低氧環(huán)境下菊苣酸對SD大鼠心肌組織低氧適應(yīng)性的影響

劉嘉華，吳 華，行倩文，劉 波，張龍飛，王夢杰，陳鑫磊，王文勝

(青海大學(xué) 農(nóng)牧學(xué)院，青海 西寧 810016)

高海拔地區(qū)自然環(huán)境特殊，空氣中氧氣含量隨著海拔高度的升高而降低，一般認(rèn)為海拔3 000 m以上的地區(qū)為低氧環(huán)境。當(dāng)機體受到低氧刺激時，體內(nèi)氧化與抗氧化系統(tǒng)失衡，氧化中間產(chǎn)物如活性氧(ROS)等大量產(chǎn)生，導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化、線粒體功能損傷、細(xì)胞凋亡等，進(jìn)而威脅機體生命活動健康[1-2]。心臟是對缺氧反應(yīng)敏感的器官之一，增強心臟的功能及低氧適應(yīng)能力，可為高海拔低氧地區(qū)動物機體生命活動的維持提供更有利的保障。因此，開發(fā)有效的增強動物心肌低氧適應(yīng)能力的飼料添加劑顯得極為重要。

菊苣酸(chicoric acid,CA)又稱二咖啡酰酒石酸，是一種咖啡酸類衍生物，主要存在于紫錐菊等植物中，是一種天然的免疫活性成分。眾多研究表明，CA具有增強免疫、抗炎、抗病毒、抗氧化等作用[3-4]。SCHLERNITZAUER等[5]研究證明，CA是一種有效的ROS清除劑，可通過減少氧化應(yīng)激條件下的ROS積累，發(fā)揮抗氧化損傷作用。蔡坤玲等[6]研究表明，CA可促進(jìn)超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)活性，起到抗氧化作用。WU等[7]研究表明，低氧環(huán)境下CA可促進(jìn)牦牛心肌組織HIF-1α、EPO、VEGF等低氧適應(yīng)基因的表達(dá)，增強高寒地區(qū)牦牛的低氧適應(yīng)性。本課題組前期研究表明，低氧環(huán)境下CA可通過作用于SD大鼠血液學(xué)指標(biāo)，增強SD大鼠對高海拔低氧環(huán)境的適應(yīng)能力[8]。然而，目前關(guān)于CA對低氧環(huán)境下SD大鼠心肌組織低氧適應(yīng)性的研究鮮見報道?；诖?，本試驗擬以SD大鼠為研究對象，于低氧環(huán)境下對SD大鼠灌胃不同濃度CA，明確CA對SD大鼠心肌組織低氧適應(yīng)性的影響。擬為解析CA對SD大鼠心肌組織低氧適應(yīng)潛在的影響作用及緩解高海拔地區(qū)動物低氧應(yīng)激提供新思路。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及材料60只6～8周齡、體質(zhì)量為(192.00±7.35) g的健康雄性SD大鼠(P<0.05)，購自青海喜馬拉雅動物實驗中心有限公司(動物許可證號：SCXK(陜)2018-001)，于青海省河南蒙古族自治縣畜牧獸醫(yī)工作站(海拔3 500 m，氧濃度13.65%[9])進(jìn)行飼養(yǎng)。紫錐菊提取物——CA購自西安銳博生物科技有限公司。成分：CA含量4%，其中CA(2.0%～2.2%)+咖啡酸(1.0%～1.5%)+綠原酸(0.5%～1.0%)+紫錐菊甙(0.3%～0.5%)，為黃綠色精細(xì)粉末。

1.2 主要試劑SD大鼠飼料、試驗用楊木刨花墊料均購自江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司；0.9%氯化鈉注射液購自石家莊四藥有限公司；4%多聚甲醛購自Biosharp生物公司；水合氯醛購自上海展云化工有限公司；ROS測定試劑盒、丙二醛(MDA)測定試劑盒、SOD測定試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)測定試劑盒、CAT測定試劑盒、超微量Na+K+-ATP酶測試盒、超微量Ca2+-ATP酶測試盒、總蛋白(TP)測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所；線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ、Ⅲ活性檢測試劑盒購自索萊寶科技有限公司；HIF-1α、VEGF、EPO引物購自生工生物工程(上海)股份有限公司；TRNzol Universal總RNA提取試劑盒、cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒、SuperReal彩色熒光定量預(yù)混試劑盒均購自天根生化科技有限公司；HIF-1α、VEGF、EPO抗體、辣根過氧化酶(HRP)標(biāo)記山羊抗兔IgG、牛血清白蛋白(BSA)、蘇木素染液、DAB顯色劑均購自賽維爾生物科技有限公司。

1.3 低氧環(huán)境下SD大鼠飼養(yǎng)試驗將60只SD大鼠于室溫(21±2 )℃(試驗時間：2021.06.06-2021.08.08)進(jìn)行飼養(yǎng)。適應(yīng)性喂養(yǎng)2周后將SD大鼠隨機分為對照組、不同劑量CA組(10，20，40 mg/kg)，每組15只。每天上午9:00對SD大鼠進(jìn)行灌胃，對照組SD大鼠灌胃0.5 mL生理鹽水，試驗組SD大鼠分別灌胃10，20，40 mg/kg劑量的CA，并每天稱體質(zhì)量，4組SD大鼠飼喂基礎(chǔ)飼糧條件一致，連續(xù)灌胃49 d后進(jìn)行試驗?；A(chǔ)飼糧組成：谷物類原材料占比80%，包含玉米、次粉、小麥、苜蓿草、豆粕；動物性蛋白占比10%，包含秘魯魚粉、美國雞肉粉；預(yù)混料占比10%，包含動物預(yù)混料、谷朊粉、碳酸氫鈣、石粉、色拉油、飼料級氯化鈉、飼料級氯化鎂。其營養(yǎng)水平見表1。

表1 營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ)) %

1.4 試驗樣品采集試驗第50 天早上9:00，將4組SD大鼠空腹稱體質(zhì)量，并每組分別隨機抽取3只，用10%水合氯醛腹腔麻醉后取出SD大鼠心臟，將心臟表面血液用生理鹽水清洗干凈，濾紙吸干后置于液氮中保存待檢。

1.5 SD大鼠心肌組織ROS活性測定按試劑盒說明書制備SD大鼠心肌組織單細(xì)胞懸液，使用DCFH-DA熒光探針，采用熒光酶標(biāo)儀在激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為500，525 nm處檢測各組SD大鼠心肌組織中ROS的活性。

1.6 SD大鼠心肌組織抗氧化指標(biāo)測定取出SD大鼠心肌組織樣品自然解凍后，在提前預(yù)冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙擦干，稱取0.1 ～0.2 g于研缽中，按質(zhì)量(g)∶體積(mL)=1∶9的比例加入9倍體積的生理鹽水，冰浴條件下，制備成10%的組織勻漿。按前述處理制備各組SD大鼠心肌組織勻漿，隨后分別按照試劑盒說明書分別采用TBA法于532 nm處檢測 MDA 含量，WST-1法于450 nm 處檢測 SOD 活性，比色法于412 nm處檢測GSH-Px活性，鉬酸銨法于405 nm處檢測CAT含量，考馬斯亮藍(lán)法檢測組織蛋白濃度。

1.7 SD大鼠心肌線粒體功能相關(guān)指標(biāo)測定稱取約0.1 g SD大鼠心肌組織，加入1.0 mL提取液，用研缽于冰上勻漿。4℃、600×g離心10 min。將上清液移至另一離心管中，4℃、 11 000×g離心15 min。在上清及沉淀中分別加入 1.0，0.4 mL提取液，超聲波破碎，用于復(fù)合體Ⅰ、Ⅲ活性測定，并且用于蛋白含量測定。然后采用比色法，按照試劑盒說明書進(jìn)行各組SD大鼠心肌線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ、Ⅲ活性的檢測。

1.8 SD大鼠心肌能量代謝相關(guān)指標(biāo)測定準(zhǔn)確稱取SD大鼠心肌組織質(zhì)量，按質(zhì)量(g)∶體積(mL)=1∶9的比例，加入生理鹽水，冰浴條件下機械勻漿，2 500 r/min離心10 min，取上清(即10%的勻漿上清液)，再用生理鹽水10倍稀釋成1%，同時用考馬斯亮藍(lán)法檢測組織蛋白濃度。隨后按照試劑盒說明書進(jìn)行處理，通過定磷法檢測各組SD大鼠心肌組織 Na+-K+-ATP 酶、Ca2+-ATP 酶活性。

1.9 SD大鼠心肌組織低氧適應(yīng)基因mRNA及蛋白表達(dá)測定

1.9.1qRT-PCR檢測SD大鼠心肌組織低氧適應(yīng)基因的mRNA表達(dá) 取-80℃凍存的SD大鼠心肌組織，用TRNzol Universal 總 RNA 提取試劑盒分別提取各組大鼠心肌組織總RNA并進(jìn)行RNA完整性及濃度檢測，隨后按照cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說明書將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，最后采用SYBR PrimescriptTM試劑盒進(jìn)行定量PCR分析。試驗每組3個重復(fù)，根據(jù)公式2-△△Ct計算所測基因的相對表達(dá)量。

表2 引物信息

1.9.2免疫組化法檢測SD大鼠心肌組織低氧適應(yīng)基因的蛋白表達(dá) 大鼠心肌組織切片脫蠟至水，微波爐中火8 min至沸，?；? min保溫再轉(zhuǎn)中低火7 min 修復(fù)抗原，3%雙氧水溶液室溫孵育25 min消除內(nèi)源性過氧化物酶活性，滴加3% BSA 封閉30 min，分別滴加HIF-1α(1∶200)、EPO(1∶900) 和VEGF(1∶100) 抗體，4℃孵育過夜，滴加二抗室溫孵育50 min，滴加 DAB 顯色劑顯色，復(fù)染，乙醇脫水，二甲苯透明，封片，顯微鏡下觀察。蘇木素染細(xì)胞核為藍(lán)色，DAB顯出的陽性表達(dá)為棕黃色。使用圖像分析軟件Image-Pro Plus 6.0對陽性表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行平均光密度值分析。

1.10 數(shù)據(jù)分析試驗數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計軟件 SPSS 21.0 進(jìn)行統(tǒng)計分析，采用One-Way ANOVA單因素方差分析方法進(jìn)行分析，Duncan's法進(jìn)行多重比較，以P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著，采用GraphPad Prism 8.0繪圖軟件進(jìn)行繪圖。

2 結(jié)果

2.1 低氧環(huán)境下CA對SD大鼠心肌組織ROS活性的影響由圖1可知，與對照組相比，10 mg/kg組顯著降低ROS活性(P<0.05)，20，40 mg/kg組極顯著降低ROS活性(P<0.01)。試驗組間結(jié)果顯示，與10 mg/kg組相比，40 mg/kg組極顯著降低ROS活性(P<0.01)；與20 mg/kg組相比，40 mg/kg組顯著降低ROS活性(P<0.05)。其余組間差異不顯著(P>0.05)。

*P<0.05,**P<0.01

2.2 低氧環(huán)境下CA對SD大鼠心肌組織抗氧化指標(biāo)的影響由圖2可知，與對照組相比，40 mg/kg組顯著降低MDA含量(P<0.05)。試驗組間結(jié)果顯示，40 mg/kg組顯著降低MDA含量(P<0.05)(圖2A)。與對照組相比，20 mg/kg組顯著提高SOD活性(P<0.05)，40 mg/kg組極顯著提高SOD活性(P<0.01)。試驗組間結(jié)果顯示，40 mg/kg組顯著提高SOD活性(P<0.05)(圖2B)。與對照組相比，20，40 mg/kg組極顯著提高GSH-Px活性(P<0.01)；試驗組間結(jié)果顯示，與10 mg/kg組相比，20，40 mg/kg組極顯著提高GSH-Px活性(P<0.01)；與20 mg/kg組相比，40 mg/kg組顯著提高GSH-Px活性(P<0.05)(圖2C)。與對照組相比，20，40 mg/kg 組極顯著提高CAT活性(P<0.01)。試驗組間結(jié)果顯示，20 mg/kg組顯著提高CAT活性(P<0.05)，40 mg/kg組極顯著提高CAT活性(P<0.01)。其余組間差異不顯著(P>0.05)(圖2D)。

A.MDA含量的變化；B.SOD活性的變化；C.GSH-Px活性的變化；D.CAT活性的變化。*P<0.05,**P<0.01

2.3 低氧環(huán)境下CA對SD大鼠心肌線粒體功能相關(guān)指標(biāo)的影響結(jié)果顯示，與對照組相比，10 mg/kg組顯著提高呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ活性(P<0.05)，20，40 mg/kg組極顯著提高呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ活性(P<0.01)，試驗組間差異不顯著(P>0.05)(圖3A)。與對照組相比，不同劑量CA組極顯著提高呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性(P<0.01)；試驗組間結(jié)果顯示，20，40 mg/kg 組極顯著提高呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性(P<0.01)。其余組間差異不顯著(P>0.05)(圖3B)。

A.心肌線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ活性的變化；B.心肌線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性的變化。*P<0.05,**P<0.01

2.4 低氧環(huán)境下CA對SD大鼠心肌組織能量代謝相關(guān)指標(biāo)的影響結(jié)果顯示，與對照組相比，40 mg/kg 組極顯著提高Na+K+-ATP酶活性(P<0.01)。試驗組間結(jié)果顯示，與10 mg/kg組相比，40 mg/kg組極顯著提高Na+K+-ATP酶活性(P<0.01)；與20 mg/kg組相比，40 mg/kg組顯著提高Na+K+-ATP酶活性(P<0.05)(圖4A)。與對照組相比，20，40 mg/kg組顯著提高Ca2+-ATP 酶活性(P<0.05)。試驗組間結(jié)果顯示，20，40 mg/kg組顯著提高Ca2+-ATP 酶活性(P<0.05)。其余組間差異不顯著(P>0.05)(圖4B)。

A.Na+K+-ATP酶活性的變化；B.Ca2+-ATP 酶活性的變化。*P<0.05,**P<0.01

2.5 低氧環(huán)境下CA對SD大鼠心肌組織低氧適應(yīng)基因mRNA及蛋白表達(dá)的影響

2.5.1低氧環(huán)境下CA對SD大鼠心肌組織低氧適應(yīng)基因mRNA表達(dá)的影響 結(jié)果顯示，與對照組相比，20，40 mg/kg組極顯著促進(jìn)HIF-1α的mRNA表達(dá)(P<0.01)。試驗組間結(jié)果顯示，20，40 mg/kg組極顯著促進(jìn)HIF-1α的mRNA表達(dá)(P<0.01)(圖5A)。與對照組相比，不同劑量CA組極顯著促進(jìn)EPO的mRNA表達(dá)(P<0.01)。試驗組間結(jié)果顯示，與 10 mg/kg組相比，40 mg/kg組極顯著促進(jìn)EPO的mRNA表達(dá)(P<0.01)；與20 mg/kg組相比，40 mg/kg組顯著促進(jìn)EPO的mRNA表達(dá)(P<0.05)(圖5B)。與對照組相比，10，20 mg/kg組顯著促進(jìn)VEGF的mRNA表達(dá)(P<0.05)， 40 mg/kg組極顯著促進(jìn)VEGF的mRNA表達(dá)(P<0.01)。其余組間差異不顯著(P>0.05)(圖5C)。

A.HIF-1α基因的mRNA表達(dá)情況；B.EPO基因的mRNA表達(dá)情況；C.VEGF基因的mRNA表達(dá)情況。*P<0.05,**P<0.01

2.5.2低氧環(huán)境下CA對SD大鼠心肌組織低氧適應(yīng)基因蛋白表達(dá)的影響 由圖6A結(jié)果可知，HIF-1α陽性表達(dá)的細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒，EPO陽性表達(dá)的細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒，VEGF陽性表達(dá)的細(xì)胞膜或細(xì)胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒。與對照組相比，20 mg/kg組顯著促進(jìn)HIF-1α的蛋白表達(dá)(P<0.05)，40 mg/kg組極顯著促進(jìn)HIF-1α的蛋白表達(dá)(P<0.01)；試驗組間結(jié)果顯示，40 mg/kg組顯著促進(jìn)HIF-1α的蛋白表達(dá)(P<0.05)。與對照組相比，20，40 mg/kg組極顯著促進(jìn)EPO的蛋白表達(dá)(P<0.01)；試驗組間結(jié)果顯示，40 mg/kg組顯著促進(jìn)EPO的蛋白表達(dá)(P<0.05)。與對照組相比，10 mg/kg組極顯著促進(jìn)VEGF的蛋白表達(dá)(P<0.01)，20，40 mg/kg組顯著促進(jìn)VEGF的蛋白表達(dá)(P<0.05)。其余組間差異不顯著(P>0.05)(圖6B)。

A.HIF-1α、EPO、VEGF的陽性表達(dá)情況；B.HIF-1α、EPO、VEGF的平均光密度值。*P<0.05,**P<0.01

3 討論

3.1 低氧環(huán)境下CA對SD大鼠心肌組織ROS活性的影響ROS是機體內(nèi)一類氧的單電子還原物，包括H2O2、O2-等，可參與血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性的調(diào)節(jié)過程[10]。一定量的ROS有利于機體的自身調(diào)節(jié)，正常環(huán)境下，ROS產(chǎn)生后會被相應(yīng)的自由基清除劑清除，使其在機體內(nèi)保持穩(wěn)定的狀態(tài)。當(dāng)機體受到低氧等刺激時，組織器官中ROS產(chǎn)生過多導(dǎo)致自由基清除劑不能完全清除而使其大量蓄積，從而引起脂質(zhì)過氧化、線粒體功能損傷等[11-12]。本研究結(jié)果表明，與對照組相比，10 mg/kg組ROS活性顯著降低(P<0.05)，20，40 mg/kg組ROS活性極顯著降低(P<0.01)。試驗組間結(jié)果表明，40 mg/kg組ROS活性顯著降低(P<0.05)。表明低氧可能引起SD大鼠心肌組織ROS過量產(chǎn)生，導(dǎo)致心肌損傷，而CA可通過降低ROS活性起到緩解心肌損傷的作用，且40 mg/kg組作用效果最好。

3.2 低氧環(huán)境下CA對SD大鼠心肌組織抗氧化指標(biāo)的影響MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，具有細(xì)胞毒性，其含量變化不僅能反映ROS生成量還能間接反映機體低氧損傷的程度[2]。有研究表明，機體發(fā)生氧化應(yīng)激時血清MDA含量升高[13]。SOD是生物體系中抗氧化酶系的主要成員之一，是機體內(nèi)重要的抗氧化酶，具有特殊的生理活性，可清除體內(nèi)多余的ROS，拮抗因ROS大量升高對機體造成的損傷[14]。GSH-Px、CAT是機體中廣泛存在的重要的過氧化物分解酶，亦是反映機體抗氧化能力的關(guān)鍵指標(biāo)，具有清除ROS的作用[15-16]。本研究結(jié)果表明，與對照組相比，低氧環(huán)境下不同劑量CA組顯著降低MDA活性(P<0.05)，20，40 mg/kg組顯著提高SOD、GSH-Px、CAT活性(P<0.05)。試驗組間結(jié)果表明，40 mg/kg組顯著降低MDA含量(P<0.05)，顯著提高SOD活性(P<0.05)，極顯著提高GSH-Px、CAT活性(P<0.01)。說明低氧可能引起ROS過量產(chǎn)生進(jìn)而導(dǎo)致SD大鼠心肌組織脂質(zhì)過氧化損傷，而CA可通過增強SD大鼠心肌組織抗氧化能力，減弱脂質(zhì)過氧化程度及ROS活性，增強SD大鼠心肌組織的低氧適應(yīng)能力，且40 mg/kg 組作用最佳。

3.3 低氧環(huán)境下CA對SD大鼠心肌線粒體功能相關(guān)指標(biāo)的影響線粒體是組織細(xì)胞內(nèi)氧化磷酸化和ATP產(chǎn)生的主要場所，是心肌細(xì)胞最重要的細(xì)胞器，在維持心肌正常生命活動方面具有重要作用。線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ、Ⅲ是ROS產(chǎn)生的主要部位，長期低氧引起機體內(nèi)多種抗氧化機制破壞，ROS生成增加導(dǎo)致線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ、Ⅲ活性降低，從而影響線粒體功能[17]。王延玲[18]研究證明，3 400 m 的高海拔環(huán)境下應(yīng)用藥物美托洛爾后能通過提高大鼠心肌線粒體呼吸鏈復(fù)合體活性來減弱ROS產(chǎn)生，緩解低氧損傷。程巖巖等[19]研究證明，中藥健脾化痰祛瘀方能增加心肌線粒體呼吸鏈復(fù)合體活性，維持氧化磷酸化的功能，保護(hù)心臟。本研究結(jié)果表明，與對照組相比，低氧環(huán)境下不同濃度CA均可顯著提高心肌線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ、Ⅲ活性(P<0.05)。試驗組間結(jié)果表明，20，40 mg/kg組極顯著提高呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性(P<0.01)，40 mg/kg 組活性最高。揭示低氧可能引起ROS過量產(chǎn)生進(jìn)而導(dǎo)致SD大鼠心肌線粒體功能障礙，而CA可通過促進(jìn)線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ、Ⅲ活性抑制ROS產(chǎn)生，改善SD大鼠心肌線粒體功能，增強SD大鼠的低氧適應(yīng)。

3.4 低氧環(huán)境下CA對SD大鼠心肌能量代謝相關(guān)指標(biāo)的影響ATP酶主要存在于組織細(xì)胞膜及細(xì)胞器膜上，是生物膜上的關(guān)鍵蛋白酶。其功能主要是催化ATP水解為ADP和磷酸，并釋放能量滿足機體生命活動所需[20]。ATP酶主要有Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶。Na+-K+-ATP酶主要表達(dá)于細(xì)胞膜，Ca2+-ATP酶在細(xì)胞膜和肌漿網(wǎng)均有表達(dá)。心肌缺氧時，ATP生成迅速減少，鈉泵活性降低，慢鈉通道増加，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈉離子增多。同時，Ca2+-ATP酶活性受到抑制，使心肌細(xì)胞內(nèi)外鈣離子失衡，最終導(dǎo)致心肌損傷。因此，保持Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性能更好的維持細(xì)胞內(nèi)Na+、Ca2+濃度的穩(wěn)定，在低氧下起到增強心肌適應(yīng)性的作用[21-23]。本試驗結(jié)果表明，與對照組相比，低氧環(huán)境下40 mg/kg組極顯著提高Na+-K+-ATP酶活性(P<0.01)，20，40 mg/kg組顯著提高Ca2+-ATP酶活性(P<0.05)。試驗組間結(jié)果表明，40 mg/kg 組極顯著提高Na+K+-ATP酶活性(P<0.01)，20，40 mg/kg組顯著提高Ca2+-ATP 酶活性(P<0.05)。闡明低氧可能引起SD大鼠心肌組織能量代謝障礙，而CA可通過提高SD大鼠心肌組織Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶的活性，維持心肌內(nèi)外離子平衡，改善能量代謝，增強心肌組織的低氧適應(yīng)性，且40 mg/kg組作用效果最佳。

3.5 低氧環(huán)境下CA對SD大鼠心肌組織低氧適應(yīng)基因mRNA及蛋白表達(dá)的影響HIF-1α對機體缺氧具有敏感的特異性，對維持體內(nèi)氧氣穩(wěn)態(tài)具有重要的作用。EPO基因是最早發(fā)現(xiàn)的與低氧適應(yīng)相關(guān)的基因，可通過促進(jìn)紅細(xì)胞生成調(diào)節(jié)血液攜氧能力，緩解機體缺氧情況。有研究表明，當(dāng)機體供氧不足時，EPO基因的表達(dá)量顯著增加[24]。VEGF在機體血管生成和血管重塑中起重要作用，VEGF可作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，使缺氧組織周圍的血管新生，從而改善組織缺氧損傷情況[25]。EPO和VEGF是HIF-1α的標(biāo)志性靶基因，在缺氧環(huán)境下，HIF-1α通過促進(jìn)EPO、VEGF的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)，從而促進(jìn)紅細(xì)胞生成，提高組織攜氧能力，增加血管的新生能力，減少組織缺氧造成的損傷，從而對心肌缺氧起到代償?shù)谋Ｗo(hù)作用[26-27]。本試驗結(jié)果表明，與對照組相比，低氧環(huán)境下CA可顯著促進(jìn)低氧適應(yīng)基因HIF-1α、EPO、VEGF的mRNA及蛋白表達(dá)(P<0.05)。試驗組間結(jié)果顯示，40 mg/kg組極顯著促進(jìn)HIF-1α、EPO的mRNA表達(dá)(P<0.01)，顯著促進(jìn)HIF-1α、EPO的蛋白表達(dá)(P<0.05)。說明CA可通過作用于HIF-1α來調(diào)控EPO及VEGF的表達(dá)，提高組織攜氧能力及血管新生能力，進(jìn)而增強動物機體低氧條件下的生存能力，且40 mg/kg組作用最好。

綜上所述，CA可通過抑制SD大鼠心肌組織ROS活性，提高其抗氧化能力、線粒體功能、能量代謝水平及低氧適應(yīng)能力，增強SD大鼠心肌組織低氧適應(yīng)性，且以40 mg/kg組作用最佳。為解析CA對SD大鼠心肌組織低氧適應(yīng)潛在的影響作用及緩解高海拔地區(qū)動物低氧應(yīng)激提供新思路。