原發(fā)性高血壓患者血清miR-192 表達(dá)水平與左室肥厚的關(guān)系

杜高波，賈小鳳，余 強(qiáng)，李曉鵑

（黃石市中心醫(yī)院，湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科，湖北 黃石 435000）

隨著我國(guó)居民飲食結(jié)構(gòu)的改變，原發(fā)性高血壓患病率逐年升高，且發(fā)病年齡日趨年輕化[1]，已成為威脅我國(guó)人群健康的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題。研究表明[2]，長(zhǎng)期持續(xù)存在的高血壓會(huì)導(dǎo)致心臟及血管結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，并可引發(fā)一系列的并發(fā)癥。其中，由心室重構(gòu)引起的左心室肥厚是導(dǎo)致患者心律失常、心肌梗死、心力衰竭甚至死亡的主要原因[3]，因此，如何逆轉(zhuǎn)或減緩左心室肥厚在高血壓治療中尤為重要。有研究指出[4]，心肌發(fā)生纖維化與心室重構(gòu)關(guān)系密切。微小RNA-192（microRNA-192，miR-192）作為miRNA 重要類(lèi)型，參與了肝臟[5]、皮膚疤痕[6]等多種器官纖維化過(guò)程，是否與高血壓心室重構(gòu)所致左心室肥厚有關(guān)，鮮有報(bào)道。本研究分析了高血壓患者血清中miR-192 表達(dá)與左心室肥厚相關(guān)性，探討其在高血壓左心室肥厚中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年6 月至2019 年12 月在黃石市中心醫(yī)院治療的原發(fā)性高血壓患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡在18 歲以上，符合原發(fā)性高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；（2）臨床資料完整；（3）初診或既往雖診斷但未接受規(guī)范降壓藥物治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）繼發(fā)性高血壓，或服用降壓藥物治療者；（2）合并糖尿病、高血脂者；（3）合并心肌病、心力衰竭、心房顫動(dòng)、卒中者；（4）肝腎等重要臟器嚴(yán)重功能障礙患者；（5）重度感染、惡性腫瘤、免疫疾患者。共納入187 例，其中，男性101 例，女性86 例，平均年齡（59.34±9.84）歲。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者行知情同意。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集收集患者一般情況、收縮壓、舒張壓、高血壓病程、煙酒嗜好及高血壓家族史，計(jì)算體重指數(shù)（BMI），以及空腹血糖（FBG）、血脂[總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白-C（LDL-C）和高密度脂蛋白-C（HDL-C）]、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）和超敏-C 反應(yīng)蛋白（hs-CRP）等生化指標(biāo)。

1.2.2 超聲心動(dòng)圖檢查患者行超聲心動(dòng)圖檢查，檢查由超聲科具有高級(jí)職稱(chēng)的醫(yī)師利用德國(guó)西門(mén)子公司生產(chǎn)的SC2000 超聲診斷系統(tǒng)完成。分別獲取左心室后壁厚度（LVPWd）、室間隔厚度（IVST）、舒張末期和收縮末期左心室內(nèi)徑（LVEDD、LVESD）、舒張末期和收縮末期左心室容積（LVEDV、LVESV）、左心房前后徑（LAD）和左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF），均測(cè)量3 個(gè)心動(dòng)周期，取均值。計(jì)算左心室質(zhì)量（LVM）=0.8×1.04×[（IVST+LVEDD+LVPWT）3—LVEDD3]+0.6，左心室質(zhì)量指數(shù)（LVMI）=LVM/身高2.7，左心室肥厚判定標(biāo)準(zhǔn)[8，9]：男性LVMI >49.2 g/m2.7，女性LVMI >46.7 g/m2.7。根據(jù)是否合并左心室肥厚，將患者分為肥厚組和對(duì)照組。

1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 術(shù)檢測(cè)血清中miR-192 表達(dá)患者抽取晨起空腹肘靜脈血5 mL，室溫下靜置60 min，離心（3 500 r/min，半徑13.5 cm）15 min，留取上層血清，保存于-80℃冰箱保存。取凍存血清，室溫融化，根據(jù)總RNA 提取試劑盒（上海斯信公司，貨號(hào)：239435）提供的操作步驟提取總RNA，利用紫外分光光度儀（購(gòu)自日本島津公司）檢測(cè)其濃度。按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒（日本TaKaRa 公司，貨號(hào)：RR037A）操作步驟將總RNA 轉(zhuǎn)錄為cDNA。按照PCR 擴(kuò)增試劑盒（日本TaKaRa 公司，貨號(hào)：RR390A）操作步驟，利用StepOnePlus 型實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀（美國(guó)ABI 公司）對(duì)引物體系進(jìn)行擴(kuò)增。引物序列：miR-192：上 游：5 ′-CTGACCTATGAATTGACAGCCGT-3′，下游：5′-ATCCAGTGCAGGGTCCGA-3′；U6：上游：5′-GAGAAGATTAGCATGGCCCCT-3′，下游：5′-ATATGGAACGCTTCACGAATTTG C-3′。反應(yīng)條件：94 ℃ 3 min，94 ℃ 30 s，54 ℃30 s，70 ℃ 30 s，38 個(gè)循環(huán)，每個(gè)樣本設(shè)復(fù)孔6 個(gè)。用2-△△Ct法計(jì)算血清中miR-192 表達(dá)量。

1.2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA 法）檢測(cè)血清中心肌纖維化指標(biāo)取凍存血清，室溫融化，利用ELISA 法檢測(cè)血清中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）、Ⅰ型前膠原羧基末端肽（PⅠCP）和Ⅲ型前膠原氨基端肽（PⅢNP）水平，試劑盒購(gòu)自上海通蔚公司（貨號(hào)分別為：3683、01869、3215），所有操作均按試劑盒說(shuō)明完成。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 2 組患者臨床基礎(chǔ)資料和超聲心動(dòng)圖指標(biāo)比較

經(jīng)超聲心動(dòng)圖檢查，187 例原發(fā)性高血壓患者中，76 例出現(xiàn)左心室肥厚（肥厚組），111 例未發(fā)現(xiàn)左心室肥厚（對(duì)照組），與對(duì)照組比較，肥厚組患者LVPWT、IVST、LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LAD、LVMI 和hs-CRP 均升高（P<0.05），見(jiàn)表1。

表1 2 組患者一般資料比較（）Tab.1 Comparison on the general data of patients between the two groups（）

表1 2 組患者一般資料比較（）Tab.1 Comparison on the general data of patients between the two groups（）

*P < 0.05。

2.2 2 組患者血清中miR-192、TGF-β1、PⅢNP和PⅠCP 水平比較

與對(duì)照組比較，肥厚組患者血清中miR-192、TGF-β1、PⅢNP 和PⅠCP 水平升高（P<0.05），見(jiàn)表2。

表2 2 組患者血清中miR-192、TGF-β1、PIIINP 和PICP 水平比較[（），μg/L]Tab.2 Comparison on the serum levels of miR-192，TGF-β1，PIIINP and PICP in patients between the two groups[（），μg/L]

表2 2 組患者血清中miR-192、TGF-β1、PIIINP 和PICP 水平比較[（），μg/L]Tab.2 Comparison on the serum levels of miR-192，TGF-β1，PIIINP and PICP in patients between the two groups[（），μg/L]

*P < 0.05。

2.3 原發(fā)性高血壓患者血清中miR-192 水平與超聲心動(dòng)圖和心肌纖維化指標(biāo)相關(guān)性

Pearson 相關(guān)分析結(jié)果顯示，血清中miR-192 與LVPWT、IVST、LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LAD、LVMI、TGF-β1、PⅠCP 和PⅢNP呈正相關(guān)（P<0.05），見(jiàn)表3。

表3 原發(fā)性高血壓患者血清中miR-192 水平與超聲心動(dòng)圖和心肌纖維化指標(biāo)相關(guān)性Tab.3 Correlation of the serum level of miR-192 with the indexes of echocardiography and myocardial fibrosis in patients with essential hypertension

2.4 原發(fā)性高血壓患者血清中miR-192 水平影響因素分析

在排除一般資料的影響后，以原發(fā)性高血壓患者血清miR-192 水平作為因變量，把超聲心動(dòng)圖指標(biāo)和心肌纖維化指標(biāo)作為自變量，開(kāi)展多元線(xiàn)性回歸分析，LVPWT、IVST、LVEDD、LVESV、TGF-β1、PⅠCP 和PⅢNP 是影響血清miR-192水平的相關(guān)因素（P<0.05），見(jiàn)表4。

表4 原發(fā)性高血壓患者血清miR-192 水平的多元影響因素分析Tab.4 Analysis on the multivariate influencing factors of the serum level of miR-192 in patients with essential hypertension

3 討論

左心室肥厚作為心臟對(duì)血壓升高的一種適應(yīng)性變化，在高血壓患者中發(fā)生率較高，本研究中，187 例原發(fā)性高血壓患者中40.64%并發(fā)有左心室肥厚，與以往研究報(bào)道相當(dāng)[10]。早期的左心室肥厚有利于維持正常的泵血功能，但隨著時(shí)間延長(zhǎng)，會(huì)導(dǎo)致患者心肌順應(yīng)性會(huì)降低、耗氧量增多，最終引發(fā)心衰甚至死亡，已成為心血管事件發(fā)生及死亡的重要風(fēng)險(xiǎn)因素[11]。因此，積極探討高血壓左心室肥厚發(fā)病機(jī)制或風(fēng)險(xiǎn)因素對(duì)高血壓病的綜合防治具有重要意義。miRNA 作為機(jī)體內(nèi)廣泛存在的參與多種生理、病理過(guò)程的高度保守的短鏈RNA，與心血管疾病發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，參與調(diào)解心肌細(xì)胞生長(zhǎng)，并在心肌重構(gòu)、纖維化中發(fā)揮重要作用[12]。本研究結(jié)果顯示，miR-192 在肥厚組患者血清中表達(dá)水平較對(duì)照組明顯升高，說(shuō)明miR-192 表達(dá)與高血壓患者發(fā)生左心室肥厚相關(guān)，出現(xiàn)了高表達(dá)，同時(shí)，相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，血清miR-192 與超聲心動(dòng)圖指標(biāo)LVPWT、IVST、LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LAD 和LVMI 呈正相關(guān)，進(jìn)一步說(shuō)明miR-192 與高血壓左心室肥厚有關(guān)，但具體作用機(jī)制尚待進(jìn)一步研究明確，本研究中并未發(fā)現(xiàn)血清miR-192 與LVEF 相關(guān)，分析原因可能與心臟功能代償有關(guān)，從而導(dǎo)致左心室肥厚以保證LVEF 能夠滿(mǎn)足身體供血需要。

有研究指出[13]，高血壓左心室肥厚以心肌細(xì)胞肥大及細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)為主要表現(xiàn)。左心室肥厚早期以心肌細(xì)胞肥大為主要表現(xiàn)，從而代償性降低室壁張力以維持正常的射血功能，但隨著病變進(jìn)展，大量凋亡的心肌細(xì)胞發(fā)生凋亡并由細(xì)胞外基質(zhì)替代，從而引起射血能力減低、心臟功能出現(xiàn)惡化。膠原是構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)的重要組分，其合成、降解及構(gòu)造異常在促使心肌纖維化導(dǎo)致心肌重構(gòu)中發(fā)揮重要作用，具體表現(xiàn)為血清PⅠCP 和PⅢNP 水平升高[14]。TGF-β1 介導(dǎo)的信號(hào)通路則是心肌纖維化中主要通路[15]。本研究結(jié)果顯示，肥厚組患者血清中TGF-β1、PⅢNP 和PⅠCP 水平較對(duì)照組升高，且血清miR-192 與TGF-β1、PⅠCP 和PⅢNP 呈正相關(guān)，說(shuō)明原發(fā)性高血壓患者合并左心室肥厚時(shí)出現(xiàn)血清中miR-192 表達(dá)水平出現(xiàn)升高，可能與心肌細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)及心肌纖維化有關(guān)。本研究顯示，LVPWT、IVST、LVEDD、LVESV、TGF-β1、PⅠCP 和PⅢNP 是影響血清miR-192 水平的相關(guān)因素，從另一方面亦說(shuō)明miR-192 可能是反映高血壓左心室肥厚嚴(yán)重程度及心肌纖維化的指標(biāo)，可能是評(píng)估心肌肥厚及心肌纖維化的潛在標(biāo)志物。

綜上所述，miR-192 在出現(xiàn)左心室肥厚的高血壓患者血清中表達(dá)水平升高，且與左心室肥厚指標(biāo)及心肌纖維化指標(biāo)相關(guān)，有望成為評(píng)估高血壓左心室肥厚及心肌纖維化的新的標(biāo)志物，但鑒于高血壓左心室肥厚病理過(guò)程復(fù)雜，涉及眾多分子機(jī)制，miR-192 具體作用過(guò)程尚待進(jìn)一步研究明確。