猴耳環(huán)種子貯藏及其種苗繁育研究

邢瑞林，周宏英，黃宏輝，陳煒玲，陳香杏

（1.廣東良田農(nóng)林科技有限公司，廣東清遠(yuǎn) 511899；2.廣東良田中藥材種植有限公司，廣東清遠(yuǎn) 511899）

現(xiàn)階段，有關(guān)猴耳環(huán)的研究主要集中在制劑研發(fā)、臨床應(yīng)用、藥理學(xué)、化學(xué)成分、生藥學(xué)等層面。猴耳環(huán)制劑在臨床中的應(yīng)用效果相對較好，導(dǎo)致制劑的需求量呈現(xiàn)逐年遞增狀態(tài)。但當(dāng)前猴耳環(huán)藥材植物主要是依靠收集野生植株的方式來獲取，隨著采集量不斷增加，面臨野生資源逐漸枯竭的問題，而且無法保證藥材的質(zhì)量以及后續(xù)供給。由此，某地區(qū)為了有效保護(hù)猴耳環(huán)資源，針對猴耳環(huán)種子貯藏和種苗繁殖建設(shè)了相應(yīng)的項(xiàng)目研發(fā)基地，希望其可以在應(yīng)用層面保證持續(xù)性。

1 猴耳環(huán)概述

1.1 猴耳環(huán)

猴耳環(huán)是一種極其珍稀的中藥材植物，在我國主要分布在廣東省粵北山區(qū)等地區(qū)，是多年生喬本類植物，見圖1。

圖1 猴耳環(huán)植株

猴耳環(huán)又稱落地金錢、洗頭樹、雞心樹、圍涎樹、婆劈樹等。猴耳環(huán)通過粗提取工藝提煉出的物質(zhì)能夠?qū)w外病毒起到極高的抗性作用。

1.2 猴耳環(huán)的應(yīng)用價(jià)值

1.2.1 民間應(yīng)用價(jià)值

在我國民間藥用層面，猴耳環(huán)擁有相對較為長遠(yuǎn)的歷史，其枝葉和嫩枝都可以用在藥理中。其主要功能是止瀉、涼血、消腫、清熱、解毒等。外用主要是治療燙傷、燒傷等；也可以將枝葉煮沸用來洗頭，具有消炎、去屑、烏發(fā)、潔發(fā)等作用。

1.2.2 藥用價(jià)值

由猴耳環(huán)葉及嫩枝的水提取浸膏制作而成的單味劑，例如治療呼吸道感染的藥物、猴耳環(huán)消炎片、猴耳環(huán)消炎膠囊等都已經(jīng)得到了大范圍應(yīng)用，而且我國在2005 年已經(jīng)將上述藥物收納進(jìn)國家藥典管理文件中。臨床醫(yī)學(xué)上，猴耳環(huán)主要用來治療急性腸胃炎、急性扁桃體炎、急性咽喉炎、上呼吸道感染等病癥。

1.2.3 日用價(jià)值

猴耳環(huán)可以作為研發(fā)創(chuàng)可貼、洗發(fā)水、保健牙膏等的原材料[1]。

2 某項(xiàng)目研發(fā)基地的項(xiàng)目背景概述

2.1 項(xiàng)目產(chǎn)業(yè)背景

1）猴耳環(huán)相關(guān)藥物在研發(fā)和生產(chǎn)制造環(huán)節(jié)的原材料基本是依靠野生資源來獲取，但現(xiàn)階段野生資源逐漸枯竭，原材料的供給日益緊缺，導(dǎo)致市場層面存在相對較大的缺口，影響猴耳環(huán)產(chǎn)業(yè)鏈的發(fā)展。

2）猴耳環(huán)品種的混雜程度相對較高，優(yōu)秀品種覆蓋率極低。

3）規(guī)范化種植程度不高，整體產(chǎn)量相對偏低。

2.2 深厚的產(chǎn)業(yè)基礎(chǔ)

1）粵北地區(qū)屬于猴耳環(huán)的密集分布區(qū)域，調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，在清遠(yuǎn)地區(qū)有一部分猴耳環(huán)的自然分布，而且在小范圍內(nèi)實(shí)現(xiàn)了成功種植，有較為優(yōu)良的基礎(chǔ)。

2）項(xiàng)目研發(fā)企業(yè)一直長期致力于南藥資源的保護(hù)、研發(fā)和利用等工作，技術(shù)力量較好。

3）項(xiàng)目研發(fā)企業(yè)與我國林業(yè)科學(xué)研究院熱帶林業(yè)研究所黃世能教授團(tuán)隊(duì)達(dá)成了戰(zhàn)略性合作，主要提供對項(xiàng)目的技術(shù)性指導(dǎo)、監(jiān)督等，而且黃世能教授團(tuán)隊(duì)在猴耳環(huán)有關(guān)研究層面具備極豐富的工作經(jīng)驗(yàn)，多次主持研究林藥和猴耳環(huán)優(yōu)良品種資源的收集以及栽培技術(shù)項(xiàng)目，2017 年被原國家林業(yè)局評定為100 項(xiàng)著重推廣的林業(yè)科技成果之一。

3 猴耳環(huán)種子貯藏研究

3.1 原材料

試驗(yàn)應(yīng)用的猴耳環(huán)種子采自于廣東省某地區(qū)的野生植株，將新鮮種子放到透氣性較好的塑料樣品袋中，將其放在冰箱中儲存，溫度控制在4 ℃。

3.2 試驗(yàn)方法

3.2.1 對猴耳環(huán)種子進(jìn)行脫水敏感性試驗(yàn)

應(yīng)用硅膠干燥的方法，對猴耳環(huán)種子完成脫水操作。隨機(jī)選擇1 200 粒左右新鮮猴耳環(huán)種子，應(yīng)用電子天平對新鮮種子完成稱重操作之后，按照含水量測定方法、發(fā)芽率測定方法，測定種子含水量、發(fā)芽率，將猴耳環(huán)種子放在裝有變色硅膠的干燥容器當(dāng)中，完成脫水處理操作。脫水后1 h、2 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h，隨機(jī)抽取種子，測量種子含水量，檢查種子發(fā)芽率。

3.2.2 對猴耳環(huán)種子進(jìn)行貯藏以及貯藏生理生化等試驗(yàn)

從猴耳環(huán)種子中選取一部分樣品用于貯藏，在試驗(yàn)開展之前，對種子進(jìn)行生理生化指標(biāo)測定，并將數(shù)值作為初始數(shù)值。種子全部應(yīng)用3%多菌靈溶液浸泡30 min 左右，再對其進(jìn)行滅菌操作，放在陰涼干燥處，待表面水分全部蒸發(fā)之后，在4 ℃、-20 ℃、室溫狀態(tài)下按3 種方式貯藏，3 種貯藏方式分別為放置在透氣性較好的透氣塑料樣品袋中、去掉種子皮將其放置在透氣性較好的塑料樣品封袋中、放置在含水量為12%的濕沙中。

-20 ℃保存條件下放在透氣性較好的塑料樣品袋中的處理方式，貯藏1 h 之后測量種子的生活力，其他處理方式每隔30 d 測量種子發(fā)芽率。由于猴耳環(huán)種子數(shù)量有限，所以每隔30 d 對4 ℃濕沙貯藏、4 ℃塑料樣品袋貯藏、室溫貯藏的猴耳環(huán)種子進(jìn)行生理和生化指標(biāo)測定[2]。

4 試驗(yàn)結(jié)果以及測試分析

4.1 猴耳環(huán)種子脫水敏感性分析

4.1.1 種子快速脫水速率

試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，新鮮的猴耳環(huán)種子水含量相對較高，能夠達(dá)到59.1%左右。隨著種子脫水時(shí)間不斷增加，種子內(nèi)部的含水量也會隨之減少，但是前6 h 下降速度相對較為緩慢，在脫水1 h 后含水量下降到50.2%左右，隨后種子含水量下降速度逐漸減緩，最終含水量在11.0%左右。

4.1.2 種子含水量以及發(fā)芽率的關(guān)聯(lián)性分析

試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，隨著猴耳環(huán)種子含水量由59.1%降低到11%，種子的發(fā)芽率由起始的97.2%下降到0%。含水量下降前期，含水量在40%左右時(shí)，種子發(fā)芽率的下降變化相對不明顯，但是種子含水量從39%降低到22%的過程中，種子發(fā)芽率的降低速度明顯增加，而且下降幅度波動(dòng)相對較大。

4.2 猴耳環(huán)種子貯藏效果分析

4.2.1 貯藏方式以及時(shí)間對發(fā)芽率造成的影響

試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，在-20 ℃的儲存狀態(tài)下，采取透氣性較好的塑料袋樣品貯藏處理方式的種子，經(jīng)過1 h 之后，生命力會逐漸喪失，無法抵抗低溫?；? 種貯藏方法，隨著時(shí)間增加，種子發(fā)芽率會明顯下降，120 d 之后，發(fā)芽率相較于初期有大范圍降低。前60d，除4 ℃下應(yīng)用濕沙保存的處理方式外，其他種子的發(fā)芽率都可以達(dá)到70%左右，發(fā)芽率相對較高。采取室溫透氣性塑料袋樣品密封以及在4 ℃下應(yīng)用透氣性較好的塑料袋樣品貯藏方式的種子，在貯藏期間發(fā)芽率的降低速度相對較為相似。剝皮之后的種子貯藏30 d 后，發(fā)芽率會達(dá)到91.6%，明顯比其他組的發(fā)芽率高出許多，但是到達(dá)峰值之后，發(fā)芽率會急速降低，經(jīng)過60 d后，會與室溫狀態(tài)貯藏條件下應(yīng)用透氣性塑料樣品袋密封的處理?xiàng)l件以及在4 ℃采取塑料樣品袋保存處理方式的種子發(fā)芽率較為接近。應(yīng)用濕沙方法貯藏的種子，發(fā)芽率在儲存30 d 后急速降低，且數(shù)值下降到11.6%左右，60 d 后種子的發(fā)芽率降到0%[3]。

4.2.2 不同貯藏方法下電導(dǎo)率的變化分析

試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，應(yīng)用3 種貯藏方法的種子，其電導(dǎo)率數(shù)值隨著貯藏時(shí)間的增加而增大。在室溫狀態(tài)下應(yīng)用透氣性較好的塑料樣品袋貯藏以及在4 ℃下應(yīng)用塑料樣品袋貯藏的種子，其電導(dǎo)率會以較慢的速度逐漸上升，二者上升速度較為接近，并始終維持平緩勻速上升的趨勢。通過對比分析方差數(shù)值可知，二者在0～120 d 的時(shí)間點(diǎn)沒有出現(xiàn)明顯偏差。但是，在4 ℃貯藏狀態(tài)下應(yīng)用濕沙貯藏的種子，其電導(dǎo)率高于其他貯藏方式種子的電導(dǎo)率，貯藏60 d 后，數(shù)值能夠達(dá)到其他兩組的3.1 倍，存在較為明顯的差異。3 種貯藏狀態(tài)下種子電導(dǎo)率和發(fā)芽率的有關(guān)系數(shù)表明，電導(dǎo)率、種子發(fā)芽率之間呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。

5 猴耳環(huán)種子在種苗繁育期間的扦插繁殖研究

5.1 原材料

試驗(yàn)應(yīng)用的原材料取自項(xiàng)目企業(yè)下屬的種子栽培基地，選取當(dāng)年生枝條頂芽和木質(zhì)化部位之間的莖段，直徑0.7～1 cm。穗條需要及時(shí)噴水確保其濕潤性，避免出現(xiàn)失水問題。采摘完成后，在實(shí)驗(yàn)室用清水浸泡，第二天修剪，穗長控制在20～25 cm，挑選具備兩個(gè)葉芽以上的插穗，將所有葉片以及長度超過1 cm 的葉芽全部摘除，上段位置全部剪切成平口，距離芽端1 cm左右，下端應(yīng)用斜口，將剪切完成的種子插穗每20 根扎成1 捆，泡在水中保濕。扦插前用1%多菌靈浸泡，時(shí)間為5 min。

5.2 試驗(yàn)分析

5.2.1 不同基質(zhì)對猴耳環(huán)種子在扦插生根環(huán)節(jié)造成的影響分析

試驗(yàn)設(shè)置3 種不同類型的扦插基質(zhì)，分別為腐殖土和河沙，比例為1∶1；紅土壤和河沙，比例為1∶2；河沙。插穗期間用濃度為300 mg/L 的IBA 進(jìn)行處理，時(shí)間為1 h。每處理完20 根插穗之后，重復(fù)操作3 次，同時(shí)注意試驗(yàn)環(huán)節(jié)要保證隨機(jī)性[4]。

5.2.2 不同位置插穗對猴耳環(huán)種子扦插生根形成的影響分析

試驗(yàn)環(huán)節(jié)按照位置將其分為下、中、上3 個(gè)處理階段，也就是木質(zhì)化插穗、頂端嫩枝和木質(zhì)化區(qū)域之間的插穗、頂端嫩枝。插穗期間應(yīng)用濃度為300 mg/L 的IBA處理，時(shí)間為1 h，每處理完20 根插穗之后，重復(fù)操作3 次，同時(shí)保證試驗(yàn)的隨機(jī)性。

5.2.3 不同季節(jié)對猴耳環(huán)種子扦插生根形成的影響分析

分別在3 月、6 月、9 月開展不同季節(jié)對猴耳環(huán)種子扦插生根的影響試驗(yàn)，插穗環(huán)節(jié)的工序與上述兩道工序相同。

5.2.4 不同激素處理方式對猴耳環(huán)種子扦插生根的影響分析

按照試驗(yàn)處理方案對插穗進(jìn)行處理，之后完成扦插操作，將清水處理方式作為對照方案。之后依然是每處理完20 根插穗之后，重復(fù)操作3 次。

5.3 試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果顯示，猴耳環(huán)在種苗繁殖環(huán)節(jié)的扦插繁殖相對較為困難，生根率極低。

1）猴耳環(huán)在不同基質(zhì)狀態(tài)下的扦插試驗(yàn)結(jié)果顯示，河沙基質(zhì)下的生根率最高，應(yīng)用腐殖土與河沙混合基質(zhì)下的生根率最低。扦插基質(zhì)通氣、溫度、保濕性等存在差異，會對扦插生根率、生根質(zhì)量產(chǎn)生不同程度的影響。腐殖土的營養(yǎng)含量雖然相對較高，但是通氣性能極低，微生物衍生數(shù)量較多，容易導(dǎo)致插條出現(xiàn)腐爛變質(zhì)的問題。以河沙作為基質(zhì)，因?yàn)楹由惩庑韵鄬^好，所以插穗生根的根系生長速度快。

2）扦插位置不同，保水能力和營養(yǎng)成分也存在一定的偏差。猴耳環(huán)扦插嫩枝相對較細(xì)，但是沒有出現(xiàn)木質(zhì)化的狀態(tài)，導(dǎo)致其保水能力相對不高，所以會快速死亡。然而中部、下部已經(jīng)趨于半木質(zhì)化或全木質(zhì)化狀態(tài)，保水性能、營養(yǎng)成分處于較為優(yōu)良的狀態(tài)。研究人員按照插穗不定根產(chǎn)生部位和產(chǎn)生機(jī)理的差異性，將生根類型劃分為中間生根類型、愈傷組織生根類型、皮部生根類型等不同方式，最終扦插結(jié)果顯示，猴耳環(huán)屬于皮部生根類型，所以極有可能因?yàn)槟举|(zhì)化的原因，使猴耳環(huán)出現(xiàn)不定根的現(xiàn)象，或者在生長繁殖環(huán)節(jié)很難突破皮部位置的木栓層，導(dǎo)致種子生根極其困難[5]。

3）在猴耳環(huán)的扦插繁殖種植試驗(yàn)中，當(dāng)前只有春季才能夠?qū)崿F(xiàn)生根生長，夏季和秋季所有種子全部死亡，而且在夏季的死亡速度極快。通過研究發(fā)現(xiàn)，不同植物所適用的扦插季節(jié)也存在一定的差異，正常狀況下，扦插選擇在3—5 月、9—10 月進(jìn)行。季節(jié)不同，環(huán)境溫度、環(huán)境濕度、植物的生理狀況也存在一定的差異，會對扦插成活率造成一定影響。猴耳環(huán)只能在春季生根生長，可能是因?yàn)楹锒h(huán)在扦插生根時(shí)對環(huán)境中的濕度和溫度有極高要求，還可能是猴耳環(huán)植物體內(nèi)化學(xué)成分發(fā)生了一定的變化，營養(yǎng)成分或生根抑制成分存在差異，導(dǎo)致植物扦插生根概率存在一定的偏差[6]。

4）實(shí)踐研究證實(shí)，扦插環(huán)節(jié)不容易生根的樹種，插穗內(nèi)部通常含有抑制物，而抑制物大部分是酸性物質(zhì)，會阻礙植物生根發(fā)育。針對插穗期浸泡提取液的研究發(fā)現(xiàn)，極有可能是有機(jī)酸或類似單寧物質(zhì)。猴耳環(huán)提取液濃度數(shù)值的不同，對發(fā)芽率和胚根生長也會造成不同的影響，濃度超過0.1 g/mL 時(shí)，會對發(fā)芽率以及胚根的生長產(chǎn)生抑制作用，猴耳環(huán)在插穗期有可能包含一些抑制生根的物質(zhì)[7]。

6 結(jié)束語

通過對猴耳環(huán)種子的貯藏方式和種苗繁育的試驗(yàn)研究可知，猴耳環(huán)種植基地的土壤營養(yǎng)成分供應(yīng)相對較為平衡，土壤自身養(yǎng)分不夠平衡，而且對養(yǎng)分造成限制的影響因素相對較多，所以在后期的田間管理工作中，需要重點(diǎn)關(guān)注土壤肥力的實(shí)際狀況，以及猴耳環(huán)種子在生長環(huán)節(jié)的特性及所需營養(yǎng)特征，科學(xué)協(xié)調(diào)養(yǎng)分含量，適當(dāng)增加磷肥、有機(jī)肥料，合理使用鉀肥、氮肥，最大限度地確保猴耳環(huán)種子正常生長發(fā)育、繁殖，提升猴耳環(huán)種子的質(zhì)量和產(chǎn)量。