牛偽狂犬病的診斷與防疫措施

吾買爾江·牙合甫,阿麗米熱·買買提,艾海提.買買提

1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院新疆草食動物新藥研究與創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗室,新疆 烏魯木齊 830052 2.哈密市伊州區(qū)陶家宮鎮(zhèn)人民政府農(nóng)業(yè)(畜牧業(yè))發(fā)展服務(wù)中心,新疆 哈密 839000

0 引言

偽狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)又叫“奧耶斯基氏病”(aujesky’s disease ,AD),是由豬皰疹病毒Ⅰ型引起的偽狂犬病病毒。該病發(fā)現(xiàn)于1813年,多數(shù)家畜動物出現(xiàn)瘙癢、狂躁后死亡現(xiàn)象,1912年該病被設(shè)立為獨(dú)立的一個疾病。豬一直被認(rèn)為是唯一的自然宿主和宿主,并且PRV病豬或PRV攜帶豬是PRV的主要傳染源,它能引起家畜、野生動物的急性致死性傳染病[1]。國內(nèi)外陸續(xù)報道有羊、狼、貂、狐貍感染PRV的事件發(fā)生,牛養(yǎng)殖場中牛偽狂犬病也時常發(fā)生,稱“瘋癢病”(Maditch),主要表現(xiàn)為狂躁、咽喉麻痹、呼吸困難以及發(fā)熱、局部癢,腦脊髓炎癥狀為主要臨床特征,感染后病死率高、病程短,致死率高達(dá)90%～100%。

1 病原學(xué)

偽狂犬病病毒屬皰疹病甲亞科,核衣殼直徑為105～110 nm,病毒粒子呈球形,線狀雙股DNA病毒,直徑在110～150 nm。病毒有囊膜,囊表面有呈放射狀排列的纖突,長8～10 nm。病毒可在豬腎、兔腎、牛睪丸、雞胚成纖維等多細(xì)胞中生長繁殖,并形成核內(nèi)嗜酸性包涵體。偽狂犬病病毒只有一個血清型,發(fā)病初期存在于血液、乳汁、實(shí)質(zhì)器官和尿中,后期存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)。動物一旦感染將終生帶毒,呈隱形感染狀態(tài)[2]。該病毒對外界因素的抵抗力比較強(qiáng),pH值在4～9穩(wěn)定,對熱、紫外線及乙醚、稀鹽酸均敏感,56 ℃維持30 min、70 ℃維持10 min、100 ℃維持1 min病毒即可滅活,或利用0.5%～1%氫氧化鈉溶液也可很快殺滅病毒。此外,病毒可在被病毒污染的廄舍環(huán)境存活30 d左右,動物尸體內(nèi)存活11 d(鹽腌20 d)。空氣濕度超過55%時,可存活7 d。在一定天氣條件下,氣溶膠傳播范圍可達(dá)2 km。不同季節(jié)變化中夏天存活30 d,冬天可存活46 d,冷凍條件下可保存2年[3]。

2 流行病學(xué)

牛偽狂犬病一般呈地方性流行或流行性,一年四季均可發(fā)生。被感染牛、流產(chǎn)的胎兒(死胎)、帶毒鼠類是該病的主要傳染源[4]。被感染動物的鼻黏液、唾液、尿液和乳汁、飛沫(氣溶膠)以及污染圈舍飼的草料、飲水、墊草、圈舍等均攜帶病毒。經(jīng)呼吸道(鼻腔)、消化道(口腔)感染是該病的傳播途徑。

另外,有文獻(xiàn)報道牛、羊、豬、犬、貓、狐貍、狼等35種家畜、野生動物均可發(fā)生傳播感染。牛的傳播與接觸犬、豬、鼠有關(guān),其中牛、豬混養(yǎng)是引起牛偽狂犬病發(fā)生的主要原因,生豬與牛同在一房舍關(guān)養(yǎng)的偽狂犬病數(shù)占年報76.3%,豬先感染發(fā)病后再引起牛感染病占年報的89.2%[4-5]。此外牛與牛之間,牛與豬之間也會交叉?zhèn)鞑ジ腥綶6]。

3 臨床特征

牛偽狂犬病潛伏期為3～6 d,很少超過10 d,患牛病初表現(xiàn)為局部皮膚強(qiáng)烈瘙癢、眼球塌陷、犬坐姿勢。患牛不停舔咬從而引起鼻部、乳房、后肢等發(fā)生皮膚脫毛、充血現(xiàn)象[7]。據(jù)報道,偽狂犬病病毒能抑制肺泡巨噬細(xì)胞功能,降低細(xì)胞消滅細(xì)菌的能力。此外伴隨精神沉郁、飲欲食欲減少或廢絕、反芻停止、泌乳減少、體溫高達(dá)40 ℃以上。后期病牛表現(xiàn)狂暴不安、異常鳴叫、前后肢刨地、不斷起臥,隨著病情加重表現(xiàn)出痙攣加劇、咽麻痹、流涎、呼吸急促、心跳加速、全身痙攣,最終死亡。常見成年牛發(fā)病24～48 h、幼畜1 d內(nèi)即死亡[8]。

4 病理變化

病死?；疾科つw增厚2～3倍,被毛脫落,撕裂、糜爛,皮下和肌肉組織有多黃色膠樣浸潤或混有血液。由于水腫或出血延伸到皮下水腫組織和下頜下肌肉而顯著增厚[9-10]。中樞神經(jīng)癥狀明顯,腦、腦膜充血,脊髓液增多。肺部出現(xiàn)明顯的肺水腫,心包積液[11];消化道黏膜充血和出血,肝淤血腫大,其上可見少量灰白色壞死點(diǎn)。組織病理學(xué)檢查可見彌漫性非化膿性腦膜腦炎、神經(jīng)節(jié)炎癥、膠質(zhì)細(xì)胞壞死等病變[12-13]。淋巴細(xì)胞浸潤心外膜、心包、胸腺、腎臟、肺等組織[14]。

5 診斷

5.1 牛偽狂犬病的診斷

1)發(fā)病期一般為3～6 d,急性、劇烈的局部瘙癢,轉(zhuǎn)圈、輕癱、癲癇、眼球震顫、狂躁,伴有高熱、呼吸窘迫現(xiàn)象。

2)中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂,出現(xiàn)漿液性鼻炎、壞死性扁桃體炎、壞死性支氣管炎、壞死性細(xì)支氣管炎、肺淋巴結(jié)出血現(xiàn)象。

3)養(yǎng)殖場有病豬的接觸史、發(fā)病史或被其他動物咬傷痕跡等。

4)家兔對偽狂犬病病毒敏感性較高,可將疑似病牛血清肌肉注入1～2 mL到兔體內(nèi),觀察24～48 h,注射部位出現(xiàn)奇癢,啃咬,破損和出血現(xiàn)象。后期家兔衰竭,倒臥、痙攣、呼吸困難死亡[15],即可初步診斷為牛偽狂犬病。

5)為確診病例,眼觀、鏡檢病變診斷外,還可進(jìn)行病毒分離、免疫熒光抗體、血清學(xué)等方法。在病牛癥狀未出現(xiàn)典型臨床癥狀情況下,需要采取實(shí)驗室診斷。發(fā)病死亡采取可疑病牛腦、延腦、小腦、肝、脾、肺等部位,制作壓片、冰凍切片等開展熒光抗體染色檢測。需要注意的是為防止鼻組織樣品送實(shí)驗室期間細(xì)菌污染,事先準(zhǔn)備添加抗生素的無菌生理鹽水,以免影響檢測結(jié)果。血清學(xué)技術(shù)、分子生物學(xué)方法已成為PRV的常規(guī)診斷方法[16]。血清學(xué)技術(shù)中ELISA是PRV抗體臨床檢測中最常用的方法,與其他篩選測定相比ELISA特異性和靈敏度較高。我國已開發(fā)出靶向gB或gE抗體的競爭性ELISAs(cELISA),目前該技術(shù)以商業(yè)化并得到廣泛應(yīng)用[17-20]。分子生物學(xué)方法中一般來說,PCR和RT-PCR是快速檢測PRV感染或區(qū)分PRV野生型和疫苗株最常用的方法[21]。此外,環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增(LAMP)檢測具有更高的靈敏度、特異性、快速性和成本效益,更適合于現(xiàn)場PRV診斷[22]。文獻(xiàn)報道PRV的檢測可采用新型高通量測序、下一代和第三代測序(NGS和TGS)等方法,但高通量測序方法成本高,不合適臨床檢測[23-24]。此外,養(yǎng)殖場PRV與其他疾病可能存在混合感染現(xiàn)象。

5.2 與狂犬病的鑒別診斷

在診斷中還應(yīng)注意牛偽狂犬病與?？袢〉膮^(qū)別,相關(guān)文獻(xiàn)中袁鳳燕 等[25]報道牛偽狂犬病與李氏桿菌病混合感染。黃立 等[26]報道仔豬群主要由偽狂犬病毒和大腸桿菌、沙門氏菌的混合感染。楊穎 等[27]報道某養(yǎng)殖場育肥豬發(fā)病確診為偽狂犬野毒、圓環(huán)病毒混合感染。鄭彬 等[28]報道保育豬群發(fā)病中一例病豬是偽狂犬和鏈球菌病混合感染。因此,實(shí)驗室檢測時有必要與病畜臨床、病理癥狀開展相關(guān)分析,防止出現(xiàn)誤診,導(dǎo)致藥物濫用、盲目治療的現(xiàn)象,給養(yǎng)殖者帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。具體如下。

1)牛狂犬病毒屬于彈性病毒科狂犬病毒屬,與偽狂犬病毒不同。狂犬病癥是漸進(jìn)性的,持續(xù)時期較長,臨床過程分為前驅(qū)期、急性興奮期、麻痹期等。病牛發(fā)生跛行、脊髓、大腦、顱神經(jīng)、泌尿生殖道、胃腸道等癥狀。

2)通常情況下,養(yǎng)殖場環(huán)境中狂犬病病毒不存在氣溶膠傳播風(fēng)險。動物被其他動物咬傷后,帶有病毒的唾液接觸動物組織而發(fā)生傳播。

3)狂犬病具有攻擊人畜行為,吼叫(嘶啞、哀鳴)、視力障礙、厭食、表現(xiàn)恐懼和高度緊張,性機(jī)能亢進(jìn),頻繁交配爬跨,角弓反張,離群獨(dú)處,共濟(jì)失調(diào),流涎,皮膚不發(fā)生瘙癢現(xiàn)象。

4)泌乳期患病奶牛泌乳突然停止,警覺,雙眼、雙耳隨外界聲音反應(yīng)迅速。

5)患病動物出現(xiàn)麻痹癥狀和突然死亡現(xiàn)象。

6)狂犬病病毒不能通過血液傳播。家兔皮下、肌肉注射疑似動物血清,不出現(xiàn)奇癢現(xiàn)象。

7)實(shí)驗室組織學(xué)檢查診斷中,疑似患病動物小腦蒲金野氏細(xì)胞、海馬角神經(jīng)細(xì)胞可發(fā)現(xiàn)基氏小體。

6 防控手段

1)重點(diǎn)發(fā)展科學(xué)、標(biāo)準(zhǔn)、現(xiàn)代化養(yǎng)殖場,依照家畜養(yǎng)殖特點(diǎn),完善養(yǎng)殖模式,進(jìn)行統(tǒng)一管理、培訓(xùn),定期開展動物疫病防控專題講座,提高養(yǎng)殖人員、獸醫(yī)人員操作技能,以逐年改進(jìn)和提高養(yǎng)殖場家畜產(chǎn)品的質(zhì)量安全。曾有發(fā)病史養(yǎng)殖場內(nèi)的陰性健康牛,出售前必須檢測血清中和試驗后方可出售。養(yǎng)殖場須逐年開展增加采樣、檢測和無害化工作,逐步消滅病毒。

2)目前尚無有效特異性治療方法,日常加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,嚴(yán)格將豬與牛及其他動物分開飼養(yǎng),持續(xù)做好防鼠、捕鼠和滅鼠工作。冬季是鼠類動物進(jìn)入圈舍尋食時期,應(yīng)該更加注重滅鼠工作。

3)新進(jìn)家畜時須加強(qiáng)家畜調(diào)運(yùn)關(guān),加強(qiáng)檢疫申報制度,應(yīng)檢必檢,杜絕瞞報漏報[29]。引進(jìn)牛時提前做好養(yǎng)殖場及調(diào)運(yùn)車輛的消殺防疫工作,引進(jìn)牛必須進(jìn)行嚴(yán)格檢疫,用基因缺失ELISA試劑盒進(jìn)行血清學(xué)檢測,防止帶入病原引發(fā)疫情。此外,新引進(jìn)家畜應(yīng)場外隔離15 d后再放入養(yǎng)殖場[30-31]。

4)發(fā)病養(yǎng)殖場及圈舍,可用偽狂犬病弱毒凍干疫苗或牛羊偽狂犬病氫氧化鋁甲醛疫苗,成年牛10 mL(皮下),犢牛8 mL,1次/年。牛舍、被污染的環(huán)境區(qū)、運(yùn)動場用10%的石灰乳進(jìn)行消毒;工具、飼槽、門窗墻壁用2%熱氫氧化鈉溶液、5%石炭酸、次亞氯酸鈉、磷酸三鈉等消毒劑進(jìn)行噴灑,并將排泄物無害化處理[32-33]。對病死家畜進(jìn)行深埋處理,防止野狗、貓偷吃尸體[34]。

5)對于常發(fā)病地區(qū)的大型養(yǎng)殖場,要定期開展血清學(xué)檢測,陽性病牛被淘汰后,再重復(fù)進(jìn)行血清學(xué)檢測,確保全部檢測結(jié)果為陰性。

6)獸醫(yī)相關(guān)部門應(yīng)當(dāng)建立檢測實(shí)驗室,完善科研儀器,有利于各類突發(fā)疾病被及時、快速檢測,達(dá)到精準(zhǔn)治療、精準(zhǔn)防控的目的。養(yǎng)殖技術(shù)人員應(yīng)嚴(yán)格依照實(shí)驗室診斷結(jié)果,淘汰患病動物,對已經(jīng)出現(xiàn)神經(jīng)癥狀的一律捕殺,嚴(yán)格依照GB16548《病害動物及動物產(chǎn)品無害化處理規(guī)程》的規(guī)定銷毀處理。養(yǎng)殖場發(fā)病點(diǎn)方圓3 km內(nèi)的牛全部要進(jìn)行緊急免疫接種。

7 結(jié)束語

大型養(yǎng)殖場、牧區(qū)養(yǎng)殖過程中應(yīng)當(dāng)完善和提高疫病防治原則,對牛偽狂犬病開展科學(xué)、有效的防疫措施。一方面可提高養(yǎng)殖場健康發(fā)展,增加收益;另一方面可提高畜產(chǎn)品的安全與質(zhì)量。