枳術(shù)便秘通丸成型工藝及質(zhì)量控制研究

何英蒙，賴 慧，米曉琴，蒲清榮，趙春妮，梁 剛，趙福蘭△

（西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院 1.藥劑科，2.制劑室，3.腫瘤科，四川 瀘州 646000）

便秘是導(dǎo)致肛腸疾病、胃腸神經(jīng)功能紊亂、心腦血管疾病、直腸癌等發(fā)生的重要原因[1］，更是惡性腫瘤患者在化學(xué)藥物治療（簡稱化療）過程中常出現(xiàn)的副反應(yīng)之一[2］。晚期癌癥患者的便秘率為40%～60%[3-4］。常見的便秘治療藥物雖能有效緩解短期癥狀，但長期使用可能會(huì)導(dǎo)致其他不良反應(yīng)，如腹瀉和代謝紊亂[5-6］。枳術(shù)便秘通丸是以古方枳術(shù)丸結(jié)合臨床加減而成，主要由大黃、麩炒枳實(shí)、麩炒白術(shù)等6味中藥材組方，具有健脾化濕、行氣通便功效。該方自2016年用于臨床，不僅能有效緩解化療過程中出現(xiàn)的便秘癥狀，同時(shí)還可減輕腹脹腹痛、惡心嘔吐等伴隨癥狀，改善癌癥患者的生活質(zhì)量[7］。本研究中初步探討了其成型工藝和質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，為后續(xù)規(guī)?；a(chǎn)和質(zhì)量控制提供依據(jù)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

儀器：ZEJ-Z型全自動(dòng)中型制丸機(jī)（甘肅恒悅制藥設(shè)備有限公司）；LC-20AT型高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）；101-2AB型電熱鼓風(fēng)干燥箱（杭州江銳儀器設(shè)備有限公司）；JA-Series電子天平（常州市幸運(yùn)電子設(shè)備有限公司）；JPCQ1020型超聲波提取器（武漢嘉鵬電子有限公司）；DOODLOOK-1000型薄層色譜成像系統(tǒng)（上?？普苌萍加邢薰荆?。

試藥：大黃、麩炒枳實(shí)、麩炒白術(shù)、木香、茯苓、砂仁飲片（成都吉安康藥業(yè)有限公司，批號(hào)分別為200101，200501，200401，200401，200401，00501）。大黃素對(duì)照品（批號(hào)為110756-201913，含量為89.7%）、大黃酚對(duì)照品（批號(hào)為110796-201922，含量為99.4%）、辛弗林對(duì)照品（批號(hào)為110727-202110，含量為99.5%），均購自中國食品藥品檢定研究院；淀粉（批號(hào)為200907）、羧甲基纖維素鈉（CMC-Na，批號(hào)為201108）、羥丙纖維素（HPC，批號(hào)為201011），均購自淄博豐匯生物科技有限公司；糊精（漢中秦發(fā)糊精責(zé)任有限公司，批號(hào)為200606）；硅膠G薄層板（青島海洋化工廠）；甲醇為色譜純；其余試劑均為分析純；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 成型工藝

2.1.1 制法

按處方量稱取大黃60 g，麩炒枳實(shí)、麩炒白術(shù)、木香、茯苓各150 g，砂仁80 g，粉碎，過篩，混合均勻，得混合藥粉；黏合劑用熱水溶解后與混合藥粉攪拌均勻；采用塑制法制丸、干燥，即得。流程見圖1。

圖1 成型工藝流程圖Fig.1 Flow chart of forming process

2.1.2 黏合劑選擇

按處方量稱取混合藥粉5份，每份740 g；分別取水740 g及淀粉、糊精、CMC-Na、HPC各178 g，用593 mL熱水溶解后作為黏合劑，充分拌勻后轉(zhuǎn)入制丸機(jī)，觀察中藥條的性狀及成丸情況，烘干，參照2020年版《中國藥典（四部）》溶散時(shí)限測定法測定溶散時(shí)限。

以純化水、CMC-Na和HPC為黏合劑時(shí)，藥條成丸性較差；以淀粉或糊精為黏合劑時(shí)，藥條韌性良好，均可成丸。但以淀粉為黏合劑，所制得的丸劑呈棕黃色，表面粗糙且溶散時(shí)限較長；以糊精為黏合劑所制得的丸劑呈棕黃褐色，表面較光滑，溶散時(shí)限較短，故選擇糊精。各黏合劑成丸情況及溶散時(shí)限詳見表1。

表1 不同黏合劑下的成丸情況和丸劑溶散時(shí)限Tab.1 Pellet formation and dissolution time limit under different adhesives

2.1.3 成型工藝優(yōu)化

以糊精漿體積分?jǐn)?shù)[因素A，糊精漿體積分?jǐn)?shù)（%）=糊精量/純水量×100%］、藥粉與水質(zhì)量比（因素B）、干燥時(shí)間（因素C）為考察因素，以丸劑溶散時(shí)限和含水量（參照2020年版《中國藥典（四部）》水分測定法測定）的綜合評(píng)分（以綜合加權(quán)評(píng)分法[8-10］計(jì)算）為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用L9（34）正交試驗(yàn)優(yōu)化。綜合評(píng)分=溶散時(shí)限最小值/溶散時(shí)限×0.5+含水量最小值/含水量×0.5，綜合評(píng)分越高表明丸劑質(zhì)量越好。因素與水平見表2。

表2 因素與水平Tab.2 Factors and their levels

正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見表3。枳術(shù)便秘通丸成型工藝的3個(gè)主要因素影響大小順序依次為A＞B＞C。由方差分析結(jié)果（表4）可知，3個(gè)因素均對(duì)成型工藝有顯著影響，最佳成型工藝為A2B1C3，即以30%糊精漿為黏合劑，藥粉∶純水為5∶3（m/m），干燥24 h所得產(chǎn)品最佳。

表3 L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Tab.3 Design and results of the L9（34）orthogonal test

表4 方差分析結(jié)果Tab.4 Results of the ANOVA

2.1.4 驗(yàn)證試驗(yàn)

根據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果，進(jìn)行枳術(shù)便秘通丸成型工藝的驗(yàn)證試驗(yàn)。取滅菌后的藥粉混合，粉碎成細(xì)粉；糊精用0.6倍藥粉量的熱水溶解制成30%糊精漿，與藥粉混勻，使藥粉充分潤濕轉(zhuǎn)入制丸機(jī)，制丸，將濕丸粒轉(zhuǎn)入拋光機(jī)，50℃烘干24 h，選丸，即得。

2.2 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

2.2.1 定性鑒別

麩炒枳實(shí)：取樣品5 g，研細(xì)，加甲醇20 mL，超聲（功率100 W，頻率20 kHz；下同）處理20 min，濾過，取續(xù)濾液，蒸干，殘?jiān)蛹状?.5 mL使溶解，即得供試品溶液。取辛弗林對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的對(duì)照品溶液。按枳術(shù)便秘通丸處方和工藝制備缺麩炒枳實(shí)的陰性樣品5 g，同供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。按2020年版《中國藥典（四部）》薄層色譜（TLC）法試驗(yàn)，吸取上述溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4∶1∶5，V/V/V）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.5%茚三酮乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾。詳見圖2。

圖2 薄層色譜圖1-3.Test solution 4 Synephrine reference solution 5 Negative reference solution 6.Reference medicinal materials solution of Atractylodis Macrocephalae Rhizoma A.Bran-fried Aurantii Fructus B.Bran-fried Atractylodis Macrocephalae RhizomaFig.2 TLC chromatograms

麩炒白術(shù)：取樣品5 g，研細(xì)，加正己烷10 mL，超聲處理15 min，濾過，取濾液，即得供試品溶液。取白術(shù)對(duì)照藥材0.5 g，精密稱定，加正己烷2 mL，同供試品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液。按枳術(shù)便秘通丸處方和工藝制備缺麩炒白術(shù)的陰性樣品5 g，同供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。按2020年版《中國藥典（四部）》TLC法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（50∶1，V/V）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾。詳見圖2。

2.2.2 含量測定[11-14］

色譜條件：色譜柱為Kromasil C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15，V/V）；流速為1.0 mL/min；檢測波長為254 nm；柱溫為40℃；進(jìn)樣量為10μL。

溶液制備：分別取大黃素、大黃酚對(duì)照品4.25，4.32 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻，得混合對(duì)照品溶液。取樣品粉末0.5 g，精密稱定，置具塞圓底燒瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，再次稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液；精密量取10 mL，置圓底燒瓶中，揮去溶劑，加8%鹽酸溶液10 mL，超聲處理2 min；再加三氯甲烷10 mL，加熱回流1 h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器并倒入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10 mL，合并三氯甲烷液；加壓回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，經(jīng)0.22μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按枳術(shù)便秘通丸處方和工藝制備缺大黃的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

適用性試驗(yàn)與專屬性試驗(yàn)：取上述混合對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各適量，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果，理論板數(shù)按大黃素和大黃酚峰計(jì)應(yīng)不低于3 000；分離度均大于1.5，基線分離良好；陰性對(duì)照品溶液在與混合對(duì)照品溶液色譜相同保留時(shí)間處無干擾峰，表明專屬性良好。詳見圖3。

圖3 高效液相色譜圖1.Emodin 2.Chrysophanol A.Mixed reference solution B.Test solution C.Negative reference solutionFig.3 HPLC chromatograms

線性關(guān)系考察：分別精密量取混合對(duì)照品溶液，制成系列混合對(duì)照品溶液。精密量取10μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以待測成分質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得大黃素和大黃酚回歸方程分別為Y1=35 017X1-9 008.6（r=0.999 9）、Y2=54 345X2-3 280.9（r=0.999 9）。結(jié)果表明，大黃素和大黃酚質(zhì)量濃度分別在0.848～34.01μg/mL和0.864～34.56μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取混合對(duì)照品溶液適量，按擬訂色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果，大黃素和大黃酚峰面積的RSD分別為0.12%和0.07%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液適量，分別于室溫下放置0，2，4，6，8，12，24 h時(shí)按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，大黃素和大黃酚峰面積的RSD分別為0.34%和0.42%（n=7），表明供試品溶液在室溫放置24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取樣品適量，各6份，按擬訂方法制備供試品溶液，再按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果，大黃素和大黃酚含量的RSD分別為1.70%和1.03%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量樣品適量，共9份，分別加入低、中、高質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，按擬訂方法制備供試品溶液，再按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表5。

表5 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）Tab.5 Results of the recovery test（n=9）

樣品含量測定：取樣品各適量，分別按擬訂方法制備供試品溶液，再按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，平行3次，記錄峰面積并計(jì)算樣品含量，結(jié)果見表6。

表6 樣品含量測定結(jié)果（mg/g，n=3）Tab.6 Results of the content determination of emodin and chrysophanol in the samples（mg/g，n=3）

按2020年版《中國藥典（四部）》中藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與指導(dǎo)原則9101“分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”相關(guān)要求，以大黃素和大黃酚總量下浮20%計(jì)算，將本品的大黃素和大黃酚總含量定為不得少于0.466 mg/g。

3 討論

枳術(shù)便秘通丸處方作為經(jīng)驗(yàn)方已在臨床使用多年，治療脾虛氣滯所致的便秘效果顯著。與市場中其他同類制劑相比，枳術(shù)便秘通丸對(duì)化療或阿片類藥物等引起的脾虛氣滯型便秘療效尤其顯著，能同時(shí)起到健脾、化濕和行氣的作用。本課題組在原有組方的基礎(chǔ)上進(jìn)行制劑工藝研究，優(yōu)化丸劑成型工藝，便于患者服用、攜帶和保存。

制劑工藝過程中，考慮到砂仁含有揮發(fā)性成分，在滅菌時(shí)選擇乙醇密閉滅菌法；其他藥味采用電熱滅菌法，且滅菌后均符合微生物限度要求。本試驗(yàn)中通過正交試驗(yàn)優(yōu)化確定的枳術(shù)便秘通丸自動(dòng)化生產(chǎn)最佳成型工藝，相比于傳統(tǒng)手工泛丸，具有操作簡便、生產(chǎn)高效、質(zhì)量與藥物療效穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。

在生產(chǎn)工藝的基礎(chǔ)上建立了麩炒枳實(shí)、麩炒白術(shù)專屬性強(qiáng)且簡便的TLC法，對(duì)比了3種不同展開系統(tǒng)，結(jié)果均顯示斑點(diǎn)清晰，分離效果良好，且陰性對(duì)照無干擾，可作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下的鑒別方法。對(duì)枳術(shù)便秘通丸中大黃的有效成分進(jìn)行定量控制，藥典中對(duì)大黃飲片的含量測定包括了大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃酸和大黃素甲醚5種成分，但在實(shí)際檢測時(shí)發(fā)現(xiàn)，蘆薈大黃素和大黃酸的出峰時(shí)間接近，且由于制劑中含有其他藥材及輔料，可能對(duì)蘆薈大黃素和大黃酸的測定造成干擾，影響準(zhǔn)確度。因此，參考文獻(xiàn)[14］等中的含量測定方法，最終以大黃素和大黃酚為指標(biāo)，對(duì)枳術(shù)便秘通丸中大黃質(zhì)量進(jìn)行控制。

綜上所述，枳術(shù)便秘通丸成型工藝合理，所建標(biāo)準(zhǔn)可用于制劑的質(zhì)量控制。