駝乳對(duì)不同類型肝損傷的保護(hù)作用研究進(jìn)展

高 天，杜冬華，2，哈斯蘇榮，3

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部動(dòng)物疾病診療技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018；2.河北北方學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院預(yù)防獸醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 張家口 075131；3.內(nèi)蒙古駱駝研究院，內(nèi)蒙古 阿拉善右旗 750300）

肝損傷類型很多，按病因可分為化學(xué)性肝損傷、藥物性肝損傷、免疫性肝損傷、酒精性肝損傷、病毒性肝損傷和肝臟部分切除術(shù)等。肝臟是特殊的免疫器官，含肝巨噬細(xì)胞、肝血竇內(nèi)皮細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cell，HSC）以及膽管細(xì)胞等。發(fā)生肝損傷時(shí)，肝細(xì)胞表面表達(dá)死亡受體，免疫細(xì)胞表達(dá)死亡配體，這些死亡配體和死亡受體在不同的肝損傷中相互作用導(dǎo)致肝細(xì)胞死亡。在此期間，肝細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生高水平的活性氧 （reactive oxygen species，ROS），增強(qiáng)了氧化應(yīng)激（oxidative stress,OS），直接引起細(xì)胞毒性［1］。OS 常常伴隨炎癥反應(yīng)的加劇，炎癥反應(yīng)是許多疾病的共同表現(xiàn)，肝巨噬細(xì)胞和浸潤性巨噬細(xì)胞被激活，然后通過分泌趨化因子，如轉(zhuǎn)化生長因子-β1 （transforming growth factor-β1，TGF-β1）等，激活HSC，加劇初始肝損傷?；罨腍SC 不僅可以轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞，加快慢性肝纖維化的進(jìn)展，而且HSC 中的NADPH 氧化酶（NADPH oxidase，NOX）和線粒體呼吸通過產(chǎn)生ROS 參與肝臟炎癥和纖維化［2］。

駱駝是生活在荒漠、半荒漠戈壁草原的動(dòng)物，其分為3 個(gè)種屬：單峰駝、雙峰駝和野駱駝（野生雙峰駝）。中國是雙峰駝的主要分布區(qū)域之一，集中分布于內(nèi)蒙古、新疆、寧夏、甘肅等省區(qū)的荒漠和半荒漠草原。駱駝足底厚實(shí)，適合在沙漠中行走，背有肉峰，用于積蓄脂肪，胃里的水脬可以貯水，所以耐饑渴，較長時(shí)間無需飲食，所以被稱為“沙漠之舟”。因此，駱駝從古代就作為役畜，以供馱運(yùn)和騎乘［3-4］。

目前，可用于治療肝損傷的藥物選擇仍舊有限，而且會(huì)產(chǎn)生某些副作用。據(jù)報(bào)道，家畜奶在預(yù)防和治療各種疾病方面具有較好的效果，其中駝乳（camel milk,CM）是最佳的候選天然奶之一。CM是牧民傳統(tǒng)的飲品和食品，除了可以做成奶茶外，還可以做成奶酪、酸奶等，在牧區(qū)的飲食和經(jīng)濟(jì)結(jié)構(gòu)中擁有重要地位，被稱作“沙漠中的白金”，其具有獨(dú)特的成分，脂肪含量高，產(chǎn)熱量大，富含蛋白質(zhì)、維生素和微量元素，如鎂、鋅、錳和硒等。此外，CM 促進(jìn)B 族維生素、VC 和VE 的吸收和代謝，這些維生素對(duì)細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷具有保護(hù)作用。CM 的總蛋白含量較高，高于牛乳，其主要成分是酪蛋白和駱駝乳清蛋白 （camel whey protein,CWP），現(xiàn)階段的研究證明CWP 是一種強(qiáng)大的天然抗氧化劑，其抗氧化作用遠(yuǎn)超牛乳清蛋白［5］。

CM 富含多種抗氧化成分，具有抗氧化作用，對(duì)不同的肝損傷具有不同程度的保護(hù)作用。第一，CWP 可通過增加谷胱甘肽（glutathione，GSH）和抗氧化酶的表達(dá)降低氧化應(yīng)激和組織損傷［6］，CWP中缺乏易引起幼齡動(dòng)物和嬰幼兒過敏反應(yīng)的β-乳球蛋白（β-lactoglobulin，β-LG）；第二，CM 富含抗氧化生物活性肽，具有顯著的抗氧化作用，已證明CM 具有清除自由基的能力［7］；第三，CM 中富含的多種礦物質(zhì)，如鐵、鈉、鎂，以及含量較高的維生素C 同樣可以作為抗氧化劑清除自由基，具有抗OS 的功效［8］。因此，該研究圍繞CM 對(duì)上述各種肝損傷的抗炎和抗OS 作用展開綜述，以期為其他學(xué)者進(jìn)行后續(xù)研究提供線索，為CM 的推廣提供相關(guān)參考。

1 駝乳對(duì)化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用

1.1 駝乳對(duì)四氯化碳引起的肝損傷的保護(hù)作用

四 氯 化 碳（tetrachloride，CCl4）是 一 種 劇 毒 揮發(fā)性液體，在工業(yè)和家庭中均用作滅火劑、溶劑、清潔劑和脫脂劑。人接觸的主要途徑是吸入和皮膚接觸，例如，打掃衛(wèi)生時(shí)把清潔劑和漂白劑混合使用，會(huì)釋放大量含氯氣體，造成吸入中毒；泡洗抹布擦拭家具會(huì)接觸中毒；長時(shí)間在金屬冶煉車間工作或者紡織車間工作和打掃衛(wèi)生也可能引起吸入中毒［9-10］。

CCl4誘導(dǎo)的肝損傷是比較經(jīng)典的肝病模型，CCl4經(jīng)細(xì)胞色素藥物代謝酶（CYP2E1、CYP2B1 或CYP2B2）代謝形成三氯甲基自由基，三氯甲基自由基結(jié)合細(xì)胞膜上磷脂分子，引起脂質(zhì)過氧化。丙二醛（malondialdehyde，MDA）是脂質(zhì)過氧化形成的最終產(chǎn)物，可損傷細(xì)胞膜、加重肝臟損傷程度，導(dǎo)致肝細(xì)胞變性甚至壞死。一氧化氮（nitric oxide，NO）可促進(jìn)自由基產(chǎn)生，加重氧化應(yīng)激，因此MDA和NO 含量水平可間接表明肝組織脂質(zhì)過氧化的程度［11］。CCl4不僅引起脂質(zhì)過氧化，還可以激活Toll 樣 受 體4/核 因 子-kB （Toll-like receptor 4,TLR4/nuclear factor-κB,NF-κB）炎癥信號(hào)通路，引起NF-κB 蛋白過度表達(dá)，激活淋巴細(xì)胞，釋放促炎因子，如腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factorα，TNF-α）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）、白介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）等，形成正反饋回路，增強(qiáng)炎癥信號(hào)，進(jìn)一步加重肝細(xì)胞凋亡、炎癥細(xì)胞浸潤，使得肝組織炎癥反應(yīng)惡性循環(huán)［12］。

研究證明，CCl4所致肝損傷患者服用駝乳一段時(shí)間后肝功能會(huì)得到一定程度的改善，這與發(fā)酵駝乳具有抗炎作用和免疫調(diào)節(jié)作用，以及消除自由基，抑制脂質(zhì)過氧化有關(guān)［13］。不僅發(fā)酵駝乳有此作用，鮮駝乳中富含的氨基酸和氨基酸與鈣形成的螯合物能夠增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力，尤其是半胱氨酸和甲硫氨酸能夠有效提高肝臟的GSH含量；CWP 具有清除超氧化物、羥基自由基和抑制脂類氧化的作用，通過加強(qiáng)細(xì)胞抗氧化能力，對(duì)肝細(xì)胞起到一定的保護(hù)作用，其通過改善CCl4造成的細(xì)胞變性和壞死，修復(fù)壞死的肝組織［14］。

1.2 駝乳對(duì)甲氰菊酯引起的肝損傷的保護(hù)作用

擬除蟲菊酯類殺蟲劑（pyrethroid insecticides）是世界上廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、獸醫(yī)和家庭日常生活中的殺蟲劑，屬于吡咯類藥物。由于其在生產(chǎn)生活中使用頻繁，且人易與之接觸，所以相關(guān)研究人員仍在探索吡咯類藥物的危害和作用方式，一般情況下，人類接觸吡咯類藥物通過飲水、食物等途徑。在室內(nèi)使用吡咯類藥物殺蟲劑，使其在空氣中長期殘留，在住宅和食物等經(jīng)?？蓹z測出吡咯類藥物，所以，應(yīng)該考慮其積累風(fēng)險(xiǎn)［15］。甲氰菊酯（fenpropathrin，F(xiàn)NP）是α-氰基吡咯的一種，表現(xiàn)出神經(jīng)毒性反應(yīng)，其作為殺蟲劑，用于棉花、土豆等農(nóng)作物的蟲害控制，廣泛使用FNP 所帶來的危害是其殘留物在其他生物體內(nèi)積累，并且增加了人類在工作時(shí)的接觸風(fēng)險(xiǎn)，特別是農(nóng)民和溫室工人［16］。此類殺蟲劑對(duì)經(jīng)濟(jì)進(jìn)步和公共衛(wèi)生有重要作用，但是，其對(duì)環(huán)境健康的危害也同樣不容忽視，特別是此類藥物有可能產(chǎn)生遺傳毒性。

FNP 可誘導(dǎo)大鼠的DNA 損傷和細(xì)胞凋亡，F(xiàn)NP 暴露大鼠血清中OS 相關(guān)生物標(biāo)志物顯著增加。OS 是體內(nèi)氧化和抗氧化作用失衡的一種狀態(tài)，也是FNP 暴露固有不良反應(yīng)的潛在機(jī)制。FNP暴露導(dǎo)致血清中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和過氧化氫酶（catalase，CAT）活力顯著升高，MDA 和蛋白質(zhì)羰基 （protein carbonyl，PCO）的濃度升高，GSH 血清水平顯著下降。先前的研究認(rèn)為，MDA 濃度的顯著升高與ROS 的生成增加有關(guān)，吡咯烷酮的代謝過程中可能會(huì)產(chǎn)生ROS，從而觸發(fā) 脂質(zhì)過氧化［17］。不僅如此，肝臟CYP1A1 基因表達(dá)在FNP 暴露大鼠中上調(diào)，可能由于FNP 與CYP1A1 競爭結(jié)合代謝相關(guān)的酶，且含α-氰基的FNP 更加敏感，F(xiàn)NP 暴露后觀察到的肝臟DNA 損傷，可能是自由基攻擊DNA 所產(chǎn)生的后果［18］。

CM 可治療由FNP 暴露引起的肝臟DNA 損傷與氧化應(yīng)激。CM 可以顯著增加血清GSH 含量，顯著降低由FNP 誘導(dǎo)升高的SOD、CAT、MDA、PCO 水平，CM 處理還可使CYP1A1 基因表達(dá)顯著下調(diào)，這歸因于CM 在蛋白質(zhì)水平上可以改變CYP1A1 mRNA 表達(dá)方式。CM 也可以發(fā)揮對(duì)肝臟DNA 損傷的調(diào)節(jié)作用，這可能與CM 的乳鐵蛋白和高水平的VC 有關(guān)［19］。所以，CM 可以改善FNP殺蟲劑引起的OS 和遺傳毒性結(jié)果。

2 駝乳對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用

長期或者大量飲酒會(huì)引起酒精性肝?。╝lcoholic liver disease，ALD），其癥狀包括可逆的脂肪變性和危及生命且不可逆的肝硬化，以及極少數(shù)情況下發(fā)生癌變。酒精誘導(dǎo)的肝損傷一直是研究的焦點(diǎn)，其誘發(fā)因素也很多，其中，大量或者長期飲酒是直接誘發(fā)因素。另外，空腹飲酒、肥胖人群飲酒和本身患有肝病的人飲酒會(huì)加劇酒精性肝損傷的發(fā)生。雖然酒精性肝損傷的發(fā)病原因明確，但其發(fā)病機(jī)制還不完全清楚，目前，氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、脂肪變性和腸道微生物群紊亂被認(rèn)為是ALD 的主要原因［20］。

乙醇在體內(nèi)代謝主要有兩條途徑：其一是在肝臟中經(jīng)乙醇脫氫酶 （alcohol dehydrogenase，ADH）代謝轉(zhuǎn)化成乙醛，釋放大量的氫離子，大量的氧化型輔酶 （NAD+）轉(zhuǎn)變?yōu)檫€原型輔酶Ⅰ（nicotinamide adenine dinucleotide，NADH），破壞正常的氧化還原反應(yīng)，產(chǎn)生大量的自由基，破壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能，由此造成肝損傷，降低對(duì)脂肪酸的氧化能力，導(dǎo)致脂肪堆積。不僅如此，NADH/NAD+的比值還能夠反映肝臟氧化還原狀態(tài)［21］。其二是在肝臟中經(jīng)肝微粒體酶細(xì)胞色素P4502E1（CYP2E1）代謝，造成GSH 的減少和CYP2E1 的活化，經(jīng)乙醇誘導(dǎo)活化后的CYP2E1 會(huì)產(chǎn)生大量的ROS，加重肝細(xì)胞的OS、脂質(zhì)過氧化和炎性因子的釋放，最終導(dǎo)致肝細(xì)胞壞死或者凋亡［22］。

CM 可改善酒精性肝損傷。目前還沒有特定的藥物或療法可以逆轉(zhuǎn)人類ALD 的進(jìn)展，戒酒是ALD 最有效和無毒的治療方法。隨著研究的深入，針對(duì)ALD 的實(shí)驗(yàn)性營養(yǎng)策略逐漸增多，因?yàn)榇祟惙椒ū确煤铣伤幬锏母弊饔酶。允艿皆絹碓蕉嗟年P(guān)注［23］。在游牧地區(qū)的傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)實(shí)踐中，CM 是可以保護(hù)肝臟的，CM 不僅可以防止酒精誘導(dǎo)的結(jié)腸功能障礙和脂質(zhì)積聚，還可以調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激和炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生，從而防止小鼠慢性ALD。CM 富含乳鐵蛋白，其通過降低肝細(xì)胞內(nèi)的甘油三酯（triacylglycerol，TG）含量，改善脂肪變性，通過誘導(dǎo)產(chǎn)生大量抗炎因子，抑制促炎因子的釋放［24］。

3 駝乳對(duì)熱應(yīng)激所致肝損傷的保護(hù)作用

熱應(yīng)激（heat stress，HS）是一種非特異性的身體反應(yīng)，由體核溫度的病理性升高引起，長期暴露在高溫環(huán)境中會(huì)導(dǎo)致HS，甚至死亡。在牲畜中，HS可導(dǎo)致繁殖率下降，以及牛奶和肉類產(chǎn)量減少，從而造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。預(yù)防HS 的管理措施，包括改善圈舍條件、應(yīng)用不同的營養(yǎng)方案或培育耐熱品種［25］。

研究表明，HS 誘發(fā)的體溫升高和代謝紊亂會(huì)引起細(xì)胞內(nèi)ROS 的含量增多。當(dāng)產(chǎn)生的ROS 超出了機(jī)體抗氧化防御機(jī)制所能承受的極限時(shí)，就會(huì)導(dǎo)致OS 的發(fā)生。OS 會(huì)損傷細(xì)胞成分，包括核酸、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)，造成細(xì)胞內(nèi)DNA 突變、脂質(zhì)過氧化和PCO 等不良后果，進(jìn)而造成氧化損傷，如果沒有及時(shí)采取有效的處理方案，這種反應(yīng)會(huì)引起嚴(yán)重的后果［26］。HS 不僅會(huì)直接造成機(jī)體的損傷，其抑制機(jī)體免疫系統(tǒng)同樣造成嚴(yán)重后果，會(huì)增加動(dòng)物的患病致死率和流行病暴發(fā)的潛在風(fēng)險(xiǎn)［27］。

肝損傷是HS 病理中最常見且致命的并發(fā)癥，其機(jī)制涉及氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)。天然抗氧化劑因其具有安全、有效和廉價(jià)等特性被廣泛用于某些疾病的輔助治療。CWP 是一種強(qiáng)大的天然抗氧化劑，其通過降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶 （glutamic-pyruvic transaminase，GPT）和IL-1β 水平，恢復(fù)體核溫度，防止肝臟中的細(xì)胞凋亡和組織病理學(xué)改變來發(fā)揮作用，通過防止炎性小體被激活，進(jìn)而減少HS 誘導(dǎo)的大鼠肝臟炎癥［28］。不僅如此，CWP 可以顯著降低AST、GPT 水平，通過調(diào)節(jié)GSH、SOD、CAT等，控制OS 的發(fā)展，呈劑量依賴性降低ROS 和MDA 水平，最終緩解HS 所致的肝損傷［28-29］。

4 駝乳對(duì)糖尿病肝損傷的保護(hù)作用

糖尿病是世界范圍內(nèi)越來越嚴(yán)重的健康問題，可細(xì)分為1 型糖尿?。╰ype 1 diabetes mellitus，T1DM）和2 型糖尿病 （type 2 diabetes mellitus ，T2DM）。其發(fā)病與生活方式和復(fù)雜的代謝紊亂有關(guān)，主要由胰島素抵抗 （insulin resistance，IR）引起，隨著疾病的發(fā)展，機(jī)體組織或血管損傷隨之發(fā)生，導(dǎo)致嚴(yán)重的糖尿病并發(fā)癥，如視網(wǎng)膜病變、神經(jīng)病變、腎病、心血管并發(fā)癥和潰瘍等。IR 引起的胰島素信號(hào)受損和胰島素敏感性降低與糖尿病的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切［30］。

肝臟在維持代謝內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、控制葡萄糖和脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)方面起著至關(guān)重要的作用，肝臟損傷是糖尿病的一種嚴(yán)重并發(fā)癥。IR 可引起葡萄糖穩(wěn)態(tài)失衡和脂質(zhì)積聚，從而導(dǎo)致肝臟胰島素不敏感［31］。糖尿病患者肝臟受損時(shí)，肝細(xì)胞的抗氧化酶活性降低，并產(chǎn)生大量氧自由基，導(dǎo)致OS，肝臟脂質(zhì)過氧化，肝臟中的MDA 水平顯著升高，SOD 和谷胱甘肽過氧化物酶 （glutathione peroxidase，GSH-Px）水平降低，組織病理學(xué)特征顯著改變。不僅如此，糖尿病通常被認(rèn)為是一種促炎癥狀態(tài)，OS會(huì)增加和刺激炎性細(xì)胞因子的釋放，而細(xì)胞炎性因子的釋放會(huì)誘發(fā)全身炎癥，加速糖尿病的發(fā)展和糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生［32］。

治療糖尿病的方法有很多，非藥理學(xué)方法包括飲食、運(yùn)動(dòng)和減肥；藥理學(xué)方法包括胰島素分泌促進(jìn)劑、胰島素增敏劑和α-葡萄糖苷酶抑制劑，由于需要考慮將副作用降到最低，糖尿病患者通常更喜歡使用非藥理學(xué)方法替代藥物［33］。

CM 可以提升胰島素濃度，抑制糖異生，促進(jìn)糖原合成，對(duì)糖尿病具有改善作用。治療糖尿病時(shí)，CM 中的鎂可以保護(hù)細(xì)胞免受ROS 的侵害，并幫助吸收B 族維生素、VC 和VE，這些維生素具有抗氧化作用。CM 還能增強(qiáng)腎臟、肝臟和紅細(xì)胞中抗氧化酶的表達(dá)，牛奶或水牛奶在增強(qiáng)腎臟、肝臟和紅細(xì)胞抗氧化酶方面要么沒有作用，要么作用很小［34］。不僅如此，CWP 能夠降低糖尿病小鼠的血糖水平和自由基二苯基吡啶酰（diphenylpicrylhydrazyl，DPPH）水平，抑制脂質(zhì)過氧化，保護(hù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)（central neural system ，CNS）神經(jīng)元免受氧化應(yīng)激，改善糖尿病小鼠的神經(jīng)癥狀，還可顯著改善糖尿病大鼠的組織病理學(xué)，降低MDA 水平，并恢復(fù)SOD 和GSH-Px 活性，降低血清炎癥細(xì)胞因子（如IL-6 和TNF-α）水平。CWP 增強(qiáng)SOD 和GSH-Px 的活性有助于清除氧自由基，降低氧化應(yīng)激，從而減少炎癥因子的釋放，改善肝細(xì)胞損傷［35］。因此，CM 治療可以通過減少肝臟氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)來保護(hù)肝臟。

5 小結(jié)

綜上所述，各類肝損傷的發(fā)病機(jī)制涉及氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，且各類肝損傷涉及的炎癥反應(yīng)主要是無菌性炎癥。CM/CWP 因兼有強(qiáng)大的抗氧化和抗炎作用，所以具有抗肝損傷的潛在價(jià)值。然而，駝乳抗肝損傷的作用機(jī)制尚未完全闡明，相關(guān)研究數(shù)據(jù)很少，極大限制了其臨床轉(zhuǎn)化及應(yīng)用，其確切有效成分亦有待進(jìn)一步研究。因此，未來一方面可以將研究范圍擴(kuò)大到無菌性炎癥的信號(hào)通路，高遷移率族蛋白B1（high mobility group protein B1，HMGB1）是無菌性炎癥的一種重要炎癥介質(zhì)，可以進(jìn)一步探索CM 對(duì)各種肝損傷的保護(hù)作用是否與調(diào)節(jié)HMGB1 有關(guān)，對(duì)其相應(yīng)受體及下游多種基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)有何影響；另一方面可以探索CM 中其他組成成分是否發(fā)揮了對(duì)肝損傷的保護(hù)作用、如何發(fā)揮保護(hù)作用，從而促進(jìn)CM 在保健品及畜牧獸醫(yī)生產(chǎn)中的應(yīng)用。