畜產(chǎn)品中沙門氏菌檢驗方法的研究進展

郝書林 張亞南 王 靜

（江蘇省徐州市畜禽水產(chǎn)品質量檢測中心，徐州 221006）

沙門氏菌屬是一群形態(tài)和培養(yǎng)特性都類似的腸桿菌科中的一個大屬，也是腸桿菌科中最重要的病原菌屬。沙門氏菌血清型多，分布廣泛，是重要的人畜共患病的病原體。沙門氏菌病一直是一個世界性問題，對世界各國經(jīng)濟造成的損失也很大，嚴重威脅人的健康和生命安全。沙門氏菌作為食品致病菌檢測的一項重要指標，在公共衛(wèi)生、口岸檢疫和畜牧獸醫(yī)上有重要的意義。近年來，隨著免疫學實驗技術和分子生物學技術的發(fā)展，沙門氏菌檢驗技術的研究也有了新的研究進展。

1 血清學鑒定

血清學方法是利用抗原抗體的特異性反應，可見到明顯的凝集現(xiàn)象。目前，國內(nèi)外還應用其他方法來鑒定如PCR技術、屬特異性抗體ELISA等。國內(nèi)報道了雞白痢沙門氏菌脂多糖敏化紅細胞的間接血凝試驗，是張如寬等（1998）用熱酚-水法提取雞白痢沙門氏菌LPS經(jīng)pH8.0熱處理后，致敏醛化的綿羊紅細胞，用被檢血或血清作間接血凝試驗，具有特異、快速、簡便且陽性檢出率比全血玻板凝集反應法高10%～30%。

2 免疫標記技術

免疫標記技術是由免疫熒光標記、免疫酶標記和放射免疫技術組成，是當前免疫學技術應用的重點。而沙門氏菌的檢測技術上著重應用了免疫熒光和免疫酶技術。這2種技術的應用，促進和推動了沙門氏菌檢測上向著快速、靈敏、簡便的方向發(fā)展。

2.1 免疫熒光標記技術

用熒光素標記抗原或抗體，與特異的抗體或抗原結合而產(chǎn)生熒光。孫洋等人（1994）利用吖啶橙免疫熒光菌團培養(yǎng)法檢測沙門氏菌，證明該檢測法對于34個菌/ml的沙門氏菌均可檢出，與枯草桿菌、大腸桿菌等8種雜菌均不形成菌團交叉，與雜菌的濃度比在1∶640內(nèi)均不受干擾，在30 h內(nèi)可獲得結果，縮短了檢測時間，且具有敏感性高、特異性強、簡便快速等特點。Cloak等人（1999）利用表面吸附將檢測樣品吸附于玻璃斜面的一種薄膜上，再用免疫熒光顯微鏡進行結果判定。該法可檢測103.5個沙門氏菌/ml，而不呈現(xiàn)假陽性或假陰性反應。總之，以上方法具有能在短時間內(nèi)較準確的確定沙門氏菌，而要真正的分清楚沙門氏菌的血清型及種還有待于通過其他方法進一步鑒定。

2.2 免疫酶技術

由最初發(fā)展的免疫酶測定方法，到后來發(fā)展的免疫酶聯(lián)吸附試驗（ELISA），給沙門氏菌的檢測帶來新的檢測方法。但許多學者應用后，發(fā)現(xiàn)使用多價血清不同程度地存在交叉反應，使ELISA產(chǎn)生較多的假陽性，給生產(chǎn)實踐應用帶來了一定困難。直到20世紀80年代單克隆抗體的出現(xiàn)，才有效的解決了這一問題，使沙門氏菌的檢測特別是ELISA迎來了新的曙光，相繼產(chǎn)生了許多檢測方法，如沙門氏菌鞭毛蛋白單抗ELISA法，沙門氏菌屬特異性單克隆抗法ELISA法，抗原捕獲ELISA等。

3 分子生物學技術

3.1 基因型檢測

鼠傷寒沙門氏菌和傷寒沙門氏菌的DNA序列是非常接近的。根據(jù)雜交實驗證實，二者的DNA序列98%～99%相似。但這2個菌之間的同源重組頻率相當?shù)停ǔ藗抽T氏菌ty21α）。其原因是，被mutS和mutL編碼的錯配修補蛋白和RecBCD的recD依賴性外切酶活性所抑制的結果。通過鑒別基因型的差別，可將沙門氏菌屬及亞種加以區(qū)分。

3.2 核酸探針雜交及PCR技術

目前，檢測沙門氏菌的核酸探針是屬特異性沙門氏菌探針，已從鼠傷寒沙門氏菌E23566菌株染色體DNA克隆成功，已用于食品中沙門氏菌的檢測。

PCR技術檢測沙門氏菌的特異性取決于所擴增序列是否是沙門氏菌高度保守的特異性片斷，能否準確無誤地擴增靶序列由引物決定。也就是說，引物的設計取決于沙門氏菌是否具有顯著特征的屬或種特異性靶序列。靶序列的選擇與引物的設計是本試驗成功與否的關鍵所在。從目前的報道來看，大多是采用一段已知的沙門氏菌染色體DNA片段來設計的，且大多數(shù)是根據(jù)屬特異性靶序列設計的。

3.3 血清型的研究

應用分子生物學技術對沙門氏菌血清型的研究報道還不多。目前，主要集中在以下4個方面：①雙相菌第二相H抗原缺失 瑞士學者Burnens（1996）報道，有9，12∶1，V∶-血清型的行查表有5個血清型可作為它的前體型，基因酶切片斷分析證明其第二相基因的存在，啟動子flj的分析證明其缺失hin基因，2相基因處于鎖閉狀態(tài)。②復合的雙相H抗原 薩林那斯沙門氏菌是一個具有復合雙相H抗原的沙門氏菌4，12∶d∶e，h∶e，n，215。此菌具有2套H抗原的基因。若被H：d抗血清誘導，則產(chǎn)生4，12，e，h∶e，n，215，與圣地亞哥血清型無法區(qū)別。但后來的抗原表面上將其志杜伊斯堡血清型4，12，27∶d∶e，n，215合并。③H抗原的R相 Franco（1992）報道從印度尼西亞獲得的20株傷寒桿菌中有7株具有特別的外膜蛋白電泳圖和特別的DNA酶切模式。免疫斑點分析顯示外膜蛋白具有H：j和H：d抗原；而其他傷寒菌株無H：j抗原。④無動力菌隱蔽的H抗原 法國學者Kilger和Grimont用第一相鞭毛抗原基因fliC擴增酶切圖譜分析，說明G系復合抗原與雙相菌第一相抗原的酶切圖譜不同，雛雞沙門氏菌血清型帶有隱蔽的鞭毛基因gm，與無動力無Vi抗的傷寒血清型不同。

總之，沙門氏菌的檢測技術在不同的研究方向上均取得了可喜的研究進展，有的已應用于生產(chǎn)實際，有的仍處在研究探索階段。隨著免疫學技術和分子生物學技術的快速發(fā)展，必將帶動沙門氏菌檢測技術的快速向前發(fā)展，必將向著快速、靈敏、特異性強、經(jīng)濟的方向不斷發(fā)展。

[1]張如寬，甘軍紀.雞白痢沙門氏菌脂多糖敏化紅細胞在間接血凝試驗中應用[J].中國畜禽傳染病，1989，（1）：59-60.

[2]孫洋，王云翔，柳增善.吖啶橙免疫熒光菌團培養(yǎng)法對沙門氏菌的快速檢測[J].吉林畜牧獸醫(yī)，1994，（6）：14-16.

[3]Cloak OM，Duffy G，Sheridan JJ，etal.Development of a surface adhesion immunofluo-resent technigue for the rapid detection of Salmonella spp. From meat and pultry [J]. Journal of Applied Microbiology，1999，（4）：583-590.

[4]Burnens AP，Stanley J，Sechter I，etal.Evolutionary origin of amonophasic Salmonella serovar，9，12：l，v：-，revealed by IS200 profiles and restriction fragment polymorphisms of the fljB gene[J].J Clin Microbiol，1996，（34）：1641-1645.