薄層色譜技術(shù)在中藥檢驗(yàn)中應(yīng)用的研究進(jìn)展＊

張曉丹，劉宏，鄒洪平，黃昊，鄧淑晶

（廣州白云山光華制藥股份有限公司，廣東 廣州 510285）

0 引言

薄層色譜法自《中華人民共和國(guó)藥典》（簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》）1985年版后的歷版藥典均有收載?！吨袊?guó)藥典》2020年版一部收載品種2 711個(gè)，其中超過(guò)50%的品種應(yīng)用了薄層色譜鑒別方法，薄層色譜分析是各級(jí)藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)、藥品生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)部門質(zhì)檢人員檢驗(yàn)中藥的強(qiáng)制性檢驗(yàn)項(xiàng)目［1］。薄層色譜技術(shù)是一種經(jīng)典的中藥分析技術(shù)，其受測(cè)試樣品種類限制很小，適用范圍廣［2-3］。多年來(lái)，薄層色譜技術(shù)在中藥上的應(yīng)用開發(fā)研究趨于多元化，尤其在中藥成分的鑒別和定量分析方面，涌現(xiàn)出許多高質(zhì)量的學(xué)術(shù)研究成果［4-5］。目前，對(duì)薄層色譜技術(shù)在中藥檢驗(yàn)應(yīng)用方面的研究主要集中在以下3個(gè)方面：一是對(duì)現(xiàn)有的中藥薄層色譜鑒別方法的優(yōu)化，如改進(jìn)樣品制備方法、優(yōu)化展開劑和顯色劑等；二是建立新的中藥成分薄層色譜鑒別方法，例如建立藥典中未曾規(guī)定的中藥薄層色譜系統(tǒng)；三是聯(lián)合其他技術(shù)手段進(jìn)行更全面的中藥檢驗(yàn)分析。本文介紹、分析薄層色譜技術(shù)在中藥檢驗(yàn)方面的應(yīng)用研究情況，尤其是中藥定性鑒別和定量分析方面的研究進(jìn)展，以期為相關(guān)學(xué)者提供研究方向和思路。

1 薄層色譜在中藥快速鑒別中的應(yīng)用

隨著色譜技術(shù)的發(fā)展及檢驗(yàn)質(zhì)量的提高，目前《中國(guó)藥典》中的絕大部分中藥是利用薄層色譜法進(jìn)行檢驗(yàn)的，利用薄層色譜法可對(duì)一些強(qiáng)揮發(fā)性、無(wú)紫外線吸收的藥物組分進(jìn)行定性及定量檢測(cè)，還可以對(duì)中藥進(jìn)行分離和分析鑒定。薄層色譜技術(shù)可用于快速鑒別中藥材的產(chǎn)地及真?zhèn)?，以及鑒別藥材中的非法添加。

不同產(chǎn)地的中藥材所含的化學(xué)成分存在微小差別，可用薄層色譜技術(shù)方便地鑒別出不同產(chǎn)地的中藥。巢穎欣等［6］應(yīng)用薄層色譜技術(shù)反映廣陳皮藥材的鑒別信息，通過(guò)分析廣陳皮特有的2-甲氨基-苯甲酸甲酯斑點(diǎn)作為快速鑒別廣陳皮與其他產(chǎn)地陳皮的有效手段。

薄層色譜除了用于不同產(chǎn)地中藥的鑒別，也可用于偽中藥的鑒別。孔娟等［7］發(fā)現(xiàn)，在相同的色譜條件下，不同產(chǎn)地何首烏及其偽品的薄層色譜圖均有明顯差異，可憑此快速、高效地鑒別何首烏的真?zhèn)巍?/p>

在中藥中非法添加色素一直是影響中藥發(fā)展的阻礙之一［8］，薄層色譜技術(shù)在中藥非法色素鑒別上也有很好的應(yīng)用。李啟艷等［9］用薄層色譜法快速篩查中藥中的29種非法添加色素，發(fā)現(xiàn)各色素分離效果較好，可采用薄層色譜法解決中藥中多色素染色的問(wèn)題。

2 優(yōu)化現(xiàn)有中藥材薄層色譜方法

隨著薄層色譜法在中藥鑒別中的廣泛應(yīng)用，一些原有的鑒別體系逐漸顯現(xiàn)出不足，如供試品制備過(guò)程復(fù)雜、展開劑與顯色劑對(duì)生態(tài)環(huán)境不友好、顯色特征性不強(qiáng)等。目前，中藥研究者的很多工作是圍繞優(yōu)化現(xiàn)有中藥薄層色譜鑒別體系中的各項(xiàng)條件展開。

2.1 單方藥材鑒別條件優(yōu)化

趙曉梅等［10］深入研究澤瀉藥材的物質(zhì)基礎(chǔ)，構(gòu)建多指標(biāo)定性、定量評(píng)價(jià)系統(tǒng)，并選擇合適的指標(biāo)，完善澤瀉藥材及飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，最終給《中國(guó)藥典》2020年版提供了澤瀉的來(lái)源、鑒別（薄層）、浸出物（鹽澤瀉）、含量測(cè)定等項(xiàng)目的修訂建議。荊曉燁等［11］研究發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)行版的《中國(guó)藥典》中降香標(biāo)準(zhǔn)的薄層色譜鑒別仍使用三氯甲烷、甲苯、甲醇等有毒有害試劑，因此從綠色環(huán)保、生態(tài)友好的角度出發(fā)，研究運(yùn)用天然低共熔溶劑提取樣品，利用改進(jìn)的無(wú)毒或低毒的薄層展開系統(tǒng)對(duì)中藥降香進(jìn)行薄層色譜鑒別，為降香綠色質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供了參考。

2.2 復(fù)方制劑多組分鑒別

一些中藥復(fù)方制劑通常含有多味藥材且各藥材組成比例懸殊，成分比單味藥復(fù)雜，一般采用多個(gè)薄層色譜鑒別項(xiàng)控制其質(zhì)量。復(fù)方制劑的薄層定性鑒別一直是一件費(fèi)時(shí)、費(fèi)力的工作。馮文明等［12］建立了“一板多藥”薄層色譜鑒別方法，可同時(shí)對(duì)小柴胡顆粒中的柴胡、黃芩、甘草3味藥材進(jìn)行鑒別，操作簡(jiǎn)單、快速，專屬性強(qiáng)，完善了小柴胡顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

3 新建中藥材薄層色譜方法

中藥品類繁多，隨著人們對(duì)中藥研究的不斷深入，原有中藥材中被發(fā)現(xiàn)的新中藥成分也會(huì)越來(lái)越多，對(duì)應(yīng)的鑒別方法也需要完善。對(duì)于一些現(xiàn)行藥典中還沒有質(zhì)量控制體系的中藥材成分，也需要逐漸建立起科學(xué)可控的質(zhì)量體系。

3.1 建立單味中藥材鑒別新方法

羅健菱等［13］發(fā)現(xiàn)苦皮藤藥材尚未有完善可行的質(zhì)量控制體系，并且2020版《中國(guó)藥典》中也未收載其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，故系統(tǒng)地建立苦皮藤薄層色譜鑒別項(xiàng)的各個(gè)條件，并確定最佳的薄層色譜條件。張穎等［14］建立薄層色譜法鑒別地黃及其炮制品，根據(jù)糖類成分在生地黃與熟地黃中的差異，對(duì)地黃不同的炮制品進(jìn)行薄層鑒別方法研究，建立可區(qū)別生地黃、熟地黃的薄層色譜鑒別方法，為地黃飲片的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考。

3.2 建立復(fù)方中藥制劑鑒別新方法

復(fù)方中藥由多味中藥按照一定的比例混合而成，原則上復(fù)方中藥中的各味藥材均需建立各自的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，一般每一味中藥都會(huì)有其特征鑒別項(xiàng)。研究者對(duì)中藥進(jìn)行系統(tǒng)研究后發(fā)現(xiàn)，原有復(fù)方中藥鑒別項(xiàng)的不足，建立一套新的薄層色譜鑒別項(xiàng)，完善了復(fù)方藥劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。魏艷蕓等［15］發(fā)現(xiàn)桂附地黃丸（濃縮丸）的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)滯后，鑒別項(xiàng)下僅對(duì)粉末入藥的牡丹皮、附子（制）、肉桂、山藥進(jìn)行顯微鑒別，而浸膏入藥的主藥熟地黃無(wú)任何鑒別方法，因此對(duì)熟地黃進(jìn)行研究，建立一套熟地黃的薄層色譜鑒別方法，可為桂附地黃丸（濃縮丸）的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考。

4 薄層色譜聯(lián)用技術(shù)應(yīng)用

在中藥檢驗(yàn)中只應(yīng)用薄層色譜法存在一定的局限性（靈敏度不高），薄層色譜只適合快速進(jìn)行一些簡(jiǎn)單的定性分析。為更全面地檢驗(yàn)分析中藥中的復(fù)雜化學(xué)成分，各類高效的現(xiàn)代化學(xué)分析檢測(cè)技術(shù)被引入中藥分析中，如薄層色譜與質(zhì)譜、紅外、高效液相、拉曼、核磁共振等一種或多種檢測(cè)分析技術(shù)聯(lián)用。

4.1 薄層色譜與質(zhì)譜聯(lián)用

質(zhì)譜是一種基于測(cè)量離子質(zhì)荷比（質(zhì)量—電荷比）的分析方法，具備高特異性和高靈敏度的特點(diǎn)。薄層色譜與質(zhì)譜的聯(lián)用形式主要可分為3類：一是接口儀器的間接聯(lián)用；二是質(zhì)譜對(duì)薄層板的原位檢測(cè)；三是質(zhì)譜對(duì)薄層分離過(guò)程的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)［16］。

郭依俐等［17］結(jié)合薄層板分離中藥成分快速、高效的特性和質(zhì)譜分析成分的特異性，將薄層色譜和串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用，將粗葉懸鉤子的薄層板上的各成分斑點(diǎn)提取濃縮后逐個(gè)進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析，可便捷地得到斑點(diǎn)中化合物一級(jí)質(zhì)譜和二級(jí)質(zhì)譜的信息。

薄層色譜和質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)作為一種新型分析技術(shù)，常用來(lái)定性或定量分析生物活性樣品或提取物中的未知化合物。張強(qiáng)等［18］探索質(zhì)譜在中藥分析中的應(yīng)用效果，一是實(shí)現(xiàn)了肉桂和川芎薄層色譜分析后層析板上化合物的原位快速鑒定，成功鑒定了川芎中的香豆素和桂皮醛，以及藁本內(nèi)酯、蛇床內(nèi)酯和洋川芎內(nèi)酯A等成分；二是對(duì)肉桂藥材中的香豆素進(jìn)行定量測(cè)定，得到香豆素的含量數(shù)據(jù)。

4.2 薄層色譜與高效液相色譜聯(lián)用

應(yīng)用薄層色譜技術(shù)可以進(jìn)行化合物的簡(jiǎn)單分離，得到相對(duì)較純的組分，但由于分辨率不高，對(duì)于一些性質(zhì)或結(jié)構(gòu)類似的物質(zhì)還不能完全分離。此時(shí)，需要借助更靈敏和精確的分離分析手段，高效液相色譜技術(shù)聯(lián)合薄層色譜技術(shù)可應(yīng)用于此種情況的分析。陳培英等［19］對(duì)經(jīng)過(guò)薄層色譜分離后的硅膠板上的幾個(gè)熒光點(diǎn)應(yīng)用高效液相色譜進(jìn)行分離和分析發(fā)現(xiàn)，每一個(gè)熒光點(diǎn)均又出現(xiàn)了2～3個(gè)色譜峰，表明每個(gè)熒光點(diǎn)中還包含有結(jié)構(gòu)或性質(zhì)相似的不同化合物。高效液相色譜除了用于高分辨定性分析有效成分，還有許多研究報(bào)道其應(yīng)用于定量分析中藥中的有效成分。

4.3 薄層色譜與拉曼光譜聯(lián)用

拉曼光譜是一種靈敏性高、特異性好的無(wú)損分析方法。薄層色譜與拉曼光譜聯(lián)用將使薄層色譜的成分分離功能和拉曼光譜獲取特征信息的功能合二為一，能精密區(qū)分中藥中結(jié)構(gòu)類似的化合物，并減少一些微量有效成分的丟失［20］。

顧曉玲［21］應(yīng)用薄層色譜和拉曼光譜的聯(lián)用技術(shù)分析中草藥黃連中的有效成分（主要含有異喹啉類生物堿，如小檗堿、黃連堿、巴馬汀和藥根堿），發(fā)現(xiàn)聯(lián)用方法可以很好地區(qū)分異喹啉類生物堿中的4個(gè)目標(biāo)分析物，尤其是通過(guò)拉曼強(qiáng)度比值（I708/I728）可以分析鑒別出一個(gè)斑點(diǎn)中的2個(gè)結(jié)構(gòu)類似物（小檗堿和黃連堿），并且4個(gè)目標(biāo)物具有很低的表面增強(qiáng)拉曼光譜檢測(cè)限，表明該方法靈敏度非常高。

5 結(jié)語(yǔ)

中藥材復(fù)雜成分的檢驗(yàn)是中藥質(zhì)量控制的關(guān)鍵內(nèi)容。隨著我國(guó)中藥的發(fā)展與壯大，中藥質(zhì)量研究的很多基礎(chǔ)工作需要基于中藥有效成分的檢驗(yàn)展開。薄層色譜檢驗(yàn)方法已經(jīng)成為藥典規(guī)定的法定中藥檢驗(yàn)方法，現(xiàn)有中藥材成分薄層色譜分析方法各項(xiàng)條件的優(yōu)化和未知中藥薄層色譜方法的開發(fā)是一項(xiàng)基礎(chǔ)工作。同時(shí)，隨著中藥檢驗(yàn)技術(shù)和現(xiàn)代化學(xué)分析方法的發(fā)展，多種檢測(cè)方法的高效聯(lián)用技術(shù)是未來(lái)中藥檢驗(yàn)和應(yīng)用研究的重要方向。建立科學(xué)且全面的中藥檢驗(yàn)方法能為我國(guó)中藥的發(fā)展提供保障。