帕金森病患者血清中維生素K2及其他相關(guān)炎癥指標(biāo)變化和危險(xiǎn)因素分析

郁曉丹 虞燕霞 沈明強(qiáng)

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州醫(yī)院 蘇州市立醫(yī)院 1神經(jīng)內(nèi)科，江蘇 蘇州 215002；2藥物臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)辦公室)

帕金森病(PD)是常見的神經(jīng)退行性疾病，其主要病理變化是黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元丟失和路易小體的形成。目前環(huán)境、神經(jīng)炎癥、線粒體功能紊亂、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡、遺傳因素等因素都參與PD的發(fā)病過程。其中神經(jīng)炎癥是PD比較重要的一個(gè)發(fā)病機(jī)制。維生素(V)K2作為一種維生素，除了具有骨鹽代謝、凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)調(diào)節(jié)的作用，它還有一定的抗炎癥作用，有報(bào)道在多發(fā)性硬化(MS)、阿爾茨海默病(AD)患者血清中VK2含量下降〔1～3〕，在PD患者中的相關(guān)研究鮮有報(bào)道。前期我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)VK2具有抗炎作用，體內(nèi)外試驗(yàn)顯示VK2能夠抑制魚藤酮誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞活化〔4〕。有研究表明，在血清中還有其他一些物質(zhì)同樣具有抗炎作用，而且影響PD的發(fā)病和發(fā)展〔5～7〕，例如：VD、C-反應(yīng)蛋白(CRP)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。此外血尿酸(UA)、中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值(NLR)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)等也被認(rèn)為是PD發(fā)病的影響因素〔8～10〕。本研究搜集這些與炎癥反應(yīng)程度相關(guān)的臨床指標(biāo)，比較其在PD組和健康對(duì)照組的差別，綜合評(píng)估各指標(biāo)對(duì)于PD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象 選自2016年3月至2019年3月在蘇州市立醫(yī)院門診和住院部就診的PD患者92例，患者均符合英國(guó)腦庫(kù)的PD診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除由腦外傷或中毒等原因引起的繼發(fā)性帕金森綜合征、進(jìn)行性核上性麻痹等帕金森疊加綜合征、患有肝腎疾病等相關(guān)疾病的患者。按照Hoehn-Yahr(H&Y)分期將PD患者分成早期(H&Y 1.0～2.5)和中晚期(H&Y 3.0～5.0)。早期患者41例，中晚期患者51例。另外，搜集相同時(shí)間內(nèi)的健康體檢者109例作為對(duì)照組。

1.2資料收集 搜集PD組和對(duì)照組姓名、性別、年齡、體重、身高、病程和患病情況，檢測(cè)其血清VK2、VD、CRP、HDL-C、LDL-C、UA、WBC指標(biāo)，計(jì)算中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)比值，記錄為NLR。

1.3檢測(cè)方法 受試者均于清晨空腹條件下采集5 ml靜脈血。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)VK2及VD水平。采用全自動(dòng)生化分析測(cè)定HDL-C、LDL-C、UA、CRP水平，采用全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)WBC及分類。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS23.0軟件進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、曼特惠尼u檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)、多因素Logistic回歸分析，并繪制受試者工作特征(ROC)曲線。

2 結(jié) 果

2.1一般基線資料 對(duì)照組年齡45～90歲；PD組年齡41～84歲。兩組年齡、性別、身高、體重指數(shù)(BMI)、高血壓、糖尿病、HDL-C、CRP、WBC、UA水平差異均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。PD組VK2、VD、LDL-C水平低于對(duì)照組，PD組NLR水平高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組臨床資料比較〔M(P25,P75)〕

2.2多因素Logistic回歸聯(lián)合ROC曲線分析 根據(jù)上述單因素分析所得出的結(jié)果，以VK2、VD、LDL-C和NLR作為L(zhǎng)ogistic回歸分析模型的自變量，以是否患有PD作為因變量，進(jìn)行多因素Logistic回歸分析(表2)。以O(shè)R值>1.000作為危險(xiǎn)因素，OR值<1.000作為保護(hù)因素。研究結(jié)果顯示，低水平的VK2、VD和LDL-C是PD發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素；NLR不能認(rèn)為是PD發(fā)病的獨(dú)立保護(hù)因素(P>0.05)。利用VK2、VD、LDL-C值構(gòu)建ROC曲線，VK2的曲線下面積(AUC)最高，對(duì)于預(yù)測(cè)PD發(fā)病的價(jià)值高于其他指標(biāo)。見表3、圖1。

表2 PD患者多因素Logistic回歸分析

表3 PD患者相關(guān)指標(biāo)ROC曲線AUC及其他參數(shù)

圖1 VK2、VD及LDL-C預(yù)測(cè)PD發(fā)病的ROC曲線

2.3PD組不同分期患者VK2、VD、LDL-C和NLR的比較 PD早期組VK2、VD、LDL-C水平高于PD中晚期組，NLR水平低于中晚期組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 PD不同分期患者VK2、VD、LDL-C和NLR的比較

3 討 論

PD與腦內(nèi)慢性炎癥相關(guān)，而外周炎癥的激活和平息又影響著腦內(nèi)炎癥〔11，12〕。血清中VD、CRP、HDL-C、LDL-C、UA、WBC等這些可以監(jiān)測(cè)的指標(biāo)均不同程度地參與了機(jī)體的氧化應(yīng)激反應(yīng)，與體內(nèi)的炎癥反應(yīng)的發(fā)生息息相關(guān)。同時(shí)它們可能與PD的發(fā)生相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)低水平的VK2、VD、LDL-C可能是PD發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

VK2作用廣泛，能治療骨質(zhì)疏松、抗腫瘤、抑制血管鈣化等〔13〕。研究表明VK2有一定的抗炎作用，Saputra等〔14〕發(fā)現(xiàn)VK2通過抑制核轉(zhuǎn)錄因子(NF)-κB信號(hào)通路的激活抑制炎癥反應(yīng)〔14〕。Ohsaki等〔15〕研究發(fā)現(xiàn)給大鼠口服VK后能夠減少炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，提示VK可以抑制脂多糖誘導(dǎo)的大鼠炎癥反應(yīng)。在腦內(nèi)，VK2參與Gas6、蛋白S的生物激活和鞘脂的合成。鞘脂能夠參與細(xì)胞增殖、分化、衰老和細(xì)胞間的相互作用〔16〕。鞘脂的代謝改變與AD和PD等神經(jīng)退行性疾病有關(guān)〔17〕。在AD患者中VK2的水平明顯降低，VK2在神經(jīng)退行性疾病中具有神經(jīng)保護(hù)作用〔3〕。有研究〔18〕對(duì)192例老年人日常葉綠醌的攝入量通過問卷調(diào)查的方式進(jìn)行估算，發(fā)現(xiàn)攝入較多葉綠醌的老年人能夠獲得更高簡(jiǎn)易心理狀態(tài)檢查(MMSE)得分和較低的行為與額顳行為評(píng)定量表(FBRS)得分，證實(shí)VK2與老年人的認(rèn)知行為能力有關(guān)。有研究通過比較31例癡呆患者和健康對(duì)照組的VK攝入量，發(fā)現(xiàn)癡呆患者的攝入量很低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔2〕。Shatenstein等〔19〕跟蹤36例早期AD患者和58例認(rèn)知功能正常的老年人18個(gè)月的營(yíng)養(yǎng)攝入情況，發(fā)現(xiàn)早期AD患者的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)攝入水平明顯較對(duì)照組低，其中包括VK的水平。在神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病MS患者中也有類似的發(fā)現(xiàn)，Lasemi等〔1〕對(duì)45例MS患者和29位健康體檢者進(jìn)行組間分析，發(fā)現(xiàn)MS患者血清VK2水平明顯較健康對(duì)照組低，而且結(jié)果顯示女性較男性更低，VK2水平也會(huì)隨著MS發(fā)作次數(shù)的增多而下降，這些結(jié)果均提示VK2在MS的發(fā)病和進(jìn)展中具有一定的作用。Heix基因突變的果蠅PD模型中，VK2能夠通過傳遞電子對(duì)線粒體產(chǎn)生修復(fù)作用〔20〕。前期我們研究工作顯示在魚藤酮激活的小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)，NF-κB信號(hào)通路被激活，引起大量的炎癥因子的產(chǎn)生釋放，而VK2能通過抑制神經(jīng)炎癥拮抗魚藤酮誘導(dǎo)的炎癥介質(zhì)釋放，從而起到保護(hù)神經(jīng)元SH-SY5Y細(xì)胞的作用〔4〕。因此，VK2可能與PD、AD等神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)。

本研究結(jié)果提示臨床上可通過監(jiān)測(cè)VK2水平評(píng)估PD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)行補(bǔ)充VK2或許將成為減少PD發(fā)病或延緩PD 進(jìn)展的一種治療手段。

VD是一種類固醇激素，參與類固醇合成、細(xì)胞膜組成等多種生化過程。動(dòng)物試驗(yàn)證實(shí)，VD能夠抑制神經(jīng)炎癥、減少多巴胺神經(jīng)元的損傷〔21〕。一項(xiàng)meta分析認(rèn)為VD水平在PD病人和健康人群之間具有顯著差異，并且與疾病的嚴(yán)重程度負(fù)相關(guān)〔22〕。膽固醇是一種普遍存在于細(xì)胞膜中的脂質(zhì)，維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整性和功能特異性。大腦是膽固醇含量最高的器官，膽固醇代謝異常與許多神經(jīng)退行性疾病有關(guān)。膽固醇水平降低可能通過輔酶Q10減少引起氧化應(yīng)激，對(duì)多巴胺神經(jīng)元產(chǎn)生損傷，增加PD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)〔23〕。本研究結(jié)果表明VD和LDL-C可能也與PD的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)。

NLR是一種提示周圍炎癥的標(biāo)志物，反映了引起炎癥進(jìn)展的中性粒細(xì)胞和免疫調(diào)節(jié)途徑的淋巴細(xì)胞的信息。外周和腦內(nèi)炎癥的相互作用可能在黑質(zhì)紋狀體多巴胺神經(jīng)元損傷中有重要作用。Moghaddam等〔9〕發(fā)現(xiàn)PD組NLR水平高于健康對(duì)照組，且在以震顫為主要表現(xiàn)的PD患者中NLR水平與運(yùn)動(dòng)嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。本研究結(jié)果推測(cè)低水平的NLR是PD的保護(hù)因素。

綜上所述，低水平的VK2、VD、LDL-C可能會(huì)增加PD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。VK2、VD、LDL-C可能是通過抑制炎癥反應(yīng)、減少氧化應(yīng)激保護(hù)多巴胺神經(jīng)元，從而減少PD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。本研究存在一定局限性，受試者均來自同一所醫(yī)院，可能存在一定的數(shù)據(jù)偏倚。其次，并沒有對(duì)受試者的VK2水平進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察。后期將進(jìn)行多中心前瞻性研究以獲取更準(zhǔn)確研究結(jié)論。