区视频在线观看| 九九在线视频观看精品| 日韩大片免费观看网站| 熟女人妻精品中文字幕| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 97在线视频观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 免费观看av网站的网址| 国产黄片视频在线免费观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 男女下面进入的视频免费午夜| 97精品久久久久久久久久精品| 九九在线视频观看精品| 久久久久久久午夜电影| 内射极品少妇av片p| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲欧美精品专区久久| 国产免费又黄又爽又色| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲av不卡在线观看| 高清av免费在线| 黄色配什么色好看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 少妇丰满av| 人人妻人人看人人澡| av网站免费在线观看视频 | 午夜日本视频在线| 亚洲精品一区蜜桃| 嫩草影院精品99| 熟女电影av网| 干丝袜人妻中文字幕| 爱豆传媒免费全集在线观看| 久久久久久久久久成人| 99久国产av精品国产电影| 日本午夜av视频| 免费人成在线观看视频色| 免费观看无遮挡的男女| 亚洲精品自拍成人| 成人亚洲精品av一区二区| 麻豆国产97在线/欧美| 国产黄片美女视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲av男天堂| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 成人性生交大片免费视频hd| 亚洲美女视频黄频| 18+在线观看网站| 久久久久九九精品影院| 美女大奶头视频| 联通29元200g的流量卡| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 欧美一区二区亚洲| 91久久精品电影网| av黄色大香蕉| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国内精品美女久久久久久|